Microbiologa II

UNIVERSIDAD DE
BELGRANO
MARISA M RODRIGUEZ
Licenciada en Ciencias Biolgicas

ANALISIS BACTERIOLOGICO DE AGUAS

AGUA POTABLE
Libre de microorganismos patgenos y libre
de minerales, de sustancias orgnicas que
puedan producir efectos fisiolgicos
adversos.
Libre de turbidez visible, color
y sabor aceptables.
Podr ser ingerida o utilizada en el
procesamiento de alimentos sin temor por
los efectos nocivos que pueda producir
sobre la SALUD.

Artculo 982 "Agua potable de suministro

pblico y uso domiciliario" (1994)
PARAMETROS MICROBIOLOGICOS
Aguas para consumo humano
Rcto. de Bacterias Aerobias Mesfilas
< 500 UFC/ml
Rcto. Coliformes totales NMP igual o
< de 3/100 ml
Rcto. Escherichia coli ausencia en 100 ml
Rcto. Pseudomonas aeruginosa ausencia
en 100 ml

Como

P
R
E
V
E
N
C
I
O
N

evitar las
enfermedades de
transmisin hdrica?

Tratamiento de aguas
residuales antes de su eliminacin o
reutilizacin.
Mtodos de purificacin del agua
para proporcionar agua potable y
segura.
Control microbiolgico del agua

Aislamiento de
microorganismos
patgenos

H2O de peligro
potencial para
la salud.

Pero
En que nmero?
Que microorganismo?
Sistema de deteccin temprana
"alarma?

Que buscamos?
Indicadores de contaminacin fecal.
Deben estar presente en gran nmero
en el intestino del hombre y animales de
sangre caliente
Fcilmente detectable por mtodos
analticos simples y econmicos
No debe proliferar en aguas naturales
Debe tener una persistencia en el
agua similar a la de los patgenos.

Que buscamos?
FAMILIA ENTEROBACTERIACEAE
Enterobacterias
Coliformes totales
Coliformes termotolerantes
E. coli
BACILOS GRAM NEGATIVOS
NO ESPORULADOS
OXIDASA NEGATIVA
AEROBIOS ANAEROBIOS FACULTATIVOS
UTILIZAN GLUCOSA (ACIDO Y GAS)
REDUCEN NITRATOS

Coliformes totales
CARACTERSTICAS
Origen (habitat) fecal y no fecal
Bacilos gram-negativos, oxidasa (-) ?
Crecen en presencia de sales biliares
?
Fermentan lactosa con produccin
de cido y gas a 35-37 C en 48 hs

La prueba debe realizarse utilizando

cultivos frescos (18-24 horas), y que
no provengan de medios con azcares
con pH cido
Microorganismo

Oxidasa

Pseudomonas aeruginosa

Neisseria spp.

Aeromonas spp.

Vibrio spp.*

Moraxella

Familia Enterobacteriaceae

G (-)
cepas que fermenten
la lactosa

ssales biliares
Violeta cristal
Rojo neutro
Lactosa
Peptona

un indicador visual de pH, distinguiendo as las bacterias gram negativas

que pueden fermentar la lactosa (Lac+) y las que no pueden (Lac-).

Presencia de coliformes totales

Coliformes totales
Desventajas:
Crecimiento en el sistema de distribucin.
Ser habitantes normales del suelo, plantas y agua.
No siempre estn presentes durante los brotes de
origen hdrico.

Coliformes termotolerantes

Su presencia en agua tratada indica:

Contaminacin fecal
Inadecuado tratamiento para remocin
de bacterias fecales.
En agua cruda indica el grado de
contaminacin, el tipo de tratamiento
para potabilizarla y el riesgo sanitario.
son capaces de fermentar lactosa
a 44-45 C se
conocen como coliformes
termotolerantes

Coliformes termotolerantes
CARACTERSTICAS
Coliformes que fermentan la lactosa a
44,5C con produccin de gas.
Incluyen Escherichia coli, Citrobacter
spp.,Klebsiella spp. y Enterobacter spp.
Origen (hbitat) predominantemente
fecal

Escherichia coli
Pertenece a los Coliformes
Termotolerantes
Origen (hbitat) intestino del hombre y
animales de sangre caliente
Su presencia indica:
Contaminacin fecal
Inadecuado tratamiento para remocin
de bacterias fecales

