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Laboratorio de Biotecnologa Agroindustrial, Instituto de Qumica y Tecnologa, Facultad de Agronoma. Universidad Central de Venezuela.
Apdo. 4579. Maracay 2101. Venezuela.
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Facultad de Ingeniera. Ncleo Cagua. Universidad Central de Venezuela. Apdo. 4579. Cagua, Aragua. Venezuela
RESUMEN
Este trabajo evalu el efecto del tipo de fermentacin sumergida (FS) o en estado slido (FES) y la suplementacin
del medio con varias fuentes de carbono en la induccin de la actividad enzimtica de la -amilasa y la glucoamilasa.
Estos resultados fueron contrastados con los obtenidos empleando afrechillo de trigo como nico sustrato fermentable
en el medio para la obtencin de aditivos enzimticos empleando Aspergillus niger ANM-1. Se observ que los
factores de mayor importancia en la induccin de las actividades enzimticas estudiadas (P<0,01) fueron el tipo de
fermentacin empleada para las glucoamilasas y la fuente de carbono suplementada para las -amilasas. Adems,
los procesos fermentativos en slido y en lquido fueron llevados a escala mayor empleando para ello fermentadores
por carga y se obtuvieron dos aditivos multienzimticos, de los cuales, el obtenido por FES present el mayor
contenido de protenas (37,5%) y las ms elevadas actividades para las -amilasas (1.432 UA/g), glucoamilasas
(3.442 UI/g), fitasas (5.765 UI/mL), xilanasas (419 BXU/g) y -1,4 endoglucanasas (536 UI/g).
Palabras clave: Aspergillus niger, -amilasas, glucoamilasas, aditivo.
Evaluation of the amylolytic activity of Aspergillus niger ANM-1 in solid state and
submerged fermentation for obtaining and characterization of enzymatic additives
ABSTRACT
This work evaluated the effect of method of fermentation submerged (FS) and solid (FES) and supplementation
of the medium with various carbon sources, on the induction of enzymatic activity of -amylase and glucoamylase.
These results were compared using wheat bran as sole fermentable substrate in the medium to obtain enzyme additives
employing Aspergillus niger ANM-1. It was observed that the most important factors on the induction of enzymatic
activities (P<0.01) was the type of fermentation used for the glucoamylases and supplemented carbon source for
a-amylase. In addition, the fermentation processes in solid and liquid were taken on a larger scale load fermenters
and two multienzymatic additives were obtained, of which, the one obtained by FES had the highest protein content
(37.5%) and higher activities for -amylase (1,432 AU/g), glucoamylases (3,442 IU/g), phytase (5,765 IU/mL),
xylanases (419 BXU/g) and endo -1,4-glucanases (536 IU/g).
Key words: Aspergillus niger, -amylases, glucoamylases, aditive
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INTRODUCCIN
Los aditivos enzimticos obtenidos en procesos
biotecnolgicos empleando desechos agrcolas a
agroindustriales, son incorporados directamente en el
alimento de pollos y cerdos en la etapa de iniciacin
(Morillo et al., 2003). Estos aditivos aportan enzimas
tales como las amilasas, las cuales complementan la
actividad desarrollada por las enzimas endgenas del
tracto intestinal de los animales, permitiendo as, el
uso de materias primas alternativas de bajo precio sin
desmejorar la calidad de las dietas. Contribuye adems
a disminuir los costos atribuibles a los ingredientes
usados en la alimentacin animal y a mejorar la ganancia
de peso y la conversin alimenticia (Palomo, 2008;
Bertsch et al., 2010). En consecuencia, varios trabajos
se han llevado a cabo para estudiar el efecto del uso de
diferentes fuentes de carbono (almidn, harina de papas,
afrechillo de trigo, carboximetilcelulosa) y de diversos
microorganismos (Aspergillus fumigatus, Bacillus
sp., Aspergillus niger) en la produccin de amilasas
(Bertolin et al., 2003; Lagunas et al., 2006; Oliveira et
al., 2007; Grata et al., 2008; Gupta et al., 2008; Daz,
2010; Asad et al., 2011; Domnguez et al., 2011). Este
trabajo tiene como propsito evaluar el efecto del proceso
de fermentacin en estado slido (FES) y fermentacin
sumergida (FS) y de la suplementacin del medio, en la
actividad de las -amilasas y glucoamilasas, as como la
obtencin y caracterizacin de dos aditivos enzimticos
empleando Aspergillus niger ANM-1 en un medio de
cultivo a base de afrechillo de trigo.
