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net/jhonnyrojanop/turbidimetria-ambiental
REACCIONES DE PRECIPITACIN.
1.1. TTULO DE ANTICUERPOS.
1.2. REACCIONES DE NEUTRALIZACIN.
1.3. REACCIONES DE PRECIPITACIN.
1.3.1. INMUNODIFUSIN RADIAL SIMPLE (RID) O TCNICA DE MANCINI.
1.3.2. INMUNODIFUSIN DOBLE TIPO I (IDD-I).
1.3.3. INMUNODIFUSIN DOBLE TIPO II (IDD-II) U OUCHTERLONY.
1. REACCIONES DE PRECIPITACIN.
1.1. TTULO DE ANTICUERPOS.
El ttulo de Ac es la mayor dilucin que da una respuesta POSITIVA. El mtodo de evaluacin
puede ser midiendo la absorbancia a travs de la densidad ptica (DO), o sea una DO
mayor a la lnea de corte.
La neutralizacin (Nt) mide actividad biolgica del virus por lo tanto requiere de virus
vivos para poder realizarse. Igualmente, se realiza en un sistema vivo.
Lectura de la placa
Prueba CUALITATIVA.
Se vierte el gel de agarosa sobre portas y se deja gelificar (1-2% de agarosa a pH 7-8.5).
Se hacen dos pocillos y se deposita el Ag en uno de ellos y el Ac en el otro.
Ag y Ac difunden y en el punto de encuentro de los dos, y s las concentraciones son
adecuadas, se produce una banda de precipitacin.
Si en la solucin existen dos Ag reconocidos por el Ac, habr dos bandas.
Se puede usar azul cromassie para teir las bandas.
1.3.3. INMUNODIFUSIN DOBLE TIPO II (IDD-II) U OUCHTERLONY.
c) Identidad parcial (los dos Ag comparte un epitopo, pero uno de ellos tiene un epitopo
extra que es reconocido por el suero): se forma un arco de precipitacin al que le sale un
espoln.
Artculos relacionados:
CITOMETRA DE FLUJO
INMUNOFLUORESCENCIA
https://microinmuno.files.wordpress.com/2011/07/inmunodifusic3b3n-radial.pdf
http://es.slideshare.net/HermerLira1/inmunodifusion
Inmunofluorescencia
Autor: SALVADOR RESINO | Visitas: 8.051 views | Categora: DIAGNSTICO
INMUNOLGICO
5. FLUORESCENCIA
5.1. ESPECTRO DE FLUORESCENCIA
5.2. ELECCIN DEL FLUOROCROMO
5. FLUORESCENCIA
Es el resultado de un proceso en tres etapas que ocurre en algunas molculas (fluorforos)
Fuente luminosa: coincidente con espectro de absorcin del fluorocromo. Que no llegue al
ocular (UV perjudica la retina) Luz monocromtica o no.
Filtros:Excitador: Transparente a l cortas bloqueando l ms largas. Barrera: Transparente a
l largas bloqueando l cortas. Se coloca entre el objeto y el observador.
5.3.1. FUNDAMENTO.
Consiste en conjugar colorantes fluorescentes con anticuerpos, exponiendo despus este
conjugado a los anticuerpos o antgenos correspondientes en cortes de tejidos, frotis de
microorganismos o de clulas, o cultivo de tejidos en capa nica. Cuando la reaccin es
positiva y se expone a la luz ultravioleta se producir fluorescencia observable bajo el
microscopio de inmunofluorescencia. Se realiza un acople a un anticuerpo de un fluorforo o
una enzima que cataliza una reaccin por la cual se emite fluorescencia
Tambin influyen:
Intensidad de marcacin
Homogeneidad de marcacin
Presencia en el conjugado de otras molculas marcadas
B) Anticuerpos
Para mayor especificidad utilizar antgenos puros para inmunizar
Absorber los antisueros para eliminar Acs indeseables o naturales
Purificar la fraccin de Ig a marcar
Verificar ttulo de anticuerpos
Existe un estrecho paralelismo entre ttulo precipitante y fluorescente
Titulacin de reactivos: Ac 1 y Conjugado deben titularse.
