Manual Clinico

PARASITOLOGIA
5.1 EXAMEN FSICO DE HECES
1.1.1. PROPSITO:
Por medio de la observacin macroscpica de la muestra de heces determinar el color,
la consistencia,
presencia de mucus, sangre, restos alimenticios o parsitos.
1.1.2. MUESTRA REQUERIDA:
5 gramos de heces recin emitidas, instruir al paciente que colecte en el frasco la
porcin de muestra
que evidencia el dao intestinal (Mucus, sangre, parsitos). No son recomendables las
muestras
obtenidas con laxantes o enemas.
1.1.3. MATERIALES:
-
Frascos plsticos de boca ancha y tapa de rosca, con aplicador.

Aplicadores de madera.
Guantes descartables.
Marcador.
Laminas y laminillas.
1.1.4. PROCEDIMIENTO:
-
Observar el color de la muestra.

Observar la consistencia de la muestra.
Utilizar un aplicador de madera para buscar la presencia de mucus en la muestra.
Observar la presencia de restos alimenticios en la muestra.
Anotar los hallazgos.
1.1.5. FUENTES DE ERROR:

- Ingesta de medicamentos y algunos alimentos con colorantes.
- Frascos sucios.
- Contaminacin de las heces con orina.
1.1.6. FORMA DE REPORTE:
-
COLOR: Marrn, amarillo, verde, rojo, aclico (blanco), negro.

CONSISTENCIA: Dura, cbalos, blanda, pastosa y lquida.
PRESENCIA DE MUCUS: Negativo o Positivo.
RESTOS ALIMENTICIOS: Escasos, moderados o abundantes.
Valores de referencia:
- COLOR: Marrn
- CONSISTENCIA: Pastosa a blanda.
- PRESENCIA DE MUCUS: No debe observarse.
- RESTOS ALIMENTICIOS: Escasos.
1.1.7. RESPONSABLE:
Profesional Tecnlogo Medico y/ o Tcnico de laboratorio.
1.2 EXAMEN MICROSCPICO DE HECES

1.2.1. PROPSITO:
Analizar microscpicamente una muestra de heces en busca de la presencia de
leucocitos,
parsitos protozoarios y metazoarios en sus diferentes estadios.
5 gramos de heces recin emitidas. No son recomendables las muestras obtenidas con
laxantes o
enemas.
1.2.3. MATERIALES Y REACTIVOS:
-
Lminas porta objeto.

Laminillas cubre objeto.
Marcador.
Aplicaciones de madera.
Solucin salina 0.85%.
Solucin de Lugol para heces.
Papel lente.
1.2.4. EQUIPO:
- Microscopio
- Identificar la lmina porta objeto
- Colocar en un extremo de la lmina portaobjeto una gota de solucin salina al 0.85%.
- Seleccionar la parte ms representativa de la muestra (mucus o sangre, si hay
presencia
de estos).
- Agregar con un aplicador 1 a 2 mg de material fecal seleccionada y emulsionar.
- Cubrir la preparacin con una laminilla cubreobjeto, colocndola en ngulo de 45
sobre el borde de la preparacin y bajndolo con cuidado a fin de que no queden
burbujas
entre el cubre y el porta objeto.
- Colocar en el otro extremo del portaobjeto, una gota de lugol para heces y repetir el
procedimiento anterior.
- Observar en forma sistemtica al microscopio, con el objetivo 10x y luego con el 40x.
- Reportar todo lo observado. (Anexo 2)
Con solucin salina 0.85%, los trofozoitos y quistes de los protozoarios se observan en
forma natural
y con lugol se visualizan las estructuras internas, ncleos y vacuolas.
- Desecacin de la preparacin.
- Preparacin muy gruesa o delgada.
- Intensidad de luz inadecuada.
- Contaminacin de la muestra con orina.
- Dejar transcurrir ms de 3 horas despus de la recoleccin para observar formas
activas
en la muestra.
- Omitir la preparacin y observacin con lugol.
- No examinar en forma sistemtica.
- Muestra de heces escasa o seca en el frasco.
PARSITOS: Anotar el nombre del gnero y especie, as como su estado evolutivo.
LEUCOCITOS: Reportar el nmero de leucocitos por campo.
ERITROCITOS: Reportar el nmero de eritrocitos por campo.
LEVADURAS: Escasas, moderadas o abundantes.
RESTOS DE GRASA: Reportar de moderado a abundante.
PARSITOS: No se deben observar.
LEUCOCITOS: No se deben observar.
ERITROCITOS: No se deben observar.
RESTOS ALIMENTICIOS: de escasos a moderados.
LEVADURAS: No se deben observar.
RESTOS DE GRASA: Reportar de moderado a abundante.
1.3 PRUEBA DE AZUL DE METILENO
1.3.1. PROPSITO:
Es la bsqueda de leucocitos polimorfonucleares y mononucleares en una muestra
lquida coloreada
con azul metileno lo que permite identificar si se trata de un proceso viral o bacteriano.
5gr. de heces frescas y lquidas, instruir al paciente sobre la forma de colectar la
muestra.
1.3.3. MATERIALES Y REACTIVOS
-
Lmina portaobjeto.
Aceite de inmersin.
Papel filtro.
Embudo.
Bandeja o soporte de coloracin.
Colorante de azul metileno 0.1%.
Marcador de vidrio.
Papel toalla.
Fsforos.
Papel lente.
1.3.4. EQUIPO:
- Microscopio.
- Mechero.
1.3.5. PROCEDIMIENTO
- Filtrar el colorante antes de utilizar.
- Identificar el portaobjeto a utilizar.
- Realizar el extendido de muestra en las dos terceras partes de la lmina.
- Dejar secar a temperatura ambiente.
- Fijar al calor pasndolo rpidamente sobre la llama de un mechero tres veces en forma
horizontal.
- Cubrir la lmina con azul de metileno de 30 a 60 segundos.
- Eliminar el azl de metileno tomando el portaobjeto por el extremo numerado
inclinndolo
hacia delante, y lavar dejando caer una corriente de agua a baja presin sobre la parte
en
que no hay extendido, la que escurrir suavemente sobre la pelcula.
- Observar al microscopio con objetivo de inmersin 100x.
- Contar 100 clulas blancas o leucocitos diferenciando los polimorfonucleares de los
mononucleares.
-
Extendidos gruesos.
Fijacin con excesivo calor.
Lminas sucias o grasosas.
Arrastrar la prepracin con un lavado brusco

Reportar el porcentaje de leucocitos encontrados con el predominio del que tenga mayor
porcentaje.
Polimorfonucleares ........... por ciento.
Mononucleares .... por ciento.
Interpretacin:
Predominio de polimorfonucleares se asume que existe un proceso infeccioso de origen
bacteriano.
Predominio de Mononucleares se asume que el proceso infeccioso es de origen viral.
5.4 COLORACIN DE ZIELH NEELSEN MODIFICADA PARA
LA INVESTIGACIN DE COCCIDIOS
1.4.1. PROPSITO:
La bsqueda de los ooquistes de coccidios en una coloracin teida con Zielh Neelsen
modificada,
la cual se basa en el comportamiento cido resistente de la cubierta de estos parsitos,
que se tien
de rojo, destacndose sobre un fondo azul.
5 gr de heces fecales o esputo.
-
Lminas portaobjeto esmerilada.

Fucsina fenicada.
Azl de metileno.
Papel filtro.
Embudo.
Alcohol cido.
Papel toalla.
Marcador de vidrio.
Aceite de inmersin.
Fsforos.
Papel lente.
1.4.4. EQUIPO:
- Mechero.
- Microscopio.
- Filtrar los colorantes antes de utilizar.
- Identificar la lmina en el extremo esmerilado.
- Hacer un extendido de materia fecal sobre un portaobjeto en las dos terceras partes de
la
lmina (No ejercer presin para hacer e extendido).
- Dejar secar el extendido a temperatura ambiente.
- Fijar con calor pasndolo rpidamente tres veces sobre la llama de un mechero en
forma
horizontal.
- Cubrir la preparacin con Fucsina fenicada por 20 minutos.
- Eliminar la fucsina tomando el portaobjeto por el extremo numerado inclinndolo hacia
delante, y lavar dejando caer una corriente de agua a baja presin sobre la parte en que
no
hay extendido, la que escurrir suavemente sobre la pelcula.
- Decolorar con alcohol cido por 2 minutos.
- Lavar con agua de chorro hasta que no hayan restos de colorante.
- Cubrir la preparacin con azul de metileno por 1 minuto.
- Lavar con agua de chorro hasta que no hayan restos de colorante.

- Observar al microscopio toda la preparacin con el objetivo 40x en busca de
estructuras
semejantes a los ooquistes del coccidio. (Anexo 2)
- Identificar con el objetivo de inmersin 100x.
-
No filtrar los colorantes.

Realizar extendidos muy gruesos.
No dejar el tiempo suficiente para el secado del extendido.
Omitir la fijacin o excesivo calor al fijar la preparacin.
Incumplir los tiempos de coloracin.
Cubrir la preparacin con insuficiente fucsina.

En presencia de ooquistes:
Reportar: Se observan ooquistes de Isospora belli o Criptosporidium sp. o Cyclospora
cayetanensis, segn lo encontrado.
En ausencia de ooquistes en la preparacin:
Reportar: No se observan ooquistes.
1.5.1.METODO DE CONCENTRACION DE LAS HECES DENNIS MODIFICADO
1.5.1. PROPSITO:
La bsqueda de los parasitos, que talvez por su presencia escasa no se observan en los
exmenes microscpicos de solucin salina y lugol, se evidencian en una cantidad
mayor de muestra y por sedimentacin con solucin detergente al 1%.
5 gr de heces fecales.
-
Lminas portaobjeto esmerilada.

Solucion detergente al 1%.
Embudo.
Tubos conicos.
Gasa.
Marcador de vidrio.
Lugol.
Gradilla.
Piceta.
1.5.4. EQUIPO:
- Microscopio.
- Preparar la solucin detergente al 1% con agua destilada, y colocarla en una piceta.
- Identificar la muestra y el tubo conico, colocar en el embudo la gasa doblada.
- Homogenizar toda la muestra de heces con solucin detergente, y filtrarla a travez de
la gasa.
- Dejar reposar por 15 minutos..
- Decantar suavemente todo el sobrenadante, y con ayuda de la piceta con fuerza llenar
nuevamente el tubo.
- Dejar reposar por 15 minutos, y repetir nuevamente por una vez mas la decantacin del
sobrenadante, el
llenado del tubo y finalmente la decantacin .
- Colocar en la lamina portaobjeto una gota del sedimento y agregar una gota de lugol,
homogenizar y cubrir con la laminilla.
- Observar al microscopio toda la preparacin con el objetivo de 10X y luego a 40x en
busca de estructuras
parasitarias.
- Mala preparacin de la solucin detergente.
- Concentracion de una cantidad escasa de muestra de heces, sin una buena
homogenizacin.
- No realizar los tres lavados recomendados, si se hacen mas corremos el riesgo de
quedarnos sin un buen sedimento o si es menos la cantidad de sedimento es muy
abundante, que no permite ser visualizado correctamente al microscopio.
En presencia de parasitos:
Reportar: Se observan huevos, quistes o larvas de parasitos, segn lo encontrado.
En ausencia de parasitos en la preparacin:
Reportar: No se observan huevos, larvas, ni quistes de parasitos.
1.6. EXAMEN COPROFUNCIONAL
1.6.1. PROPOSITO: Es muy importante en el estudio de causas de transtornos digestivos, en recin
nacidos y adultos.
1.6.2. MATERIALES
-
Lminas porta objeto.

Laminillas cubre objeto.
Marcador.
Solucin salina 0.85%.
Solucin de Lugol para heces.
Papel lente.
- Reactivo de sudan III

- Reactivo de benedict.
- Papel tornasol.
1.6.3. EQUIPO:
- Microscopio
- Identificar la lmina porta objeto
- Colocar en un extremo de la lmina portaobjeto una gota de solucin salina al 0.85%.
- Seleccionar la parte ms representativa de la muestra (mucus o sangre, si hay
presencia de estos).
- Agregar con un aplicador 1 a 2 mg de material fecal seleccionada y emulsionar.
- Cubrir la preparacin con una laminilla cubreobjeto, colocndola en ngulo de 45
sobre el borde de la preparacin y bajndolo con cuidado a fin de que no queden
burbujas entre el cubre y el porta objeto.
- Colocar en el otro extremo del portaobjeto, una gota de lugol para heces y repetir el
procedimiento anterior.
- Observar en forma sistemtica al microscopio, con el objetivo 10x y luego con el 40x.
- Reportar todo lo observado.
Con solucin salina 0.85%, los trofozoitos y quistes de los protozoarios se observan en
forma natural.
y con lugol se visualizan las estructuras internas, ncleos y vacuolas, fibras musculares,
fibras vegetales, almidn, gotas de grasa, et.
1.6.5 FUENTES DE ERROR:
- Desecacin de la preparacin.
- Preparacin muy gruesa o delgada.
- Intensidad de luz inadecuada.
- Contaminacin de la muestra con orina.
- Dejar transcurrir ms de 3 horas despus de la recoleccin para observar formas
activas en la muestra.
- Omitir la preparacin y observacin con lugol.
- No examinar en forma sistemtica.
- Muestra de heces escasa o seca en el frasco.
PARSITOS: Anotar el nombre del gnero y especie, as como su estado evolutivo.
LEUCOCITOS: Reportar el nmero de leucocitos por campo.
ERITROCITOS: Reportar el nmero de eritrocitos por campo.
LEVADURAS: Escasas, moderadas o abundantes.
Fibras musculares: normalmente unas pocas sueltas, apenas reconocibles como tales , sin estriacin
transversal y redondeadas. Fibras estriadas de carne poco modificada sugieren un defecto e la digestin
proteica o creatorrea, cuya causa es la insuficiencia pancretica
Almidn. Amilorrea: restos de almidn sin digerir en las heces, que con lugol aparecen de color azul. Trnsito
acelerado a travs del coln
Grasas : Reportar de moderado a abundante. (Esteatorrea), Puede apreciarse macroscpicamente
si es muy abundante. En la preparacin microscpica :con Sudn III se tie de rojo los glbulos de grasa.
Causas: deficiencia de enzimas pancreticas ( pancreatitis crnica, fibrosis qustica del pncreas) o
enteropatas (enfermedad celiaca, enfermedad de Whipple,etc)
Azcar reductor: lactosa (reaccin de benedict). Importante en estudio de diarreas en lactantes: intolerancia a
la lactosa, sindrome de mala absorcin
pH : aporta informacin sobre una posible malabsorcin de hidratos de carbono como causa de diarrea y
fermentacin en el coln por la flora bacteriana y como consecuencia los cidos grasos de cadena corta
liberan acidifican el pH y lo disminuyen por debajo de 6
1.7.SANGRE OCULTA EN HECES
1.7.1.
PROPOSITO : Importante en el estudio de anemias crnicas por sospecha de sangrado oculto en va

digestiva: lcera, cncer de estmago, cncer de colon
1.7.2.
MUESTRA REQUERIDA:
5 grs de heces, previa dieta de tres das sin carne,sin alimentos ricos en hierro.Evitar frmacos
irritantes gstricos
1.7.3.
MATERIALES :
Kitts de reactivos para sangre oculta
1.7.4-
PROCEDIMIENTO :
Tomar una muestras de heces de 5 6 lugares diferentes,con un aplicador y colocarlo en un diluyente.

Homogenizar y dispensar tres gotas en el cassette.
Leer a los 10 minutos.
1.7.4.
10
RESULTADOS :
Positivo : cuando aparece una lnea roja en el control y el testigo.
Invalidado : Cuando no aparece la lnea roja en el control, aunque aparezca en el testigo.
Negativo : Cuando aparece la lnea roja solo en el control, mas no asi en el testigo.
URIANLISIS
6.1 TOMA DE MUESTRA PARA ANLISIS DE ORINA

2.1.1. PROPSITO:
Obtener una muestra de orina con el volumen y condiciones adecuadas para realizar un anlisis
11
fsico, qumico y microscpico.

30 mL de orina de chorro intermedio, recomendable la primera miccin de la maana, previa higiene genital.
2.1.3. MATERIALES:
Frascos plsticos transparente de boca ancha con capacidad de 50 mL limpio y seco.
- Lavar cuidadosamente los genitales, con agua, luego secarlos.
- Descartar el inicio y el final de la miccin; recolectar la orina de la porcin intermedia. (En
el caso de la mujer separar los labios genitales).
- Destapar y depositar la muestra de orina en un frasco plstico, transparente, limpio, de
boca ancha con tapn de rosca y capacidad de 50 a 100 mL.
- Tapar el frasco inmediatamente.

- Limpieza de genitales inadecuada.
- Frascos sucios.
- Tiempo prolongado entre la recoleccin y la entrega en el laboratorio.
- No descarte del inicio y final de la miccin.
2.1.6. RESPONSABLE:
Paciente con instrucciones previas proporcionadas por el personal de laboratorio.
2.2 EXAMEN FSICO DE ORINA

2.2.1. PROPSITO:
Por medio de la observacin directa de la muestra de orina determinar el color y el aspecto de sta,
lo cual puede sugerir una patologa del tracto urinario u otras enfermedades que estn en diferente
localizacin, pero que sus manifestaciones secundarias son a nivel del rin.

30 mL de orina. Preferible la primera de la maana, 10 mL de orina en muestra de nios.
2.2.3. MATERIALES:
- Frascos plsticos transparente de boca ancha con capacidad de 50 mL.
- Bolsa peditrica recolectora de orina.
- Papel toalla.
- Marcador.
- Guantes descartables.
- Verificar que el frasco est bien identificado y completamente tapado.
- Agitar en forma circular sobre la mesa de trabajo.
- Observar color y aspecto.
- Anotar lo observado.

- Frascos sucios.
12
- Toma de muestra inadecuada.

- Muestras medicamentosas.
- Tiempo transcurrido desde la toma de la muestra hasta la observacin (no mayor de 2
horas)

COLOR: Amarillo.
ASPECTO: transparente.
2.2.7. RESPONSABLE:
Profesional en Laboratorio Clnico o Laboratorista.
2.3 EXAMEN QUMICO DE ORINA

2.3.1. PROPSITO:
Determinar las sustancias qumicas presentes en una muestra de orina, as como su densidad y
pH, a travs de las zonas de reaccin presentes en una tira reactiva.
2.3.2 MUESTRA REQUERIDA:

30 mL de orina. Preferible la primera de la maana, 10mL de orina en muestra de nios.

- Frascos plsticos transparente de boca ancha con capacidad de 30 mL.
- Bolsa peditrica recolectora de orina.
- Tubos con capacidad de 10 mL.
- Gradilla para tubos.
- Papel toalla.
- Marcador.
- Tiras reactivas para orina.
- Identificar el tubo.
- Agitar la muestra de orina en forma circular sobre la mesa de trabajo.
- Verter la orina en el tubo.
- Introducir la tira reactiva en el frasco de orina.
- Eliminar el exceso de orina colocando la tira sobre un papel absorbente.
- Esperar el tiempo recomendado por el fabricante para su lectura visual o con el equipo lector de tiras.
- Anotar los resultados.
Los cambios de color que aparecen despus de dos ms minutos carecen de importancia
diagnstica.

- Muestras medicamentosas.
- Tubos mal lavados.
- Tiras reactivas de mala calidad o vencidas.
- Cortar las tiras reactivas.
- Leer las tiras reactivas despus del tiempo indicado por el fabricante.

pH: de 5 a 9.
DENSIDAD: de 1.000 a 1.030.
13
LEUCOCITOS: 0 a 500 Leucocitos por l.

NITRITOS: Positivo Negativo.
PROTENA: 0 a 1000 mg por dL.
GLUCOSA: 0 - 1000 mg por dL
CUERPOS CETNICOS: de una cruz a tres cruces.
UROBILINGENO: de <1 a 12 mg por dL.
BILIRRUBINA: de una cruz a tres cruces.
SANGRE/HEMOGLOBINA: de 0 a 250 eritrocitos por L
Siempre que en la tira reactiva no se observe un cambio de color se reportar como
negativo.
pH: de 5 a 6.
DENSIDAD: de 1.005 a 1.010 .
LEUCOCITOS: 0 Leucocitos por l .
NITRITOS: Negativo.
PROTENA: 0 mg por dL.
GLUCOSA: 0 mg por dL .
CUERPOS CETNICOS: Negativo.
UROBILINGENO: <1 mg por dL.
BILIRRUBINA: Negativa.
SANGRE: 0 eritrocitos por L.
2.3.7. RESPONSABLE:
2.4 EXAMEN MICROSCPICO DEL SEDIMENTO URINARIO

2.4.1. PROPSITO:
Observar microscpicamente en el sedimento urinario elementos celulares, cilindros, cristales,
parsitos, filamentos mucoides y bacterias. Con el fin de sugerir una patologa del tracto urinario
u
otras enfermedades que estn en diferente localizacin.

