TRATAMIENTO

INTEGRANTES
MICROBIOLGICO
DEL AGUA

Cabrera Jonathan
Coba Paul
Gualancaay Cristian
Jimnez Wilson
Muso Paul
Naranjo Xavier
Rodrguez Fabrizio
Vsquez Hugo
Zurita Carlos

ESCUELA POLITCNICA
NACIONAL
INGENIERA EN
PETRLEOS
TRATAMIENTO Y
MANTENIMIENTO DE
AGUAS DE
PRODUCCIN

TRATAMIENTO MICROBIOLOGICO
DEL AGUA
El conocimiento de los microorganismos presentes en el agua es muy
importante debido a que pueden causar corrosin o taponamiento de las
tuberas o equipos de produccin e inyeccin.
BIOLOGA.- Es la parte de la ciencia que estudia la vida y los procesos
de los organismos.
MICROBIOLOGA.- Es la parte de la Biologa que se encarga de los
microorganismos, en la industria petrolera la principal preocupacin que
conlleva la vida de estos seres unicelulares es la capacidad que tienen
para vivir en todo tipo de condiciones y velocidad de multiplicacin.

MICROORGANIMOS PRESENTES EN LOS

SISTEMAS DE AGUA Y PETRLEO
BACTERIAS
Las bacterias constituyen los microorganismos de mayor inters para
nosotros en el manejo del agua. La clula bacteriana tiene poca
estructura visible, incluso cuando se examina con un microscopio
electrnico.
Alrededor de la clula hay una pared celular que da a la clula su forma.
Dentro de la pared celular hay una membrana semipermeable delgada
que rodea el contenido de la clula bacteriana y selectivamente controla
el paso de sustancias entre la clula y su medio externo. La clula se
llena de agua que contienen diferentes minerales y productos qumicos.
La mayora de las especies son mviles, lo que significa que las
bacterias se impulsan a travs del agua por medio de uno o ms flagelos
de ltigo.

EUCARYA

Este grupo de microorganismos incluye algas, hongos y protozoos.

Algas

Las algas son plantas unicelulares que contienen clorofila que fabrican
su alimento por fotosntesis usando la luz como fuente de energa y CO2
como fuente de carbono para todo el crecimiento. Necesitan la luz solar
para el crecimiento normal, aunque pueden crecer lentamente en la
oscuridad. Las algas pueden formar limo en la superficie del agua que se
identifica fcilmente por su color verde o azul-verde. A menudo se
observa en el agua estancada y en las torres de refrigeracin.
Las algas estn presente en el agua de mar, aunque por lo general no
como lodos. Hay nmeros especies en la mayora de los ocanos y que
pueden contribuir sustancialmente a los slidos de taponamiento en el
agua.
Hongos

Los hongos generalmente crecen mejor en sistemas aerbicos y se cree

que causa algunos problemas en la mayora sistemas de inyeccin de
agua.
Protozoos

Los protozoos son la forma ms simple de la vida animal. Se encuentran

tanto en agua dulce y salada y requieren oxgeno para vivir. En los
sistemas de inyeccin de agua que se encuentran en los tanques o fosas
abiertas. Tambin se encuentran en los filtros cuando se airea el agua.
En general, el control de la otra poblacin microbiana basta para
controlar la poblacin protozoa.

MACROORGANISMOS
Los ocanos del mundo contienen criaturas como el plancton que se
aplica a todos los animales y plantas que viven libremente en el agua y
que, debido a sus poderes limitados de movimiento, simplemente se
mueven debido a las corrientes de agua. Esto no quiere decir que no
pueden nadar. Algunos, como los crustceos y larvas de peces pueden
nadar muy bien, pero puede que no sean capaces de nadar ms rpido
que el agua en que se mueven.
El plancton puede agruparse por tamaos. Animales muy grandes, como
las medusas se llaman megaloplancton. Esos organismos que son
fcilmente visibles con el ojo humano, y hacia abajo al reducir su
tamao los de 1 mm se conocen como macro plancton. Organismos
ms pequeos de 1 mm de tamao, pero ms grande que 75 um son
micro plancton. Los de tamao ms pequeo se llaman nano plancton,
que incluyen plantas diminutas, bacterias y criaturas llamadas
flagelados. Los flagelados ms pequeos, es decir, aquellos por debajo
de 5 um, a veces son llamados ultra plancton.
El plancton es importante para nosotros, ya que constituyen una parte
importante de los slidos de taponamiento en la mayora de las aguas
marinas. Adems, sirven como alimento para las criaturas ms grandes,
que a su vez puede contribuir a dicho problema.

CLASIFICACIN DE LAS BACTERIAS

Las bacterias son extremadamente pequeas (alrededor de 0,5 um de
dimetro). Las bacterias tienen forma de esferas, barras rectas, o varillas
curvadas. Las formas se nombran de la siguiente manera:

1. Una sola bacteria esfrica: COCO

Como un asunto de inters, una cadena o cadena de cocos se llama un
estreptococo, mientras que una hoja o plano de cocos se llama un
estafilococo.

2. varilla recta: BACILO

3. varilla curvada:
Vibrio: Una sola curva en forma de "C"
Sigmoide: forma de "S"
Spirillum: Dos o ms curvas en la forma de un tornillo o espiral.

CRECIMIENTO
La razn de los problemas originados por estos organismos es la
velocidad de su multiplicacin, en condiciones ideales su poblacin

puede duplicarse en 20 minutos, lo que quiere decir que pocas bacterias

pueden llegar a colonizar millones de bacterias en pocas horas.
Las bacterias pueden desarrollarse en un amplio rango de temperaturas,
desde 10 a 99 C., y valores de PH entre 0 y 10,5., pueden vivir en
grupos formando slidos en superficies o suspendidos en el agua,
cundo estn adheridas a superficies se denominas bacterias ssiles y si
estn suspendidas en el fluido se llaman plancton o simplemente
flotantes.