C) Fluorocromos
-El fluorocromo no unido se dializa o se separa por filtracin en geles. Disponibilidad filtros
D) Intensidad de marcacin
Fluorocromo puede ser conjugado en un nmero variable a cada molcula de protena,
resultando diferentes grados de marcacin.
Mayor intensidad de marcacin, mayor intensidad
Marcacin excesiva:
Disminucin del PI de las protenas
Alteraciones en las propiedades inmunolgicas de los anticuerpos (6 7 molculas de
fluorescena/ molcula de Ac es el lmite mximo)
Quenching de fluorescencia (disminucin del rendimiento de emisin)
E) Homogeneidad de marcacin
Altamente marcadas: Fluorescencia inespecfica
Medianamente marcadas: Resultados ms satisfactorios
Insuficientemente marcadas: Fluorescencia poco intensa
Ac Monoclonal
Pool de Ac
monoclonales
Fuerza de
seal
Excelente
Regular a Buena
Excelente
Especificidad
Buena, pero a
veces el
background
es alto
Excelente pero
con posible
reaccin cruzada
Excelente
Seal fuerte
Especfico
Seal fuerte
No renovable
Baja seal
Especfico
Ventajas
Desventajas
Background
Disponibilidad
Se necesita
titular
En esta tcnica la visualizacin del IC no es directa, sino que se lleva a cabo por
intervencin de sustancias fluorescentes acopladas a un Ac o anti-Ac, que recibe el
nombre genrico de conjugado fluorescente. Los Ag utilizados son formes o
partculas (cortes de tejidos, bacterias, parsitos o cortes de parsitos, etc).
En los tres casos, los IC formados se ponen de manifiesto por observacin del porta en un
microscopio provisto de luz ultravioleta (los Ac se ven con fluorescencia verde). El patrn de
fluorescencia es caracterstico de cada Ag.
http://es.slideshare.net/JeluyJimenez/inmunodifusin
http://es.slideshare.net/cbejarl/estudio-de-proteinas-sericas
urbidimetra y nefelometra
Cuando un rayo de luz golpea una partcula en suspensin, una parte de la luz es reflejada, otra absorbida,
otra desviada y el resto es transmitida. La turbidimetra mide la reduccin de la intensidad de la luz en su
paso a travs de una suspensin, a causa de las partculas presentes en esta, y cuantifica la luz residual
transmitida. La nefelometra mide la luz desviada en diversos ngulos (entre 15? y 90?) por las partculas
presentes en esta suspensin.
La sensibilidad de la turbidimetra est limitada, en lo fundamental, por la exactitud y sensibilidad del
instrumento utilizado para la medicin, y depende de la capacidad del detector para registrar peque?os
cambios en la intensidad de la luz. Las lecturas realizadas en longitudes de onda bajas, en un
espectrofotmetro de buena calidad, permiten obtener buenos resultados.
Para la nefelometra es necesario emplear un equipo con caractersticas especficas, que recibe el nombre
de nefelmetro. Sus componentes bsicos son:
1.
2.
Sistema colimador (innecesario con la lmpara de lser), cuya funcin es la de concentrar el rayo
de luz en haces paralelos.
3.
4.
Cubeta de medicin.
5.
Detector (fotomultiplicador).
6.
Galvanmetro.
Los primeros equipos de este tipo efectuaban la medicin de la luz en un ngulo de 90?, pero hoy se
prefiere trabajar con la deteccin en ngulo ms peque?o, lo cual confiere una mayor sensibilidad.