10 mL de orina.
2.4.3. MATERIALES:
- Tubos de vidrio de 10 mL .
- Lminas portaobjetos.
- Laminillas cubreobjetos.
- Marcador para vidrio.
- Gradillas para tubos.
2.4.4. EQUIPO:
- Centrfuga de tubos.
- Microscopio.
- Centrifugar durante 5 minutos a 2,500 rpm .
- Vertir en un tubo mediano, hasta la mitad la orina centrifugada para probar la albumina con acido
sulfosalicilico al 3%, e informar de acuerdo a la turbidez en cruces, o si no hay presencia de turbidez como
negativo.
- Descartar el liquido sobrenadante del tubo de 10 ml.
- Suspender el sedimento urinario golpeando ligeramente con la mano.
14
- Colocar una gota de sedimento entre un porta y un cubreobjeto.

- Observar la preparacin con el objetivo 10x para lograr una visin general del sedimento.
- Identificar los elementos formes a mayor aumento 40x.
Anotar lo observado.

- Usar portaobjetos y cubreobjetos sucios.
- Desecacin del sedimento urinario.
- Tiempo transcurrido desde la toma de la muestra hasta la observacin
microscpica.
- Uso excesivo de luz.
- Centrifugacin inadecuada.

CLULAS EPITELIALES, ESCAMOSAS Y REDONDAS: reportar escasas, moderadas o
abundantes.
GLBULOS ROJOS: Reportar el nmero estimado por campo.
LEUCOCITOS: Reportar el nmero estimado por campo.
CILINDROS: se pueden encontrar en la orina los siguientes cilindros: hialinos, granulosos finos y
gruesos, leucocitarios, hemticos, grasos y creos. Reportar el nmero de cilindros observados por
campo.
FILAMENTOS MUCOIDES: reportar escasos, moderados o abundantes.
CRISTALES: se pueden encontrar en la orina los siguientes cristales: oxalatos de calcio, acido
rico, uratos amorfos, fosfatos amorfos, fosfatos triples, urato de amonio, leucina, cistina y tirosina.
Reportar en la forma siguiente: escasos, moderados o abundantes.
LEVADURAS: Reportar escasos, moderada y abundantes.
PARSITOS: Se pueden encontrar en orina Trichomonas vaginalis, Phitirus pubis, huevos y quistes
de parsitos por contaminacin con heces.
BACTERIAS: Reportar la presencia de bacterias moderadas o abundantes, solamente cuando se
observen ms de 10 leucocitos por campo.
Valores de referencia
CLULAS EPITELIALES, ESCAMOSAS: Escasas a moderadas.
CLULAS EPITELIALES REDONDAS: No deben observarse.
GLBULOS ROJOS: No deben observarse.
LEUCOCITOS: .0-5 por campo.
CILINDROS: No deben observarse.
FILAMENTOS MUCOIDES: No deben observarse.
CRISTALES: Podran observarse oxalatos, uratos y fosfatos amorfos de escasa a moderada
cantidad.
LEVADURAS: No deben observarse.
PARSITOS: No deben observarse.
BACTERIAS: Escasas o no presentes.
2.4.8. RESPONSABLE:
15
3. BIOQUMICA
7.1 TOMA DE MUESTRA DE SANGRE VENOSA PAR
A EXMENES
DE QUMICA CLNICA
16
3.1.1. PROPSITO:
Obtener sangre venosa para realizar pruebas de qumica sangunea.

De 5 a 10 mL. de sangre venosa sin anticoagulante.
3.1.3. MATERIALES:
- Tubo de 6 ml sin anticoagulante con sistema de extraccin al vaco.
- Torundas de algodn.
- Alcohol etlico (70%).
- Marcador indelebles.
- Torniquete.
- Agujas 21 x 1 para sistema de extraccin al vacio.
- Lavar y secar las manos y colocarse los guantes.
- Identificar el tubo de acuerdo a la solicitud.
- Explicar al paciente sobre el procedimiento que se le va a realizar.
- Sentar cmodamente al paciente para la extraccin tomando en cuenta que el rea de toma de muestra
debe contar con suficiente iluminacin.
- Seleccionar la vena apropiada para la puncin.
- Realizar asepsia con torunda de algodn humedecida con alcohol etlico al 70% de adentro hacia fuera.
- Colocar el torniquete firmemente alrededor del brazo, y pedir al paciente que abra y cierre
la mano varias veces para favorecer la dilatacin de las venas.
- Proceder a puncionar la vena seleccionada.
- Colocar la aguja con el bisel hacia arriba sobre la vena a puncionar.
- Introducir la aguja en el centro de la vena y penetrar a lo largo de la vena de 1 a 1.5 cm.
- Si utiliza sistema al vaco introducir el tubo en el dispositivo (holder) de manera que al ejercer presin se
atraviese el extremo inferior de la aguja, para que la sangre fluya hacia el tubo por efecto
del vaco.
- Inmediatamente empieze a fluir la sangre retirar el torniquete tirando del extremo doblado.
- Cambiar los tubos de acuerdo a las muestras necesarias, cuando termine el procedimiento colocar una
torunda de algodn sobre la piel donde se encuentra oculta la punta de la aguja.
- Extraer la aguja con un movimiento rpido por debajo de la pieza de algodn, pedir al paciente que
presione firmemente la torunda durante 3 minutos con el brazo extendido.
- Separar la aguja del holder, descartando con el dispositivo sin tocar la aguja, para evitar pinchaduras.
- Esperar que la muestra se coagule a temperatura ambiente.
- Centrifugar la muestra a 4000 rpm por 5 minutos.
- Separar el suero del paquete globular.
- Verificar nuevamente la identificacin del paciente.

- Prolongada aplicacin del torniquete.
- Extraccin violenta de la sangre, que puede provocar hemlisis.
- Depositar la sangre en el tubo en forma violenta, sin desligar una vez que empiece la fluir la sangre, la
presin del vacio es exagerada.
- Que el paciente no cumpla con las indicaciones de acuerdo al anlisis qumico a realizar.
- Separacin inadecuada del cogulo antes de centrifugar (no poner en bao de Mara).
- Centrifugacin inadecuada de la muestra.
3.1.6. RESPONSABLE:
17
3.2. METODO ENZIMATICO COLORIMETRICO PARA DOSAJE DE GLUCOSASA SANGU

MTODO ENZIMTICO COLORIMTRICO SIN DESPROTEINIZACIN
3.2.1. PRINCIPIO:
La glucosa se determina despus de la oxidacin enzimtica en presencia de glucosa oxidasa. El
perxido de hidrgeno formado reacciona bajo catlisis de la peroxidasa con fenol y 4-aminofenazona
produciendo un complejo rojo violeta usando la quinoneimina como indicador.
3.2.2. MUESTRAS REQUERIDA:

Para valor de glucosa en ayunas: Suero Tomado completamente en ayunas de 12 horas.
Para valor de glucosa postpandrial: primera muestra completamente en ayunas de 12 horas y
segunda muestra 2 horas despus de haber ingerido un desayuno completo.

- Pipetas automticas.
- Puntas plsticas.
- Tubos.
- Reactivo enzimtico.
- Estndar de glucosa (concentracin 100 mg/dL).
- Sueros controles comerciales.
- Papel toalla.
- Papel para film.
3.2.4. EQUIPO:
- Analizador semiautomatizado.
- Bao de Mara con termmetro.
- Reloj marcador.
- Centrfuga.
- Refrigeradora.
- Llevar los reactivos a temperatura ambiente.
- Los reactivos se preparan de acuerdo a las instrucciones del fabricante en el cual estar indicado la
estabilidad del reactivo
- Rotular 4 tubos de la siguiente manera: blanco, estndar, muestra y control normal y patolgico.
- Mezclar e incubar de acuerdo a las indicaciones del fabricante.
- Leer a la longitud de onda indicada por el fabricante generalmente de 500 a 546 nm y de
acuerdo al equipo utilizado.

- No llevar los reactivos a temperatura ambiente.
- Pipetas mal calibradas.
- Puntas en mal estado.
- No leer en la longitud de onda recomendada.
- Tubos sucios.
- Agua destilada de mala calidad.
- Reactivos vencidos o en mal estado.
- Pipeteado inadecuado.
- Separar el suero despus de los 30 minutos de la recoleccin.
18
TECNICA
BLANCO
AGUA DESTILADA
ESTANDAR
MUESTRA
SUERO CONTROL
REACTIVO
ESTANDAR
MUESTRA
CONTROL
5 L
-------------------------5 L
--------------------------------------------- 5 L
-----------------------------------------------------------------5 L
500 L
500 L
500 L
500uL
Incubar a 37 C por 5 minutos, leer a 500 nm.(492 520 nm)

3.2.7. FORMA DE REPORTE
Los valores de glucosa se reportan en mg/dL
Clculo:
Se puede calcular usando factor de calibracin:
La prueba es lineal hasta la concentracin de 500 mg/Dl.
Si la concentracin de glucosa en la muestra es superior a estos lmites diluir la muestra 1+2 con
agua destilada y repetir la determinacin.
Multiplicar el resultado por 3.
Valor de referencia:
70 -105 mg/dl
METODO ENZIMTICO COLORIMTRICO PARA COLESTEROL CON

FACTOR ACLARANTE DE LPIDOS
3.3.1. PRINCIPIO:
El colesterol se determina despus de la hidrlisis enzimtica y la oxidacin. En presencia de un
indicador el cual desarrolla el color de acuerdo a la concentracin del colesterol presente en la
muestra.

Suero tomado con 12 horas de ayuno.

- Puntas plsticas.
- Tubos.
- Estndar de colesterol (concentracin 200 mg/dL).
- Papel toalla.
3.3.4. EQUIPO:
- Analizador semiutomatizado
- Bao de Mara. con termmetro.
- Reloj marcador.
19
- Centrfuga.
- Refrigeradora con termmetro.
- Los reactivos se preparan de acuerdo a las instrucciones del fabricante en el cual estar
indicado la estabilidad del reactivo.
- Rotular 4 tubos de la siguiente manera: blanco, estndar, muestra y control normal.
- acuerdo al equipo utilizado.

- Tubos sucios.
TECNICA
BLANCO
ESTANDAR
MUESTRA
CONTROL
AGUA DESTILADA------------5 L
ESTANDAR------------------------------------------ 5 L
MUESTRA ---------- ---------- ------------------------------------------5 L
SUERO CONTROL --------------------------------------------------- ---------- ---------- 10 L
REACTIVO
500 L
500 L
500 L
500 L
Los valores de colesterol se reportan en mg/dL
Clculo
La prueba es lineal hasta la concentracin de 750 mg/dL (Revisar tcnica ya que depende de la
casa comercial).
Si la concentracin del colesterol en la muestra es superior a estos limites diluir la muestra 1+2 con
solucin fisiolgica y repetir la determinacin.
Hasta 200 mg/dltra
ura
TRIGLICRIDOS
MTODO ENZIMTICO COLORIMTRICO PARA TRIGLICRIDOS CON ACLARANTES DE
LPIDOS
3.4.1. PRINCIPIO:
El triglicrido se determina despus de la hidrlisis enzimtica con lipasa. En presencia de un
indicador que desarrolla color de acuerdo a la concentracin del triglicrido presente en la
muestra.
20

Suero tomado con 12 horas de ayuno.

- Puntas plsticas.
- Tubos.
- Marcador para vidrio
- Estndar de triglicridos (concentracin 200 mg/dL).
- Papel toalla.
- Papel para film.
3.4.4. EQUIPO:
- Equipo semiautomatizado de bioqumica.
- Reloj marcador.
- Centrfuga.
- Los reactivos se preparan de acuerdo a las instrucciones del fabricante en el cual estar
indicado la estabilidad del reactivo.
- Rotular 4 tubos de la siguiente manera: blanco, estndar ,muestra y control
3.4.6. FUENTES DE ERROR

- Tubos sucios.
TECNICA
BLANCO
ESTANDAR MUESTRA
CONTROL
AGUA DESTILADA ----------------5 L
ESTANDAR ---------------------------------------------- 5 L
MUESTRA ------------ ---------------------------------------------------- 5 L
SUERO CONTROL ---------- ---------- --------------------------------------------------- 5 L
REACTIVO
500 L
500 L
500 L
500 L
21
Los valores de triglicridos se reportan en mg/dL

Clculo:
La prueba es lineal hasta la concentracin de 1000 mg/dL (Revisar tcnica ya que depende de la
casa comercial).
Si la concentracin de triglicridos en la muestra es superior a estos lmites diluir la muestra 1+4 con
solucin salina fisiolgica y repetir la determinacin.
30 - 150 mg/dL.
METODO ENZIMATICO COLORIMETRICO PARA DOSAJE DE CIDO RICO

3.5.1. PRINCIPIO:
El cido rico se determina despus de la hidrlisis enzimtica de la uricasa, que en presencia de
un indicador que desarrolla color rojo-violeta que es proporcional a la concentracin de cido rico
presente en la muestra.

Suero (dentro de las 24 horas no ingerir embutidos, mariscos y carnes rojas).

- Puntas plsticas.
- Tubos.
- Estndar de cido rico (concentracin segn lo indica el fabricante).
- Papel toalla.
- Papel para film.
3.5.4. EQUIPO:
- Equipo semiautomatizado de bioquimica.
- Reloj marcador.
- Centrfuga.
- Los reactivos se preparan de acuerdo a las instrucciones del fabri cante en el cual
estar indicado la estabilidad del reactivo.
- Rotular 4 tubos de la siguiente manera: blanco, estndar, muestra y control

22

- Tubos sucios.
TECNICA
BLANCO
ESTANDAR
MUESTRA
CONTROL
AGUA DESTILADA
10 L
ESTANDAR -------------------------------------10 L
MUESTRA ---------- ---------- ----------------------------------------------10 L
SUERO CONTROL ---------- ---------- --------------------------------------------------- 10 L
REACTIVO
500 L
500 L
500 ul
500 ul
Los valores de cido rico se reportan en mg/dL.
Clculo:
La prueba es lineal hasta la concentracin de 20 mg/dL.
Si la concentracin de cido rico en la muestra es superior a estos lmites, diluir la muestra 1+1
con solucin salina fisiolgica y repetir la determinacin.
Hombre: 3.4 7.0 mg/dL.
Mujer: 2.4 5.7 mg/dL.
Factor de calibracin=
3.6. BIOQUIMICA AUTOMATIZADA

Los reactivos lquidos enzimticos estn listos para usar. Por lo tanto, no requieren ningn tratamiento
previo, tales como la reconstitucin del reactivo en polvo y tienen las siguientes ventajas:
Ahorro de tiempo - se puede utilizar directamente despus de la apertura.
Evitar los errores manuales.
Rapidez en la emisin de resultados.
Econmico - No hay reactivo de trabajo perdido a causa de que expir la estabilidad del reactivo.
El ltimo beneficio y uno de los ms importantes. Evita las prdidas de reactivo de trabajo ya que usted
tiene la flexibilidad parapreparar el volumen de reactivo requerido por la carga de trabajo. Esto en
contraste con los kits liofilizados, dondese preparan a los volmenes de empaque. Para los laboratorios
pequeos, los volmenes de empaque no siempre se ajustan la tasa de consumo
23
HEMATOLOGA
24
4.1 TOMA DE MUESTRA DE SANGRE CAPILAR PARA EXMENES HEMATOLGICOS

4.1.1. PROPSITO:
Obtener sangre capilar para realizar pruebas hematolgicas.

Sangre capilar, Obtener 5 capilares heparinizados.
4.1.3. MATERIALES:
- Torunda de algodn.
- Marcador de vidrio.
- Capilares heparinizados.
- Plastilina para sellar capilares con su respectiva base numerada.
- Lancetas desechables.
- Lminas esmeriladas.
- Lavar, secar las manos y colocar los guantes.
- Explicarle al paciente sobre el procedimiento que se le va a realizar.
- Seleccionar el dedo anular de la mano a puncionar y dar masaje para mejorar la irrigacin
sangunea.
- Realizar asepsia con torunda de algodn humedecida con alcohol etlico al 70%.
- Con lanceta desechable efectuar la puncin limpia y rpida de 2 a 3mm. de profundidad.
- Eliminar la primera gota de sangre con un trozo de algodn seco.
- Colocar el capilar de modo que penetre la sangre libremente.
- Cuando se ha obtenido la cantidad de sangre adecuada se presiona el lugar de la
puncin con un trozo de algodn humedecido con alcohol etlico al 70% hasta que cese
el sangramiento.
- Colocar los capilares verticalmente en la plastilina.

- Presin excesiva hace que salga lquido intersticial que puede diluir la muestra y acelerar
la coagulacin.
- Puncin inadecuada.
- Puncionar con el dedo hmedo.
4.1.6. RESPONSABLE:
TOMA DE MUESTRA DE SANGRE VENOSA PARA EXMENES HEMATOLGICOS

4.2.1. PROPSITO:
Obtener sangre venosa para realizar pruebas hematolgicas.

De 2 a 3 mL de sangre venosa con anticoagulante para hematologa (se emplean de 1 mg de
EDTA por mL de sangre).
25
4.2.3. MATERIALES:
- Sistema de extraccin al vaco.
- Lminas esmeriladas.
- Torniquete.
- Tubos con anticoagulante 12 x 75 mm del sistema de extraccin al vaco.
- Gradilla.
- Guantes decartables.
- Lavar, secar las manos y colocarse los guantes.
- Identificar el tubo y la lmina adecuadamente.
- Sentar cmodamente al paciente para la extraccin tomando en cuenta que el rea de sangra debe
contar con suficiente iluminacin.
- Colocar el torniquete firmemente alrededor del brazo, y pedir al paciente que abra y cierre la mano
varias veces para favorecer la dilatacin de las venas.
- Si utiliza sistema de sangrado al vaco introducir el tubo en el dispositivo (holder) de manera que al ejercer
presin se atraviese el extremo inferior de la aguja, para que la sangre fluya hacia el tubo por
efecto del vaco.
- Retirar torniquete inmediatamente empiece a fluir la sangre, tirando del extremo doblado, y cuando se haya
obtenido la muestra, colocar una torunda de algodn sobre la piel donde se encuentra oculta la punta de la
aguja.
- Desechar la aguja del holder cuidadosamente.
- Mezclar la sangre invirtiendo los tubos suavemente varias veces.

- Mezcla inadecuada de la sangre.
- Relacin inadecuada de sangre y anticoagulante.
- Dejar los tubos con muestras destapados (evaporacin del plasma, y contaminacin).
4.2.6. RESPONSABLE:
4.3 PREPARACIN Y TINCIN DEL FROTIS SANGUNEOS

4.3.1. PROPSITO:
Obtencin de un frotis sanguneo coloreado para el reconocimiento de los elementos celulares de la sangre.

Sangre capilar o venosa recin extrada sin anticoagulante o sangre con anticoagulante EDTA.
26
4.3.3. MATERIAL Y REACTIVOS:

- Portaobjeto de vidrio con extremo esmerilado.
- Alcohol etlico al 70%.
- Torunda de algodn.
- Bandeja o soporte para la coloracin.
- Aceite de inmersin.
- Reloj marcador.
- Perilla de hule.
- Papel toalla.
- Solucin de Wright.
- Buffer pH 6.8.
- Antes de utilizar los portaobjetos de vidrio, limpiarlos con alcohol y aclarar con agua.
- Identificar la lmina adecuadamente en el extremo del portaobjeto (parte esmerilada).
- Colocar en el portaobjeto una pequea gota de sangre de 2 mm de dimetro a una distancia de 2 a 3 mm del
extremo del portaobjeto y hacer rpidamente el extendido.
- Para evitar la coagulacin; se puede utilizar sangre con EDTA.
- Poner la lmina extensora a un ngulo de 45 del portaobjeto y moverla hacia atrs para que haga contacto
con la gota, que debe extenderse rpidamente.
- El extendido debe tener unos 30 mm. de largo.
- Colocar la preparacin de sangre, completamente seca, sobre un soporte. (no necesita fijacin previa
pues el metanol del Wright fija la preparacin).
- Cubrir todo el frotis con coloracin de Wright y dejarlo en reposo 3 minutos (o el tiempo necesario segn la
maduracin del colorante).
- Agregar una cantidad igual de buffer (pH 6.8 ) evitando derramar el Wright, mezclar soplando con suavidad
para asegurar una mezcla uniforme, aparecer una pelcula verde metlico, dejarlo en reposo por 5 minutos o
el tiempo necesario segn la maduracin del Wright.
- Lavar la lmina con agua de chorro hasta quitar el exceso de la mezcla.
- Limpiar la parte posterior del portaobjeto con una torunda de algodn impregnada con alcohol, para eliminar
todos los restos de colorante.
- Dejar secar la preparacin al aire colocando la lmina en posicin vertical en una rejilla para portaobjeto.