CLASIFICACIN DE LAS BACTERIAS

Uno de los mtodos de clasificacin de las bacterias que es de inters en
los sistemas petroleros es saber si las bacterias especficas requieren o
no oxgeno para vivir.
Se dividen en tres categoras:

BACTERIAS AEROBIAS.- necesitan oxgeno para crecer

BACTERIAS ANAEROBIAS.- no necesitan oxgeno para crecer

BACTERIAS FACULTATIVAS.- pueden crecer con o sin oxigeno

Problemas que causan las bacterias:

Bsicamente son 2 los ms importantes: taponamiento y Corrosin
Las bacterias pueden afectar el proceso de corrosin en los sistemas de
campos petroleros de varias maneras.
1. Generar sulfuro de hidrgeno, lo que aumenta la corrosividad del
agua.
2. Producir cidos orgnicos que inician o aceleran la corrosin sobre
la superficie metlica por efecto de las colonias.
3. Producen enzimas que pueden aumentar la velocidad de corrosin
mediante la participacin directa en el proceso de corrosin
electroqumica.
4. Oxidar el hierro soluble en el agua, haciendo que se precipite y
forme depsitos llamados "tubrculos.
5. El Taponamiento puede resultar de la actividad bacteriana debido
a la formacin de la biomasa bacteriana, la generacin de
producto de corrosin (tales como sulfuro de hierro) o la
precipitacin de hierro soluble en el agua.

Sulfato de Reduccin de Bacterias (SRB)

Los reductores de sulfato probablemente causan problemas ms serios
en los sistemas de inyeccin de campos petroleros que cualquier otra
bacteria.
Reducen el los iones sulfato o sulfito en el agua a iones sulfuro,
resultando en H2S como un subproducto.
Ellos pueden participar directamente en la reaccin de corrosin por
picadura y causarla directamente debajo de la colonia bacteriana

Corrosin en picadura causada por un Sulfato Reductor de Bacterias

Tipos de Sulfatos Reductores de Bacterias

Cerca de nueve familias o gneros, de bacterias reductoras de sulfato
son conocidos. Sin embargo, la mayora de los problemas de corrosin
SRB se atribuyen a miembros de dos familias: Desulfovibrio y
Desulfotomaculum.

Los organismos reductores de sulfato ms comnmente detectados en el

campo petrolfero pertenecen al gnero Desulfovibrio. (S'9)
Desulfotomaculum puede formar esporas. Una espora bacteriana es una
estructura formada dentro del cuerpo de una bacteria. Las esporas son
resistentes a la temperatura, cidos, alcoholes, desinfectantes, secado,
congelacin y muchas otras condiciones adversas.
Las esporas pueden durar cientos de aos y luego germinar en
condiciones favorables. Una espora tiene muchas de las caractersticas
de una semilla, pero no es una estructura reproductiva.
Efectos de la Salinidad
Los Sulfatos reductores de bacterias se encuentran en las aguas
naturales de todas las salinidades desde cerca de cero hasta la
saturacin.
Muchos Desulfovibria son tolerantes a la sal y pueden crecer en
concentraciones de NaCl tan altas como 100 000 ppm. Las
concentraciones ms altas tienden a limitar el crecimiento.
Desulfovibrio Salexigens tiene un requisito mnimo absoluto de 25000
ppm de NaCl.
Desulfovibrio Vulgaris es una cepa de agua dulce que requiere
concentraciones de NaCl de menos de 10000ppm
Desulfotomacula rara vez se encuentra en aguas que contienen ms de
20000 ppm de NaCl. Por encima de 20000 ppm, la poblacin es casi
siempre Desulfovibria
Temperatura, Presin y PH

Sulfatos reductores de bacterias como grupo son reportados a tolerar

temperaturas de 40-170[F], un intervalo de pH de aproximadamente 5 a
9, y las presiones de al menos 14,57 psi.
Sin embargo, los valores absolutos de temperatura, presin y pH
requeridos para el crecimiento de bacterias reductoras de sulfato en
ambientes naturales son imposibles de indicar con algn grado de
certeza.
Por ejemplo, reductores de sulfato aisladas de pozos con temperaturas
del fondo del pozo de ms de 250F [l21oC] se han cultivado en el
laboratorio a temperaturas ms bajas, pero no creceran a temperaturas
superiores a 19O a presin atmosfrica.
Adems, la temperatura mxima a la que crecen bacterias reductoras
de sulfato aparentemente aumenta con la presin.
Las siguientes declaraciones se aplican a un crecimiento en el
laboratorio en un medio artificial:

Desulfovibrio: El rango de temperatura ptima para el

crecimiento es de aproximadamente 77-110F, con un lmite
superior de temperatura de 120F.

Desulfotomaculum Nigrificans: La temperatura ptima para el

crecimiento es 130F. Exhiben crecimiento lento en 150-160F, y
pueden sobrevivir en 170F.

Desulfotomaculum Orientis: Exhibe un crecimiento ptimo a

temperaturas de 85-100F. Ellos son asesinados cuando la
temperatura supera 108F

Nutricin
Las bacterias absorben sus nutrientes directamente desde el entorno
que les rodea. Cada clula contiene protenas llamadas enzimas que
ayudan a descomponer molculas de nutrientes y activar las
bacterias para extraer energa de ellos.
Una sola clula viva contiene cientos de diferentes enzimas, cada uno
de los cuales es un catalizador eficaz para una reaccin qumica
especfica. Sin embargo, las enzimas trabajan juntas de manera
coordinada para producir los materiales necesarios para el
crecimiento normal de las clulas y el metabolismo.
Aunque todas las enzimas se producen inicialmente en la clula,
algunos son secretadas a travs de la pared celular y la funcin en el
entorno de la clula. Este tipo de enzima permite a la clula de
asimilar grandes molculas por romper hacia abajo fuera de la clula
en molculas ms pequeas que pueden ser absorbidos a travs de
la pared celular.

Los sulfatos reductores de bacterias requieren un nmero de nutrientes

en orden para el crecimiento de la sustancia. Algunos de los ms
importantes son:

Carbn
Nitrgeno y Fsforo
Hierro Disuelto
Sulfatos
Sulfitos
Bisulfitos y Iones Tiosulfatos

Acidificacin de depsito

Ha habido un nmero significativo de casos de "acidificacin

depsito", debido a la reduccin de sulfato

la actividad bacteriana. En cada caso, los fluidos del yacimiento

son inicialmente dulce. Se inicia la inyeccin de un sulfato de
agua-cojinete. En algn momento despus de la irrupcin de agua
de inyeccin en los pozos productores, aparece H2S. La
concentracin se eleva gradualmente, y se ha informado tan alto
como 317 mg / f en la fase de gas.

