REPBLICA BOLIVARIANA DE VENEZUELA

MINISTERIO PARA EL PODER POPULAR DE EDUCACIN UNIVERSITARIA

INSTITUTO UNIVERSITARIO POLITCNICO SANTIAGO MARIO
INGENIERA AGRONMICA

Laboratorio de Fitopatologa Salida Practica INIA Mrida

(INFORME DE SALIDA PRCTICA)

Autor: Argenis Zambrano

Asignatura: Fitopatologa
Profesor: Ing. Agro. Luis Ral Ramrez

Mrida, Junio de 2015

INTRODUCCIN

Los laboratorios a nivel Fito-sanitario estn facultados para la

identificacin y el registro de las enfermedades que perjudican a las plantas
en un lugar determinado, adems de dar diagnsticos y posibles enmiendas,
para prevenir mayores daos dentro de las reas del cultivo, Las Buenas
Prcticas de Laboratorio (BPL) representan un sistema de calidad relativo a
los procesos organizativos y condiciones, bajo los cuales se han de
planificar, realizar, controlar, registrar, archivar e informar PROGRAMA DE
CUMPLIMIENTO DE LAS BUENAS PRACTICAS DE LABORATORIO Rev. 3
(2/2/2004). Dentro del laboratorio se deben optimizar los trabajos bajo
parmetros establecidos que permitan realizar y registrar perfectamente los
resultados que dan las muestras en el laboratorio.
En el Laboratorio de Fitopatologa del INIA Mrida, se ejecutan
actividades tanto de investigacin como de descripcin de las enfermedades
de las plantas, conjuntamente se trabaja en las siguientes reas:
a) Patologa de semillas.
b) Estudios de las enfermedades fngicas en plantas.
c) Estudios de bacterias de suelos y de plantas.
d) Estudios y presencia de nematodos en los suelos.

OBJETIVOS

General

Ampliar conocimientos en el rea de la asignatura de Fitopatologa por

medio

de

visitas

guiadas

al

INIA (instituto

de

investigaciones

Agropecuarias) Mrida que influyan en formacin de los estudiantes de

pregrado en la especialidad de Ingeniera Agronmica.
Especifico

Familiarizarse

con

el

funcionamiento

de

los

laboratorios

de

investigacin de fitopatologa ubicado en el INIA Mrida.

Examinar el protocolo para la recepcin y anlisis de muestras que

son analizadas en el laboratorio de Fitopatologa del INIA Mrida.

Reconocer el funcionamiento de los equipos y materiales usados para
el diagnstico de las enfermedades en plantas y suelo a travs
anlisis Fitopatolgicos.
PARTE TERICA

El

INIA

Mrida

se

encuentra

conformada

por

profesionales

especialistas de gran experiencia en enfermedades de las plantas as como

aquellas enfermedades causadas por factores medioambientales. Los
trabajos de investigacin y proyeccin que realizan abarcan diversos cultivos.
INIA-MERIDA

cuenta

con

modernos

laboratorios

de

fitopatologa,

entomologa, suelos, pastos y forrajes y en 2006 el de biologa molecular, a

su vez junto al laboratorio de cultivo de tejidos vegetales de Mucuches y el
de qumica y calidad del cacao en San Juan de Lagunillas, constituyen una
formidable herramienta tecnolgica de apoyo para el desarrollo agrcola del