- Falta de mezclado de la sangre previo a la elaboracin del frotis
- Irregularidades en la superficie del frotis y espacios en blanco.
- Que el frotis se extienda hasta el borde de la lmina.
- Extendidos gruesos o muy delgados.
- Tiempos de coloracin inadecuados.
- Mal lavado de la lmina.
- Buffer con pH muy cido o alcalino.
- Falta de filtracin del colorante del Wright.
- Uso de portaobjetos con polvo, grasa o huellas dactilares.
4.3.6. RESPONSABLE:
.4 EXAMEN MICROSCPICO DEL FROTIS SANGUNEO

PARA FRMULA DIFERENCIAL
4.4.1. PROPSITO:
Establecer y evaluar las caractersticas morfolgicas de cada tipo de clulas y ver la frecuencia de las
diferentes lneas leucocitarias.
27

Frotis de Sangre coloreado.
4.4.3. MATERIALES:
- Frotis de sangre coloreado.
- Papel limpia lente.
4.4.4. EQUIPO:
- Microscopio con objetivo 40x y 100x.
- Contmetro diferencial manual.
- La observacin inicia con el objetivo 40x para obtener un cuadro general del nmero de clulas, la
distribucin de las mismas y la calidad de la tincin.
- Seleccionar las reas a observar con objetivo de inmersin 100x buscando una distribucin
homognea de las clulas.
- Realizar el recuento diferencial identificando las caractersticas y grado de desarrollo de
las clulas; estos se reportan en porcentajes para lo cual tiene que contarse un mnimo
de 100 leucocitos estos pueden convertirse en nmero de clulas por mm (nmero
absoluto).
- Observar en los eritrocitos: el tamao, la forma, la reaccin de coloracin, las inclusiones
intracitoplasmticas y la presencia del ncleo (eritroblastos).

- Observacin de los leucocitos en los extremos de la lmina.
- Realizar el recuento diferencial con un objetivo que no sea el de inmersin.
- Hacer la frmula diferencial en base de menos de 100 clulas blancas.

El recuento diferencial de leucocitos se reporta en trminos porcentuales segn las diferentes lneas
observadas.
GB: Glbulos Blancos.
N: Neutrfilos.
L: Linfocitos.
B: Basfilos.
M: Monocitos.
E. Eosinfilos.
LEUCOCITOS
NIOS (1-8 aos)
ADULTOS
NEUTRFILOS SEGMENTADOS
20 45 %
60 70 %
NEUTRFILOS EN BANDA
04%
26%
LINFOCITOS
40 60 %
15 40 %
EOSINFILOS
15%
14%
BASFILOS
01%
01%
MONOCITOS
28%
28%
NMERO DE GB X C/U DE LA FORMULA DIFERENCIAL (NM, E)
Esto nos dar como resultado el valor absoluto de leucocitos por milmetro cbico, donde la suma
es igual al recuento del total de los leucocitos.
28
4.4.8. RESPONSABLE:
4.5. FROTIS DE SANGRE PERIFRICA

4.5.1. PROPSITO:
Observacin detallada de todos los elementos de la sangre, con el fin de evaluar la condicin
hematolgica del paciente.

Frotis de sangre perifrica coloreado con Wright.
4.5.3. MATERIALES:
4.5.4. EQUIPO:
- Microscopio con objetivo 40x y 100x.
Cada tcnico debe aprender a observar todos los elementos del frotis mientras lleva a cabo el recuento
diferencial. Debe formar el hbito de verificar los puntos siguientes.
ERITROCITOS:
- Tamao: microcitosis, macrocitosis y normocitos. El grado de variacin en tamao se reduce al trmino de
anisocitosis.
- Forma: esferocitos, codocitos, eliptocitos, megalocitos, drepanocitos, acantocitos, equinocitos etc. El grado
de variacin en forma se reduce al trmino de poiquilocitosis.
- Concentracin de hemoglobina: Grado importante de hipocroma, e hipercroma aparente, observar el
aumento aparente o evidente de la proporcin de glbulos rojos policromticos.
- Otros hallazgos anormales: La policromatofilia (basfilia difusa), punteado basfilo, anillo de Cabot,
cuerpos de Howell-Joly, etritroblastos, las clulas parasitadas y la formacin de Rouleaux.
LEUCOCITOS:
- Observar la madurez de los leucocitos, el nmero promedio, anormalidades morfolgicas, signos de
malignidad, la variante de leucocitos que predominan.
- Comparar el recuento de leucocitos por milmetro cbico con lo observado en el frotis.
PLAQUETAS:
- Observar si se encuentran en cantidades aproximadamente normales (de tres a ocho plaquetas por cien
glbulos rojos). La disminucin de las plaquetas en un frotis puede deberse a la manera de realizarlo, pero su
falta o su disminucin considerable, en un frotis bien hecho pueden hacer sospechar de trombocitopenia.
Debe observarse si las plaquetas que se encuentran parecen normales o existen muchas formas gigantes
(macroplaquetas) o notablemente pequeas.
- Comparar el recuento de plaquetas por milmetro cbico con lo observado en el frotis.

- Observar los elementos celulares en la parte ms gruesa del frotis.
- Coloracin defectuosa del frotis.
- Observar el extendido con un objetivo diferente al de inmersin.
29
- Equipo en mal estado.

- Aceite de inmersin de mala calidad o en malas condiciones.

LNEA ROJA:
- Anisocitosis: leve, moderada o severa (reportar predominio).
- Poiquilocitosis: leve, moderada o severa (reportar predominio).
- Hipocromia: leve, moderada o severa.
- Otros: reportar cualquier hallazgo anormal.
LNEA BLANCA:
- Madurez de los leucocitos.
- Variante de leucocitos que predomina.
- Alteraciones encontradas en los leucocitos.
LNEA PLAQUETARIA:
- Cantidad.
- Tamao: macro o micro plaquetas.
Eritrocitos normocrmicos.
Leucocitos maduros sin presencia de anormalidades.
Plaquetas distribucin y tamao normal, comparar los observado en recuento con mm .
4.5.8. RESPONSABLE:
4.6. HEMATOCRITO
4.6.1. PROPSITO:
El hematocrito es el volumen de eritrocitos expresados en porcentaje del volumen de sangre como una
fraccin del volumen de sangre, para determinar si un paciente presenta o no anemia.

Sangre venosa con EDTA o sangre capilar tomada directamente en tubos capilares heparinizados.
4.6.3. MATERIALES:
- Tubos capilares heparinizados o no heparinizados.
- Plastilina.
- Lector de hematocrito.
4.6.4. EQUIPO:
- Micro centrfuga para hematocrito con una fuerza de 10,000 - 13,000 rpm.
- Llenar el tubo de micro hematocrito mediante accin capilar, ya sea por una puncin que hace que la
sangre fluya libremente o por sangre venosa bien mezclada. Los tubos capilares deben estar llenos
en dos terceras partes.
- El extremo opuesto y exento de sangre se llena con plastilina para sellarlo.
- Colocar el capilar sellado en una centrfuga para el micro hematocrito, con el extremo abierto hacia el centro
de la microcentrfuga.
- Centrifugar a velocidades de 10,000 a 13,000 rpm por 5 minutos.
30
- Despus de centrifugado leer en la tabla para hematocrito haciendo coincidir el menisco del plasma con el
final de la marca de la tabla y el fondo del empacado de eritrocitos que coincidan con el inicio de la
marca de la tabla.
- Leer siempre en la direccin de la numeracin ascendente cuantos mL de empacados de eritrocitos tiene la
muestra.

- Presencia del lquido intersticial si se obtiene de una puncin dactilar.
- stasis prolongado en la toma de la muestra.
- Exceso de anticoagulante.
- Llenado incorrecto del tubo capilar.
- Mezcla inadecuada de la sangre.
- Lectura del hematocrito en posicin paralela.
- Evaporacin del plasma durante la centrifugacin.
- Dejar transcurrir el tiempo sin hacer la lectura.
- Formacin de burbujas en el plasma.
- Centrifugacin inadecuada.
- Instrumento de lectura en malas condiciones o deteriorados.

Se reporta el volumen de eritrocitos empacados en porcentaje del volumen total.
Valores de referencia: Dependen de la altura sobre el nivel del mar, en la costa, los valores son los siguientes:
Hombre: 42%-51%
Mujer: 38%-42%
Nios: 33%-38%
Recin nacidos: Hasta 55%
RESPONSABLE:
4.7. HEMOGLOBINA
MTODO DE LA CIANAMETAHEMOGLOBINA
4.7.1. PROPSITO:
Evaluar la presencia y la severidad de la anemia. Este mtodo consiste en efectuar una dilucin exacta de
sangre en una solucin que contiene ferrocianuro de potasio, que convierte la hemoglobina en
cianometahemoglobina y se compara colorimetricamente con una solucin patrn de cianametahemoglobina
de concentracin exacta y estable.

Sangre venosa con EDTA o sangre capilar.
4.7.3. MATERIAL Y REACTIVO:

- Cubetas estandarizadas de lectura.
- Pipeta automtica de 20 L.
- Tubos de 13 x 100 mm.
- Puntas plsticas.
- Papel parafilm.
- Pipeta serolgica.
31
- Propipeta o bulbo de hule.

- Reactivo de cianametahemoglobina.
- Estndar de hemoglobina.
4.7.4. EQUIPO:
- Espectrofotmetro o analizador semiautomatizado de bioquimica
- Mezclador mecnico (opcional).
- Reloj marcador.
- Hacer una serie de tres tubos con el estndar de hemoglobina para calcular el factor de calibracin.
- Colocar al primer tubo 5 mL de estndar puro.
- Colocar al segundo tubo 2.5 mL de estndar puro.
- Colocar al tercer tubo 1 mL de estndar puro.
- Llevar al volumen de 5 mL con cianametahemoglobina el segundo y tercer tubo.
- Mezclar y dejar reposar 10 minutos.
- Leerlos en espectrofotmetro a 540 nm y anotar la densidad ptica de los tubos.
- Obtener la concentracin de cada tubo en gramos por decilitros.
- Dividir la concentracin de cada tubo entre la densidad ptica.
- Sumar los 3 factores y sacar un promedio.
- Este ser el factor de calibracin por el cual se multiplicarn las densidades pticas de las muestras.
- La preparacin de la cianametahemoglobina estar sujeto a las indicaciones del fabricante
del reactivo.
- Medir exactamente 5 mL solucin de cianametahemoglobina en un tubo de 13x100 mm.
- Con pipeta automtica colocar 20 microlitos de sangre.
- Mezclar bien y dejar reposar por 10 minutos.
- Transferir a la cubeta de lectura y leer en el espectrofotmetro a 540 nm.

- Toma inadecuada de muestra.
- stasis prolongada que resulta de dejar un torniquete en el brazo.
- Presencia de lquido insterticial que diluye la muestra de sangre.
- Mezclar incorrectamente de la muestra.
- Errores de pipeteado o dilucin.
- Coagulacin de la muestra.
- Sangre hiperlipmica (afecta el color)
- Numero alto de glbulos blancos por mm. cbico.
- Calibracin incorrecta.
- Reactivo expuesto a la luz.

La hemoglobina se reporta en gr/dL.
Hombre: 14.0-17.0 gr/dL
Mujer: 12.5-15.0 gr/dL
Nios: 11.0-13.0 gr/dL
Recin nacidos: Hasta 18 gr/dL
4.7.8. RESPONSABLE:
Lectura de muestra x Concentracin de stndar

Lectura del estndar
4.8. RECUENTO DE LEUCOCITOS
32
4.8.1. PROPSITO:
Evaluar la cantidad de clulas nucleadas que se encuentran en la muestra de sangre (leucocitos y
eritroblastos).

2-3 mL de sangre venosa con EDTA o sangre capilar.

- Tubos de 12x75 mm.
- Cmara de Neubauer.
- Laminilla para cmara de Neubauer.
- Puntas plsticas.
- Acido actico glacial al 3%.
4.8.4. EQUIPO:
- Microscopio.
- Contmetro manual.
- Agitador.
4.8.5. PROCEDIMIENTO (Tcnica en tubo):

- Colocar 0.38 mL de cido actico glacial al 3% en un tubo 12x75mm.
- Mezclar perfectamente la sangre, y tomar exactamente 20 L con pipeta automtica. Y colocarla en el tubo
que contiene el acido actico glacial al 3 % lo que hace una dilucin de la sangre 1:20.
- Mezclar por un mnimo de 2 minutos.
- Dispensar con pipeta automtica o con capilar la dilucin en el borde de la laminilla para
cmara Neubauer.
- Esperar 3 - 5 minutos Para que la clula se estabilicen.
- Luego se procede a contar los glbulos blancos en el microscopio con el objetivo 10x y con poca luz en las
dos reas primarias opuestas de la cmara, contar las clulas que aparecen. Cuando el trabajo no es
excesivo se cuentan las cuatro reas primarias para tener un dato ms exacto.
- En caso de una leucopenia de menos de 1,000 leucocito/mm, la dilucin se hace 1:10.
- En caso de una leucocitosis de mas de 30,000 leucocito/mm, la dilucin se hace 1:200 con
diluyente de leucocitos.

- Desintegracin de los leucocitos cuando se deja la muestra mucho tiempo sin procesar.
- Pipeta mal calibradas.
- Dilucin incorrecta.
- Llenado incorrecto de la cmara.
- Presencia de levaduras o suciedad en el liquido de dilucin.
- Calculo errneo de las clulas contadas.
- Usar cmara y laminilla sucios y hmedos.
- Usar laminillas corrientes.
- Puntas defectuosas.
- Cmaras de mala calidad.

Reportar el nmero de leucocitos contados en las dos reas opuestas de la cmara y reportar por mm.
Clculos:
33
- Cuando la dilucin es 1:20 el numero de leucocitos contados en las dos reas primarias opuestas de la
cmara se multiplica x 100 = N de leucocitos/mm, y se multiplicar por 50 si se cuentan 4 rea primarias.
- Cuando la dilucin es 1:10 el factor por el cual se multiplican los leucocitos, ser 50 si se cuentan dos reas
primarias opuestas y ser 25 si se cuentan 4 reas primarias.
- Cuando la dilucin es 1:200 y se cuenta toda el rea central, el factor ser 2,000.
Cuando en una frmula diferencial se obtienen ms de 10 eritroblastos por 100 clulas blancas contadas, se
har la siguiente correccin, debido a que el lquido de dilucin de los leucocitos no destruye el ncleo de los
eritroblastos y cuando se efecta el recuento se cuenta como si fueran leucocitos.
Correccin
Si en una formula diferencial salieron 80% de eritroblastos, en realidad se han contado 180 clulas nucleadas,
luego de 180 clulas Nucleadas 80 son eritroblastos, en el nmero de leucocitos contados se obtendr una
cantidad X de eritroblastos.
Adultos: 5,000-10,000 x mm
Nios: 5,000-12,000 x mm
Recin nacidos: 10,000-30,000 x mm
4.8.8. RESPONSABLE:
N de clulas contadas en cmara x 100

= N leucocitos verdaderos
100 + % de eritroblastos encontrados
4.9. RECUENTO DE PLAQUETAS (Mtodo directo en cmara)
4.9.1. PROPSITO:
Evaluar la cantidad de plaquetas existentes en la sangre para lo cual se diluye una muestra de sangre con
una sustancia con un lquido diluyente que hace a las plaquetas ms visibles.

4.9.3. MATERIAL Y REACTIVOS:

- Tubos de vidrios 12x75mm.
- Cmara Neubauer.
- Laminilla para cmara de Neubauer.
- Tubo capilar.
- Papel filtro.
- Caja de Petri.
- Puntas plsticas.
- Solucin de Gower.
4.9.4. EQUIPO:
- Microscopio.
- Contmetro manual.
- Reloj marcador.
4.9.5. PROCEDIMIENTO (tcnica en tubo):
34
- Colocar 2 mL de reactivo de Gower en un tubo de 12 x75 mm.

- Mezclar bien la muestra de sangre varias veces.
- Colocar exactamente 10 L de sangre en el tubo que contiene el diluyente.
- Mezclar por un mnimo de 3 minutos.
- Dispensar con pipeta automtica o con capilar la dilucin en el borde de la laminilla de la cmara Neubauer.
- Colocar la cmara en una caja de petri sobre un disco del papel filtro hmedo, para evitar la
evaporacin, se tapa y se espera de 10 a 20 minutos para que se depositen bien las plaquetas.
- Proceder al conteo de las plaquetas en el microscopio con el objetivo 40x y poca luz.
- Contar toda el rea central.
- Observar las plaquetas como pequeas partculas de gran refringencia.
- Correlacionar el recuento de plaquetas obtenido en la cmara con las plaquetas que se observan en el frotis.

- Desintegracin de las plaquetas cuando se deja mucho tiempo la muestra sin procesar, y adherencia a las
paredes del tubo de vidrio.
- Tomar la muestra de sangre en rea con cianosis.
- Dilucin incorrecta.
- Mal almacenamiento del lquido de dilucin el cual debe conservarse en refrigeracin.
- Presencia de bacterias en el lquido de dilucin.
- Falta de filtracin del diluyente antes de su uso.
- Cmara y laminilla sucias o hmedas.
- Uso de laminilla corriente.
- No comparar el recuento directo con el indirecto.

Las plaquetas contadas en la cmara se multiplican por el factor correspondiente y se reportan por mm de
sangre.
Clculo:
150,000-450,000/mm
4.9.8. RESPONSABLE:
N de plaquetas contadas X 2,000 = N de plaquetas/mm

4.10. ESTIMADO DEL NMERO DE PLAQUETAS (Mtodo indirecto)
4.10.1. PROPSITO:
Evaluar el nmero de plaquetas presentes en la sangre, a travs de la observacin de un frotis coloreado,
con el fin de comparar con el conteo directo.

Frotis de sangre coloreado con Wright.

- Papel limpia lentes.
4.10.4. EQUIPO:
- Contmetro.
- Microscopio.
35
- Colocar la lmina coloreada en la platina del microscopio.

- Observar con el objetivo 40x.
- Colocar una gota de aceite de inmersin en la lmina coloreada.
- Observar con el objetivo 100x.
- Contar las plaquetas en 10 campos situados entre el cuerpo y la cola del frotis (los campos
deben contener aproximadamente 100 glbulos rojos).

- Hacer el conteo en los mrgenes del frotis.
- Aceite de inmersin de mala calidad o contaminado.
- No comparar el recuento indirecto con el directo.

Calcular el nmero de plaquetas de la siguiente forma:
4.10.8. RESPONSABLE:
Estimado de plaquetas mm =
N PLAQUETAS = n PLAQUETAS CONTADAS EN 10 CAMPOS X HEMATOCRITO X 100
Si el hematocrito es menor a 45 se aumenta 3% al valor del hematocrito, si es mayor se disminuye 3% y se procede en forma normal.
4.11. RECUENTO DE RETICULOCITOS

4.11.1. PROPSITO:
Evaluar el funcionamiento de la mdula sea ya que los reticulocitos son glbulos rojos jvenes que
constituyen un ndice de la respuesta eritropoytica.
4.11.2. MUESTRA:

- Tubos de 12 x 75 mm.
- Lminas portaobjeto en buen estado.
- Azul de cresil brillante.
4.11.4. EQUIPO:
- Microscopio.
- Bao de Mara o estufa a 37 C.
- Contmetro manual.
- Aadir igual volumen de sangre con EDTA, y de colorante azul cresil, en un tubo de 12x75 mm.
- Mezclar bien e incubar a 37C o a temperatura ambiente durante 15 minutos.
- Preparar frotis de la mezcla de la forma usual, dejar secar.
- Leer al microscopio con objetivo de inmersin.
- Contar 10 campos en donde se observen 100 eritrocitos por campo, anotar los reticulocitos
observados.
36

- No incubar los capilares a 37C.
- Colorante con precipitados.
- Observar en campos donde los eritrocitos no estn uniformemente distribuidos.