Ejemplos de bacterias:
Bacterias de Hierro Oxidante

Son capaces de oxidar los iones ferrosos solubles en el agua para

formar una funda de hidrxido frrico alrededor de ellos a medida
que crecen. Ejemplos de bacterias del hierro son Sidemcapsa,
Gallionella y Sphaerotilus. Se clasifican como bacterias aerobias, a
pesar de que aparentemente pueden crecer bien con solamente
trazas de oxgeno (<0,5 ppm).

Bacterias formadoras de limo

Formadoras de limo bacterias son una clase general de bacterias

capaces de producir masas densas de limo sobre superficies
slidas. Ejemplos son Pseudomonas, Flavobacterium, Enterobacte;
Escherichia, y Bacillus. Ellos causan taponamiento y contribuiyen a

la corrosin de la misma manera como las bacterias del hierro

mediante el blindaje de parte de la superficie.

Cultivo de bacterias

El cultivo de las bacterias es anlogo al cultivo de flores, papas.

El objeto es hacer crecer el cultivo bacteriano

El crecimiento artificial es la tcnica estndar para la estimacin

de las poblaciones bacterianas.
Tcnica de dilucin por Extincin

Esta es una tcnica de campo, a veces llamado dilucin en serie, que

puede utilizarse para detectar diferentes tipos de bacterias deteccin de
cada clase o tipo de bacterias requiere un medio de cultivo especfico.
Muestreo
Los procedimientos de muestreo se tratan ms adelante en este
captulo.
PROCEDIMIENTO
El procedimiento de dilucin extincin se ilustra en la Figura 5.3 y se
realiza como sigue:
1. Alineacin de una serie de frascos de suero, conteniendo cada uno 9
ml de medio de crecimiento estril. Una serie 4-6 botellas es comn.
2. Inyectar i ml de la muestra de agua en el primer frasco y agitar bien.
Tire a la jeringa de distancia.
3. Retirar 1 ml de la solucin de la primera botella con una nueva jeringa
estril desechable y lo inyecta en el segundo botella. Agite la botella.
Tire a la jeringa de distancia.
4. Retirar 1 ml de solucin a partir de la segunda botella con una nueva
jeringa estril e inyectar en la tercera botella. Agite bien la botella y tirar
la jeringa de distancia.
5. Repita este procedimiento hasta que todos los botes hayan sido
inoculado

El objetivo de este procedimiento es para diluir la muestra hasta el

punto de que la final 1 ml de solucin que inyectar en la ltima botella
no tiene bacterias en l; Por lo tanto, la tcnica de dilucin nombre
extincin. Diluy la muestra hasta el punto de extincin de cualquier
bacteria presente.
El hecho de que la dilucin se realiza en una serie de relaciones de
dilucin fijos permite estimar
La poblacin bacteriana de la muestra original 1 ml de agua.
La miles del estado de juego que no se puede transferir parte de una
bacteria de una botella a otro suero. Esto significa que cuando usted
retira I ml de una botella de suero que contiene 10 ml de lquido, debe
haber por lo menos 10 bacterias en una botella, o un promedio de al
menos uno de bacterias por ml, antes de una se permite la
transferencia. Por ejemplo, si slo haba 8 bacterias en el bote, la
poblacin media sera 0,8 bacteria por ml, y la transferencia no puede
producirse de acuerdo con las mas.
Del mismo modo, si hay 15 bacterias en una botella, la poblacin media
es de 1,5 bacterias por ml. Dado que slo las transferencias de nmeros
enteros se les permite, una retirada ml de lquido le reporte me bacteria
para transferir a la siguiente botella.

Bacterias Sulfato Reductoras

La serie SRB utiliza un medio de crecimiento que es especfico para las
bacterias reductoras de sulfato. Los recuentos de bacterias obtenidas
utilizando este medio incluyen Desulfovibrio. Desulfotomaculum tambin
puede ser detectado. Sin embargo. Si las condiciones del sistema
parecen ser favorable para el crecimiento de Desulfotomaculum, puede
ser deseable para inocular un medio adicional diseada especialmente
para su deteccin como un precaucin .Comnmente adicional utiliza
medios de comunicacin incluyen los descritos en API RP 38, as como
un nmero de otros medios propuestos por Postgate y otros.
Una vez que las botellas han sido inoculado, que se fijan a un lado y se
dejan "incubar" por un perodo a tiempo. Se recomienda un periodo de
incubacin de 28 das. Sin embargo, la incubacin ms corto periodo
puede utilizarse cuando se pueda demostrar que todo el crecimiento se
produce en menos de 28 das que vienen temperatura constante es
deseable durante el perodo de incubacin y las tasas de crecimiento
son sensibles a la temperatura. Los cultivos deben incubarse a una
temperatura dentro 9De [5 C] de la temperatura registrada del agua
en el momento de muestreo si es posible.
Si no es as, mantener la temperatura entre 77 oF y 1OOoF
Crecimiento est indicado cuando la botella se vuelve negro. Los medios
de comunicacin SRB contienen hierro ferroso soluble o un clavo de
hierro estril. Cuando crecen los SRB, producen H2S que reacciona con
el hierro para formar insoluble, sulfuro de hierro negro.
Conteo general de las bacterias
La serie "general" emplea un medio de crecimiento diferente, que
promueve el crecimiento de bacterias hetertrofas "generales", as como
las bacterias facultativas. Un periodo de incubacin de 5 das es comn.
El escrutinio general "incluye las bacterias aerobias generales,
principalmente los formadores de limo, y tambin puede incluir bacterias
anaerobias, as como las bacterias facultativas. No incluye las bacterias

del hierro. Que son difciles de cultivar en un medio artificial. Por lo

general, se detectan mediante microscpica significa
Tres tipos de medios de comunicacin son de uso comn para la
deteccin de bacterias Hetertrofas generales:
1. Standard bacteriolgicas Nutrient Broth
Crecimiento est indicado por el desarrollo de turbidez. La turbidez es
causada por las clulas bacterianas s mismos, y por lo general es
evidente cuando el recuento de clulas es superior a 1000 por ml.
2. Phenol Red Dextrose Broth

