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AGUA
Marco conceptual
El agua constituye gran parte de las plantas (Kramer y Boyer 1995; Taiz y Zeiger
2006). En solucin acuosa ocurre la mayor parte de las reacciones metablicas,
adems de procesos necesarios como el crecimiento celular, la fotosntesis y por
tanto la misma productividad (Taiz y Zeiger 2006). Por esta razn, la escasez de
agua en el ambiente de la planta origina respuestas en su crecimiento y
productividad. Para saber acerca del estado hdrico de la planta se pueden realizar
mediciones como el potencial hdrico, el contenido hdrico relativo, la tasa de
transpiracin, la conductancia estomtica, entre otros.
El potencial hdrico es un indicador utilizado como medida del estado hdrico en las
plantas. El potencial hdrico se basa en el potencial qumico del agua que es una
expresin cuantitativa de la energa libre; es el trabajo que se debe realizar para
llevar una unidad de masa de agua ligada a un tejido o al suelo, hasta un estado de
referencia cero, que es el agua pura. Debido a que el estado de referencia es el punto
cero, los valores de potencial hdrico son negativos. El potencial hdrico de una
clula vegetal est dado por w= s + m + p. El potencial osmtico s, depende de
los solutos disueltos en el agua los cuales disminuyen el potencial hdrico de la hoja
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agua al punto inicial es la fuerza y tensin con la cual estaba unida el agua a los
tejidos y por tanto es un estimado del potencial hdrico (Galms 2006).
Otra medida del estado hdrico de la planta se realiza por medio del contenido
hdrico relativo, que es un indicador del balance hdrico de la planta porque expresa
la cantidad absoluta de agua que necesita la planta para alcanzar una saturacin total
(Gonzles y Gonzles-Vilar 2001). El contenido hdrico relativo expresa el
porcentaje de contenido de agua en un momento y tejido dado. Este valor es relativo
a la turgencia o saturacin total y se halla normalmente en hojas o discos foliares de
rea conocida (Smarth y Bingham 1974).
Est dado por la ecuacin (Slatyer, 1967).
Donde:
mf= masa fresca de la hoja o disco foliar
ms= masa seca de la hoja o disco foliar
mt= masa a plena turgencia
El paso crucial para obtener el CHR es el peso turgente, para esto se recomienda
hacer una curva de imbibicin de las hojas o discos foliares dado a que en un punto,
debido a la saturacin hdrica, se pueden comenzar a afectar las paredes celulares,
pigmentos y otras estructuras de tal manera que las hojas comenzarn a perder agua.
A partir de la curva de imbibicin se determinar el tiempo necesario para que las
hojas absorban agua hasta su punto de saturacin y turgencia total (Yamasaki y
Rebello 1999).
El estado hdrico de la planta est relacionado con el proceso de la transpiracin en
el cual la planta pierde agua por la superficie foliar, tallos (a travs de lenticelas),
flores y frutos. La transpiracin es un proceso clave en la formacin de biomasa,
adems de participar de forma relevante en la estabilidad de la temperatura de la
planta. La transpiracin ocurre por medio de los estomas que son clulas
Laboratorio de fisiologa y bioqumica vegetal. Departamento de biologa. Universidad Nacional de Colombia
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disminuyen el potencial hdrico para mantener el gradiente (Yancey 2005). Esto trae
consigo inevitablemente la disminucin en el crecimiento. La respuesta de la
conductancia estomtica al ABA depende de si la especie es isohdrica o
anisohdrica; para especies isohdricas la sensibilidad de los estomas al ABA se
relaciona negativamente con el potencial hdrico foliar; para especies anisohdricas,
la regulacin estomtica en condiciones de estrs hdrico depende slo de la
concentracin de ABA en el xilema (Damour et l. 2010).