Se reportan los reticulocitos por cada 100 eritrocitos observados.
Clculo:
Adultos: 0.5% - 1.5%
Recin nacidos: 2.5% - 6.5%
% Reticulocitos = Total de reticulocitos observados en 10 campos

10
VELOCIDAD DE SEDIMENTACION
4.12.1. PROPSITO:
La velocidad de Eritrosedimentacin mide la velocidad de sedimentacin de los glbulos rojos en el plasma.

3 mL de Sangre venosa con EDTA.
4.12.3. MATERIALES:
- Agujas Wintrobe.
- Tubos Wintrobe.
- Soporte para tubos de sedimentacin.
4.12.4. EQUIPO:
- Reloj marcador.
- Mezclar la muestra de sangre.
- Llenar un tubo de Wintrobe hasta la seal cero, introduciendo cuidadosamente la aguja de Wintrobe
adaptada a una jeringa, conteniendo la sangre hasta el fondo del tubo, cuidar de que no formen burbujas.
- Colocar en el soporte, en posicin perfectamente vertical durante 1 hora.
- A la hora exacta leer de arriba hacia abajo el valor numrico en mm, midiendo la distancia que hay entre el
punto ms bajo del menisco de la superficie y el lmite superior del sedimento de glbulos rojos; los
mm, ledos corresponden a la velocidad de sedimentacin por hora.
Toda eritrosedimentacin con hematocrito menor de 40%, se corregir usando la tabla de correccin
de la manera siguiente:
- Llevar valores de hematocrito y sedimentacin a la tabla de correccin.
- Tome el punto dnde se interceptan ambos, este punto caer sobre una de las lneas curvas de dicha tabla,
la que deber seguir hacia la derecha y abajo, hasta el punto de intercepcin con la lnea negra mas gruesa,
que corresponde al valor de hematocrito de 40%.
- Lea a la derecha de la tabla el valor de eritrosedimentacin corregida, este valor es el que se deber
reportar.

- Dejar transcurrir ms de 2 horas entre la toma de la muestra y el montaje de la prueba.
37
- Efectuar la prueba en temperaturas muy altas o muy bajas.

- No leer a la hora exacta.
- Presencia de cogulo en la sangre.
- No realizar la debida correccin cuando es necesaria.
- No hacer una buena mezcla de la muestra.
- Que el tubo no este en posicin completamente vertical.
- La presencia de burbujas al llenar el tubo.

Velocidad de eritrosedimentacin se expresa en milmetros por hora
(mm/h).
Mujeres: 0-15 mm/h
Hombres: 0-7 mm/h
Nios: 0-20 mm/h
Recin nacidos: 0-2 mm/h
4.13. TIEMPO DE SANGRIA

4.13.1. PROPSITO:
Evaluar el funcionamiento y nmero de plaquetas as como la contractilidad capilar.
4.13.2. MUESTRA:
Sangre del lbulo de la oreja.
4.13.3. MATERIALES:
- Lanceta descartable estril.
- Papel filtro.
- Torundas de algodn humedecidas con alcohol.
4.13.4. EQUIPO:
- Cronmetro.
- Desinfectar cuidadosamente el rea de puncin.
- Puncionar el lbulo de la oreja.
- Secar con el papel filtro cada medio minuto hasta que cese el sangramiento.
- Realizar el secado en forma descendente o circular sin tocar la piel.
- Anotar el tiempo desde que se punciona hasta que cesa el sangramiento y reportar.

- Presionar el lbulo para que fluya la sangre.
- Rozar el papel filtro al dedo.
- Puncin inadecuada.
- No marcar el tiempo en el momento de la puncin.
- Puncionar el rea seleccionada cuando an est hmeda.
38

Reportar el tiempo de sangrado en minutos y segundos.
1 - 4 minutos.
8.14. TIEMPO DE COAGULACIN.

MTODO DE LEE Y WHITE
4.14.1. PROPSITO:
Evaluar en forma global el mecanismo intrnseco de la coagulacin.
4.14.2. MUESTRA:
Sangre venosa.
4.14.3. MATERIALES:
- Agujas para vacio
- Tubos 12x75mm.
- Alcohol etlico al 70%.
- Torniquete.
4.14.4. EQUIPO:
- Bao de Mara a 37C.
- Reloj marcador.
- Termmetro.
4.14.5. PROCEDIMIENTOS:
- Obtener sangre venosa.
- Poner en marcha el cronmetro en el momento en que la sangre penetre en la jeringa.
- Verter cuidadosamente 1 CC de sangre en 3 tubos, mantenerlos en bao Mara a 37C.
- Invertir cada medio minuto (sin agitar) los 3 tubos hasta que cada uno pueda invertirse sin
que se vierta su contenido.
- Tomar el tiempo de coagulacin de cada uno de los tubos y luego sacar un promedio de
los tres.

- Uso de material mal lavado.
- No tomar el tiempo en el momento de la extraccin.
- Temperatura del Bao de Mara inadecuada.
- No cumplir con los intervalos de tiempo indicados en el procedimiento.
- Invertir bruscamente el tubo.
39
El tiempo de coagulacin se reporta en minutos.

5-10 minutos.
4.15. GOTA GRUESA

4.15.1. PROPSITO:
Concentrar los parsitos a travs de 20 capas de globulos rojos, de tal modo que permita observarlos
microscpicamente.

Sangre capilar.

- Portaobjetos.
- Torundas de algodn humedecidas con alcohol.
- Colorante Giemsa o Wright.
- Buffers pH 6.8.
4.15.4. EQUIPO:
- Microscopio.
- Reloj marcador.
- Pinchar con una lanceta, el dedo ndice, parte lateral, descartando la primera gota, y en una lmina
.portabjeto, en la parte central del tercio externo colocar una gota pequea, de igual forma en el tercio medio,
a la gota ubicada en el tercio externo, realizar de 3 a 6 movimientos puede ser en forma circular o formando
un cuadrado de adentro hacia afuera, que no exceda de un centmetro de dimetro o de lado.
- A la gota ubicada en el tercio medio, se realizar un fino extendido, en un angulo de 45.
- Fijar solo el frotis con metanol, mas no asi la gota gruesa.
- Colorear con Giemsa, preparando la solucin de trabajo con 1 gota de colorante por un mililitro de agua
destilada, para una lmina necesitamos aproximadamente 3 ml, cubrir con la solucin de trabajo por un
espacio de 20 minutos.
- Enjuagar con mucho cuidado para no desprender la gota gruesa, y dejar secar.
- Leer al microscopio con aceite de inmersin con el objetivo de 100, buscando parsitos en la gota gruesa, si
hay alguna duda en la identificacin de la especie, identificarlo en el frotis.

- Extendidos de gota y frotis muy gruesas.
- Realizar la prueba cuando el paciente haya tomado paracetamol o cloroquina, lo cual nos da un falso
resultado.
- Enjuague muy fuerte que desprende la gota gruesa y/o el frotis.
- Extendidos de gota y frotis demasiado delgados, lo cual nos puede dar falsos negativos.

- Gota gruesa positiva cuando se observa presencia del parsito , los resultados de la densidad parasitaria
es por 100 campos examinados y se expresa de la siguiente forma:
N de parasitos
:
Menos de 40 parsitos por 100 campos, informar el nmero de parsitos
encontrados en la lectura.
+/2
:
De 40 a 60 parsitos en 100 campos.
+
:
1 parsito por campo.
++
:
2 a 20 parsitos por campo.
+++
:
21 a 200 parsitos por campo.
++++
:
Ms de 200 parsitos por campo.
Tambin se informar la especie del plasmodium encontrado.
40
-Gota gruesa negativa

No se observan parsitos de Plasmodium. Cuando en la gota gruesa no se observa ningn parsito.
4.16. HEMOGRAMA AUTOMATIZADO
4.16.1. PROPOSITO: Realizar el recuento eritrocitario, leucocitario y plaquetario, asi como las constantes
corpusculares. Mediante la metodologa de impedancia elctrica y laser.
4.16.2. VENTAJAS:
se realiza en una dilucin de la muestra con diluyente y reactivo adecuado
la adherencia de los monocitos no tiene importancia
miles de clulas son analizadas
coeficientes de variacin aceptables
41
INMUNOLOGA
42
5.1. TOMA DE MUESTRA DE SANGRE VENOSA PARA EXMENES DE INMUNOLOGA

5.1.1. PROPSITO:
Obtener sangre venosa para realizar pruebas de inmunologa.

5 mL de sangre venosa sin anticoagulante.
5.1.3. MATERIALES:
- Sistema de extraccin al vaco.
- Torniquete.
- Tubos sin anticoagulante 13 x 100 mm del sistema de extraccin al vaco.
- Sentar cmodamente al paciente para la extraccin tomando en cuenta que el rea de sangra debe
contar con suficiente iluminacin.
- Colocar el torniquete firmemente alrededor del brazo, y pedir al paciente que abra y cierre la
mano varias veces para favorecer la dilatacin de las venas.
- Introducir el tubo en el dispositivo (holder) de manera que al ejercer presin se atraviese el extremo
inferior de la aguja, para que la sangre fluya hacia el tubo por efecto del vaco.
- Retirar torniquete tirando del extremo doblado, inmediatamente empiece a fluir la sangre, pidindole al
paciente que abra la mano, cuando se hayan sacado los tubos necesarios colocar una torunda de algodn
sobre la piel donde se encuentra oculta la punta de la aguja.
- Separar la aguja del holder cuidadosamente.
- Esperar que la muestra se coagule a temperatura ambiente.
- Centrifugar la muestra a 3000 rpm por 5 minutos.
- Separar el suero del paquete globular.

- Depositar la sangre en el tubo en forma violenta.
- Dejar los tubos con muestras destapados.
- Que el paciente no cumpla con las indicaciones de acuerdo al anlisis qumico a realizar.
- Separacin inadecuada del coagulo antes de centrifugar (no poner en bao de Mara).
- Centrifugacin inadecuada de la muestra.
43
5.1.6. RESPONSABLE:
5.2. PRUEBA RPIDA DE REAGINA (Mtodo RPR)

5.2.1. PROPSITO:
Detectar y cuantificar anticuerpos reagnicos en suero, que corresponde a un diagnostico
presuntivo de Sfilis, La prueba de RPR, es una modificacin del antgeno VDRL (pruebas no
treponmicas).El RPR es una prueba que contiene micropartculas de carbn para visualizar la reaccin
antgeno anticuerpo.

5mL de sangre sin anticoagulante de preferencia tomada en ayunas (para obtener de 2 a 3 mL de suero).

- Tarjeta o lmina en crculos de 18 mm.
- Dispensadores de 50 uL.
- Frasco plstico con aguja calibrada para depositar 16uL.
- Antgeno: Cardiolipina, Lecitina, Colesterol y partculas de carbn.
- Agua destilada.
- Papel toalla.
- Aplicadores.
- Solucin salina 0.85%.
- Puntas plsticas.
- Tubos 12x75 mm.
5.2.4. EQUIPO:
- Reloj marcador.
- Rotador serolgico de 100 rpm.
- Micropipeta automtica regulable.
Prueba cualitativa:
- Centrifugar la sangre a 3,500 rpm durante 5 minutos.
- Separar los sueros del paquete globular.
- Identificar los sueros y crculos de la tarjeta o lmina de reaccin.
- Depositar en cada crculo de la tarjeta lmina, 50 uL. de los sueros en estudio y controles positivo y
negativo, manteniendo el dispensador verticalmente para que el volumen sea exacto.
- Extender el suero sobre la superficie del crculo con el extremo opuesto del dispensador.
- Homogenizar el antgeno y depositar una gota (equivalente a 16 uL) sobre el suero.
- Colocar la tarjeta en el rotador serolgico.
- Rotar durante 8 minutos a 100 rpm.
- Inclinando la lmina de adelante hacia atrs observar a simple vista con buena iluminacin agregados bien
diferenciados en el centro y en la periferia del crculo.
Toda prueba cualitativa que presente aglutinacin se debe hacer prueba semicuantitativa.
Prueba semicuantitativa:
44
- En cinco crculos poner con el dispensador una gota (50 L) de solucin salina 0.85 %, no extender.
- Depositar con el dispensador en el primer crculo 50 L de suero, mezclar aspirando y expeliendo 3 a 6
veces, evitando la formacin de burbujas.
- A partir de esta mezcla que constituye la dilucin 1:2 proseguir las diluciones seriadas, en base 2 mezclando
y pasando sucesivamente de un crculo a otro 50 L; descartar los 50 L de la ltima dilucin.
De esta manera se obtienen las diluciones siguientes:
Crculos 1 2 3 4 5
Diluciones 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32
- Extender las gotas por la superficie del crculo, utilizando un mezclador e iniciando por la dilucin
ms alta.
- Colocar en cada crculo una gota (16 L) de antgeno bien homogenizado, no agitar violentamente.
- Colocar las placas en un rotador
- Rotar durante 8 minutos a 100 rpm.
- Inclinando la lmina de adelante hacia atrs observar a simple vista con buena iluminacin agregados bien
diferenciados en el centro y en la periferia del crculo.
Toda prueba que de una reaccin de 1:32 se debe hacer la prueba cuantitativa.
Prueba cuantitativa:
- En un tubo colocar 1.5 mL de solucin salina a 0.85 % y 0.1 mL de suero. (Esta constituye una dilucin 1:16)
- A partir de la dilucin 1:16 hacer diluciones seriadas en base 2 mezclando y pasando sucesivamente de un
crculo a otro 50 L.
Descartar los 50 L de la ltima dilucin y se obtendrn las siguientes diluciones:
Crculos 6 7 8 9 10
Diluciones 1:32 1:64 1:128 1:256 1:512

- No mezclar el antgeno.
- No leer inmediatamente la reaccin.
- Rotador con velocidad inadecuada.
- Aguja dispensadora de reactivo sucia o deteriorada.
- No dispensar las gotas en forma vertical.
- No utilizar los reactivos a temperatura ambiente.
- Mala iluminacin para la lectura.
- Diluciones inexactas.
- Uso de reactivos vencidos o en malas condiciones.
- Muestras hiperlipmicas.
- Presencia de infeccin.

- Resultado No Reactivo: aspecto liso de la suspensin, la cual aparece sin agregados.
- Resultado Reactivo dbil: Se observa reaccin en la prueba cualitativa y no aparecen agregados visibles en
todas las diluciones semi cuantitativas.
- Resultado Reactivo: agregados bien diferenciados en el centro y en la periferia del crculo.
- En las pruebas semicuantitativa y cuantitativa, si el resultado es Reactivo debe reportarse la ltima dilucin
en la que se observa reaccin.
5.2.8. RESPONSABLE:
9.3. DETECCIN DE ANTICUERPOS DEL VIRUS DE LA

VIRUS DE INMUNODEFICIENCIA HUMANA (Prueba rpida)
5.3.1. PROPSITO:
45
Detectar in vitro los anticuerpos formados en el torrente sanguneo por el virus de la

Inmunodeficiencia humana (VIH 1 y VIH 2).

Suero, plasma y sangre completa.

- Tubos de ensayo 13 x 100 mm al vacio.
- Buffer.
- Pipeta Pasteur con bulbo o pipeta transferencia.
- Papel toalla.
- Protocolo de trabajo.
- Cassetes de prueba sensibilizadas con antgeno VIH 1 y VIH 2.
5.3.4. EQUIPO:
- Pipeta automtica de volumen variable.
- Reloj marcador.
- Llevar a temperatura ambiente los cassette a utilizar.
- Preparar el protocolo de trabajo.
- Cortar la lnea de puntos de la bolsa para retirar los cassettes.
- Identificar los cassettes reactivas a utilizar.
- Dispensar 25 L de suero con el gotero en forma vertical, y una gota de tampn, de acuerdo al
protocolo de trabajo.
- Leer a los 10 minutos, no interprete los resultados despus de los 20 minutos.
- Observar el rea de reaccin, si aparece o no la lnea roja, en el control y/o testigo.
5.3.6. FUENTE DE ERROR

- Reactivos vencidos y en mal estado.
- Cassettes que no estn a temperatura ambiente.
- Concentraciones bajas de anticuerpos.
- Pacientes con transfusiones masivas.
- Manipular con guantes empolvados.
- Infeccin con una variante del virus que no reacciona con los antgenos especficos utilizados
en la configuracin del ensayo.

REACTIVO:
- Presenta barra roja en las dos ventanas del rea de reaccin, tanto la del paciente con la ventana del
control.
INDETERMINADO:
Presenta barra tenue en la ventana del rea de reaccin del paciente y barra roja en la ventana del control.
NO REACTIVO A LA FECHA:
46
Presenta barra roja solamente en la ventana de control y no presenta barra roja en la ventana
del resultado del paciente.
REACCIN NO VLIDA:
No aparece ninguna barra roja ni en la ventana de control ni en la ventana del paciente, esta prueba debe
repetirse.
No aparece ninguna barra roja en la ventana de control pero s en la ventana del paciente, esta prueba debe
repetirse.
5.3.8. RESPONSABLE:
5.4. ANTGENOS FEBRILES

5.4.1. PROPSITO:
Investigar en el suero del paciente anticuerpos producidos por infecciones causadas por Salmonellas,
Brucellas, Rickettsias u otras infecciones bacterianas, por las cuales el organismo del paciente reacciona
con la produccin de anticuerpos especficos.

Suero.

- Tubos de ensayo 12 x 75 mm.
- Puntas plsticas.
- Lmina de reaccin.
- Pipeta Pasteur con bulbo o pipeta transfer.
- Aplicadores de madera.
- Papel toalla.
- Antgeno somtico O.
- Antgeno flagelar H.
- Antgeno paratyphico A.
- Antgeno paratyphico B.
- Antgeno somtico O X 19.
- Antgeno somtico Brucella abortus.
- Control negativo y control positivo.
5.4.4. EQUIPO:
- Centrfuga.
- Reloj marcador.
- Rotador serolgico.
- Llevar los reactivos y las muestras a temperatura ambiente.
47
Prueba cualitativa:
- Mezclar las suspensiones cuidadosamente antes de su uso.
- Colocar una gota (40 ul) de muestra en los 6 crculos y una gota de cada control positivo y negativo en su
respectivo crculo.
- Colocar sobre cada muestra o control una gota de reactivo.
- Mezclar con palillos descartables por separado y esparcir el lquido sobre el rea completa de cada crculo.
- Colocar la lmina en un rotador a 100 rpm durante 2 minutos
- Leer los resultados bajo luz artificial inmediatamente.
- Examine macroscpicamente la presencia o ausencia de aglutinacin.
Prueba semicuantitativa:
- En caso de obtener resultados positivos hacer determinacin semicuantitativa en lmina:
- Si ha salido positivo alguno de los analitos, colocar 20, 10 y 5 ul de suero e igual cantidad de reactivo.
- Continuar el procedimiento como se describe en la prueba cualitativa, empleando cada dilucin como
muestra.
- Leer los resultados bajo luz artificial inmediatamente.
- Examine macroscpicamente la presencia o ausencia de aglutinacin.
- Reportar la ltima dilucin en la que se observe aglutinacin, si queda en la primera de 40 ul ser 1/40, con
20 ul (1/80), 10 ul(1/160), 5 ul (1/320).

- Fase precoz de la enfermedad.
- Niveles bajo de anticuerpos.
- Leer la reaccin despus del tiempo estipulado.
- Rotacin inadecuada.
- Reactivos vencidos o deteriorados.
- No homogenizar los antgenos antes de usarlos.
- No llevar a temperatura ambiente los reactivos.

POSITIVO: Cuando se observa aglutinacin macroscpica y reportar ltima dilucin en la que se
observa aglutinacin.
NEGATIVO: Cuando no se observa aglutinacin.
5.4.8. RESPONSABLE:
5.5. GRUPO SANGUNEO

PRUEBA DIRECTA EN TUBO
5.5.1. PROPSITO:
Investigar en la sangre la presencia o ausencia de los antgenos A, B y Rh que se localizan en la
superficie de los glbulos rojos, utilizando anticuerpos especficos para cada uno de ellos.

1 mL de Sangre completa con o sin anticoagulante.