estado Mrida y de los estados vecinos, dicha institucin deja de ser un

espacio para la formacin de investigadores y se convierte en actor
fundamental para el desarrollo de las condiciones de vida de los ciudadanos
y las generaciones futuras.
LA INSTITUCIN
En el INIA se trabaja para dar impulso la agricultura como una
contribucin a la instauracin de la prosperidad del pas, reconociendo su
importancia fundamental como medio de vida de miles de familias rurales en
Venezuela. Esta tarea, en la prctica se centra en la bsqueda de una
mejora sustantiva de la eficiencia y la eficacia operacional, tanto en el logro
de los productos, como en la calidad de los servicios prestados por nuestra
institucin.
MISIN
Se impulsa la innovacin tecnolgica agroalimentaria para optimizar la
funcin produccin en el sistema agroalimentario nacional, bajo la estructura
social comunal, en el marco del modelo agrario socialista.
VISIN
Es una institucin componente del sistema agrario nacional, dedicado
a la innovacin agroalimentaria, que permite fortalecer los valores ticos
socialistas del modelo agrario vigente, como instrumento para la nueva
sociedad; que reconoce y promueve la cultura ancestral, tradicional, formal e
informal en la consolidacin del socialismo revolucionario, cientfico y
bolivariano.

Los Laboratorios de Fitopatologa realizan anlisis fitopatolgicos. Se

realizan estudios tanto a suelos como a plantas. Cuenta con capacidad

tcnica para determinar especies de hongos, bacterias y nematodos. Si se

envan muestras al laboratorio de fitopatologa, los resultados indicarn el
estado sanitario del suelo y, en caso de ser necesario, se recomendarn las
prcticas y tecnologas a aplicar para sanear o controlar los patgenos
presentes.
El Laboratorio de Fitopatologa INIA MERIDA, es un espacio donde se
llevan a cabo distintas actividades como trabajos de investigacin, se les
brinda apoyo a investigadores, se atiende a otras instituciones educativas
sobre el funcionamiento del mismo, sealando que su actividad principal es
atender las necesidades de enseanza y puedan realizar experimentos
prcticos necesarios para comprobar los conocimientos tericos que se les
imparte en el aula y proporcionarles las herramientas para realizar
aplicaciones reales de los conocimientos adquiridos.
En el Laboratorio de Fitopatologa se imparten prcticas relacionadas
con la observacin e identificacin de microorganismos patgenos como:
hongos,

bacterias,

nematodos.

Tambin

se

observan

identifican

microorganismos no patgenos de cultivos que forman parte de la microflora

del suelo. Para muchas personas la produccin agrcola es su nica fuente
de sustento y si sta falla o no es lo suficientemente rentable, la familia del
productor se ver afectada, as como el suministro de productos agrcolas al
resto de la comunidad o regin

PARTE EXPERIMENTAL DE CAMPO

El laboratorio de fitopatologa cuenta con la infraestructura necesaria y

el equipamiento suficiente para la observacin e identificacin de hongos,
bacterias y nematodos fitopatgenos, y para cubrir las necesidades del
mismo. Las clulas y los tejidos para llevar a cabo sus funciones normales no
puede verse afectada por ningn patgeno, si est se encuentra afectada,
disminuye o se anula por completo su capacidad productora; como resultado,
la planta muere o merma su crecimiento. La identificacin de la especie que
causa sntomas en una planta, deben clasificarse, este paso es necesario
para lograr la identificacin y el control de cualquier enfermedad de las
plantas.
TCNICAS DE TINCIN PARA DETERMINAR FORMA, TAMAO Y
AGRUPACIN CELULAR.
Como las clulas bacterianas son incoloras, se requiere del empleo de
colorantes para hacerlas ms ntidas al microscopio, para lo cual se pueden
emplear tcnicas de coloracin simples o diferenciales. Tincin simple. El
azul de metileno de Loeffler es uno de los reactivos ms valiosos que se
tienen para la tincin de bacterias. Es excelente para las bacterias del gnero
Curtobacterium donde puede demostrar el perlado y los grnulos. En los
bacilos esporulados (Bacillus), teidos con este reactivo, las esporas
aparecen como cuerpos no teidos dentro de clulas azules. Tincin
diferencial. Una de las tcnicas ms ampliamente utilizadas es la Tincin de
Gram., porque no solo permite determinar la forma y agrupacin de las
bacterias, sino tambin es de considerable valor en la identificacin y
clasificacin, al separar a las bacterias en gram negativas y gram positivas.