http://es.scribd.com/doc/54885577/Turbidimetria-y-Nefelometria
http://bibing.us.es/proyectos/abreproy/4821/fichero/MEMORIA%252FCAPITULO+4.pdf
Nmero:
1
Autores/Authors:
Dayana Acebo Gonzlez, Armando T. Hernndez Garca
Palabras Claves / Key words:
mtodos
turbidimtricos,
sistemas
pticos,
bioprocesos,
cultivo
celular,
microbiologa
predictiva,
techniques differ one each other in geometry of the light detector used. The development of optical
systems has led to an effective use in order to have information on various measurement fields including
biotechnological processes. Therefore, turbidimetric methods constitute an alternative way for obtaining
information and controlling biotechnological systems
Texto Completo:
INTRODUCCIN
Las tcnicas pticas de medicin se utilizan desde hace aos para obtener cierta informacin de un objeto,
teniendo en cuenta
fenmenos pticos implican la interaccin de la luz con un medio. Al atravesar una muestra el haz
luminoso, ocurre la absorcin, la fluorescencia o la dispersin que junto a las propiedades ondulatorias
(amplitud, fase, polarizacin, longitud de onda) ofrecen un mundo rico en informacin. 1
La medicin de la turbidez, inicialmente comenz a utilizarse para proporcionar una evaluacin bsica de la
calidad del agua. Los primeros turbidmetros se desarrollaron en la dcada del 60 del siglo XX y la
tecnologa ptica fundamental se mantuvo sin cambios hasta mediados de los aos 80. Desde entonces, el
desarrollo tecnolgico de estos instrumentos ha avanzado de manera agigantada. Nuevos diseos de
turbidmetros han evolucionado en cuanto a la tecnologa utilizada (fuentes de luz y el diseo del detector)
y se han utilizado para compensar o eliminar las interferencias asociadas
al anlisis de la turbidez
(ejemplo: color de la muestra, burbujas en la muestra que desvan la luz y longitud de onda), que a
menudo hacen difcil la comparacin de las mediciones realizadas. 2
Las tcnicas pticas tradicionales de medicin han experimentado un renacimiento debido al fuerte
desarrollo de las fuentes y los detectores de luz, as como de nuevos elementos de tipo ptico. Los
avances en la nanotecnologa han abierto nuevos campos como la nanomedicina y la tomografa ptica,
impulsando una creciente demanda para el desarrollo de la medicin ptica y de la tecnologa de imagen
en las ciencias de la vida. En general, son tcnicas rpidas, sin contacto y no destructivas para el medio
ambiente.3 Los recientes acontecimientos en las tcnicas pticas, como: las sondas de densidad ptica, los
biosensores pticos, los sensores de fibra ptica, infrarrojos y de fluorescencia, demuestran la creciente
importancia que presentan los sistemas de sensores pticos en el registro de los procesos biotecnolgicos.
Estos ofrecen la posibilidad de un seguimiento continuo del proceso sin perturbacin alguna y cercano al
valor real.4 El objetivo de esta revisin consisti en mostrar el estado del arte en cuanto a las tcnicas de
medicin de turbidez aplicadas a las ciencias de la vida, especialmente, a los bioprocesos.
MEDICIN DE TURBIDEZ
Definicin de turbidez
La turbidez se define por la Organizacin Internacional de Normalizacin (ISO), como la reduccin de la
transparencia de un lquido causada por la presencia de partculas no disueltas de material distinto al
propio lquido.5 Al ser un indicador de apariencia ptica, ocasionado por la dispersin y absorcin de la
energa lumnica a travs del lquido, la turbidez solo puede ser medida usando tcnicas pticas. 6 Se
fundamenta en la relacin de la intensidad de la luz incidente y de la luz dispersada por el medio, mediante
la ley de Lambert-Beer (Ecuacin 1), en la que la turbidez es proporcional a la concentracin de
partculas.7-9 Un haz de radiacin monocromtica paralelo con intensidad I 0 llega al medio absorbente
perpendicular a la superficie; luego pasa a travs de la longitud X del medio, que contiene partculas
absorbentes que bloquearn la transmisin de la luz (tomos, iones o molculas), la intensidad del haz
disminuye a I como resultado de la absorcin y la dispersin. Si el material se compone de partculas con
diferentes coeficientes de absorcin y de dispersin, el coeficiente total de absorcin y de dispersin, (A y
B), es igual a la suma de los coeficientes de absorcin y de dispersin de todas las partculas. 10
dnde:
I intensidad de la luz resultante.
I0 intensidad de la luz en el punto 0.