- Puntas plsticas.
- Pipeta Pasteur con bulbo o pipeta transfer.
- Aplicadores de madera.
- Frasco lavador.
48
- Papel toalla.
- Antisuero A.
- AntisueroB.
- Antisuero RH (anti-D).
5.5.4. EQUIPO:
- Centrfuga.
- Reloj marcador.
- Lmpara para lectura de aglutinacin.
- Identificar previamente los tubos.
- Depositar 2-3 gotas de sangre en un tubo.
- Realizar 3 veces el lavado de clulas de la siguiente manera:
a) Agregar 1 mL de solucin salina 0.85%.
b) Mezclar y llenar con solucin salina 0.85% el tubo hasta 3/4 partes.
c) Centrifugar por 2 minutos a 3400 rpm .
d) Descartar toda la solucin salina quedando en el fondo un paquete de glbulos
rojos.
- Preparar una suspensin al 5%, colocando una gota de los glbulos rojos lavados y 19
gotas de solucin salina y mezclar.
- Rotular 3 tubos con las letras A, B, Rh por cada muestra a analizar, a cada uno agregar
una gota de glbulos rojos al 5%.
- Depositar los antisueros respectivos:
a) Tubo A antisuero A.
b) Tubo B antisuero B.
c) Tubo Rh antisuero D.
- Centrifugar 15 segundos a 3400 rpm .
- Leer la presencia o ausencia de aglutinacin agitando suavemente los tubos.

- Hemlisis de los glbulos rojos por mezcla inadecuada.
- Presencia de enfermedades autoinmunes.
- Iluminacin inadecuada en el momento de la lectura.
- Dilucin inadecuada de los glbulos rojos.

Se reporta:
Grupo A: si aglutina el tubo marcado A.
Grupo B: si aglutina el tubo marcado B.
Grupo O: si no aglutinan los tubos marcados A y B.
Grupo AB: si aglutinan los tubos marcados A y B.
5.5.8. RESPONSABLE:
9.6. DETERMINACIN DE VARIANTE Du

5.6.1. PROPSITO:
Comprobar si una persona es verdadero positivo o negativo con respecto al factor Rh (D). La variante Du se
determina cuando el factor Rh es negativo.
49

Suspensin de eritrocitos al 5%.

- Pipeta Pasteur con bulbo o pipeta transferencia.
- Papel toalla.
- Albmina bovina.
- Suero antihumano (coombs).
5.6.4. EQUIPO:
- Bao de Mara.
- Centrfuga.
- Lmpara para lectura de aglutinacin.
- Identificar dos tubos
- En el tubo 1: colocar una gota de suero anti D y agregar una gota de suspensin de eritrocitos al 5% a
estudiar.
- Mezclar suavemente.
- En el tubo 2 (control): colocar una gota de albmina bovina y agregar una gota de suspensin de eritrocitos
al 5% a estudiar.
- Mezclar suavemente.
- Centrifugar ambos tubos a 3400 rpm por 15 segundos.
- Desprender suavemente el botn de clulas del fondo del tubo.
- Observar presencia o ausencia de aglutinacin frente a la luz de una lmpara.
- Si no se observa aglutinacin se incuban los tubos a 37C por 15 minutos.
- Lavar los glbulos rojos de ambos tubos cuatro veces llenndolos con solucin salina al 0.85%.
- Centrifugar por 2 minutos a 3400 rpm cada vez y descartar la solucin despus de cada lavada.
- Agregar a cada tubo 2 gotas de suero Coombs.
- Centrifugar 15 segundos a 3400 rpm.
- Leer frente a la luz de una lmpara y buscar aglutinacin tratando de desprender suavemente el botn de
clulas.
- Observar aglutinacin.

- Hemlisis de los glbulos rojos por mezcla inadecuada.
- Presencia de enfermedades autoinmunes.
- Iluminacin inadecuada en el momento de la lectura.
- Dilucin inadecuada de los glbulos rojos.
- Bao de Mara con temperatura inadecuada.

Du POSITIVO: (presencia de aglutinacin o botn) = Rh POSITIVO
Du NEGATIVO: (ausencia de aglutinacin) = Rh NEGATIVO
5.6.8. RESPONSABLE:
50
5.7. PRUEBA DE EMBARAZO

5.7.1. PROPSITO:
Investigar en orina la presencia de la hormona gonadotropina corinica (HCG); el mtodo se basa en la
reaccin de aglutinacin de una suspensin de Ltex recubiertas con anticuerpos monoclonales Anti-hormona
gonadotropina corinica.

Orina, se recomienda utilizar la orina de la primera hora de la maana, ya que generalmente contiene mayor
concentracin de hormona.
Muestras de orina: estable 48 horas a 2-8C o 3 meses a -20C.

-Tarjetas o lminas de reaccin.
- Papel toalla.
- Dispensadores plsticos.
- Tubos.
- Suspensin de partculas de ltex con anticuerpo monoclonal
- Anti-hormona gonadotropina corinica humana.
- Control positivo: orina humana con una concentracin conocida de hormona gonadotropina
corinica.
- Control negativo: suero animal sin presencia de hormona gonadotropina corinica.
5.7.4. EQUIPO:
- Centrfuga.
- Rotador serolgico.
- Lmpara de luz.
- Reloj marcador.
- La muestras de orina que presente turbidez debe centrifugarse antes de iniciar la prueba.
- Llevar a temperatura ambiente los reactivos y las muestras.
- Identificar correctamente lmina o tarjeta.
- Sobre cada crculo de lmina o tarjeta depositar 100 L de muestras a analizar e incluir un control Positivo y
un negativo por cada tiraje.
- Homogenizar suavemente el reactivo de Ltex antes de usar.
- Depositar una gota de reactivo de Ltex sobre cada una de las muestras y los controles.
- Mezclar con el extremo opuesto del dispensador, procurando extender la suspensin por toda la superficie
interior del crculo
- Emplear un dispensador distinto para cada muestra.
- Colocar la tarjeta o lmina sobre un agitador rotatorio de 80 - 100 rpm durante 2 minutos.
- Examinar macroscpicamente bajo una fuente de luz la presencia o ausencia de aglutinacin
inmediatamente despus de retirar del agitador.
5.7.6. FUENTE DE ERROR

- Las concentraciones altas de hormonas folculo estimulante y luteinizante, presentan reaccin cruzada con
la hormona gonadotropina corinica.
- Muestras con bajo niveles de hormona gonadotropina corinica (antes de las seis semanas,se recomienda
repetir la prueba unos das ms tarde).
- La orina de pacientes con enfermedades trofoblsticas tales como carcinoma o quiste hidatidiforme podran
causar resultado falsamente positivos.
- Realizar la prueba con reactivos que no han sido llevados a temperatura ambiente.
51

REACCIN DIRECTA:
POSITIVA: Formacin aglutinacin.
NEGATIVA A LA FECHA: No se observa aglutinacin.
REACCIN INDIRECTA:
POSITIVA: No se observa aglutinacin.
NEGATIVA A LA FECHA: Formacin de aglutinacin.
Consultar siempre el inserto provisto por la casa comercial.
52
MICROBIOLOGA BSICA
53
6.1. PREPARACIN DE UN EXTENDIDO DE MUESTRA

6.1.1. PROPSITO:
Estudiar mediante un frotis teido la presencia de bacterias, lo cual aporta una informacin til para
el diagnstico de la enfermedad del paciente y contribuye a establecer un tratamiento inmediato.

Pus, esputo, orina y secreciones.

- Asa bacteriolgica o aplicador de madera.
- Lmina portaobjeto.
- Papel toalla.
- Gasa.
- Fsforos.
6.1.4. EQUIPO:
Mechero.
- Identificar la lmina porta objeto.
- Extender en el centro de una lmina portaobjeto una porcin de la muestra con asa o aplicador de madera
en forma de capa fina, trazando una espiral del centro a la periferia.
- Dejar secar completamente al aire libre.
- Fijar al calor.
- Fijar al calor pasndolo rpidamente sobre la llama de un mechero, tres veces en forma horizontal con la
muestra hacia arriba.
- Dejar enfriar.
- Aplicar coloracin que corresponda, segn agente a investigar.

- Sobre calentar el frotis o no fijarlo.
- Frotis gruesos o muy delgados.
- No dejar enfriar el frotis.
6.1.7. RESPONSABLE:
6.2. EXAMEN MICROSCPICO (Coloracin de Gram)

6.2.1. PROPSITO:
54
Colorear las bacterias presentes en un frotis mediante la tincin de Gram, la cual permite diferenciar en dos
grandes grupos, bacterias grampositivas que toman el color violeta y bacterias gramnegativas que toman el
color rosado.

Frotis de la muestra a analizar correctamente identificado.

- Papel filtro.
- Embudo.
- Bandeja o soporte de coloracin.
- Papel toalla.
- Cristal violeta modificado por Hucker.
- Lugol o solucin de Yodo para Gram.
- Alcohol Acetona.
- Safranina.
6.2.4. EQUIPO:
- Reloj marcador.
- Microscopio.
- Filtrar los colorantes antes de utilizar.
- Colocar los frotis a colorear en la bandeja o soporte de coloracin.
- Cubrir el frotis completamente con Cristal Violeta, durante un minuto.
- Enjuagar con agua corriente y escurrir.
- Cubrir el frotis completamente con Lugol o solucin de Yodo para Gram durante un minuto.
- Aplicar alcohol acetona gota a gota hasta que no salga Cristal Violeta.
- Cubrir el frotis con Safranina.
- Dejar reposar por 30 segundos.
- Enjuagar suavemente con agua corriente.
- Dejar secar al aire libre.
- Observar al microscopio con lente de inmersin 100x.

Grampositiva falsa
- Colorante de Cristal Violeta que presenta sedimentos.
- Remocin incompleta del Lugol.
- Decoloracin insuficiente del frotis.
- Tiempo prolongado con Safranina.
Gramnegativa falsa
- Tiempo insuficiente con Lugol.
- Tiempo prolongado con alcohol Acetona o lavado incompleto.

- Reportar morfologa bacteriana observada (iniciar con las ms frecuente) indicando
la agrupacin y la cantidad.
- Reportar, si lo hubiere, la presencia de polimorfonucleares y/o linfocitos.
Indicar la presencia y cantidad de levaduras o micelios y clulas epiteliales.
55
6.2.8. RESPONSABLE:
10.3. DIRECTO AL FRESCO DE SECRECIN VAGINAL

6.3.1. PROPSITO:
Investigar en una muestra de secrecin vaginal, la presencia de Trichomonas vaginalis, levaduras y/o
pseudohifas.

Secrecin vaginal, tomada con un hisopo estril y colocada en un tubo con 2 mL de solucin salina estril
0.85%.

- Tubos de vidrio 16 x 150 mm.
- Laminilla cubreobjeto.
- Hisopos estriles.
- Papel toalla.
- Gasa.
- Solucin salina estril 0.85%.
6.3.4. EQUIPO:
- Microscopio.
- Identificar la lmina portaobjeto.
- Colocar una gota en el portaobjeto y cubrir con laminilla cubre objeto, con el cuidado de no formar burbujas
de aire.
- Examinar toda la preparacin al fresco en el microscopio con objetivo 10x.
- Buscar presencia de Trichomonas vaginalis, levaduras o pseudohifas.

- Contaminacin de la muestra.
- Solucin salina contaminada.
- Dejar secar la preparacin.
- Formacin de burbujas de aire en la preparacin.

- Se observan Trichomonas vaginalis: cuando estn presentes en la preparacin.
- Se observan levaduras y pseudohifas: cuando estn presentes en la preparacin.
- No se observan Trichomonas vaginalis ni levaduras y pseudohifas: cuando no estn presentes en la
preparacin ninguna de ellas.
6.3.8. RESPONSABLE:
6.4. DIRECTO DE SECRECIN VAGINAL COLOREADO CON GRAM

6.4.1. PROPSITO:
56
Investigar en una muestra de secrecin vaginal coloreada, la presencia de Lactobacilos, mobiluncos, o

gardnerella.

Secrecin vaginal, tomada con un hisopo estril y colocada en un tubo con 2 mL de solucin salina estril
0.85%.

- Tubos de vidrio 16 x 150 mm.
- Hisopos estriles.
- Papel toalla.
- Gasa.
6.4.4. EQUIPO:
- Microscopio.
- Proceder a la elaboracin de frotis y coloracin de Gram como est descrito en los procedimientos de:
Preparacin de un extendido de muestra y Coloracin de Gram .
- Observar en el microscopio con objetivo de inmersin 100x, la presencia de Lactobacilos, mobiluncos, o
gardnerella.
- Reportar lo observado.

- Contaminacin de la muestra.
- Solucin salina contaminada.
- Coloracin o frotis inadecuado.

Reportar de la forma siguiente:
FLORA NORMAL:
- Cuando se observan slo bacilos grampositivos (Lactobacilos).
FLORA VAGINAL ALTERADA:
- Cuando se observa predominio de bacilos grampositivos y escasos bacilos
gramnegativos.
VAGINOSIS BACTERIANA POSIBLEMENTE POR GARDNERELLA VAGINALIS:
- Cuando se observan escasos o ningn bacilo grampositivo y predominio de bacilos
gramnegativos rectos, extra e intracelulares.
VAGINOSIS BACTERIANA POSIBLEMENTE POR MOBILUNCUS:
- Cuando se observan escasos o ningn bacilo grampositivo y predominio de bacilos
gramnegativos curvos.
57
PUNTAJE DE LA FLORA VAGINAL MEDIANTE COLORACION GRAM DEL FROTIS

CUANTIFICACION BACTERIAS X CAMPO
MORFOLOGIA
PUNTAJE
______________________________________________________________________________________
0
4
1
1+
3
2-5
2+
LACTOBACILLUS
2
6-30
3+
1
>30
4+
0
______________________________________________________________________________
1
1+
1
2-5
2+
2
6-30
3+
GARDNERELLA Y/O
3
>30
4+
BACTEROIDES
4
______________________________________________________________________________
1
1+
1
2-5
2+
2
6-30
3+
3
>30
4+
MOBILUNCUS
4
______________________________________________________________________________
PUNTAJE DE LOS MORFOTIPOS BACTERIANOS OBSERVADOS Y VALORIZADOS
PUNTAJE
DIAGNOSTICO
0 -3
NORMAL
4 -6
INTERMEDIO
7-10
VAGINOSIS BACTERIANA
_______________________________________________________________________________
6.4.8. RESPONSABLE:
6.5. DIRECTO DE SECRECIN URETRAL COLOREADO CON GRAM

6.5.1. PROPSITO:
Investigar en una muestra de secrecin uretral coloreada, la presencia de Diplococos gramnegativos
intracelulares (leucocitos) y extracelulares.

Secrecin uretral, tomada si es posible en las primeras horas de la maana antes de que el paciente haya
orinado.
58

- Aplicador de madera o asa bacteriolgica.
- Papel toalla.
- Gasa.
- Cristal violeta modificado por Hucker.
- Lugol o solucin de Yodo para Gram.
- Alcohol Acetona.
- Safranina.
6.5.4. EQUIPO:
- Microscopio.
- Tomar la muestra aplicando una ligera presin en el pene de atrs hacia delante de manera que salga una
gota de pus por el meato, la cual ser recibida en una lmina portaobjeto.
- Cuando la muestra es demasiada espesa, agregar una gota de solucin salina estril 0.85%.
- Proceder a la elaboracin de frotis y coloracin de Gram como est descrito en los procedimientos de:
Preparacin de un extendido de muestra y Coloracin de Gram
- Observar en el microscopio con objetivo de inmersin 100x, la presencia de Diplococos gramnegativos de
forma arrionadas, tanto intracelulares (leucocitos) como extracelulares.
- Prestar especial atencin a las orillas del frotis donde los elementos se extienden en una capa ms delgada,
son ms fciles de reconocer y la tincin es menos concentrada.
- Reportar lo observado.

- Coloracin o frotis inadecuado.

Reportar de la forma siguiente:
SE OBSERVAN DIPLOCOCOS GRAMNEGATIVOS INTRA Y/O EXTRACELULARES Y LA PRESENCIA DE
POLIMORFONUCLEARES.
- Cuando se observan cocos arrionados en pareja de color rosado.
NO SE OBSERVAN DIPLOCOCOS GRAMNEGATIVOS EN LA PRESENTE PREPARACION.
- Cuando no se observan cocos en pareja de color rosado ni intra ni extracelulares.
6.5.8. RESPONSABLE
:
6.6. EXAMEN DIRECTO PARA BACILOS CIDO ALCOHOL RESISTENTE (Tuberculosis)
59
6.6.1. Objetivo:
la
fundamental
tuberculosis.
Alcance:
baciloscopa
para
el
es
una
diagnstico
tcnica
de
la
clnica ortega- rea de microbiologa
6.6.2.Muestra: muestra pulmonar:

Esputos, aspirado bronquial, post aspirados bronquiales.
Muestra extra pulmonar:
orina.
Lquidos
biolgicos
6.6.3.Materiales y equipos:
Vasos de plstico con tapa
recoleccin de la muestra.
rosca
de
boca
ancha
para
la
Laminas porta objetos nuevos, desgrasados con alcohol.

Mechero bunsen y de alcohol.
Bandejas.
Papel graff.
Soporte de metal para colorear las lminas.
Aceite de inmersin.
Colorantes segn la tcnica de ziehl neelsen: fucsina
bsica fenicada, alcohol-cido clorhdrico al 95%, azul
de metileno y agua destilada.
- Microscopio binocular con objetivo de 100x.
- Aplicadores de madera para el extendido.
6.6.4.Procedimiento:
Sobre el extendido:
- Colocar sobre la mesa de trabajo el papel graff
humedecido con el fenol al 5% para colocar las muestras
debidamente rotuladas.
- Rotular las lminas con un papel graso en la tercera
parte de la lmina y hacer una lnea divisoria.
- Cuidadosamente destapar el envase que contiene la
muestra,
siempre manteniendo la boca del envase cerca
del mechero encendido.
- Fraccionar el aplicador de madera (baja lengua) en 2 o
tres partes para poder seleccionar y extraer la muestra
que debe ser muco purulento, enrollando en el aplicador.
60
- Colocar la porcin elegida sobre el portaobjeto y

extender haciendo movimientos de vaivn (movimientos
rotatorios como ovillos), que sea un extendido uniforme
y que no sea un muy grueso ni muy delgado y no hacer la
extensin hasta el borde
de lmina para evitar
contaminarse.
Una vez extendida las l{aminas deben dejarse secar en
una bandeja soporte a temperatura ambiente
- Terminado el extendido descartar los aplicadores en el
recipiente para ser incinerados y cerrar el envase que
contiene la muestra.
Sobre el coloreado del extendido: tcnica ziehl neelsen
- Antes de su uso los colorantes deben ser filtrados.
- Colocar las lminas extendidas y secas sobre el soporte
para colorear con el extendido hacia arriba y sobre un
lavadero.
- Cubrir la totalidad de la superficie del extendido con
el colorante de la fucsina bsica fenicada.
- Calentar suavemente con la llama del mechero de alcohol
por debajo de cada lmina portaobjeto hasta la emisin
del vapor, repetir el proceso por tres veces (no debe
hervir la o preparacin). Si el colorante disminuye por
la evaporacin agregar ms colorante hasta cubrir el
extendido y dejar enfriar.
- Lavar la lmina con agua corriente y a baja presin para
eliminar la fucsina, inclinando y tomando la lmina por
el lado rotulado con el dedo pulgar e ndice o con una
pinza.
- Cubrir la totalidad de la superficie del extendido con
la solucin del alcohol acido durante dos minutos hasta
obtener una coloracin rosa plido. De ser necesario
decolorar nuevamente y dejar reposar por un minutos.
- Eliminar el alcohol acido lavar nuevamente la lmina con
agua corriente a baja presin para no desprender el
extendido.
- Cubrir la superficie del extendido con azul de metileno
de uno a dos minutos.
- Colocar las lminas coloreadas en una bandeja, inclinado
para escurrir el agua y dejar secar al medio ambiente.
6.6.5. RESULTADOS:
61
- Observacin microscpica de la muestra coloreada.

- Es importante considerar como campo microscpico til
aquel en el cual se observa elementos celulares de
origen bronquial es decir fibras mucosas clulas
ciliadas y leucocitos. Los campos que carecen de estos
elementos no deben ser considerados en una lectura, esta
es para las muestras que proceden de las muestras
pulmonares especialmente en el esputo.
Colocar una gota de aceite de inmersin en la lmina
coloreada a observar.
Observar como mnimo cien campos (tiles en el esputo).
Hacer un examen completo d la lmina empleando objetivo
de 100x avanzando de izquierda a derecha con iluminacin
mxima y sin filtro de color.
Apuntar el nmero de bacilos observados y el nmero de
campos observados.
I.
Interpretacin e informacin.
1. Se informa de la siguiente escala semi
cuantitativa:
+
++
+++
6.7.PREPARACIN
Negativo: no se encuentra BAAR en 100

microscpicos observados.
Menor
de
un
BAAR
por
campo
en
100
microscpicos observados.
1 a 10 BAAR observados en 50 campos microsc
observados.
Ms de 10 BAAR por campo en 20 campos microsc
observados.
DE LOS MEDIOS DE CULTIVOS
Objetivo: Para hacer el aislamiento de bacterias y micosis

causantes de la enfermedad.
Muestra:
62
Partiendo de los insumos existentes en el comercio,

que ya estn ajustados en pH y
composicin
adecuada.
Alcance:
Clnica Ortega REA DE MICROBIOLOGA
Materiales y Equipos:
Placas Petri estriles.