Este medio contiene azcar y rojo de fenol, que es y el indicador cidobase cual cambia de rojo a amarillo cuando el pH del medio de cultivo
me cae por debajo de 6,6. Cuando el azcar se fermenta u oxidado por
bacterias, se producen diversos cidos orgnicos. La acidez resultante
hace que el pH caiga, lo que hace que el color del medio para cambiar
de rojo a amarillo.
Crecimiento se indica por un cambio de color de rojo a amarillo, el
desarrollo de turbidez, o ambos. -Turbidez Indica el crecimiento
bacteriano en general, y un cambio de color indica la presencia de
bacterias productoras de cido.
Tioglicolato Medio.
Este medio se utiliza para detectar bacterias anaerobias hetertrofos.
Crecimiento est indicado por el desarrollo de turbidez.
Una vez que las botellas han sido inoculado, que se fijan a un lado y se
dejan "incubar" durante 5 das a la misma temperatura que las botellas
SRB.
Recuento final
Como regla general, el crecimiento suele ocurrir dentro de 3 das
bacterias generales, pero dos semanas a un mes puede ser requerido
para el crecimiento reductor de sulfato. Las botellas deben ser
examinadas todos los das en busca de signos de crecimiento y los
resultados registrados. La lectura final para las bacterias generales debe
ser Talen despus de 5 das, y el recuento final sobre el SRB debe ser
tomada despus de 28 das a menos que la experiencia indica que
periodos cortosson aceptables.
Interpretacin de los resultados
El nmero de bacterias presentes en los 1 ml originales de agua
inyectada en la primera botella se puede estimar utilizando la Tabla 5.3

Problemas de interpretacin de Crecimiento Comn

Todas las botellas muestran crecimiento
Si todas las botellas muestran crecimiento, entonces no es posible
estimar la poblacin.
Positivos Inmediatos
Un punto de precaucin: Si la primera botella de medios SRB se vuelve
negro dentro de 2 horas despus de la muestra de agua 1 ml se ha
inyectado en la botella, no es el resultado del crecimiento de bacterias
en la botella. Crecen muy rpido, pero no tan rpido. El color negro es
sulfuro de hierro resultante de altos niveles de H2S en la muestra de
agua que reaccionan con el hierro disuelto en el medio de cultivo
bacteriano.
Omitiendo Botellas
A veces, una de las botellas en el medio de una serie queda claro
mientras que las botellas en cada lado de ella muestran crecimiento. Si
esto ocurre, el salto debe observarse, y el nmero de bacterias que
corresponde a el nmero ms alto de botellas en la serie que muestra el
crecimiento debe ser reportado.
Importancia de los resultados
Este mtodo permite la estimacin del nmero de bacterias planctnicas
que flotan en el agua. Dado que la mayora de las bacterias en un
sistema habr bacterias ssiles unidos a superficies slidas, que es una
manera muy pobre para evaluar el nmero de bacterias que viven en
realidad en el sistema. Sin embargo, es una prueba sencilla de realizar, y
ha demostrado ser un indicador muy til del nivel de actividad
bacteriana.
A menudo, el nmero absoluto de bacterias en una muestra de agua
dado es menos importante que los cambios en la poblacin. Si el nmero
de bacterias aumenta a medida que se desplaza por el sistema de la
fuente de agua a los pozos de inyeccin, el crecimiento bacteriano
activo dentro del sistema es casi segura. Del mismo modo, el aumento

de los recuentos bacterianos con el tiempo en cualquier punto dado en

el sistema es un buen indicador de crecimiento activo.
Contador general
Los recuentos bacterianos de menos de 10 000 organismos por ml no se
consideran significativas en aguas no tratadas. Como regla general, un
recuento de 17 000 por ml indica una fuerte posibilidad de taponamiento
y la necesidad de tratamiento biocida. Iniciar examinar inyectividad para
cualquier disminucin y buscar cualquier evidencia de aumento de las
presiones de inyeccin o taponamiento del filtro.
Algunas bacterias forman limo slo GMW sobre una superficie slida y no
sern detectados por esta tcnica.
Sulfato de Reduccin de Bacterias
La presencia de una sola bacterias reductoras de sulfato se considera
que representa un problema potencial. Recuerde que SRB son bacterias
ssiles y que este mtodo slo detecta bacterias planctnicas. Por lo
tanto, las probabilidades son muy altas que existen muchas bacterias
adheridas a la pared del sistema para todo aquel que est flotando en el
agua.
Por el contrario, los recuentos bacterianos bajos no significan
necesariamente que no hay ningn problema bacteriano. Pueden ser por
lo establecido con seguridad bajo los depsitos que muy pocas bacterias
son desalojados de la comunidad ssiles, resultando en bajos conteos en
el agua.
Otra evidencia de la gravedad del problema son los niveles de H2S y
"agua negro" debido al sulfuro de hierro en el agua.
Una vez que se detectan bacterias reductoras de sulfato, que deben ser
monitoreados muy de cerca, y el tratamiento debe ser instituido si
recuentos bacterianos y / o niveles de H2S aumentan
Deteccin bacteriana rpida y mtodos de recuento
Tcnicas de cultivo se basan en el crecimiento de las bacterias para su
deteccin. Las bacterias pueden estar presentes en una muestra dada,
pero no crecen en los medios de comunicacin artificial seleccionado,
que no se detectan. Adems, el crecimiento toma tiempo, y el uso de
cultivo como una deteccin bacteriana y tcnica de contando no es
rpida.
Hay un nmero de mtodos que permiten a uno recolectar rpidamente
informacin sobre las poblaciones microbianas en los sistemas de