MATERIALES Y MTODOS
Microorganismo
Se utiliz Aspergillus niger ANM-1, aislado a
partir de granos de maz (Zea mays L.), perteneciente
al cepario del Laboratorio de Microbiologa del Instituto
de Qumica y Tecnologa de la Facultad de Agronoma
de la Universidad Central de Venezuela (Mujica,
2006). Dicha cepa fue conservada bajo refrigeracin
a 4C y propagada en cuas de papa dextrosa agar
(PDA).
Medio de cultivo y condiciones del proceso
fermentativo
Se emplearon 50 g/L de sustrato en un medio
compuesto por afrechillo de trigo como sustrato base.
Adicionalmente se utilizaron cinco fuentes de C
suplementarias a distintos niveles de sustitucin (5,
10 y 15%) para la prueba, las cuales se seleccionaron
basadas en su disponibilidad y en la capacidad sealada
como fuentes inductoras de amilasas. Estas fuentes de
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RESULTADOS Y DISCUSIN
Efecto de diferentes fuentes suplementarias de
C sobre la actividad enzimtica
El anlisis estadstico aplicado a los datos
recolectados indica que la actividad de la -amilasa fue
influida (P<0,01) por la fuente de C suplementada
(Cuadro 1). Esto seala que la actividad amiloltica no
fue afectada por el tipo de fermentacin o los niveles de
suplementacin de los sustratos en el medio.
Asimismo, los resultados de la prueba de
comparacin de medias de Fisher de la actividad de la
enzima -amilasa fue 28,93% superior en la FS, con
respecto a la FES. No obstante, esta diferencia en las
medias no fue estadsticamente significativa.
En la Figura 1 se puede observar que la prueba de
comparacin de medias de Fisher demostr la existencia
de dos grupos homogneos en los ensayos realizados en
FS, donde el tratamiento suplementado con residuos
de pasta hmeda present la ms elevada actividad de
la -amilasa y se diferenci (P<0,05) del tratamiento
suplementado con residuos de papas.
En ambos procesos fermentativos (FS y FES)
los datos recolectados permitieron evidenciar el efecto
de las fuentes ricas en almidn como inductoras en la
generacin de enzimas amilolticas (Kunamneni et
Suma de cuadrados
2.171,13
17 786,11
11 475,23
31 432,50
gl
1
8
20
29
Cuadrados medios
2 171,13
2 223,26
573,76
F
0,98
3,88
P
0,352
0,007
12
100
80
ab
ab
a
60
40
ab
b
20
0
af +
alm
af +
cel
af +
cmc
af +
pap a
af +
pasta
13
Suma de cuadrados
gl
Cuadrados medios
410 639,58
35 655,50
42 990,33
489 285,41
1
8
20
29
410 639,58
4 456,94
2 149,52
92,14
2,07
0,000
0,089
300
200
100
b
0
Fermentacin
sumergida
Fermentacinen
en estado slido
Tipo de fermentacin
14
15
CONCLUSIONES
Bajo las condiciones de este trabajo, el tipo de
fermentacin (FS y FES) a emplear en los procesos
biotecnolgicos, en conjunto con la fuente de C
suplementada, resultaron ser los principales factores de
Dif.
*
ns
ns
**
**
Aditivo enzimtico FS
572,3645,93
1 421,60150,8s
376,7947,08s
135,903,02
1 195,0018,03
Asterisco simple y doble indican diferencia significativa a P<0,05 y P<0,01, respectivamente. ns = no significativo.
BXU = Unidades de xilanasas correspondientes a 1 nmol de xilosa de xilano en 1 seg
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AGRADECIMIENTOS
REFERENCIAS
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