Tubos de vidrios estriles.
Balones o matraces 50 ul 100 ul 250 ul.
Cocinita pequea.
Autoclave.
Mechero Bunsen.
Incubadora 37C para el control.
PROCEDIMIENTO
1. Pesar de acuerdo a la indicacin de cada medio que est
inscrito en cada etiqueta y/o de acuerdo a la necesidad.
2. Agregar la cantidad de agua destilada suficiente de
acuerdo a los gramos pesados.
3. Disolver completamente con ayuda del calor haciendo que
de un hervor.
4. Colocar en la autoclave por 15 minutos a 15 libras de
presin.
No todos los medios se autoclavan como es el caso paro
los medios para coprocultivo S.S. Agar o XLD, y tambin
en el caso de la urea que se esteriliza por filtracin o
esterilizar solo el agua destilada y despus agregar la
UREA.
5. Cumplido el tiempo de esterilizacin apagar y dejar por
unos 15 minutos y luego esperar que no est muy caliente
para paquear, o si lo requieren en tubos, ya sea en
tubos inclinados (pico de flauta) o tubos rectos, con
mechero encendido.
6. Esperar que se enfre.
7. Colocar en la incubadora a 37 por 24 horas.
8. Guardar en un medio de conservacin en bolsas plsticas,
no ms de 6 semanas.
9. Para hacer uso de los medios de cultivo pre calentar
antes a 37 grados centgrados en la incubadora.
10. El pH del medio debe ajustarse entre 7,2-7,4, debe almacenarse a 2-8C y utilizarse
dentro de los 7 das siguientes a su preparacin. El medio debe dejarse a
temperatura ambiente unas dos horas antes de utilizarlo. Si existe agua en la
superficie del agar, las placas pueden colocarse en el incubador a 35C durante unos
30 minutos con la tapa ligeramente entreabierta.
63
6.8. UROCULTIVO
Objeto:
Realizar el aislamiento primario de la bacteria

responsable de la infeccin del tracto urinario del
paciente.
Alcance:
Clnica Ortega rea Microbiologa
Muestra:
Orina, colectada adecuadamente *
Materiales y Equipo:
Medio de cultivos bsicos (Agar Sangre, Agar MCkonkey).

Asa de siembra calibrado (10ul).
Mechero de bunsen.
Incubadora.
Placas Petri.
Tubos de prueba de vidrio 13*100.
Balones 50 ul 100 ul 250 ul.
PROCEDIMIENTO:
1. Rotular las placas con medios de cultivo, con el nombre
del paciente, prueba y fecha.
2. Quemar el asa de siembra calibrada de 10 ul, con el fin
de esterilizarla.
3. Esperar que el asa de siembra se enfre, tomar una asada
de la muestra y siembran en el agar sangre, por estra.
4. Inmediatamente sin necesidad de esterilizar, sembrar en
el agar MCkonkey por estra.
5. Esterilizar el asa de siembra y guardarlo.
6. Colocar las placas con agar, sembradas, en la incubadora
a 37C por 24 horas.
INTERPRETACION:
64
La lectura de los medios cultivados sern realizados

despus de las 18 a 24 horas.
Observar el tipo de colonia y hacer la coloracin gram
de la misma.
Realizar el recuento de colonias
Estas deben ser mayor a cien mil. (100000 unidades
formadoras de colonias (UFC/ml))
Realizar
identificacin
bioqumica
de
los
gram
negativos, en los medios de TSI, LIA, CITRATO SIMONS,
SIM, UREA, INDOL.
Identificar ayudado por la tabla de identificacin de
enterobacterias.
NOTA: es imprescindible hacer coloracin Gram de
colonias sospechosas
*Ver toma de Muestra
6.9.
CULTIVO DE SECRECIN FARNGEA
Objetivo: Aislamiento
faringitis,
pilares.
de
microorganismos
causantes
amigdalitis, o inflamacin de
Alcance:
Clnica Ortega REA DE MICROBIOLOGA
Muestra:
Secrecin Farngea.
de
los
Materiales:
Hisopos de algodn esterilizados

Baja lenguas
Mascarilla
Laminas porta objeto
Medios de cultivo (agar MCkonkey, agar sangre,
Columbia, agar manitol salado, agar saboread)
Tubos 13 x 100mm
Incubadora
Microscopio
Mechero bunsen
Asas de platino
agar
Procedimiento
1. Rotular las placas con medio de cultivo con el nombre
del paciente.
2. Con el paciente sentado y cmodo proceder a tomar la
muestra de las amgdalas, pilares y y fondo de la
faringe con el hisopo.
3. Colocar muestra de secrecin en cada una de las placas
con el hisopo
4. Con el asa de siembra hacer la estra de la secrecin
en el agar
65
5. Colocar un trozo de algodn en la base del frasco de

anaerobiosis y humedecer, para crean un ambiente hmedo.
6. Colocar las placas con medios de cultivo en el frasco de
anaerobiosis correctamente y encender una vela para
quitar oxgeno del frasco.
7. Realizar la primera lectura del crecimiento a partir de
las 18 a 24 horas
8. Revisar el tipo de colonia, forma, nmero, etc. y hacer
coloracin Gram de las colonias para discriminar si son
colonias patgenas o flora normal.
Interpretacin:
Agar sangre y agar Columbia:
1. Revisar la hemolisis que han producido las colonias.
2. Revisar mediante una extensin y coloracin Gram de la
colonia si son bacterias de inters patgeno, Gram
positivos o Gram negativos o si son levaduras.
3. Si son cocos Gram positivos tipo estreptococos se har
la prueba de bacitracina y sulfatrimetoprim. Para el
descarte de estreptococos beta hemoltico, estreptococos
viridans o estreptococos beta hemoltico del grupo A, B
o estreptococos beta hemoltico que no pertenece al
grupo A.
4. En caso de ser estreptococos beta hemoltico del grupo B
hacer antibiograma.
Agar MCkonkey
1. Pueden desarrollarse colonias como klebsiella comnmente
causantes de amigdalitis. La identificacin bioqumica
ser concluyente para su identificacin.
2. El aislamiento de pseudnimas es muy raro, pero suele
darse casos.
Agar manitol salado
1. En caso de desarrollarse colonias y estas sen de color
amarillo intenso, hacer la prueba de la couagulasa,
tomando aproximadamente 30ul de plasma , inocular la
cepa y esperar alrededor de 3 horas, revisar y concluir
si hay coagulacin o presencia de fibrina en tal caso la
prueba es positiva. Si es as hace antibiograma.
66
6.10. COPROCULTIVO
Objetivo:
es el mtodo indicado y ms til

aislamiento de bacterias enteropatgenas.
para
el
Las ms comunes son: shigella, salmonella, algunas

cepas enteropatgenas de escherichia coli.
Otras especies de poca frecuencia como: yersinia
enterocoltica, Vibrio cholerae, clostridium.
Principios generales:
Para la obtencin de la muestra, usar frascos de boca

ancha estril, si los pacientes viven cerca.
Usar medios de transporte cuando los pacientes son de
lejos o cuando se hace campaas fuera del laboratorio.
Las muestras deben ser debidamente rotuladas nombres y
cdigo que identificara a la muestra.
Materiales y equipos
Medios de cultivo como:

1. Medio de transporte cary Blair
2. Medio de xilosa lisina desoxicolato (XLD)
3. Medio de eosina azul de metileno (EMB)
4. Medio de desoxicolato citrato (DE)
5. Medio de enriquecimiento caldo selenito
Tubos de ensayo de vidrio con tapa rosca de 13 x 100

Incubadora
Esterilizadora (autoclave, estufa)
Microscopio
Placas Petri
Balones
Matraces
Asa de platino
Mechero bunsen
Procedimiento
67
Hace siembras primarias o directas son muy importantes

para aquellas que no crecen en medios de enriquecimiento
como el caso de la Shigella.
La superficie del medio de cultivo a usarse debe estar
completamente seca, debe usarse un solo medio a eleccin
XLD de preferencia.
1. Girando el hisopo y haciendo un movimiento de
rotacin dejar una porcin de la muestra en el borde
extremo de la placa.
2. Tomando como referencia central el lugar del depsito
de la muestra distribuir con el asa uniformemente
hacia ambos extremos tocando los bordes de la placa
unos dos cm. De ancho.
3. Continuar la siembra, distribuyendo con el asa, de
uno de los extremos de la primera porcin y en el
ngulo recto hasta el otro extremo, conservando el
ancho de los dos centmetros. Siguiendo la misma
direccin distribuir l tercera porcin que ha quedado
libre, como se indica en la figura, secciones b y c.
4. Seguir la siembra en la parte central, con un trazo
de zigzag bien unido, sij tocar los lados de las
siembras anteriores, segn seccin d en la figura.
5. Anotar el nombre del paciente.
6. Incubar de 35 a 37 grados centgrados durante 18 a
24 horas.
Enriquecimiento
68
1. Una vez sembrada en la placa para el aislamiento

primario, se procede hacer la siembra en el medio de
enriquecimiento, hay varios, pero caldo selenito es ms
recomendable porque no inhibe el crecimiento de la
salmonella thypi al contrario permite su crecimiento.
2. Escribir en nombre del paciente en el tubo que se va
hacer la resiembra.
3. Colocar el hisopo con loa muestra en el caldo tratando
de exprimir en los extremos del tubo y dejar el hisopo
en el tubo. Si la muestra es tomada en el laboratorio se
pondr al caldo una buena asada.
4. Incubar de 35
a 37 grados centgrados por 18 24
horas.
5. El caldo despus de este periodo de incubacin se habr
tornado rojo ladrillo y en estas condiciones para
continuar el paso siguiente.
6. La prolongacin de la incubacin del caldo selenito por
cinco das mejora en muchos casos la recuperacin de la
salmonella thypi.
7. Hacer la siembra a partir del medio enriquecido, se debe
usar el medio SS agar la cual permite el crecimiento de
la Salmonella thypi.
8. Obtener una asada sin agitar el caldo selenito, incubar
a 37 grados centgrados por 18 a 24 horas.
9. Con el asa cargada seguir el trazo de siembra indicado.
10.
Incubar las placas rotuladas
a 37
grados
centgrados por 18 a 24 horas.
Interpretacin
69
El crecimiento de colonias amarillas en XLD son latosa

positivas.
El crecimiento de colonias rojas pequeas y puntos
negros son lactosa negativas.
Las colonias sospechosas para salmonella o shigella
sern repicadas en su oportunidad a los medios de
diferenciacin bioqumica.
Las pruebas para diferenciacin bioqumica de salmonella
y shigella son numerosas ; pero aqu se usara :
o Triple azcar fierro conocido como el TSI.
o Agar lisina fierro: conocido como LIA.
o Estos medios incluyen varias pruebas bioqumicas

que
permiten
orientarnos
fcilmente
al
diagnstico de salmonella y shigella.
Caractersticas de colonias:
En el medio xilosa lisina desoxicolato (XLD)

1. Las salmonellas en XLD son colonias rojas con puntos
negros o completamente negras.
2. La shigella, son colonias rojas en el XLD.
En medio desoxicolato citrato o en eosina azul de metileno.
1. En el medio EMB las colonias de shigella y salmonellas
son translucidas e incoloras.
En el medio salmonella shigella
agar (SS)
1. Salmonella: colonias translucidas e incoloras. Bordes

incoloros y centro negro.
2. Shigella: colonias translucidas e incoloras.
Incubacin en los medios TSI y LIA
70
Tener la seguridad de que ambos tubos TSI y LIA sern

inoculados con la misma colonia tratando de no tocar las
colonias vecinas ni el fondo del medio de cultivo.
Punzar una sola vez en el medio TSI punzando por el
centro hasta tocar el fondo del tubo retirar por el
mismo trazo y sembrar en estra la parte inclinada.
Con el resto de muestra que queda en la misma asa sin
volver a tocar la colonia, punzar tres veces de espesor
en el medio de LIA hasta el fondo del tubo, terminando
as mismo en estra la parte iclinada.se colocara en el
colocara en el tubo de LIA papel indol cuidando que no
tenga contacto con el agar .
Se puede hacer el indol en tubo de caldo BHI o en el SIM
pero usar la misma colonia que se us para TSI y LIA o
hacer a partir del TSI los repicajes
Incubar los tubos de 35 37 por 18 hasta 24 horas.
Los resultados
Se llevaran a la
enterobacterias.
tabla
para
la
identificacin
de
Resultados interpretados en TSI
La presencia de color negro nos indica la produccin de

hidrgeno o sulfurado (H2S) y se califica en cruces de
1+ a 4+.
La presencia de gas se manifiesta por la elevacin y el
resquebrajamiento
de medio, se califica segn su
intensidad de 1+ a 4+.
La acides se pone de manifiesto por el cambio de color
amarillo y se simboliza con la letra A.
La alcalinidad del medio es el cambio de color rojo
ladrillo a grosella y se simboliza con la letra K.
El consumo de glucosa se manifiesta por la alcalinidad
en la parte inclinada (pico de flauta) y la acides al
fondo y se simboliza K/A.
El consumo dela lactosa y/o sacarosa se manifiesta en
cambio total del medio al color amarillo, se simboliza
A/A.
Resultados interpretados en LIA
Lisina positiva: produce alcalinidad en todo el medio

por tanto el color azul se intensifica K/K, se produce
por la descarboxilacin.
Lisina negativa: alcalinidad en la inclinacin y acides
al fondo K/A o A/A.
La desaminacin empieza en la parte inclinada, variando
esta porcin al color rojo ladrillo, al fondo del tubo
se torna amarillo (R/A) es lisina negativo.
El H2S en el medio de LIA no tiene importancia,
solamente tendr valor cuando el TSI es negativo y el
LIA es positivo.
Para identificar la salmonella y la shigella se har primero

la identificacin bioqumica
y luego la serologa y nunca
hacer la serologa sin tener orientacin bioqumica.
71
6.11.Antibiograma
El antibiograma disco-placa basado en el trabajo de Bauer, Kirby y colaboradores es uno
de los mtodos que el National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS)
recomienda para la determinacin de la sensibilidad bacteriana a los antimicrobianos.
Para conocer la sensibilidad de una bacteria a distintos antibiticos se siembra una muestra del
cultivo puro en un medio en el que conocemos la capacidad de difusin de cada una de las
sustancias a testar. Este es el medio de Mueller Hinton.
Material
Cultivo Puro de un microorganismo
Placa con medio de Mueller-Hinton
Pinzas metlicas
Discos de antibiticos
Para la realizacin de la prueba en primer lugar hay que suspender en el caldo BHI una colonia
del cultivo con el hisopo esteril, que aproximadamente nos de la turbidez de 0.5 en la escala de
Mac Farland.
Se descarga el hisopo realizando una estrella en el centro de la placa y extendindola
posteriormente por toda la superficie procurando que no queden espacios sin cubrir. Una vez
sembrada la placa. dejar secar de 3 a 5 minutos antes de depositar los discos.
Los antibiticos vienen en impregnados en discos de papel absorbente que se sacan con pinzas
metlicas esterilizadas mediante flameo.
Los discos se depositan en la superficie del medio de cultivo inoculado, realizando una ligera
presin para que queden adheridos al mismo. Hay que procurar que queden suficientemente
72
separados unos de otros para que la lectura de resultados, sea clara y no hayan interferencias
entre la accin de unas sustancias y otras.
La placa preparada con el inculo y los antibiticos se invierte y se lleva a incubar durante 24
horas a 37C.
Tras este tiempo, se leen los resultados midiendo el dimetro de los halos de inhibicin del
crecimiento que aparecen alrededor de los discos de papel. Se valora la efectividad de
los mismos consultando la tabla correspondiente en la que, segn el antibitico, tenemos la
capacidad de difusin en el medio y por tanto, la medida de halo que corresponder a una
bacteria sensible, de sensibilidad intermedia, o resistente.
La lectura de los halos de inhibicin debe interpretarse como sensible (S), intermedia (I) o
resistente (R) segn las categoras establecidas por el NCCLS
Cuando aparecen colonias dentro del halo de inhibicin, puede tratarse de mutantes
resistentes, contaminaciones, poblaciones heterogneas o cultivos mixtos y conviene volver
a identificarlas y realizar otra vez el ensayo de sensibilidad antimicrobiana. Como regla
general, no debe considerarse aquellas colonias diminutas que aparecen en el halo de
inhibicin y que han sido visualizadas mediante luz transmitida o con ayuda de una lupa, a
excepcin de estafilococos resistentes a oxacilina o enterococos resistentes a vancomicina.
La interpretacin de los resultados puede realizarse en funcin de las normas del NCCLS
Antimicrobianos seleccionados
Es evidente la imposibilidad de ensayar un gran nmero de antimicrobianos frente a un
microorganismo determinado. La seleccin final de qu antibiticos deben ser estudiados
depender del Laboratorio de Microbiologa en sintona con las decisiones del Comit de
Infecciones de cada hospital. En las Tablas 1 a 5 se muestran los antimicrobianos
recomendados por la NCCLS, agrupados en cuatro grupos segn el trabajo de Washington.
En el grupo A se encontran quellos antimicrobianos que se han de ensayar y que deben ser
73
informados de forma rutinaria. El grupo B est constituido por antimicrobianos que pueden
ser valorados de forma rutinaria, pero cuya informacin se efectuar de forma selectiva; es
decir, solamente se informarn si los del grupo A no son activos, no son apropiados para un
lugar determinado de la infeccin, o si se constata un fallo teraputico con el grupo A. En el
grupo C estn incluidos los antibiticos que sern estudiados cuando aparezcan problemas
especficos de resistencia, por ejemplo, brotes epidmicos, en pacientes con alergia a otros
antibiticos o en infecciones inusuales. Finalmente, el grupo D, se destina a
antimicrobianos utilizados en infecciones del tracto urinario. El NCCLS y grupo
MENSURA (Mesa Espaola de Normalizacin de la Sensibilidad y Resistencia a los
Antimicrobianos) tambin establecen recomendaciones segn el tipo de microorganismo e
infeccin.
Control de calidad
Es necesario emplear cepas control para supervisar la exactitud y fiabilidad de la
metodologa, debido tambin al gran nmero de variables que pueden afectar los resultados
y que se han descrito anteriormente. Las cepas que se utilizan para el control de calidad son
las mencionadas en las Tablas 1-4. El NCCLS ha establecido unos lmites en los dimetros
de las zonas de inhibicin que son aceptables para las cepas utilizadas en el control de
calidad. Los problemas que podamos encontrar en la determinacin del halo de inhibicin
de las cepas de control de calidad y su resolucin se detallan en la Tabla 5.
Las cepas de control se mantienen en el congelador a 70C en alguno de los medios
descritos para la conservacin de cepas, con el fin de preservar su viabilidad y minimizar
posibles modificaciones. Para resembrarlas debe utilizarse un escobilln o asa con el que se
rascar la superficie del material congelado (no hace falta descongelar) y sembrar en una
placa de agar sangre. Incubar a 35C, de 18 a 20 horas, realizar una nueva resiembra que ya
podr emplearse para el ensayo. Debe realizarse controles cada nuevo lote de medio de
cultivo y cada nuevo lote de antibiticos. La cepa ATCC 29212 sirve para detectar que el
Mueller-Hinton contiene los niveles correctos de inhibidores al ensayar el trimetoprim y/o
sulfametoxazol. Los resultados normalmente quedan registrados en una libreta de Control
de Calidad.
Control del inculo: Se utiliza un MacFarland 0.5. Para prepararlo se emplea 0.5 ml de
0.048 M de BaCl2 (1,175% BaCl2+2H2O) en 99,5 ml de 0.18 M H2SO4 (1% v/v) con
agitacin constante. La absorcin a 625 nm ha de estar entre 0.08 y 0.10 (comprobar cada
mes). Alcuotas de 4 a 6 ml se distribuyen en tubos con tapn de rosca y se guardan en la
oscuridad a temperatura ambiente.
Resultados
Interpretacin: Comparando los dimetros del halo de inhibicin con las CMIs, y
estableciendo las correspondientes rectas de regresin, se han fijado unos criterios para
clasificar las cepas estudiadas. De esta forma se han fijado tres categoras: sensible (S),
intermedia (I) y resistentes (R). Anteriormente se aada la categora moderadamente
sensible (MS) que tiende a eliminarse y los resultados correspondientes a la misma se han
situado en la categora de intermedia. Las interpretaciones seguirn las normas establecidas
74
por el NCCLS (Tabla 1 a 5) pero, por regla general, un dimetro de inhibicin de 30 a 35

