1.

OBJETIVOS:
Usar el mtodo de curva de calibracin, realizado en el laboratorio anterior, para determinar
la concentracin de hierro en una muestra de agua, y la absortividad molar del hierro en
1-10 fenantrolina

2. MARCO TEORICO:
Espectrofotmetro: un espectrofotmetro es un instrumento que nos da informacin sobre
la intensidad de la radiacin en funcin de la longitud de onda o de la frecuencia equipado
con una o mas rendijas de salida y detectores fotoelctricos que permiten la determinacin
de la relacin entre la potencia de dos haces en funcin de la longitud de onda como en la
espectroscopia de absorcin.
Espectrofotmetro-Visible: diseados para trabajar en el intervalo de longitudes de onda de
aproximadamente 380 a 800nm. Estos instrumentos son, con frecuencia, sencillos, de un
solo haz, relativamente baratos, robustos y fcilmente transportables. La aplicacin ms
comn es para el anlisis cuantitativo.
Colorimetria: El color es una variable importante para muchas aplicaciones industriales. La
industria qumica, petroqumica, farmacutica, del vidrio, pinturas, papel, automotriz, textil
entre otras, requieren de instrumentos pticos (espectro colormetros, colormetros y
espectrofotmetros) para llevar a cabo las mediciones de color de manera confiable
(anlisis cualitativo, medicin de color, pureza, control de calidad, aceptacin o rechazo de
producto terminado, anuncios y seguridad, uniformidad e igualacin del color, etc.), por lo
que se requiere calibrar los equipos y asegurar su trazabilidad a patrones nacionales y con
ello determinar la exactitud y compatibilidad de los resultados de las mediciones. Se
sustentan con este patrn los servicios de calibracin, el desarrollo y certificacin de
materiales de referencia y la difusin de los mtodos y tcnicas especficas de calibracin y
medicin que permiten a los laboratorios de medicin y pruebas tener confiabilidad en las
mediciones calorimtricas.

3. PARTE EXPERIMENTAL:

Materiales y Reactivos:
espectrofotmetro UV visible con dos celdas de 1cm.
08 fiolas de 25mL.
- p - nitrofenol
03 fiola de 100mL.
- cido actico glacial
04 fiola de 50mL.
- agua destilada
01 fiola de 500mL.
- fenantrolina
01 bureta de 25mL raya azul.
- HCl (conc)
02 baguetas de vidrio.
- cloruro de hidroxilamina
01pipeta volumtrica de 10mL
- amoniaco concentrado
01 pipeta de 2mL
- sulfato amoniaco ferroso
01 pipeta de 1mL.
01 probeta de 10mL.

01 probeta de 25mL.
03 pipeta pasteur c/cupn
02 vasos de 50mL.
01 piceta.
01escobilla.

Procedimiento:
- Determinacin de la Longitud de Onda de Mxima Absorcin:
Medir 3mL de la solucin diluida de hierro, llevar el volumen aproximado a 5mL
con agua destilada. Llenar otra fiola de 25mL, marcada como blanco, con 5mL de
agua destilada, en cada una de las fiolas aadir 2mL de la solucin de hidroxilamina
al 10%.
A cada fiola agregar 5 gotas de indicador p-nitrofenol y algunas gotas de amoniaco
1:2 hasta que aparezca un color amarillo y luego aadir cuidadosamente HCl 1:2,
hasta la desaparicin del color amarillo.
Agregar a cada fiola 10mL de la solucin amortiguadora y 1mL de la solucin de 110 fenantrolina. Completar el volumen a 25mL con agua destilada.
Medir la absorbancia con respecto al blanco de reactivo (agua destilada) en el rango
de 400 a 600nm.
- Curva de Calibracin y Muestra Problema:
Medir con la bureta 0, 1, 2, 3, 4mL de la solucin diluida de hierro y colocarlos en
fiolas de 25mL rotuladas como blanco, E1, E2, E3, E4 y en otra fiola de 25mL
marcada como MUESTRA, agregar 5mL de la muestra problema. Llevar el
volumen a 5mL con agua destilada. Repetir el procedimiento anterior desde que se
agrega 2mL de hidroxilamina al 10%.