IDENTIFICACIN DE GNEROS DE NEMTODOS

FITOPARSITOS.
Los nemtodos Fitoparsitos abarcan un gran nmero de gneros y
especies de gran importancia agrcola. El conocimiento de la sintomatologa,
morfologa, biologa y control es de inters fundamental para el parasitlogo.
El control de los nemtodos fitoparsitos, se basa en una identificacin
correcta del nematodo en cuestin, de ah que sea importante conocer las
caractersticas morfolgicas ms importantes de los principales gneros de
estos patgenos.
MTODO DE EXTRACCIN DEL EMBUDO DE BAERMANN
A continuacin se describe la tcnica del embudo de Baermann, pues
no requiere ningn equipamiento especfico y puede ser empleada fcilmente
sin la necesidad de conocimientos tcnicos en el manejo de aparatos de
laboratorio.
Material necesario

10 g de suelo o 25 g de material vegetal

Embudo de vidrio de 10 cm. de dimetro
Soporte de madera o metal para los embudos
Filtro de tela, algodn o celulosa sobre un tamiz que ejerza de

soporte del suelo o material vegetal

Manguerita de goma o silicona de 10 a 15 cm. de largo
Pinzas o clips para cerrar las mangueritas
Recipiente para recoger la suspensin de nematodos tras la

migracin
Placa de recuento y microscopio o Lupa binocular

Procedimiento

1. Se colocan los embudos sobre los soportes de madera o metal,

las mangueritas en la parte final de los embudos y se cierran con
pinzas o clips.
2. La muestra de suelo se tamiza a travs de una malla de 0,5-1 cm.,
se mezcla cuidadosamente y se toman unos 100 g para ser
colocados sobre el filtro de tela, algodn o celulosa, sostenido por
un tamiz o malla de unos 2 mm de apertura. El material vegetal se
macera o trocea finamente y se toman entre 5 y 25 g que se
colocan sobre el filtro.
3. Se coloca el tamiz con la muestra sobre el embudo y se llena ste
de agua hasta que cubra ligeramente el suelo o material vegetal.
4. Se permite la migracin de los nematodos del suelo al agua
durante 48 horas como mnimo, aunque en algunos casos puede
durar hasta 7-14 das. Es preciso revisar el nivel de agua
peridicamente a fin de evitar la desecacin de la muestra.
5. Abrimos el clip y recolectamos los nematodos en un recipiente.
6. Pasamos una alcuota de la suspensin a una placa de recuento y
contamos en el microscopio.
MTODO DE EXTRACCIN DE NEMATODOS QUSTICOS
Los quistes de Globodera y Heterodera se extraen mediante la tcnica
del embudo de Fenwick, la cual se basa en la propiedad de los quistes de
flotar en agua, ayudados por una burbuja de aire que se forma en su interior.
Para que est tcnica sea eficaz es necesario que el suelo que contiene los
quistes haya sido desecado previamente. Los quistes se recogen en un tamiz
de unas 150 m de apertura de malla y luego sobre un papel de filtro del que
se pescan y cuentan. Para obtener el humero de huevos viables es
necesario abrirlos individualmente o triturarlos y contar el nmero de
juveniles vivos.
AISLAMIENTO DE HONGOS FITOPATGENOS A PARTIR DE
PLANTAS ENFERMAS

El

aislamiento

consiste

en

el

proceso

de

separacin

de

microorganismos a partir de su sustrato natural (plantas) para hacerlas

crecer en un medio de cultivo artificial. El aislamiento y cultivo persigue
diversos fines, el ms comn en un laboratorio de fitopatologa es para
diagnosticar la causa de una enfermedad desconocida, sin embargo, puede
tener objetivos didcticos o de investigacin sobre taxonoma, fisiologa y
gentica microbiana. Es comn tambin cuando se quiere tener cepas puras
en

la

evaluacin

de

productos

qumicos

in

Vitro.