mm es indicativo de una cepa altamente sensible, mientras que dimetros de zona de
inhibicin inferiores a 15 mm son los que presentan las cepas resistentes.
El trmino sensible indica que la infeccin ocasionada por la cepa para la que se ha
determinado la CMI o su correspondiente halo de inhibicin puede tratarse de forma
adecuada empleando las dosis habituales de antimicrobiano, en funcin del tipo de
infeccin y de la especie considerada.
El trmino intermedio indica que el halo de inhbicin traducido en valores de CMI se
aproxima a las concentraciones de antimicrobiano alcanzables en sangre o tejidos y que
puede esperarse eficacia clnica en aquellas localizaciones en las que se alcanzan altas
cocentraciones de antimicrobiano (p. ej. orina) o cuando se emplean dosis ms elevadas de
lo habitual. El NCCLS tambin incluye en esta categora aquellos casos de antimicrobianos
con mrgenes de toxicidad estrechos en los que pequeos errores tcnicos podran suponer
cambios de interpretacin en la categora clnica.
Finalmente, el trmino resistente se refiere a aquellos microorganismos que no se inhiben
por las concentraciones habitualmente alcanzadas en sangre/tejidos del correspondiente
antimicrobiano, o a aquellos microorganismos en los que existen mecanismos de
resistencias especficos para el agente estudiado en los que no ha habido una adecuada
respuesta clnica cuando se ha usado como tratamiento el correspondiente antimicrobiano.
Reproducibilidad: el medio de Mueller-Hinton, regulado en su concentracin de iones
divalentes, presenta una buena reproducibilidad entre fabricantes. La reproducibilidad est
condicionada a la correcta estandarizacin de la metodologa y a la utilizacin de controles
de calidad.
Comunicacin: Como se ha mencionado anteriormente los resultados se expresarn como
sensible, intermedio o resistente. Como reglas importantes se debe considerar las cepas de
estafilococos resistentes a oxacilina como resistentes a todos los beta-lactmicos,
incluyendo la combinacin beta-lactmico ms inhibidor de beta-lactamasas, todas las
cefalosporinas, penicilinas y los carbapenems.
Tabla 1. Patrones estndar del halo de inhibicin, puntos de corte equivalente a

la CMI para enterobacteriasa y dimetro del halo de inhibicin para la cepa E.
coli ATCC25922 empleada como control de calidad
GRUP
O
75
Antimicrobiano
Carga del
disco (g)
Dimetro del halo de

inhibicin (mm)
Punto de corte
Equivalente a
la CMI (g/ml)
E. coli
ATCC
25922
Resisten Intermed Sensib Resisten Sensib interva

te
ia
le
te
le
lo b
76
Ampicilina a,c
10
<13
14-16
>17
>32
<8
16-22
Cefalotina c, d
30
<14
15-17
>18
>32
<8
15-21
Cefazolina c, d
30
<14
15-17
>18
>32
<8
23-29
Gentamicina c
10
<12
13-14
> 15
>8
<4
19-26
Amoxicilina/c
ido clavulnico
20/10
<13
14-17
>18
>16/8
<8/4
19-25
Ampicilina/
sulbactam
10/10
<11
12-14
>15
>32/16
<8/4
20-24
Piperacilina/
tazobactam
100/10
<17
18-20
>21
>128/4 <16/4 24-30
Ticarcilina/cid
o clavulnico
75/10
<14
15-19
>20
>128/2 <16/2 25-29
Mezlocilina
75
<17
18-20
>21
>128
<64
23-29
Ticarcilina
75
<14
15-19
>20
>128
<16
24-30
77
Piperacilina
100
<17
18-20
>21
>128
<16
24-30
Cefamandol
30
<14
15-17
>18
>32
<8
26-32
Cefonicid
30
<14
15-17
>18
>32
<8
25-29
Cefuroxima
(oral)
30
<14
15-22
>23
>32
<4
20-26
Cefpodoxima
10
<17
18-20
>21
>8
<2
23-28
Cefixima
<15
16-18
>19
>4
<1
23-27
Cefoxitina
30
<14
15-17
>18
>32
<8
23-29
Cefotetan
30
<12
13-15
>16
>64
<16
28-34
Cefmetazol
30
<12
13-15
>16
>64
<16
26-32
Cefoperazonaa
75
<15
16-20
>21
>64
<16
28-34
Cefotaximaa, d
30
<14
15-22
>23
>64
<8
29-35
Ceftizoximaa
30
<14
15-19
>20
>32
<8
30-36
Ceftriaxonaa, d
30
<13
14-20
>21
>64
<8
29-35
Cefepima
30
<14
15-17
>18
>32
<8
29-35
Imipenem
10
<13
14-15
>16
>16
<4
26-32
Meropenem
10
<13
14-15
>16
>16
<4
28-34
Amikacina
30
<14
15-16
>17
>32
<16
19-26
Ciprofloxacino
<15
16-20
>21
>4
<1
30-40
<13
14-16
>17
>8
<2
29-37
<10
11-15
>16
a, c
Levofloxacino
Trimetoprim/
1,25/23,
sulfametoxazol
75
>8/152 <2/38 24-32
a, c
78
Ceftazidimae
30
<14
15-17
>18
>32
<8
25-32
Aztreoname
30
<15
16-21
>22
>32
<8
28-36
Kanamicina
30
<13
14-17
>18
>25
<6
17-25
Netilmicina
30
<12
13-14
>15
>32
<12
22-30
Tobramicina
10
<12
13-14
>15
>8
<4
18-26
Tetraciclina c
30
<14
15-18
>19
>16
<4
18-25
Cloranfenicola
30
<12
13-17
>18
>32
<8
21-27
Carbenicilina
100
<19
20-22
>23
>64
<16
23-29
Cinoxacino
100
<14
15-18
>19
>64
<16
26-32
Lomefloxacino
10
<18
19-21
>22
>8
<2
--
Norfloxacino
10
<12
13-16
>17
>16
<4
28-35
Ofloxacino
<12
13-15
>16
>8
<2
29-33
Loracarbeff
30
<14
15-17
>18
>32
<8
23-29
Nitrofurantoina
300
<14
15-16
> 17
>128
<32
20-25
250 o
300
<12
13-16
>17
>350
<100 15-23
Sulfisoxazol
79
Trimetoprim
<10
11-15
>16
>16
<4
21-28
Fosfomicina
200
<12
13-15
>16
>256
<64
22-30
Elaborado con datos del NCCLS, 2000

a) Para aislamientos de Salmonella y Shigella spp. debemos ensayar e informar
rutinariamente solo ampicilina, una quinolona, y trimetoprim-sulfametoxazol.
Adems, el cloranfenicol y cefalosporinas de tercera generacin deben ser estudiadas
e informadas para Salmonella aisladas como causa de infecciones extraintestinales.
b) Adems de E. coli ATCC25922, estudiar E. coli ATCC 35218 cuando se ensayan
combinaciones con inhibidores de -lactamasa. Los intervalos aceptables para E. coli
ATCC 35218 son los siguientes: amoxicilina/cido clavulnico de 18 a 22 mm;
ampicilina/sulbactam, de 13 a 19 mm; ticarcilina/cido clavulnico de 21 a 25 mm y
piperacilina/tazobasctam, de 24 a 30 mm.
c) Puede adems ser apropiado para obtener informacin sobre cepas aisladas del
tracto urinario, junto con antimicrobianos del grupo D.
d) Cefalotina representa a cefapirina, cefradine, cefalexina, cefaclor y cefadroxilo.
Cefazolina, cefuroxima, cefpodoxima, cefprozil y loracarbef deben ser ensayados
individualmente ya que pueden ser activos aunque la cefalotina no lo sea.
e) Cepas de Klebsiella spp. y E. coli pueden ser resistentes a cefalosporinas y
aztreonam mediante produccin de -lactamasas de espectro extendido: a pesar de la
aparente sensibilidad "in vitro", algunas cepas pueden ser reconocidas por resultados
intermedios o resistentes a ceftazidima y aztreonam (o cefotaxima, cefpodoxima,
ceftriaxona y ceftizoxima) y frecuentemente son resistentes a otros antimicrobianos
como aminoglicsidos y trimetoprim-sulfametoxazol. Las cepas con -lactamasas de
espectro-extendido deben ser informadas como resistentes a las cefalosporinas y al
aztreonam.
f) Ciertas cepas de Citrobacter, Providencia y Enterobacter spp. pueden presentar
resultados falsamente sensibles con discos de loracarbef, por lo que los aislamientos
de estos gneros no deben ser ensayados frente a este antimicrobiano.
80
Tabla 2. Patrones estndar del halo de inhibicin para Pseudomonas aeruginosa

y Acinetobacter spp.a , puntos de corte equivalentes a la CMI y dimetro del halo
de inhibicin para la cepa Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 empleada
como control de calidad
Dimetro del halo de

inhibicin (mm)
Punto de corte
Equivalente a la
CMI(g/ml)
GRUP Antimicrobian Carga del

O
o
disco (g)
P.
aerugino
sa
ATCC
27853
Intervalo
b
Resisten Intermed Sensib Resisten Sensib

te
ia
le
te
le
Mezlocilina
75
<17
18-20
>21
>128
<16
--
Mezlocilina
Acintobacte
r spp.
75
<15
--
>16
>128
<64
19-25
Ticarcilina b
Pseudomon
as spp.
75
<14
--
>15
>128
<64
22-28
Ticarcilina
Acinetobact
er spp.
75
<14
15-19
>20
>128
<16
--
Piperacilina
100
<17
--
>18
>128
<64
25-33
Pseusomona
s spp
81
Pseudomon
as spp.
82
Piperacilina
Acinetobact
er spp.
100
<17
18-20
>21
>128
<16
--
Ceftazidima
30
<14
15-17
>18
>32
<8
22-29
Gentamicina
10
<12
13-14
>15
>8
<4
16-21
Amp./sulbac
t.
Acinetobact
er spp.
10/10
<11
12-14
>15
>32/16
<8/4
--
Ticar./clav.
Pseusomona
s spp.
75/10
<14
---
>15
>128/2 <64/2
20-28
Ticar./clav.
Acinetobact
er spp.
75/10
<14
15-19
>20
>128/2 <16/2
---
Piper./tazob.
Pseusomona
s spp.
100/10
<17
---
>18
>128/4 <64/4
25-33
Piper./tazob.
Acinetobact
10010
<17
18-20
>21
>128/4 <16/4
---
er spp.
83
Cefepima
30
<14
15-17
>18
>32
<8
24-30
Cefoperazon
a
75
<15
16-20
>21
>64
<16
23-29
Aztreonam
30
<15
16-21
>22
>32
<8
23-29
Imipenem
10
<13
14-15
>16
>16
<4
27-33
Meropenem
10
<13
14-15
>16
>16
<4
20-28
Amikacina
30
<<14
15-16
>17
>32
<16
18-26
Tobramicina
10
<12
13-14
>15
>8
<4
19-25
Ciprofloxaci
no
<15
16-20
>21
>4
<1
25-33
Cefotaxima
30
<14
15-22
>23
>64
<8
18-22
Ceftriaxona
30
<13
14-20
>21
>64
<8
17-23
Netilmicina
30
<12
13-14
>15
>32
<12
17-23
Cloranfenico
l
84
30
<12
13-17
>18
>32
<8
Trimetoprim 1,25/23,
/
75
sulfametoxa
zol
<10
11-15
>16
Carbenicilin
a
Pseudomon
as spp.
100
<13
14-16
>17
>512
<128
18-24
Carbenicilin
a
Acinetobact
er spp.
100
<19
20-22
>23
>64
<16
--
Ceftizoxima
30
<14
15-19
>20
>32
<8
12-17
Tetraciclina c
30
<14
15-18
>19
>16
<4
--
Lomefloxaci
no
10
<18
19-21
>22
>8
<2
22-28
Levofloxaci
no
<13
14-16
>17
>8
<2
19-26
Norfloxacin
o
10
<12
13-16
>17
>16
<4
22-29
>8/152 <2/38
--
--
Ofloxacino
<12
13-15
>16
>8
<2
17-21
Sulfisoxazol
250 o
300
<12
13-16
>17
>350
<100
--
Elaborado con datos del NCCLS, 2000.

a) Otras bacterias no pertenecientes a la familia Enterobacteriaceae deben ser
ensayadas por un mtodo de dilucin.
b) Tratar las infecciones por Pseudomonas aeruginosa en pacientes
granulocitopnicos y las infecciones graves en otros pacientes con dosis mximas de
penicilinas antipseudomonas (ticarcilina, azlocilina, mezlocilina y piperaciclina), o
ceftazidima en combinacin con un aminoglicsido.
c) Tetraciclina es el representante de todas las tetraciclinas.
d) Puede utilizarse sulfisoxazol para cualquiera de las sulfamidas disponibles.
Tabla 3. Patrones estndar del halo de inhibicin para estafilococos, puntos de corte
equivalentes a la CMI y dimetro del halo de inhibicin para la cepa Staphylococcus
aureus ATCC 25923 empleada como control de calidad.
GRUPO Antimicrobia
no
85
Carga del
disco (g)
Dimetro del halo de

inhibicin (mm)
Punto de corte
Equivalente a la
CMI (/ml)
S.
aureus
ATCC
25923
interval
o
Resistent Intermedi Sensibl Resistente Sensibl

e
a
e
e
Penicilina G
10 U
<28
--
>29
lactamas
ab
<0.1
26-37
<10
11-12
>13
>4
<2
18-24
<17
--
>18
>0.5
<0.25
--
Vancomicin
ad
30
--
--
>15
>32
<4
17-21
Teicoplanina
30
<11
11-13
>14
>32
<8
15-21
Eritromicina
15
<13
14-22
>23
>8
<0.5
22-30
Claritromici
nae
15
<13
14-17
>18
>8
<2
26-32
Azitromicin
ae
15
<13
14-17
>18
>8
<2
21-26
Clindamicin
ae
<14
15-20
>21
>4
<0.5
24-30
b,c
Oxacilina b (S.
aureus)
(Estafilococos
coagulasa -)
86
Trimetoprim 1,25/23,7
/
5
sulfametoxa
zol
<10
11-15
>16
>8/152
<2/38
24-32
Gentamicina
10
<12
13-14
>15
>8
<4
19-27
Ciprofloxaci
no
<15
16-20
>21
>4
<1
22-30
Ofloxacino
<12
13-15
>16
>8
<2
24-28
Levofloxaci
no
<13
14-16
>17
>8
<2
25-30
Cloranfenic
ole
30
<12
13-17
>18
>32
<8
19-26
Rifampicina
<16
17-19
>20
>4
<1
26-34
30
<14
15-18
>19
>16
<4
24-30
Norfloxacin
o
10
<12
13-16
>17
>16
<4
17-28
Lomefloxaci
no
10
<18
19-21
>22
>8
<2
23-29
e,f
Tetraciclina
f,g
87
Nitrofuranto
ina
300
<14
15-16
>17
>128
<32
18-22
Sulfisoxazol
250 o
300
<12
13-16
>17
>350
<100
24-34
Trimetoprim
<10
11-15
>16
>16
<4
19-26
Elaborado con datos del NCCLS, 2000.

a) Adems de S. aureus ATCC 25923, ensayar E. coli ATCC 35218 con:
amoxicilina/clavulnico de 18 a 22 mm.; ampicilina/sulbactam de 13 a 19 mm.
b) Las cepas resistentes de S. aureus producen -lactamasa, y para estas pruebas es
preferible el empleo de discos de penicilina G de 10 U. Utilizar penicilina G para estudiar
la sensibilidad de todos los estafilococos a todas las penicilinas sensibles a la penicilinasa.
c) Estafilococos resistentes a oxacilina son resistentes a todos los -lactmicos (la
sensibilidad a -lactmicos puede deducir estudiando solo penicilina y oxacilina).
d) Todos los estafilococos con un dimetro del halo de inhibicin igual o menor de 14mm
deben ser estidados para determinar la CMI de la vancomicina.
e) No para microorganismos aislados del tracto urinario.
f) No utilizar rifampicina sola para el tratamiento de infecciones estafiloccicas.
g) Tetraciclina es el representante de todas las tetraciclinas.
Tabla 4. Patrones estndar de inhibicin y punto de corte equivalente a la CMI para
88
enterococos a
GRUP
O
Antimicrobian Carg
o
a del
disco
(g)
Dimetro del halo de

inhibicin
Punto de corte
Equivalente a la
CMI (/ml)
Resistent Intermedi Sensibl Resistent Sensibl

e
a
e
e
e
Penicilina b
10 U
<14
--
>15
>16
<8
Ampicilina b
10
<16
--
>17
>16
<8
Vancomicina c
30
<14
15-16
>17
>32
<4
Teicoplanina
30
<10
11-13
>14
>32
<8
Eritromicina
15
<13
14-22
>23
>8
<0.5
Gentamicina d
120
7-9e
>10
>500
<500
Estreptomicina
300
7-9 e
>10
-f
-f
Ciprofloxacino
<15
16-20
>21
>4
<1
Norfloxacino
10
<12
13-16
>17
>16
<4
89
Nitrofurantoina
300
<14
15-16
>17
>128
<32
Tetraciclina
30
<14
15-18
>19
>16
<4
Fosfomicina
200
<12
13-15
>16
>256
<64
Elaborado con datos del NCCLS, 2000 .

a) Puede usarse S. aureus ATCC 25923 como control de calidad de los antimicrobianos de
la tabla.
b) La sensibilidad a penicilina G puede servir para predecir la sensibilidad a ampicilina,
amoxicilina, acilampicilinas, ampicilina/sulbactam y amoxicilina/cido clavulnico, a los
cuales los enterococos no productores de -lactamasa son moderadamente sensibles. La
terapia combinada con penicilina G o ampicilina ms un aminoglicsido habitualmente
est indicada para infecciones enteroccicas graves, tales como endocarditis. Para cepas
aisladas de sangre y LCR se recomienda adems una prueba de -lactamasa.
c) Frecuentemente se utiliza vancomicina para infecciones enteroccicas graves en
alrgicos a penicilina y debe informarse de forma selectiva slo en tales pacientes. La
terapia combinada con vancomicina ms un aminoglicsido est habitualmente indicada
en infecciones enteroccicas graves, como endocarditis. Cuando se valore vancomicina
frente a enterococos, las placas deben mantenerse durante 24 h. y examinarse por luz
transmitida; la presencia de una fina pelcula o de algn crecimiento dentro de la zona de
inhibicin indica resistencia. Si la vancomicina se considera para el tratamiento de
enfermedades enteroccicas graves, los microorganismos con zonas intermedias deben
estudiarse por un mtodo de CMI.
d) Se utilizan slo para ensayar un nivel de resistencia a aminoglicsidos elevado.
e) Si el halo de inhibicin es de 7 a 9 mm, el resultado de la prueba no es concluyente y se
debe utilizar un mtodo de microdilucin en caldo o de dilucin en agar para confirmar la
resistencia.
f) La CMI que se correlaciona para la estreptomicina es: ausencia de sinergia s
>1000g/ml para microdilucin y >2000 g/ml para dilucin en agar.
90
Tabla 5. Problemas que pueden surgir en la determinacin de los halos de

inhibicin de las cepas utilizadas como control de calidad
Observacin
Diagnstico
Solucin
Halos de inhibicin
demasiado pequeos
1. Inculo demasiado
denso.
1. Comprobar y ajustar
inculo.
2. Deterioro del
antibitico.
2. Comprobar potencia .
Utilizar un disco nuevo.
3. Cambio en la cepa
control.
3. Utilizar una cepa nueva.
4. Agar demasiado
profundo.
4. Comprobar profundidad
del agar.
5. Repetir con varios

5. Lectura incorrecta de los observadores.
resultados
6. Aislamiento resistente
Halos de inhibicin
demasiado grandes
1. Inculo poco denso.