4. TABULACION DE DATOS, GRAFICOS Y CALCULOS:

De los clculos realizados en laboratorio tenemos las concentraciones de las siguientes
soluciones:
solucin patrn
100.8 ppm
de hierro
solucin diluida
20.16 ppm
de hierro

Graficar la curva de calibracin y calcular la concentracin de la muestra

problema:
Para graficar la curva de calibracin del equipo, necesitamos conocer la concentracin de
cada estndar as como la absorbancia medida por el equipo para cada uno:

(dibujar los estandares y la solucion diluida de hierro)

Calculamos la concertacin de cada estndar, sabiendo que cada uno se preparo

simplemente por un proceso de dilucin:
M 1 V 1 M 2 V 2
M 1 V 1
M2
V2
20.16 ppm V 1
M2
25.0mL

Siendo:
M1: la concentracin de la solucin A.
M2: la concentracin del estndar.
V1: volumen agregado desde la solucin A.
V2: volumen final del estndar.
TABLA N1: CONCENTRACION DE HIERRO EN LOS ESTANDARES
ppm Fe g Fe/25mL
abs
E1
0.8064
0.153
20.17
E2
1.613
0.304
40.33
E3
2.419
0.467
60.48
E4
3.226
0.639
80.65
GRAFICO N1: ABS vs gFe/25mL

GRAFICO N2: ABS vs ppmFe

Al hacer pasar la muestra problema por el espectrofotmetro encontramos su absorbancia

medida:
muestra problema Abs = 0.395
Del grafico N1, su ecuacin de la recta es:
y = 0.201x 0.0145
(escala en que esta X e Y)
y = bx + a
Calculamos la desviacin estndar de la pendiente y la ordenada, para lo cual utilizamos las
siguientes formulas:


Sy

1/ 2

yi y i

n2

; sb

Sy

n=4

x
2

; sa S y x
1/ 2

xi x

1/ 2

2
i

n x x
i



i

x prod = 2.016

TABLA N2: DATOS ESTADISTICOS

Estndar
x
y
y
(y-y )^2
x^2
E1
0.8064
0.153
0.1476
2.931E-05
0.6503
E2
1.613
0.304
0.3097
3.264E-05
2.602
E3
2.419
0.467
0.4717
2.227E-05
5.852
E4
3.226
0.639
0.6339
2.575E-05
10.41
suma
1.1E-04
19.51
Entonces los valores hallados para los estndares son:

(x-xprod )^2
1.463
0.1624
0.1624
1.464
3.252

Sy/x = 7.415E-03
sb = 4.112E-03
sa = 9.081E-03
Entonces podemos calcular el intervalo de confianza de la pendiente y la ordenada al 95% y
al 99%:
I.Cb = b tsb = 0.201 0.018
I.Ca = a tsa = -0.01 0.04

(t = 4.30

grados de libertad = n-2)

al 95%

I.Cb = b tsb = 0.20 0.04

I.Ca = a tsa = -0.01 0.09

(t = 9.92

grados de libertad = n-2)

al 99%

Reemplazando la absorbancia hallada para la muestra (Absmuestra = 0.395), encontramos la

concentracin en ppm de hierro en la muestra:
ppmFe (en la muestra) = 2.037 g/mL
La muestra problema contena de dato terico 2ppm de Fe:
%Error = 1.85%
Limite de deteccin del mtodo:
Sabemos que el lmite de deteccin es:
y = yB +3sB
Donde:
sB = Sy/x = 7.415E-03
yB = a = -0.0145
L.D.D = 7.745E-03

 Calcular la desviacin estndar de la muestra:

El lmite de confianza de la muestra esta dado por:
I.Cxo = xo tsxo
Donde sxo es la desviacin estndar de la muestra y se calcula de la siguiente manera:

s xo

yo y
1

b
n

b 2 xi x

Sy

1/ 2

0.0412

Hallar los limites de confianza de la muestra al 95 y 99%

de confianza (terico es 2ppm Fe):
Grados de libertad para la muestra = 1+ n -3 = 2
I.Cxo = xo tsxo = 2.04 0.18
I.C = 1.86 2.22

(t = 4.30 ;

al 95%)

I.Cxo = xo tsxo = 2.0 0.4

I.C = 1.6 2.4

(t = 9.92 ;

al 99%)

x promd =
y promd =
yo =
b=

2.016
0.391
0.395
0.201

Al 95% el intervalo de confianza es mas pequeo tiene un ancho de 0.36ppm, mientras que
al 99% tiene un ancho de 0.8ppm, ambos intervalos contienen al valor terico de 2ppm.

Calcular la absortividad y absortividad molar a la longitud de onda mxima

absorcin encontrada:
La absortividad molar la hallamos con ayuda del grafico N2, la pendiente de la recta en
este grafico nos da la relacin entre la absorbancia y la concentracin, entonces usando la
ley de Beer y sabiendo que el ancho de la celda usada en el experimento fue b = 1.0cm.,
calculamos la absortividad molar del Fe a la longitud de onda de mxima absorcin
(510.5nm y una absorbancia = 0.467).
La ecuacin de la recta en el grafico N2 es:
y = 0.201x 0.0145
Sabemos que:
Donde:
A : absorbancia
: absortividad molar
b : longitud de la celda
c: concentracin de la solucin

A bc

m: pendiente de la recta (esta en unidades de ppm-1)

m b
0.201 M Fe 103
1.0
1.122 104 Lmol1cm1

El valor terico para la absortividad molar del ion ferroso con la fenantrolina a 510.0nm es
1.1x10-4Lmol-1cm-1.
%error = 2.0%
La absortividad T, a la longitud de onda mxima es:

%T = 10-0.467x100% = 34.1%

5. DISCUSION DE RESULTADOS:
El poco error encontrado en el clculo de la absortividad molar, se le puede atribuir a
errores del equipo, inexactitud en las medidas, por perdidas debido a la difusin del haz en
la solucin o por la absorbancia de la celda.
El porcentaje de error hallado en el calculo de ppm de la muestra problema resulto tambin
ser muy pequeo, lo que nos indica que en ambos casos hemos trabajado cuidadosamente,
no pudiendo evitar los errores antes mencionados.