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Ciertas estrategias adaptativas de las plantas como las estrategias de fijacin del
carbono se relacionan tambin con la transpiracin. Debido a que las plantas deben
mantener sus estomas abiertos a expensas de la prdida de agua, para poder acceder
al CO2 ambiental, estas han modificado el patrn tradicional de fijacin de carbono
para conservar el agua y ser ms eficientes. Las plantas C4 y CAM presentan
diferencias anatmicas y metablicas que les permiten disminuir la prdida de agua
con cambios en la apertura estomtica (Lambers et l. 1998). En tanto que las
plantas C3 y algunos subtipos de plantas C4, en referencia a las ventajas fotosintticas
que se presentan en un ambiente msico (hbitat que no es muy hmedo o no es muy
seco, pero utiliza una mediana cantidad de humedad), se ven reducidas con la
sequa, debido a que las condiciones de dficit hdrico eliminan las diferencias en la
conductancia estomtica, igualando el uso eficiente del agua en ambas especies
(Taylor et l. 2010).
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El agua del suelo es de gran importancia dentro del balance hdrico porque de l la
planta extrae lo necesario para mantener los procesos metablicos, compensando la
prdida por transpiracin. Adems del suelo se extraen minerales. En el suelo el
agua se mueve sobre todo por fuerza mtrica, dada por los poros y capilares
formados que generan tensin vertical y horizontal y por el potencial gravitacional
que empuja el agua hacia abajo (Kramer y Boyer 1995).
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Las caractersticas del suelo influencian su capacidad para retener agua y nutrientes;
la textura determina la cantidad de poros (aireacin) y capilares que se necesitan
para mantener el agua y a su vez para permitir la aireacin de la raz para sus
procesos respiratorios. A su vez, el tipo de suelo determinar tambin la capacidad
de intercambio catinico (capacidad de retencin e intercambio de iones para que
sean disponibles para las plantas). Por ejemplo, los suelos arcillosos presentan alta
capacidad de intercambio catinico y mayor capacidad de retencin de agua.
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pelos radicales, informacin que no se puede obtener por medio de los mtodos
tradicionales (psicrmetros, tensimetros, reflectometra). Los microbiosensores son
clulas bacterianas vivientes en las cuales se ha fusionado un promotor de inters y
un gen reportero dirigido por el promotor, para ello modificaron dos
microorganismos Pantoea agglomerans y Pseudomonas putida con un sistema
reportero sensible al potencial osmtico (Herron et l. 2010).
Fase experimental
Ensayo 1. Contenido de agua en rganos de las plantas
Materiales
Material Biolgico: Plantas completas de una especie vegetal
Otros materiales: tijeras podadoras, papel peridico, cinta para marcar, marcadores,
cmara hmeda
Equipos: Balanza de dos o tres cifras decimales, estufa con aire circulante
Metodologa
Seleccionar tres plantas homogneas de una misma especie, trasladarlas al
laboratorio lo ms breve posible bajo cmara hmeda, limpiar las races y retirarlas
del tallo, igualmente separar cada uno de los dems rganos y determinar la masa
fresca de cada una de las partes, posteriormente envolver en papel peridico y
marcar; colocar en estufa con aire circulante, a temperatura de 70C, dejar all por 24
horas, pasado este tiempo, retirar el material de la estufa y determinar la masa seca.
Calcular el porcentaje de agua en los diferentes tejidos en funcin de la biomasa
seca.
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Otros materiales: tijeras podadoras, cinta para marcar, marcadores, cmara hmeda
Equipos: Balanza de dos o tres cifras decimales
Metodologa
Seleccionar una especie vegetal y retirar 10 hojas homogneas, evitar perder el
pecolo conservando la mayor proporcin del mismo (mnimo 5mm), evitar que las
hojas se deshidraten. Tomar cinco hojas de las seleccionadas, pesarlas y determinar
el rea foliar con un planmetro.
Despus de pesar las hojas, colocarlas en una cmara hmeda, la cual se puede
preparar utilizando un recipiente de vidrio. En el fondo de la cmara colocar algodn
o papel absorbente hmedo dejando una capa de agua lo suficiente para que los
pecolos queden sumergidos. Posteriormente, introducir las hojas en el recipiente,
revisar que el pecolo quede sumergido y tapar la cmara, colocarla en un lugar con
baja iluminacin, y dejar all por dos horas. Pasado el tiempo retirar las hojas y secar
el exceso de agua, luego pesar. De esta manera se determina la masa en estado de
saturacin o turgencia. Posteriormente empacar y llevar a secado en estufa por 24
horas a 70C. Luego de esto pesar las hojas secas.