campos petroleros. Ellos detectan directamente bacterias o enzimas que

estn asociadas con determinados tipos de bacterias.
Examinacin Microscpica
Tcnicas microscpicas son de gran utilidad para los microbilogos
entrenados.
Por ejemplo, las bacterias del hierro y limo pueden ser identificados
rpidamente con un microscopio de contraste de fase. Sin embargo, a
menudo es difcil distinguir las bacterias de slidos en suspensin.
Microscopa de Fluorescencia
Una forma de hacer que las bacterias se destacan de su entorno es
tratarlos con un colorante fluorescente, o "mancha", lo que los har
fluorescencia cuando se expone a la luz UV de la longitud de onda
apropiada.
Pueden distinguirse fcilmente de las partculas no vivos de tamao y
forma similar al mirarlos a travs de un microscopio con luz ultravioleta.
Esta tcnica se llama microscopa de fluorescencia permite el recuento
directo de bacterias dentro de un tiempo muy corto.
Manchas celulares
Recuentos de clulas totales se pueden obtener usando las manchas
que se combinan con material celular presente en bacterias tanto vivas
como muertas. Manchas comunes usados para este propsito incluyen el
naranja de acridina, y DAPI
El nmero total de clulas vivas se puede determinar utilizando la
mancha FDA (diacetato de fluorescena).
Anticuerpos de la mancha
El tinte fluorescente se une a los anticuerpos que buscan clulas de las
bacterias reductoras de sulfato. En consecuencia, slo aquellas bacterias
reconocidas por los anticuerpos floreceran bajo el microscopio. La
principal ventaja del mtodo es la velocidad, como se obtienen
resultados dentro de dos horas.
La principal limitacin de este mtodo es que los anticuerpos son
especficos para el tipo de SRB utilizado en su fabricacin. Sin embargo,
un gran nmero de anticuerpos SRB puede ser combinado para hacer la
prueba bastante general. El mtodo detecta tanto las clulas vivas y
muertas.
Desafortunadamente, adems de requerir personal capacitado, tcnicas
microscpicas no son prcticas para su uso rutinario en el campo.

Fotometra de ATP
Anlisis ATP proporciona un medio para determinar rpidamente la
cantidad de organismos presentes en un agua de inyeccin viviente. No
es especfico para las bacterias, pero ya que la mayora de los
organismos presentes en muchas aguas de yacimientos petrolferos son
bacterias, puede ser una tcnica muy til. Es particularmente til en la
evaluacin de los programas de tratamiento de biocidas.
La base para el mtodo es:
1. ATP (trifosfato de adenosina) est presente en las clulas de todos
los organismos vivos.
2. ATP se destruye dentro de los 20 segundos de la muerte celular a
travs de la liberacin ATP de enzimas destruidas.
3. La cantidad de ATP por clula es una funcin lineal de volumen de
la clula, por ejemplo, dos veces los resultados de volumen de
clulas en como mucho dos veces ATP.
DETERMINACIN DE ENZIMAS
Medicin de hidrogenasa
La prueba se utiliza para detectar la presencia de la enzima
hidrogenasa, esta enzima es producida por las bacterias que utilizan
hidrgeno como fuente de energa.
El hidrgeno se genera en el ctodo en muchas reacciones de corrosin.
La utilizacin de este hidrgeno por bacterias tales como SRB
despolariza el ctodo y acelera la reaccin de corrosin. Por lo tanto, la
presencia de hidrogenasa indica la presencia de bacterias que pueden
acelerar la reaccin de corrosin por la despolarizacin catdica.
La prueba de hidrogenasa se realiza generalmente utilizando muestras
ssiles. La muestra se expone a una solucin de enzima de extraccin, y
el grado de oxidacin de hidrgeno en una atmsfera libre de oxgeno se
indica mediante una reaccin de color con un colorante.
Una respuesta se puede esperar en 30 minutos a 4 horas. Una
exposicin de 12 horas se utiliza generalmente para fines de
comparacin. La prueba puede llevarse a cabo en el campo o en el
laboratorio.
Medicin de APS-reductasa
Este mtodo se basa en la definicin funcional de las bacterias
reductoras de sulfato, que incluye cualquier bacteria capaz de reducir el
sulfato a sulfuro anaerbicamente. Un requisito nico para este proceso

es la presencia de una enzima, APS-reductasa. Desde esta enzima

interno es comn a todos de SRB, la medicin de su concentracin en
una muestra permite la estimacin del nmero total de SRB presente.
La prueba requiere aproximadamente 20 minutos y puede llevarse a
cabo en el campo o en el laboratorio usando kits de ensayo disponibles
comercialmente. El lmite inferior de deteccin es tpicamente de
aproximadamente 1.000 clulas / ml, aunque la sensibilidad se puede
aumentar mediante la concentracin de la muestra.

MUESTREO DEL AGUA PARA ANLISIS BACTERIANO

Se toman muestras para la determinacin tanto de la planctnicos y
poblaciones ssiles. El muestreo de la agua para determinar el nmero
de bacterias planctnicas presentes es de lejos la prctica ms comn.
Puntos de muestreo
Muestra los siguientes puntos en un sistema de inyeccin:
1. Fuente de Agua
La boca de pozo, estanque, arroyo, lago, ocano, o el agua producida.
2. Tanques y filtros
Muestra tanto la entrada y la salida, as como la descarga de retro
lavado en filtros.
3. Inyeccin de pozos
Muestra en varios cabezas de pozo de inyeccin situados a diferentes
distancias de la planta de inyeccin.
MUESTREO PARA EL ANLISIS DE BACTERIAS PLANCTNICAS
La tcnica de muestreo es bsicamente el mismo que el descrito
previamente. Sin embargo, hay algunos requisitos adicionales:
1. Si se utiliza un recipiente de la muestra, debera ser inicialmente
estril, o libre de bacterias.
2. El uso de una manguera de toma de muestras de plstico o de goma
que se ha utilizado previamente no se recomienda, ya que es una
posible fuente de contaminacin. Usted no quiere contaminar la muestra
y encontrar un problema bacteriano que en realidad no existe en el
sistema.

3. La muestra de tal manera que el oxgeno se excluye cuando el cultivo

de bacterias reductoras de sulfato.
4. Un procedimiento alternativo para la recogida de una muestra de
agua es insertar la punta de la jeringa directamente en la corriente de
agua que fluye desde la vlvula de muestra, entonces inocular
inmediatamente la primera botella de medios de comunicacin. Este
mtodo es ideal para el anlisis in situ.
Sincronizacin
La muestra de agua debe ser inyectada en el medio de crecimiento o
sometido a otros anlisis inmediatamente despus del muestreo. Los
cambios en la poblacin bacteriana se producen rpidamente y
muestras viejas pueden dar una imagen falsa de la poblacin en el
sistema de agua.