6. CONCLUSIONES:
Se comprob que se puede usar la curva de calibracin para calcular la concentracin de
muestras problemas, la concentracin en ppm de Fe en la muestra problema fue 2.037ppm
con un %error de 1.85%. Tambin encontramos la absortividad molar de la solucin de
hierro (II), la cual fue = 1.122x10-4Lmol-1cm-1, con un porcentaje de error de 2.0%

7. CUESTIONARIO
a. Cul es la estructura del complejo hierro fenantrolina y cuales son los
interferentes que pueden presentarse en esta tcnica?

b. Los datos de la tabla siguiente se obtuvieron durante una determinacin

colorimtrica de glucosa en suero sanguneo:
Concentracin
Absorbancia
de glucosa
0.0
0.002
2.0
0.150
4.0
0.294
6.0
0.434
8.0
0.570
10.0
0.704
Una muestra de suero dio una absorbancia de 0.350. Calcular el intervalo de
confianza al 95% para la glucosa en la muestra. Determine los intervalos de
confianza al 95% de confianza para la pendiente y la ordenada en el origen.
Realizamos la recta de regresin:

La ecuacin es:
y = 0.0701x + 0.0083
Calculamos los intervalos de confianza al 95% respectivo, para lo cual necesitamos las
desviaciones estndar de la ordenada y la pendiente:

Sy

1/ 2

yi y i

n2

; sb

Sy

1/ 2

xi x

n=6

; sa S y x

1/ 2

2
i

n x x
i



i

x prod = 5.0

x
0.0
2.0
4.0
6.0
8.0
10.0

y
0.002
0.150
0.294
0.434
0.570
0.704

y
0.0083
0.149
0.289
0.429
0.569
0.709
suma

(y-y )^2
0.00003969
0.00000225
2.809E-05
2.601E-05
8.1E-07
2.809E-05
0.00012494

x^2
0
4
16
36
64
100
220

(x-xprod )^2
25
9
1
1
9
25
70

Entonces los valores hallados para los estndares son:

Sy/x = 0.00559
sb = 0.000668
sa = 0.00404
El intervalo de confianza al 95% es: (t = 2.78)
b + tsb = 0.0701 0.0019
a + tsa = 0.0083 0.011
Se obtuvo experimentalmente para una muestra, el valor de absorbancia igual a 0.350, con
ayuda de la ecuacin calculamos la concentracin de la glucosa en esta muestra:
y = 0.0701x + 0.0083

concentracin de
= 4.87 mol/L
glucosa en la muestra

Para la muestra su desviacin estndar es sxo, su formula:

s xo

yo y
1

b
n

b 2 xi x

i
0.0861
Sy

1/ 2

El intervalo de confianza para la muestra al 95% seria (t = 2.78):

I.Cxo = xo tsxo = 4.87 0.24

y
x
yo
b

= 0.359
= 5.0
= 0.350
= 0.0701

c. Los datos de absortividad molar de los complejos de cobalto y nquel con 2,3quinoxalinditiol son Co = 36400 y Ni = 5520 a 510nm y son Co = 1240 y Ni =
17500 a 656nm. Una muestra de 0.425g se disolvio y diluyo hasta 50.0mL. una
alcuota de 25.0mL se trato para eliminar las interferencias, tras la adicion de
2,3 quinoxalinditiol, el volumen se ajusto hasta 50.0mL. esta solucion dio un
absorvacia de 0.446 a 510nm y 0.326 a 656nm en una celda de 1.00cm. calcular
las partes por millon de cobalto y niquel en la muestra.

8. RECOMENDACIONES:
Para disminuir errores, podemos hacer la correccin de la absorbancia de la celda, y si
queremos obtener mejores resultados, deberamos tratar de tomar mas datos, es decir
preparar mas estndares.

9. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS:

DOUGLAS A. SKOOG, Anlisis Instrumental, Mc Graw Hill, quinta edicin,

Madrid, 1985, pag: 192, 322-325, 342-345.
J.C. MILLER, Estadstica para Qumica Analtica, Iberoamericana, segunda
edicin, Estados Unidos, 1993, pag: 28-32, 96-103.
http://www.cenam.mx/publicaciones/descargas/PDFFiles/cnm-pnf-13.PDF.
Faltan colocar las unidades
Colocar datos del espectrofotometro