0 punto de partida del paso de luz a travs del medio absorbente.
X longitud del medio o distancia del viaje de la luz a travs del medio.
C concentracin del medio.
A coeficiente de absorcin.
B coeficiente de dispersin.
La proporcionalidad entre la intensidad de la luz incidente y la luz dispersada por el medio depende del
tamao y de la forma de las clulas que se encuentren en el medio que se est analizando, que tambin
puede ser afectada por las condiciones ambientales. La correlacin entre la concentracin de partculas y la
turbidez, tambin llamada calibracin, depende, en el caso del anlisis de cultivos bacterianos, de las
especies bacterianas que se estn analizando, y en ocasiones, incluso de la cepa especfica utilizada. 11 La
medicin de turbidez se usa para estimar los indicadores de crecimiento de bacterias como una alternativa
a los recuentos de las placas tradicionales. Su utilizacin se ha incrementado como nueva tendencia en la
microbiologa predictiva y ha comenzado a centrarse en la cuantificacin de la variabilidad de las
respuestas bacterianas en los entornos de los alimentos y otros productos industriales. 11-12
La unidad de medicin estndar para la turbidez es la Unidad Nefelomtrica de Turbidez (UNT). Aunque
tambin se utilizan
otras
unidades
por regulaciones y
Fig. 1. Efectos de luz al atravesar la muestra. 6 L1 Haz de luz incidente sobre la muestra. L2 Haz de luz
que ha pasado a travs de la muestra. M Muestra en anlisis. St Luz difundida por las partculas
suspendidas en la muestra. G y G1 Rayos perifricos del haz de luz difundido.
Tcnicas turbidimtricas de medicin
La turbidez se mide utilizando las tcnicas de turbidimetra o nefelometra. La relacin directa entre los
datos de turbidez y la concentracin de slidos suspendidos depende de muchos factores, entre los cuales
se incluye el tamao de las partculas, la forma, la distribucin y el estado de la superficie, ndice de
refraccin de las partculas de dispersin y de la longitud de onda de la luz utilizada. 5
Hay tres diseos bsicos de medidores de turbidez (Fig. 2):
sensor se encuentra montado en un ngulo normalmente de 90 del rayo de luz incidente. Este diseo
tiene una precisin limitada a elevadas turbiedades. A medida que aumenta la turbidez aumenta la
cantidad de luz dispersa, ocurriendo una dispersin mltiple que disminuye la intensidad de luz difusa que
llega al detector situado a los 90.5,14-17
productos lquidos que presenten colores intensos y para muestras de gran turbidez. 5 Esta configuracin
es la clave para obtener buenas caractersticas de rendimiento en las mediciones de turbidez, as como
una buena estabilidad, linealidad, sensibilidad, baja luz difusa y rechazo del color.14
Adems de estas tcnicas de medicin, la de retrodispersin se refiere a la medicin de la luz dispersada
en un ngulo entre 90 y 180. 10,18 La espectrometra de retrodispersin Rutherford (RBS) es una poderosa
tcnica analtica, basada en la medida de un haz de iones retrodispersados de elevada energa que incide
sobre una muestra.En este mtodo, la luz dispersada se detecta en direcciones determinadas, siempre
correspondientes a ngulos de dispersin mayores de 90. Esta tcnica brinda informacin sobre las masas
atmicas en el medio y determina la distribucin de los elementos en el medio en funcin de su
profundidad.19,20
(bombillas),
aquellos
dispositivos
de
electroluminiscentes
(LED
lseres)
los
basados
en
plasma
21
tamao y un amplio intervalo espectral (247-1550 nm, intervalo espectral de los LEDs disponibles
comercialmente).23
El diodo lser, como otro ejemplo de fuente de emisin, se obtuvo como resultado del desarrollo del diodo
LED. La palabra lser (Light Amplification by Stimulated Emission of Radiation) en espaol se traduce como
Amplificacin de la luz por emisin estimulada de radiacin. El diodo lser es un dispositivo que utiliza un
principio de la mecnica cuntica: la emisin inducida o estimulada para generar un haz de luz coherente
de un medio adecuado y con el tamao, la forma y la pureza controlados. Refirindose al proceso cuntico,
la luz caracterstica emitida por electrones cuando pasan de un estado de gran energa a un estado de