Concentracin sulfuro
Aspiracin la muestra para H2S, luego medir la concentracin total de
sulfuro. Si el agua que entra en el sistema es dulce, pero se vuelve agria
alguna parte del sistema, esta es una muy buena seal de que el sulfato
reductores son la fuente de los H2S.
Tambin tenga en cuenta el color, la claridad y la cantidad de slidos en
suspensin. Problemas SRB graves a menudo causan que el agua se
vuelve negro debido a la formacin de sulfuro de hierro.
MUESTREO DE BACTERIAS SSILES
Dispositivo Robbins
El dispositivo de Robbins fue desarrollado en la Universidad de Calgary
por Robbins y Costerton como un medio de estimacin de la poblacin
de bacterias ssiles en un sistema de agua.

El concepto bsico del dispositivo es insertar, cupones pequeos,

estriles de acero o "tacos" a travs de la pared de un trozo de tubera
de dimetro 1/2 pulgadas de tal manera que la cara de los cupones
quede al ras de la pared interna del tubo. En efecto, se convierten en
una parte de la pared del tubo y proporcionan un sitio para el
crecimiento de bacterias ssiles. Una corriente lateral de agua del
sistema se hace fluir a travs del dispositivo, y despus de un perodo
de exposicin dado, se eliminan los esprragos, y el nmero de bacterias
en cada esprrago es evaluado por uno de varios mtodos.
Sondas biolgicas comercial basado en los principios de la Dispositivo
Robbins son comercializados por varios proveedores. Estas sondas
consisten en un soporte que contiene de cinco a ocho, pernos de acero
dulce pequeas o cupones. La sonda est disponible en dos versiones:

Sistemas de Acceso de Alta Presin

Este tipo de sonda contiene cinco o seis pernos y est diseado para la
conexin a un acceso de alta presin apropiado. Esto permite que la
sonda que se instalar y se recupera sin despresurizar el sistema
mediante el uso de uno de los sistemas de acceso de alta presin.

Sistemas de baja presin.

La sonda contiene ocho tacos y est unido a un tapn roscado de dos

pulgadas. La porcin del sistema donde se encuentra la sonda debe ser
aislado por medio de vlvulas y despresuriza para la insercin de la
sonda y la eliminacin.

El procedimiento general para el uso de una sonda biolgica es la

siguiente:
1. Esterilizar los pernos por inmersin en alcohol etlico, y se insertan en
el soporte de plstico con pinzas estriles. (No toque los pernos!)
2. Instale la sonda en el sistema, preferiblemente en la parte inferior de
una lnea en la posicin 5 o 7 en punto.
3. Despus del perodo de exposicin deseado (tpicamente 2-6
semanas) quitar la sonda del sistema y extraer rpidamente el nmero
deseado de pernos. Tenga cuidado de no contaminar los montantes. No
los toque!
4. Determinar el nmero de bacterias adheridas a la superficie de cada
esprrago. Tres mtodos son de uso comn:
a. Cada esprrago se coloca en un tubo de ensayo de plstico que
contiene una solucin y perlas de vidrio especiales.
Las bacterias son entonces desalojados del esprrago colocando el tubo
de ensayo en un mezclador de vrtice o con la mano agitacin vigorosa
durante dos minutos. Una porcin de la solucin es entonces eliminado y
el contenido bacteriano evaluadas por la ATP o mtodos de dilucin en
serie.
b. La segunda tcnica consiste en el raspado de la biopelcula de la
superficie del perno prisionero con una hoja de bistur estril. Los

raspados, el esprrago, y la hoja se colocan en una solucin especial,

que se pone entonces en un dispositivo de limpieza ultrasnico. Una
muestra de la solucin se evalu a continuacin mediante dilucin en
serie o mtodos de ATP.
c. La poblacin bacteriana en una superficie esprrago tambin se
puede determinar mediante examen directo mediante microscopa de
fluorescencia.
TIPOS DE PRODUCTOS QUMICOS

Los productos qumicos utilizados para el control de bacterias pueden

clasificarse ampliamente en varias maneras.
Funcin
1. Bactericida: Una sustancia qumica que mata las bacterias.

2. Bacteriostato: Un producto qumico que inhibe o retarda el

crecimiento de bacterias.
3. Biocida: Un qumico que KINS otras formas de vida, adems de
bacterias. Un asesino ms universal.

4. Biostat: Un producto qumico que retarda o inhibe el

crecimiento de otras formas de vida adems de bacterias.
Composicin Qumica
Cloro

El cloro es el biocida inorgnico ms ampliamente utilizado para

sistemas de inyeccin de agua. Su uso se limita a las aguas
superficiales, como el agua de mar y agua dulce de los pozos de
abastecimiento. Su uso se cubre en una seccin posterior de este
captulo.
Dixido De Cloro
El dixido de cloro (Cl02) se utiliza como un bactericida en aguas
industriales. Se genera tpicamente en el sitio mediante la mezcla de
clorato de sodio (NaCIO3) o clorito de sodio (NaCIO2) con cido
clorhdrico para producir Cl02 y con xito se ha utilizado en sistemas de
campos petroleros.
Tambin se puede crear mediante la reaccin de clorito de sodio con
cloro.
Es un poderoso oxidante y reacciona con los sulfuros en agua para
formar sulfatos.
Las principales preocupaciones con el uso de dixido de cloro son su
corrosividad al acero y la posibilidad de crear una mezcla combustible
cuando entra en contacto con petrleo crudo. Estas preocupaciones han
limitado su uso como biosida en las operaciones de produccin.
Qumica Orgnica
Los aldehdos, compuestos de amonio cuaternario y aminas son
ejemplos comunes de bactericidas orgnicos. La mayora de los
bactericidas vendidos por empresas qumicas, con excepcin del cloro,
son orgnicos.
Aldehdos
Glutar aldehdos son muy ampliamente utilizados para el control de
bacterias en el campo petrolero. La acrolena tambin se utiliza, pero
mucho ms raramente. (Consulte el Captulo 6 para ms informacin
sobre acrolena) El formaldehdo se utiliza todava debido a
preocupaciones por su papel como un cancergeno.
Los aldehdos no son muy buenos en las biopelculas penetrantes y, a
menudo se mezclan con otras sustancias qumicas, tales como
compuestos de amonio cuaternario para aumentar su eficiencia de
penetracin.
"Quats" y aminas
Compuestos de amonio cuaternario y compuestos de fosfonio
cuaternario se refieren comnmente como "Quats." Estn en superficie
muy activa y efectivamente actan como detergentes. Su uso se limita a