Pseudomona aeruginosa
CARACTERSTICAS
Patgeno oportunista
Bacilo gram- negativo, no fermentador,
oxidasa positivo, mvil, produce
pigmentos
Muy diseminado en el medio ambiente
Moderada resistencia a la cloracin

Mtodos para Detectar

Coliformes
NMP
Basado
en probabilidad estadstica
{
NO es recuento directo
Tcnica lquida
Medio Slido
Recuento directo en medio

NMP/MPN
Las bacteria tienen una distribucin al
azar.
Los organismos no se aglutinan.
Si hay un microorganismo presente,
crecer.
PERO.
Existen las condiciones apropiadas para
crecer

NMP-El mtodo
Serie de diluciones de la muestra de
cultivo, en un medio lquido adecuado
para el crecimiento de dicho organismo
de un volumen diez veces mayor.
Se incuban las muestras de esos tubos
y, pasado un tiempo, se examinan los
tubos.

NMP
Aquellos tubos que recibieron una o
ms clulas microbianas
procedentes de la muestra, se
pondrn turbios, los tubos que no
recibieron ninguna clula
permanecern transparentes.

NPM
Al aumentar el factor de dilucin, se
alcanza un punto en el que algunos tubos
contendrn tan slo un microorganismo y
otros tubos no contendrn ninguno.
Al calcular la probabilidad de que los tubos
no hayan recibido ninguna clula, se puede
estimar el nmero ms probable de
microorganismos presentes en la
muestra original, a partir de una tabla
estadstica.
La precisin del mtodo del nmero ms
probable aumenta con el nmero de tubos
que se usan.

Sembrar
10ml

10 ml Caldo
Brila-Fluorocult

Sembrar
0.1ml

Sembrar
1ml

5 ml Caldo

Incubar 48 hs a 37C.

Brila-Fluorocult

Seleccionar los tubos que posean gas

en el interior de la campana de Durham

TABLA 1
Nmero ms probable en 100 ml. usando 3 tubos
sembrados con 10, 1 y 0,1 ml. de muestra

Mtodo de Wilson en caldo Brila Fluorocult

Produccin de gas

Coliformes totales
En el mismo tubo
UV
fluorescencia

Reactivo de
Kovacs(indol)

Fluorescencia
+

Anillo rojo
+

Fecales
(E. coli)

No Coliformes
Caldo citrato (48hs a 37C)

Turbidez

No fecales

Sin turbidez

Ausencia de
NO FECALES

MEDIDAS DEL CRECIMIENTO MICROBIANO.

MD
Muestras en porta
(Camara de PetroffHausser)

No diferencia clulas
viables de no viables
Rcto. de
clulas
totales

Contadores electrnicos de
partculas

MID
TURBIDIMETRIA

MCFARLAND

0.5
2

Estndares de turbidez
Saber que el nmero de bacterias
(UFC/mililitro)
Una escala que va de 0.5 a 10.
Patrones de BaCl2/ H2SO4

Precipitacin qumica y
una suspensin
bacteriana.

Escala

0.5

10

Nro. Aprox de
bacteria x108

1.5

12

15

18

21

24

27

30

BaCl2 (1%)

0.05

0.1 0.2

0.3

0.4

0.5

0.6

0.7

0.8

0.9

1.0

H2SO4(1%) 9.95

9.9 9.8

9.7

9.6

9.5

9.4

9.3

9.2

9.1

9.0

RECUENTO DE CLULAS VIABLES

VIABLES Clulas capaces de dividirse y dar descendencia.
EXTENCION EN PLACA:
Hasta
cuando?
UFC

100l

Superficie seca
Vol de siembra 100l

Cc inculo inicial

DILUCIONES Seriadas 1/10

900 l caldo(MH/BHI/TS) o SF c/u
100 l

100 l 100 l

100 l

Del tubo del inculo

pipetear 100 l y
trasvasar al tubo 1,
homogeneizar bien y
repetir la operacin para
los otros tres tubos.
Luego sembrar 100l en
la placa que corresponde
a cada dilucin.

Inculo

100 l

1/10

100 l

1/100

4
100 l

1/1000

Diluciones del inculo

100 l

1/10000

Recuento de inculo

Dilucin 1 / 10
5000 colonias

Dilucin 1/1000
50 colonias

Dilucin 1/100
500 colonias

Dilucin 1/10000
5 colonias

VERTIDO EN PLACA

al vol
de siembra
UFC

TC agar fundido
Homogenizacin