menor energa, estimula a otros electrones a efectuar una trayectoria similar (pasar de un estado de
mayor energa a otro de menor energa). El resultado es una luz sincronizada que sale del material. Una
caracterstica importante es que la luz emitida no solo tiene la misma frecuencia (monocromtica), sino
que es monofsica (est en fase), tambin est sincronizada y se obtiene como resultado un rayo de luz
muy preciso.24
Detectores
En los turbidmetros el haz de luz resultante de la interaccin entre la luz incidente y la muestra ser
detectado por el fotodetector y como resultado, la seal electrnica producida se procesa y se convierte
entonces en un valor de turbidez. La ubicacin del detector en el turbidmetro vara de acuerdo con la
configuracin del diseo en el instrumento. Existen cuatro detectores que se utilizan frecuentemente en
los turbidmetros, estos son, los tubos fotomultiplicadores, los fotodiodos de vaco, y de silicio, as como los
fotoconductores de sulfuro o de cadmio.25
Estos detectores se diferencian por su respuesta espectral, de acuerdo con la longitud de onda del haz de
luz incidente (Fig. 3). Los fotomultiplicadores utilizados en la instrumentacin nefelomtrica tienen picos de
sensibilidad espectral en el ultravioleta cercano y en el espectro del azul visible. Requieren un suministro
de alta tensin bien ajustado para mantener una buena estabilidad en la medicin. El fotodiodo de vaco
generalmente exhibe una respuesta espectral similar a la de un fotomultiplicador,
pero un poco ms
estable. Sin embargo, sus caractersticas se ven afectadas por las condiciones del medio ambiente, en
particular, la humedad.16 Los fotodiodos de silicio generalmente tienen un mximo de sensibilidad espectral
en la regin visible del rojo o del infrarrojo cercano. El fotoconductor de sulfuro o de cadmio tiene este
mximo entre la respuesta espectral del fotomultiplicador y del fotodiodo de silicio. 10,26
contienen, generalmente, ya sea una matriz fuertemente coloreada, partculas coloreadas, o ambas.
Adems, la muestra puede emitir fluorescencia o partculas con tamaos especficos. Estas caractersticas
se traducen en una mayor interferencia, que disminuye el rendimiento de estos dos mtodos. En los
ejemplos de tales muestras se incluyen: productos lquidos alimenticios, control de la contaminacin
durante la produccin de diversos fluidos, resinas, la degradacin de aceites y recuentos bacterianos en
agar, siendo solo una pequea parte de la gran variedad de posibilidades. 25
tcnicas
clsicas
empleadas
en
microbiologa
para
medir
el
crecimiento
celular
son:
las
determinaciones de densidad ptica (turbidez), conteo en placa y peso seco. El conteo en placa es la ms
antigua (aproximadamente 100 aos) y es considerada una de los procedimientos ms utilizados en la
aquella. Aunque esta ltima posibilita conocer de manera directa la viabilidad de los microorganismos
presentes en una muestra, sin embargo, consume tiempo. En tal sentido, el mtodo turbidimtrico tiene la
ventaja de estimar de manera rpida el crecimiento de una poblacin microbiana. 17
Generalmente, un sistema para la medicin de turbidez consta de la fuente de luz, la muestra en anlisis y
del fotodetector (fotodiodo, fotorresistencia, etc.) (Fig. 4). En estos sistemas, la fuente de emisin de luz
(ejemplo los LEDs), tiene la capacidad de emitir a una longitud de onda determinada, existe un recipiente
cristalino o frasco donde se coloca la muestra en estudio y el fotodetector se comporta como receptor de
los
fotones
sensor
ptico. 17 Dicho
fotodetector
se
encuentra
antes
de
un
bloque
de
acondicionamiento, que permite amplificar y filtrar las seales emitidas por l en forma de impulsos
elctricos. Estas seales pueden ser introducidas en una Unidad Central de Procesamiento y Control
(UCPC) encargada de la conversin analgico-digital de la seal de entrada y de cumplir con las tareas del
procesamiento digital, como la cuantificacin y el procesamiento matemtico con el objetivo de
proporcionar el resultado requerido, adems de mostrar el valor de la turbidez medida despus del