las aguas con bastante baja salinidad, como el agua de mar y ms

fresco.
Las aminas son bastante similares a quats. Son muy superficie activa.
Cuando se aplica continuamente se comportan como inhibidores de la
corrosin.
La cloracin se utiliza muy ampliamente porque es uno de los menos
caros y ms eficaz
bactericidas. Cuando se aade a agua, el cloro se hidroliza para formar
hipocloroso y hydroc Moricacids :
Efecto del pH
El grado de ionizacin es dependiente de pH . Por debajo de un pH de 5 ,
molecuiv cNorine est presente
Por encima de este pH , ESPECIAL | y OCl son las especies presentes .
Los porcentajes se muestran como una funcin del pH en la Figura:

La eficacia de cloro depende de cul de estas especies est presentes y

por lo tanto es una
En funcin del pH. Por ejemplo, el poder de matar de HOCl es mucho
mayor que la de OCl. Por lo tanto, la ms alto es el pH, menos eficaz una
cantidad dada de cloro. Es tan slo a 10 % activa a un pH de 8-9.

Sin embargo, en aguas que contienen iones bromuro (tales como agua
de mar) , el cloro oxida los iones bromuro a HOBr forma , que todava es
un biosida eficaz a pH 8-9.
La cantidad de cloro requerida para efectuar una muerte es una funcin
del tiempo y temperatura as como el pH. La velocidad de destruccin
aumenta con la temperatura y disminuye con el pH.
Generadores de hipoclorito

El hipoclorito se pueden producir en agua que contiene cloruro por

electrlisis.

La salmuera se hace pasar a travs de una celda electroltica

especial llamado generador de hipoclorito, que contiene dos
electrodos de un nodo y un ctodo.

Una corriente elctrica DC fluye desde el nodo al ctodo a travs

de la salmuera.

Los generadores de hipoclorito se utilizan comnmente en los

sistemas de agua de mar para eliminar la necesidad de
transportabilidad y almacenamiento de cloro lquido.

Soluciones de hipoclorito
Soluciones de hipoclorito lquido, tal como hipoclorito de sodio o
hipoclorito de calcio estn disponibles y pueden ser inyectados
con una bomba qumica convencional. Rara vez se utilizan debido
a su alto costo en relacin con las otras fuentes de cloro.
SELECCIN Y EVALUACIN DE PRODUCTOS QUMICOS
Seleccin

Problema

Seleccin producto qumico para el control bacteriano es

anloga a la seleccin de una sustancia qumica para el
control de la corrosin o la escala.

El problema (del tipo de problema bacteriana) debe ser

identificado, qumicos, hombres escogidos que se ocuparn
de manera efectiva.

Pruebas

En el lugar se recomienda realizar pruebas de letalidad de

diferentes bactericidas como primer paso en la seleccin de
productos qumicos.

Varios elementos deben ser considerados en la seleccin:

Matar o controlar?
La decisin de usar un bactericida o bacteriosttico es dictado por
el tipo de bacterias implicadas. Reductores de sulfato requieren un
bactericida, ya que se desea una muerte total.

Puesto que un nmero razonable de formadores de limo puede ser

tolerado sin problemas graves, un bacteriosttico se utiliza a
menudo para su control.

Cepas resistentes
A menudo escuchamos acerca del desarrollo de cepas resistentes,
que se vuelven resistentes a un biocida en particular.

Esto parece inferir mutacin gentica que da lugar a la evolucin

de una bacteria que es extremadamente difcil de matar.

Cloro
Las bacterias no desarrollan una inmunidad al cloro. Sin embargo,
en concentraciones normales, el cloro tiene un poder limitado para
penetrar en los depsitos y las masas orgnicas y puede no ser
eficaz en los sistemas sucios. Eficacia a menudo puede ser
mejorada por la inyeccin de un agente tensioactivo apropiado
junto con cloro.
Compatibilidad
Asegrese de que el producto qumico es compatible con su agua.
Algunos se precipitan en salmueras ms altos. Adems, la
compatibilidad con los secuestradores de oxgeno e inhibidores de
corrosin o escala debe ser establecida.
Mtodo de Tratamiento
Si el bactericida es inyectado de forma continua con una
concentracin inicialmente alta por lo general se requiere llevar el
control de una poblacin de bacterias; a continuacin, las
concentraciones qumicas inferiores pueden generalmente ser
efectivo una vez que la poblacin bacteriana ha sido controlado.

En la mayora de los casos, los biosidas orgnicos se inyectan de

forma discontinua debido a la mejora de la rentabilidad sobre
inyeccin continua.

Adems, la adaptacin selectiva es ms probable cuando las

bacterias estn expuestos a concentraciones de bajo nivel
continuo que cuando se somete a golpes peridicas de alta
concentracin.

Dado que la inmunidad no es un problema con el cloro, se inyecta

generalmente sobre una base continua. Las concentraciones se
mantienen tan bajos como sea posible a fin de minimizar cualquier
aumento de la corrosividad, as como por razones econmicas.