2. Antibitico demasiado
potente.
1. Comprobar y ajustar
inculo.
2. Comprobar potencia.
Utilizar un disco nuevo.
3. Cambio en la cepa
control.
3. Utilizar una cepa nueva.
4. Agar demasiado
delgado.
4. Comprobar la
profundidad del agar.
5. Lectura incorrecta de los 5. Repetir con varios

resultados.
observadores.
6. Aislamiento sensible
91
Resultados para
Pseudomonas y
aminoglicsidos fuera de
control
1. Contenido catinico
incorrecto.
1. Utilizar nuevo medio

suplementado con cationes.
Resultados anmalos para

Pseudomonas spp.
1. Mutacin en la cepa
control.
1. Utilizar cepa control

nueva.
y carbenicilina
Aminoglicsidos y
macrlidos demasiado
resistentes, tetraciclina
demasiado sensible.
1. Medio demasiado cido. 1. Comprobar pH del

medio.
Aminoglicsidos y
macrlidos demasiado
sensibles, tetraciclina
demasiado resistente.
1. Medio demasiado
alcalino.
Halo de inhibicin del

trimetoprim demasiado
pequea.
1. Exceso de timidina en el 1. Probar el medio con

medio.
Enterococcus faecalis
ATCC 33186.
1. Comprobar pH del
medio.
CONTROL DE CALIDAD
Medio de cultivo
Cada lote de Mueller-Hinton se debe evaluar utilizando una serie de cepas de control de
calidad. Uno de los problemas que pueden plantearse con el caldo de Mueller-Hinton es el
contenido en timidina que puede inducir a errores en la determinacin de la CMI de
sulfamidas y de trimetoprim. Con la cepa control de Enterococcus faecalis ATCC 29212 los
valores de CMI deben ser, respectivamente, <= 0.5 y <= 9.5 mg/l. La CMI de gentamicina
de P. aeruginosa ATCC 27853 puede ser menor de la esperada si el caldo Mueller-Hinton
no contiene una cantidad adecuada de cationes.
Cepas de referencia
92
Las cepas de referencia en mtodos de dilucin aconsejadas por el NCCLS (7) son:
Staphylococcus aureus ATCC 29213: Control para antimicrobianos usados frente a

bacterias grampositivas.
Enterococcus faecalis ATCC 29212: Control para antimicrobianos usados frente a

bacterias grampositivas, y para control de trimetoprim/sulfametoxazol.
Escherichia coli ATCC 25922: Control de antimicrobianos usados frente a bacterias

gramnegativas.
Escherichia coli ATCC 35218: Control para las combinaciones de beta-lactmicos

con inhibidores de betalactamasas.
Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853: Control de antimicrobianos usados frente a

bacterias gramnegativas y particularmente con aminoglucsidos.
Los valores aceptables para cada una de estas cepas se recogen en la Tabla 11. P.
aeruginosa ATCC 27853 desarrolla resistencia a carbenicilina cuando se subcultiva
sucesivamente. Si se observa este problema debe comenzar a usarse un nuevo cultivo de la
coleccin que se mantenga liofilizado o congelado. Para el trabajo rutinario, las cepas se
pueden mantener durante 2-4 semanas a 4-8C en tubos con agar de soja tripticasa en
lengeta. Para almacenamiento a largo plazo se deben mantener liofilizadas o congeladas al
menos a -20C (o menos) utilizando un agente estabilizante adecuado (ej. caldo de soja
tripticasa con glicerol al 10-15%, caldo con suero bovino fetal al 50%, sangre de oveja
desfibrinada, o leche descremada).
Las cepas de referencia deben usarse para controlar cada lote de tubos, placas de agar, o
placas de microdilucin. En caso de que los valores de CMI no se encuentren dentro de los
rangos recogidos en la Tabla 11 el lote se debe descartar. Este control se debe realizar
durante 30 das consecutivos sin que, para cada antimicrobiano, se obtengan ms de tres
valores fuera de los rangos recogidos en la tabla 11. Cuando se haya satisfecho este
requisito el control ser semanal. Si con esta periodicidad se observa un error (no obvio) se
har una reevaluacin durante 5 das y si con ello no se llega a determinar la fuente del
error se har un control diario nuevamente, durante 30 das, antes de volver al control
semanal.
. INFORME DE RESULTADOS
Cuando la determinacin de la CMI tiene una finalidad clnica, no es aconsejable presentar
simplemente los valores absolutos obtenidos con cualquiera de los mtodos expuestos.
Resulta ms til traducir, mediante una categorizacin cualitativa, estos valores de CMI. La
interpretacin de estos resultados debe considerar tambin aspectos farmacocinticos,
posibles mecanismos de resistencia y datos de eficacia clnica. De esta forma se pueden
distinguir tres categoras clnicas: sensible, intermedio y resistente. Su definicin y
significado pueden encontrarse en el apartado B.1.7.
93
En la actualidad existen varios grupos de estudio que han establecido puntos de corte que
permiten establecer las tres categoras citadas, pero estos valores varan de unos grupos a
otros. En Espaa, el grupo MENSURA ha establecido recientemente los puntos de corte
que definen las categoras de sensibilidad y resistencia y se recogen, de forma comparativa,
los puntos de corte establecidos por este grupo, NCCLS, CA-SFM (Sociedad Francesa de
Mcrobiloga) y BSAC (Soceda Britnica de Quimioterapia).
7. GLOSARIO DE TRMINOS
94
Acantocito: Glbulo rojo que posee prominencias puntiagudas.

Aglutinacin: Agrupamiento de un antgeno en suspensin u otra partcula bacterial con su anticuerpo
especfico que se hace visible mediante el ltex o partculas de carbn o eritrocitos.
Anticoagulante: Sustancia que demora o suprime la coagulacin de la sangre.
Antgeno: Cualquier sustancia inmunizante que habiendo sido inoculado en un organismo de persona o
animal, ocasiona la produccin y liberacin de anticuerpos especficos.
Asepsia: Mtodo de prevenir las infecciones mediante la destruccin de los agentes infectivos.
Basofilia: Consiste en un incremento del valor normal de los basfilos.
Bioseguridad: Es el conjunto de lineamientos y regulaciones para prevenir, eliminar o reducir cualquier riesgo
potencial en las personas, la comunidad y el medio ambiente.
Calibracin: Establecer con exactitud la correspondencia entre las indicaciones de un instrumento de medida
y los valores de la magnitud que se mide con l.
Cardiolipina: Extracto alcohlico de corazn de buey.
Clulas epiteliales: Clulas superficiales que protegen las cavidades internas y la superficie externa
del cuerpo.
Cbalos: Pequea bolas de heces resecas.
Cilindros urinarios: Aglomerados de protenas de estructura tubular que se forman durante las enfermedades
de los tbulos renales, pueden contener en su matriz eritrocitos, otras clulas y depsitos de sustancias
qumicas.
Coagulacin: Proceso de formacin de la sangre en una masa gelatinosa.
Cogulo: La conversin del fibringeno en una red de molculas de fibrina polimerizada, que
transforma la sangre en una masa gelatinosa.
Codocito: Glbulo rojo que presenta condensacin en el centro.
Concentracin: Es la relacin entre la cantidad de soluto y la cantidad de solvente o solucin.
Cristales urinarios: Formas geomtricas de diferentes sustancias qumicas que se cristalizan en la orina
dependiendo del pH de esta.
Densidad ptica: Cantidad de luz absorbida por una sustancia que puede ser medida por un
espectrofotmetro.
Densidad: Es la relacin entre la masa y el volumen.
Drepanocito: Glbulo rojo que adopta forma semilunar (falciformes).
EDTA: sales de sodio o potasio del cido etilendiaminotetractico, son poderosos anticoagulantes y suelen
elegirse para el trabajo hematolgico normal.
95
Eliptocito: Glbulo rojo que tiene forma elptica, es un defecto de membrana.

Ensayo: Experimento.
Enzimas: Catalizadores que modifican la velocidad de una reaccin.
Equinocito: Glbulo rojo fragmentado.
Eritroblasto: Eritrocito joven que an conserva su ncleo.
Eritrocito: Clulas sanguneas de forma discoide, bicncava y elstica que carecen de ncleo y cuya principal
funcin es el transporte de hemoglobina.
Eritropoyesis: Proceso de formacin de los eritrocitos.
Esferocito: Glbulo rojo que tiene forma de esfera, sin palidez en el centro, es un defecto de membrana.
Esputo: Material eyectado desde los pulmones a la boca.
Estndar: Una solucin patrn que se utiliza para comparar o para la elaboracin de otras diluciones.
Gramnegativa: Caracterstica de los tejidos o bacterias que pierden la coloracin por el mtodo de Gram
(toman color rosado).
Grampositiva: Caracterstica de los tejido o bacteria que conservan la coloracin por el mtodo de Gram
(toman color azul).
Heces: Mezcla de productos de excrecin y secrecin que se eliminan por el intestino.
Hematocrito: Volumen de glbulos rojos por volumen de sangre, se obtiene mediante la centrifugacin de
sangre venosa o capilar.
Hematologa: Rama de la medicina que estudia la sangre.
Hemoglobina: Componente principal de los glbulos rojos, protena conjugada que sirve de vehculo para el
transporte de oxgeno y bixido de carbono.
Hemlisis: Destruccin de Glbulos Rojos
Hipercroma: Glbulo rojo que se tie ms intensamente, ausencia de palidez central.
Hidrlisis: Adicin de agua a una sustancia, con descomposicin de esta en otras ms sencillas.
Hifa: Hongo de estructura larga filamentosa en forma de tubo.
Hiperlipmica: Aumento de la concentracin de lpidos en sangre.
Imprecisin: Mediciones que siendo realizadas en las mismas condiciones dan diferentes resultados.
Inoculacin: Introduccin de microorganismos, material infecciosos, etc. en un ser vivo o en cultivos.
Linfocitos: Clulas mononucleadas; con ncleo nico que sirven de defensa, se dividen en Linfocitos B y
Linfocitos T.
Litro: Volumen ocupado por la masa de un kilogramo de agua pura a 4 C.
Longitud de onda: Distancia entre una cresta a otra en el espectro de luz.
Megalocito: Glbulo rojo con tamao mayor de lo normal (15 a 22 micras).
Micelio: Masa de hifas.
96
Monocito: clula del sistema retculo-endotelial presente en la sangre normal con carcter fagoctico.
Mononucleares: Leucocito que posee un solo ncleo simple, como el linfocito y el monocito.
Morfologa bacteriana: Forma de los microorganismos.
Neutrfilo: Tipo de leucocito caracterizado por citoplasma granuloso que se tie fcilmente con los
colorantes cidos o bsicos.
Neutropenia: Disminucin del nmero absoluto de neutrfilos por debajo de los valores normales.
Oncosfera: Parte interna del huevo de Taenia la cual contiene el embrin.
Ooquiste: Quiste que contiene el huevo o cigote.
Plaquetas: elementos formes mas pequeos de la sangre, actan en la hemostasia y el mantenimiento de la
integridad vascular, participan en el proceso de coagulacin.
Plaquetopenia: disminucin del nmero de plaquetas por debajo del valor normal.
Plasma: Componente lquido de la sangre que se obtiene al separar una sangre con anticoagulante del
paquete globular, contiene fibringeno y componentes de la coagulacin neutralizados.
Polimorfonucleares: Son leucocitos granulocitos segmentados y se dividen en neutrfilos,
eosinfilos y basfilos.
Procedimiento: Serie de pasos en forma cronolgica, por los cuales se logra un resultado deseado.
Pseudohifas: Hongo de tipo de levadura que presenta una extensin tubular de protoplasma que difiere de
las hifas porque continan con la clula madre.
Quiste: Forma resistente de los protozoos los cuales se rodean de una membrana dura e impermeable.
Reaccin colorimtrica: Reaccin qumica que tiene como producto final un compuesto de color.
Reaccin enzimtica: Reaccin qumica que tiene por catalizador una enzima.
Reticulocitos: Glbulos rojos juveniles con restos de acido ribonucleico y ribosomas.
Riesgo: Posibilidad o probabilidad de que ocurra un dao a la salud, puede ser causado por accidente,
enfermedades u otros.
Rouleaux: Glbulo rojo que se aglomeran como pilas de monedas.
Secrecin: Sustancia que se vierten al exterior de una clula.
Suero: Componente lquido de la sangre que se obtiene al separar una sangre sin anticoagulante del paquete
globular.
Tipocroma: Glbulo rojo con un halo mayor en el centro que lo normal (baja de hemoglobina).
Trofozoto: Forma vegetativa, libre y en movimiento de los protozoos.
Trombocitopenia: disminucin del nmero de plaquetas circulantes.
Valores de referencia: Valores considerados normales.
97
8. ABREVIATURAS
98
L: microlitro, millonsima parte de un litro.

dL: decilitro, dcima parte de un litro.
Du: Expresin dbil del Rh negativo.
EDTA: cido etilendiaminotetractico.
gr: gramo, unidad de masa.
mg: miligramo, milsima parte de un gramo.
mL: mililitro, milsima parte de un litro.
mm: milmetro, milsima parte de un metro.
mm: milmetro cbico, millonsima parte de un litro.
nm: nanmetro, unidad de medida lineal = 10-9 metros.
PAM: Prueba de Azul de Metileno.
pH: Es el logaritmo inverso de la concentracin de hidrogeniones, expresada en trminos de molaridad,
determina la acidez o alcalinidad de una sustancia.
rpm: revoluciones por minuto.
RPR: Prueba Rpida de Reaginas.
VDRL: Laboratorio de Referencia de Enfermedades Venreas.
VES: Velocidad de eritrosedimentacin.
99
9. Anexos
100
Anexo 1 Preparacin de Lugol para examen microscpico de heces.

Preparacin:
- Pesar 10 gr de yodo en cristales.
- Pesar 20 gr de yoduro de potasio.
- Mezclar y disolver poco a poco con agua destilada.
- Completar a 1 litro con agua destilada.
- Guardar en garrafa color mbar con nombre y fecha de preparacin.
Este colorante hace resaltar algunas estructuras, como los ncleos de los protozoarios y da una coloracin
caf a los huevos y larvas de los metazoarios.
Equivalentes mtricas decimales:

Longitud:
10 milmetros (mm) 1 centmetro (cm.)
100 centmetros 1 metro (m)
1000 metros 1 kilmetro (Km.)
Capacidad:
1000 mililitros 1 litro
1000 litros 1 kilolitro (Kl.)
Masa:
1000 miligramos 1 gramo (gr.)
1000 gramos 1 kilogramo (Kg)
Anexo 2 - Diluciones
l acto de diluir es hacer una solucin menos concentrada de una ms concentrada. Esto
generalmente se lleva a cabo agregando un diluyente como agua, la cual no contiene nada de
soluto, a una solucin. Las diluciones generalmente se expresan como una unidad de la solucin
original en un nmero total de unidades de solucin final. As, una dilucin 1:10, se hace
tomando una unidad de la solucin concentrada que ser diluida a un volumen total de 10
unidades. Esto produce una solucin que tiene una concentracin igual a 1/10 de la concentracin
original.
Aunque las diluciones generalmente se escriben 1:10, 1:50, etc. quiz sera mas fcil entender si
las diluciones se expresaran como fracciones, tal como 1/10, 1/25, etc.
Para calcular la concentracin de solucin diluida, se multiplica la dilucin por la concentracin de
la solucin original.
101
Ejemplo: Una solucin al 10% se diluye 1: 5, la concentracin de la solucin resultante es igual a

10% x 1/5 = 2% .
Cualquier expresin de dilucin se puede tratar como una simple fraccin, y el numerador y el
denominador pueden ser multiplicados por un nmero. Ejemplo: si 500 mL de una dilucin 1:5 de
una solucin cualquiera se tiene que preparar, el razonamiento matemtico es como sigue: 1/1 x
1/5 = 1/5
Grandes diluciones que pueden ser muy difciles de llevar a cabo en una sola operacin se pueden
realizar haciendo ms de una dilucin.
Por ejemplo: no se puede utilizar ms de 10 litros de diluyente para hacer una dilucin de 1:10,000,
as como ocupar un frasco volumtrico de 10 litros, o el reducir la cantidad de solucin concentrada
en una fraccin de mL, puede introducir un gran error en la dilucin.
La mejor alternativa es la de usar una serie de dos o mas diluciones. Cualquier nmero de
diluciones diferentes puede usarse, el nico requisito es que cuando estas se multiplican entre si,
de una solucin igual a 1:10,000.
La redilucin sistemtica de un lquido un nmero de veces, es llamada dilucin en serie.
Esta se hace cuando una reaccin semicuantitativa se tiene que observar en varias
concentraciones diferentes. Esta metodologa se emplea principalmente en pruebas serolgicas, y
muy raramente en qumica clnica.
Anexo 3 Cmara Neubauer
Anexo 4 Enfermedades que pueden dar resultados falsos positivos con pruebas serolgicas
para sfilis
INFECCIOSAS
- Mononucleosis infecciosa.
- Hepatitis infecciosa.
- Sarampin.
- Varicela.
- Ricketsia.
- Tifus.
- Micoplasma.
- Neumona primaria atpica.
- Bacterias.
- Lepra.
- Fiebre escarlatina.
- Tuberculosis (avanzada).
- Neumona neumoccica.
- Protozoos.
- Tripanosomiasis.
NO INFECCIOSAS
- Lupus eritematoso.
- Artritis reumatoidea.
- Embarazo.
- Narcoadiccin.
102

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PARASITOLOGIA

5.1 EXAMEN FSICO DE HECES

Frascos plsticos de boca ancha y tapa de rosca, con aplicador.

Observar el color de la muestra.

1.1.5. FUENTES DE ERROR:

COLOR: Marrn, amarillo, verde, rojo, aclico (blanco), negro.

1.2 EXAMEN MICROSCPICO DE HECES

Lminas porta objeto.

1.3.7. FORMA DE REPORTE:

Lminas portaobjeto esmerilada.

- Dejar secar a temperatura ambiente.

No filtrar los colorantes.

1.4.7. FORMA DE REPORTE:

Lminas portaobjeto esmerilada.

Lminas porta objeto.

- Reactivo de sudan III

PROPOSITO : Importante en el estudio de anemias crnicas por sospecha de sangrado oculto en va

Tomar una muestras de heces de 5 6 lugares diferentes,con un aplicador y colocarlo en un diluyente.

6.1 TOMA DE MUESTRA PARA ANLISIS DE ORINA

fsico, qumico y microscpico.

2.1.2. MUESTRA REQUERIDA:

2.1.5. FUENTES DE ERROR:

2.2 EXAMEN FSICO DE ORINA

2.2.2. MUESTRA REQUERIDA:

2.2.5. FUENTES DE ERROR:

- Toma de muestra inadecuada.

2.2.6. FORMA DE REPORTE:

2.3 EXAMEN QUMICO DE ORINA

2.3.2 MUESTRA REQUERIDA:

2.3.3. MATERIALES Y REACTIVOS:

2.3.5. FUENTES DE ERROR:

2.3.6. FORMA DE REPORTE:

LEUCOCITOS: 0 a 500 Leucocitos por l.

2.4 EXAMEN MICROSCPICO DEL SEDIMENTO URINARIO

2.4.2. MUESTRA REQUERIDA:

- Colocar una gota de sedimento entre un porta y un cubreobjeto.

2.4.6. FUENTES DE ERROR:

2.4.7. FORMA DE REPORTE:

3.1.2. MUESTRA REQUERIDA:

3.1.5. FUENTES DE ERROR:

3.2. METODO ENZIMATICO COLORIMETRICO PARA DOSAJE DE GLUCOSASA SANGU

3.2.2. MUESTRAS REQUERIDA:

3.2.3. MATERIALES Y REACTIVOS:

3.2.6. FUENTES DE ERROR:

Incubar a 37 C por 5 minutos, leer a 500 nm.(492 520 nm)

METODO ENZIMTICO COLORIMTRICO PARA COLESTEROL CON

3.3.2. MUESTRA REQUERIDA:

3.3.3. MATERIALES Y REACTIVOS:

3.3.6. FUENTES DE ERROR:

3.4.2. MUESTRA REQUERIDA:

3.4.3. MATERIALES Y REACTIVOS:

3.4.6. FUENTES DE ERROR

Los valores de triglicridos se reportan en mg/dL

METODO ENZIMATICO COLORIMETRICO PARA DOSAJE DE CIDO RICO

3.5.2. MUESTRA REQUERIDA:

3.5.3. MATERIALES Y REACTIVOS:

3.5.6. FUENTES DE ERROR

- Pipetas mal calibradas.

3.6. BIOQUIMICA AUTOMATIZADA

Ahorro de tiempo - se puede utilizar directamente despus de la apertura.

Evitar los errores manuales.

Rapidez en la emisin de resultados.

4.1 TOMA DE MUESTRA DE SANGRE CAPILAR PARA EXMENES HEMATOLGICOS