procesamiento digital.31-32 Asimismo, la UCPC es capaz de generar y controlar una seal con determinadas
caractersticas para estimular la fuente de emisin de luz.5,33
pticos
son
herramientas eficaces para obtener cierta informacin del sistema biolgico bajo estudio, ofreciendo un
control no destructivo de los procesos biotecnolgicos. 34
Durante el registro y control de los procesos fermentativos, se necesita una estimacin rpida del
crecimiento bacteriano, para lo cual se han desarrollado mtodos turbidimtricos que permiten medir la
absorbancia de las bacterias en el cultivo.38 Para determinar el crecimiento microbiano, se toma una
muestra del caldo de fermentacin (off-line) y se mide la absorbancia de la muestra con un
espectrofotmetro o un colormetro, a una longitud de onda constante. La medicin de la densidad ptica
con un espectrofotmetro es un modo rpido y fcil para obtener la curva de crecimiento de dicho
microorganismo.39 Las mediciones de la densidad ptica proporcionan informacin til para el control del
cultivo alimentado en el fermentador, por lo que resulta ideal realizar estas mediciones directamente (online) en el proceso y as, obtener valores en tiempo real. 40 Por lo tanto, para el control en tiempo real de los
procesos de fermentacin de microorganismos, se requiere del uso de sensores que posean un amplio
intervalo dinmico de medicin.41
Varias son las investigaciones publicadas, relativas a procesos fermentativos, en las que se mide la
densidad ptica on-line. Por ejemplo, en el trabajo publicado por Kennedy,37 se realizaron mediciones
dentro del propio fermentador, para lo cual se utiliz como fuente de emisin una sonda de fibra ptica
junto a la fuente de deteccin, ambas sumergidas en el cultivo, las que posibilitaron la medicin de la
dispersin de la luz por la muestra. En este sistema experimental, se obtiene el espectro de dispersin de
la luz en la fermentacin de tres microorganismos individuales (aproximadamente a las mismas
concentraciones): Saccharomyces
dispersin de la luz y la concentracin de clulas se observa en la curva de calibracin de cada uno de los
microorganismos.37
Otro ejemplo de la aplicacin de la turbidimetra en los procesos de cultivo en biorreactores lo constituye la
investigacin realizada por P. Wu, 42
en la que se realiz la
diferentes ngulos de captacin de las seales y de diferentes longitudes de onda (entre el ultravioleta y el
infrarrojo), para el que se ha descrito un incremento significativo en la sensibilidad del sistema para la
deteccin de patgenos procedentes de diferentes medios. 46
Por otro lado, existen autores que abordan la mejora del fotodiodo y de la tarjeta asociada (circuito
integrado) en la medicin de la absorbancia (dependiendo de la frecuencia). 47 El detector de absorbancia
utilizado, se bas en la utilizacin de un amplificador en configuracin lock-in para realizar el
procesamiento digital de la seal (DSP LIA). Este detector mostr menor nivel de ruido al ser comparado
con un detector que incluy un amplificador operacional simple (TL082CP). 47
Adems, Song et al.48 reportaron el empleo de un arreglo de fotodiodos, en forma de microchip porttil,
para la identificacin y cuantificacin de E.coli O157:H7. En otra investigacin,49 se realiz el diseo y
construccin de un instrumento electrnico para
acuosos, basado en los principios de la turbidimetra y nefelometra. En dicho trabajo, se evaluaron dos
sensores pticos monolticos de gran sensibilidad, del orden de 0,45 A/W a 650 nm, colocado en la
direccin del haz transmitido y del haz dispersado. Se utiliz un amplificador de transimpedancia que
proporcion una tensin lineal y proporcional a la cantidad de luz recibida por el detector, en el que las
fotocorrientes de ambos detectores resultaban alimentadas por un circuito logartmico de precisin. La
salida del circuito logartmico es digitalizada para tener mediciones de turbidez en anlisis de aguas o de
transparencia en el caso de recubrimientos y de dispersin de luz en sistemas acuosos que tienen algn
grado de materia slida suspendida. 49
El mtodo