El

cultivo

de

microorganismos tiene enormes ventajas que contribuyen al conocimiento de

la biologa de estos. Sin embargo, hay que considerar que al cultivar un
organismo:
a) pueden ocurrir mutaciones
b) se puede perder parcial o totalmente su patogenicidad
c) los hongos pueden o no formar cuerpos fructferos en medios
artificiales; estos cuerpos pueden presentar variacin,
d) existen hongos que no se pueden cultivar (parsitos obligados)
y otros que requieren medios complejos para su desarrollo. Las
tcnicas para aislar hongos son diversas y dependen del hongo
a estudiar y de la propia experiencia del investigado
Las enfermedades de las plantas son importantes para el hombre
debido a que perjudican sus productos. Dentro de las enfermedades
presentes que actualmente se analizan en el laboratorio de fitopatologa de
INIA del estado Mrida se pueden enumerar las siguientes:
1. Enfermedades ocasionadas por hongos.
2. Enfermedades ocasionadas por bacterias.
3. Enfermedades ocasionadas por nematodos.
Cuando ingresa una muestra al laboratorio, se recoge una informacin
detallada del lugar, da y persona que tomo dicha muestra adems de otros

datos que permitan al momento de obtener un resultado, dar las

recomendaciones pertinentes al caso con la finalidad de no alterar el
equilibrio ecolgico.
En el recorrido se observaron, tanto los equipos los materiales y parte
del protocolo (anteriormente mencionado) y procedimiento para el anlisis de
las muestras Fitopatgenas vase la imagen 1 donde se observa una
cmara de flujo laminar en la cual se trabaja se realiza la siembra de
microorganismos

protegidos

del

medio

exterior

para

evitar

las

contaminaciones.

Imagen 1.- Cmara de flujo laminar

Por otro lado se lograron observar muestras de bacterias de hongos y
nematodos que fueron y que estaban siendo analizados por el personal del

laboratorio, que muy amablemente nos permitieron compartir parte de sus

experiencias y de algunas de las investigaciones que en dicho laboratorio se
realizan.
Las siguientes imgenes representan parte del material observado en
la lupa estereoscpica y a simple vista en las instalaciones, en las imgenes
se observa las colonias de las bacterias (imagen 3 inferior), y la forma en la
cual son sembradas las bacterias en los medios de cultivo (imagen 2
Superior).

Imagen 2.- forma de siembra de bacterias en medios de cultivo.

Imagen 3.-

Colonias de
bacterias observadas en la lupa.

Imagen 4.-Siembra de Bacterias en medios de cultivo

Imagen 5.-Papa conservada con sintomatologas de Ralstonia

Imagen 6.-Forma de determinar si una planta

presenta bacterias en los tejidos vasculares

Imagen 7.-Observacin de quistes de nematodos en la lupa

estereoscpica

CONCLUSIN

La importancia de las prcticas se fundamenta en la vinculacin

teora-prctica, que es una necesidad ineludible en el proceso de enseanzaaprendizaje de cualquier rama de las ciencias biolgicas, y de la Ingeniera
Agronmica, esta premisa se debe reproducir en el caso particular en todas
las asignaturas que se imparten en el Instituto Universitario Politcnico
Santiago Mario.
Estas iniciativas permiten que los estudiantes tengan las herramientas
bsicas para trabajar en el manejo de microorganismos, manejo de equipo y
otros materiales en el laboratorio de fitopatologa. De tal manera que se
incluyen los procedimientos para el anlisis de muestras de vegetales en la
identificacin y/o deteccin de agentes fitopatgenos, La participacin en
estas actividades de formacin adems de la identificacin de los
microorganismos que causan las sintomatologas es de suma importancia
para la formacin acadmica y por sobre todo para resolver la problemtica
que ha existido en el campo, las tcnicas de laboratorio aplicadas por esta
institucin (INIA). Debido a esto podemos indicar este tipo de actividades
contribuye de manera eficiente en la investigacin y en la formacin de
futuros profesionales capacitados en la determinacin de enfermedades en
cultivares.