Con las cinco hojas restantes realizar el mismo procedimiento pero trabajando con
secciones de rea foliar conocida. Estas secciones foliares (mnimo 30) pueden ser
obtenidas con un sacabocados, posteriormente colocar a hidratar en flotacin.
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Materiales
Material biolgico: muestras de suelo
Otros materiales: cilindros metlicos, papel peridico, bandas elsticas, papel filtro,
malla de tamao de poro pequeo, tapas para los cilindros.
Equipos: Balanza de dos o tres cifras decimales
Metodologa
Pesar tres cilindros o recipientes metlicos, para toma de muestras de suelo, con sus
tapas. Una vez seleccionado el sitio de muestreo retirar la vegetacin superficial.
Tomar muestras de suelo a nivel superficial, a 20 y a 30 cm de profundidad, una en
cada cilindro, no compactar manualmente el suelo y cuidar que los cilindros queden
completamente ocupados por el suelo. Registrar la masa de los recipientes con las
respectivas muestras y tapas.
Para evaluar el agua de saturacin en el suelo, cubrir la base de los cilindros con
papel de filtro, posteriormente con la malla plstica, y finalmente ajustar con una
banda elstica. Retirar la tapa superior de los recipientes y colocarlos en una cubeta
que tenga un nivel de agua de aproximadamente 1 cm, dejar saturar el suelo por dos
a tres horas, posteriormente colocar las tapas y registrar la masa en saturacin.
Colocar el montaje en estufa con aire circulante durante 24h a 70C y al cabo del
tiempo hallar la masa seca. Calcular en funcin de la masa seca el porcentaje de
agua actual y en estado de saturacin.
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Equipos: balanza
Metodologa
Tomar tres materas con plantas sembradas con anterioridad y cubrir la superficie de
suelo con arena. Determinar el peso y regar con abundante agua. Colocar las materas
sobre sustrato suelo o gravilla o arena y a las 24 horas, luego que se ha drenado el
agua gravitacional, hallar el peso en capacidad de campo. Colocar nuevamente las
materas sobre el sustrato y cuando se observen los primeros sntomas de
marchitamiento de las plantas, pasar las materas a las respectivas cmaras hmedas
y observar si se recuperan, repetir el proceso hasta el da en el cual se alcanza la
marchitez permanente. Hallar la biomasa de las plantas, la masa del suelo y de las
materas. Pasar el suelo a secar en estufa a 70C por 24h y determinar su masa.
Calcular el contenido de agua del suelo en capacidad de campo y en el punto de
marchitez permanente. Determinar el contenido de agua del suelo en funcin de su
masa seca. Determinar el contenido de agua del suelo en funcin de su masa seca
de mismo modo que se realiz con el contenido de agua del suelo y saturacin.
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Otros materiales: Lminas porta y cubre objeto, esmalte transparente, cinta pegante
transparente, agua
Equipos: Microscopio
Metodologa
Determinar el rea foliar y observar los estomas de tres especies vegetales, verificar
su presencia en el haz y en el envs, y cuantificar. i) Realizar observacin directa de
la epidermis, para ello rasgar la hoja, tomar los bordes ms delgados donde se
muestra la epidermis, realizar el montaje para observacin bajo microscopio y
cuantificar. ii) realizar observacin de la impresin de los estomas sobre pelculas de
esmalte; para ello colocar en el haz y envs de la hoja una capa de esmalte
transparente, dejar secar por tres a cinco minutos, colocar una nueva capa de esmalte
y permitir secar, repetir el procedimiento una vez ms, posteriormente para retirar la
impresin colocar cinta pegante transparente sobre las capas de esmalte, retirar la
cinta y realizar el montaje para observacin bajo microscopio y cuantificacin de
estomas. Si la hoja presenta alta densidad de tricomas es necesario depilar y
posteriormente realizar el procedimiento de impresin de los estomas.
Es necesario observar la epidermis superior e inferior y calcular el nmero de
estomas por cm2. Realizar la cuantificacin en diez campos visuales para
posteriormente calcular el valor en toda la superficie de la hoja.
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