logartmico LOG102, el
precisin, que permiten la obtencin de resultados, muestreando elementos tcnicos y valores nominales a
tener en cuenta para el diseo del instrumento de medicin. 30
En
varios
trabajos
destinados
al
diseo
optoelectrnico
de
los
turbidmetros,
se
incorpora
el
amplificador lock-in, que tambin puede ser implementado digitalmente. Este dispositivo tiene como
caracterstica principal que elimina el ruido introducido en la seal de medicin a otra frecuencia que no
sea la de referencia sin afectar dicha medicin. 31,47,50,51 En estos sistemas se miden los cambios de amplitud y
fase de las seales pticas intrnsecas (IOS), las cuales revelan cambios en la transmitancia y dispersin
de la luz. Estos sistemas en general se componen de tres partes principales: 1) fuente de alta frecuencia
que modula la intensidad de la luz; 2) detector de luz; 3) procesamiento de seales y el mdulo de
adquisicin de datos. El emisor es excitado por una fuente de corriente sinusoidal de intensidad modulada,
generada y controlada por la UCPC. Los fotones dispersos, despus de la interaccin con el medio, son
capturados por el detector de luz. En el mdulo de procesamiento de seales, se incluye un circuito
integrado (CI) demodulador, un filtro pasa bajo y un circuito de amplificacin, la seal demodulada
obtenida
en el procesamiento analgico
Finalmente, se enva la seal a un ordenador personal para su posterior anlisis. 31 La combinacin de estas
tcnicas proporciona una elevada relacin seal-ruido y la falta de sensibilidad a la luz ambiente. 31,50
continuo. El sistema
optoelectrnico para determinar la densidad ptica consta de un diodo lser y un fotodiodo. El dispositivo
ha sido validado con la bacteria Vibrio fischeri, en condiciones de cultivo continuo. Se ha comprobado una
muy buena correlacin entre las mediciones manuales y las automticas procesadas con este
instrumento.53
Es importante destacar que se han realizado varias mediciones on-line en procesos de fermentacin de E.
coli de cultivos de gran densidad mediante dispositivos pticos basados en fuentes de luz como las
lmparas o emisores de luz de diodos (LED). 39Un ejemplo es la investigacin realizada por Martin y
Timothy, en la que se describe el procedimiento no invasivo de una nueva sonda ptica basada en la
reflectancia ptica. La naturaleza no invasiva de la medicin evita los problemas de ensuciamiento del
sensor y la contaminacin cruzada, adems de la necesidad de esterilizar la sonda, lo que reduce el costo
de los materiales utilizados en la produccin del sensor. El instrumento consta de un sensor ptico que se
monta sobre el exterior del recipiente de fermentacin y de un monitor que procesa las seales de
reflectancia medidas por los sensores. El rendimiento del instrumento fue probado bajo las condiciones de
fermentacin del microorganismo E. coli.54
En recientes publicaciones, se trata el uso del sensor llamado TruCell, desarrollado por la compaa
Finesse, LLC, que consiste en una fuente lser dirigida a travs de una ventana de tefln. Este sensor
puede captar la luz dispersada enviada hacia adelante, dentro de un cono de 20, lo que hace posible una
mayor deteccin de la intensidad de luz transmitida. Este ngulo de recogida permite al sensor lograr una
gran relacin seal-ruido, incluso en medios muy turbios. Este sensor es capaz de medir en tiempo real
dentro de una brecha de la sonda de medicin, la cual tiene una longitud fsica de acuerdo con el camino
ptico de la luz, que pasa directamente a travs del medio lquido en el interior del biorreactor.40,55
Las investigaciones destinadas a mejorar los sistemas para la medicin de turbidez, van enfocadas no solo
a realizar cambios en la fuente de radiacin y deteccin, sino tambin, a mejorar la captacin de la seal
de salida del detector o sensor ptico para distintos campos de medicin, y se centran en variantes tales
como: la posicin del detector, la amplificacin de la seal medida y la disminucin
de los ruidos
procedentes de fuentes externas, con el objetivo de obtener una mejor sensibilidad en la medicin, as
como un valor cercano al real.