APLICACIN QUMICA
Limpie el sistema
La primera regla de la utilizacin con xito de bactericidas es limpiar el
sistema. Es necesario un trabajo de limpieza a fondo y tiene un solo
propsito: para eliminar todos los obstculos entre el bactericida y las
bacterias. Sin qumico puede matar las bacterias si no se puede
contactar con ellos! (5.4)
1. Limpie las lneas de inyeccin y el tubo como se indica en el captulo
3, el uso de disolventes, cidos y raspadores de lnea si es necesario.
2. Abrir todos los tanques, recipientes y filtros y limpiar manualmente
todos lodos acumulados y escala.
3. Reflujo todos los pozos de inyeccin. Si los pozos estn conectados
con los depsitos bacterianos o lodos, un fuerte agente oxidante tal
como hipoclorito de sodio se utiliza normalmente para atacar a ellos.
Con el fin de lograr la mxima eficacia, el hipoclorito de sodio es
generalmente seguido por el cido clorhdrico.
Eliminar las zonas de velocidad baja o zonas estancadas
Examinar la posibilidad de eliminar las zonas de velocidad estancadas o
bajas por cambios en diseo en el sistema. Puesto que las bacterias
crecen ms rpidamente en aguas en movimiento lento o estancado,
modificacin del sistema para reducir al mnimo el nmero de zonas de
baja velocidad har que el control de bacterias en una tarea ms fcil.
Esterilizar el Sistema
Una vez que el sistema se ha limpiado, se debe "esterilizar". Esto
significa que las bacterias deben ahora ser asesinadas. Una alta
concentracin de babosa bactericida, con tiempo de residencia
suficiente para matar las bacterias, se utiliza. No se olvide que esto
significa que las lneas, tanques, filtros y pozos de inyeccin. Sin
embargo, tambin significa la fuente de agua. Esto implica con
frecuencia la produccin de los pozos si se utiliza agua producida.
Instituto de Tratamiento
En este punto el tratamiento "normal", ya sea continuo o discontinuo,
puede ser instituido. El producto qumico se debe aadir tan cerca de la

fuente de agua como sea posible. Hay que aadir en una zona donde es
posible una buena mezcla.
La inyeccin en la lnea de la ingesta de agua (aguas superficiales), por
debajo del anillo de la oferta as, o simplemente despus de la bomba de
alimentacin es en los comunes.
Evaluacin de Programas de Tratamiento Qumico
Al igual que en cualquier otra situacin, la pregunta final es si es o no el
producto qumico (s) seleccionado en realidad trabaja en su sistema.
Esto slo se puede determinar mediante el control de cerca el sistema.
Un buen programa de monitoreo incluir alguna combinacin de los
siguientes procedimientos, llevados a cabo en todo el sistema en un
horario regular:
1. La inspeccin de los puntos de inyeccin qumica para asegurar que el
producto qumico es el que seleccionado, y que est siendo inyectada en
el sistema a la concentracin adecuada.
2. Estimacin de familias especficas de la poblacin bacteriana
planctnica en muestras de agua mediante dilucin en serie u otros
mtodos de cultivo.
3. Estimacin de la poblacin total de plancton en el agua usando ATP o
fluorescencia Micros-copia.
4. Estimacin de la poblacin bacteriana ssil utilizando un dispositivo
de Robbins para la recogida, ATP o microscopa de fluorescencia para la
estimacin de la poblacin total, y el cultivo para identificar los tipos de
bacterias.
5. La medicin de las concentraciones de H2S.
6. El examen visual de las mediciones de agua y slidos suspendidos.
7. La inspeccin interna del sistema de depsitos y la corrosin.
Cabe destacar que usted puede ser capaz de matar las bacterias
planctnicas, sin embargo, dejar de matar las bacterias ssiles que
estn realmente haciendo el dao al sistema. Cuando esto sucede, es
tpicamente debido a la presencia de la escala, los productos de
corrosin, o depsitos de blindaje las bacterias de la qumica, y / o la
incapacidad de la sustancia qumica para penetrar en el biopelicula.
El xito de un programa de tratamiento debe ser juzgado no slo por
una disminucin en la poblacin bacteriana, pero tambin por una
disminucin en la frecuencia de fugas, conectar, y los slidos, junto con
el aumento de la claridad del agua suspendida.
RADIACIN ULTRAVIOLETA
Es bien conocido que la luz ultravioleta matar las bacterias. Se detiene
el crecimiento mediante la produccin de alteraciones qumicas en la
clula que le impide dividiendo. Sin embargo, las unidades ultravioleta

comerciales capaces de tratar grandes volmenes de agua no estaban

disponibles hasta mediados de 1980.
Cuando el agua que contiene bacterias fluye a travs de una unidad de
luz ultravioleta, la probabilidad de matar a una bacteria dada es
dependiente de la longitud de tiempo que la clula se expone a la luz
ultravioleta y la intensidad de la luz que llega a la clula. La intensidad
de llegar a la clula depender de:
1. La salida de la lmpara (s), que se mide normalmente en mili vatios /
cm2.
2. La distancia desde la fuente de luz UV a la bacteria.
3. La naturaleza y la cantidad de materia en suspensin en el agua.
Partculas no disueltas se dispersan parte de la luz UV, reduciendo as la
cantidad de penetracin del agua.
4. Cualquier material disuelto en el agua que puede absorber la energa
ultravioleta reducir la intensidad. Las pelculas pueden acumularse en
las ventanas de cuarzo entre el agua y la luz UV y reducir la intensidad
de la luz. Ventanas de cuarzo se utiliza cuarzo, el cual es transparente a
las longitudes de onda ultravioleta.
Una curva tpica de dosis-respuesta se da en la Figura 5.8. La dosis se
expresa como mili vatios-segundos cm2 /, que es el producto de la salida
de la lmpara (mili vatios / cm2) multiplicado por el tiempo de
exposicin en segundos. La matanza relativa se expresa tanto como la
fraccin de supervivencia, que es el nmero de clulas divididas por el
nmero original de clulas supervivientes, y como los supervivientes por
ciento.
Resultados dadas para una prueba de campo demostraron una matanza
99,9 +% de las bacterias reductoras de sulfato. Adems, se dijo que el
costo de utilizar la luz ultravioleta fue significativamente menos costoso
que el uso de un tratamiento biosida en el caso reportado. (5.27)
Unidades de luz ultravioleta estn destinadas a evitar la entrada de
bacterias planctnicas en una parte particular de un sistema al matar a
ellos, ya que se realizan a travs de la unidad en el agua. Cualquier
bacteria que escapan a la muerte en la unidad de UV sern libres a
multiplicarse en el sistema, ya que no hay ningn efecto residual de la
radiacin. Por lo tanto, es probable que alguna forma de tratamiento
qumico todava se requiera en la mayora de los sistemas donde se
utiliza radiacin UV.
Cabe sealar que el uso de luz ultravioleta se limita a aguas que
contienen muy pequeas cantidades de slidos en suspensin y limpiar
poca o ninguna disuelta o suspendida de aceite, debido a la capacidad

de estos materiales para reducir la intensidad de la luz ultravioleta

transmitida a travs del agua.