de
confiables. De modo que se ha desarrollado un rea dinmica de la microbiologa aplicada que hace frente
al estudio para mejorar los mtodos de deteccin temprana, la caracterizacin y el recuento de
microorganismos tanto en productos clnicos, como en muestras de alimentos, productos industriales y
ambientales.56 En el mercado internacional se pueden encontrar diferentes sistemas que emplean como
tcnica de diagnstico la medicin de turbidez y que se utilizan en los procesos biotecnolgicos.
El desarrollo de nuevos sensores pticos, que pueden ser incorporados a un biorreactor, ha permitido la
medicin de la densidad ptica on-line. Entre ellos, se encuentra la sonda no invasiva, BE2100, fabricada
por la compaa Applikon Biotechnology. Este sensor se ha diseado para su uso en laboratorios de
investigacin y en ambientes industriales. Debido a la que no precisa ningn contacto directo con el medio,
el sistema puede ser utilizado en los procesos de cultivo de microorganismos patgenos y no necesita ser
esterilizado.57 El sensor BE2100 emplea una matriz de rayos lser y detectores infrarrojos, los cuales son
sensibles a los diferentes cambios en la biomasa del cultivo. Este sensor realiza mediciones continuas y en
tiempo real, en un intervalo mayor de 300 unidades de densidad ptica. 57-58
El OD4, es un sensor ptico creado por la compaa DASGIP Information and Process Technology GmbH,
para el registro on-line de la absorbancia y el crecimiento celular. El mdulo correspondiente se puede
incorporar en cuatro biorreactores como mximo. Utiliza sensores infrarrojos de gran precisin con
diferentes longitudes de trayecto ptico. 59 Cada mdulo OD4 tiene su propio microprocesador, el cual
permite que todos los datos puedan ser transferidos a un sistema de control para la
supervisin del
CONCLUSIONES
durante el paso de un haz de luz a travs de un medio. La implementacin de tcnicas de medicin cada
vez ms novedosas ha permitido realizar mediciones de turbidez que incluyen una buena linealidad y
estabilidad, un amplio intervalo de medicin y la posibilidad de medir la turbidez de la muestra, incluso en
presencia de colorantes. De igual modo, la introduccin de nuevos sistemas pticos para medir el
crecimiento celular en los procesos biotecnolgicos contina creciendo en inters, ya que constituye una
estrategia de control para los bioprocesos. De esta manera, el continuo desarrollo de los sensores pticos,
como por ejemplo, las sondas de densidad ptica, los biosensores pticos, los sensores de fibra ptica,
los infrarrojos y de fluorescenc
En donde T es la transmitancia medida
,
es la intensidad de la fuente de radiacintransmitida,
Siendo
Donde
es una constante emprica del sistema,
es la intensidad de la fuente de radiacinincidente. El valor de depende de una curva
de calibracin preparada, usando una serie depatrones de concentracin conocida.
Eleccin entre turbidimetra y nefelometra
La eleccin entre turbidimetra y nefelometra viene dada por dos factores:-
. Por lo que la mejor eleccin cuando lamuestra contiene pocas partculas dispersantes
es la nefelometra. La turbidimetra esuna buena tcnica para cuando las muestras
contienen grandes concentraciones departculas dispersantes.-
, es
enfocada sobre un medio que contiene partculas de dimensiones menores a 3/2
, se
observa dispersin de radiacin en todas las direcciones del espacio. Si la partcula
presentamayores tamaos, la radiacin puede ser reflejada o refractada. Existen dos
tipos dedispersin:1. Elstica: radiacin es absorbida por el analito y reemitida sin
cambios en la energade la radiacin. Es el caso de la dispersin Raileigh o las
dispersiones de grandespartculas.2. Inelstica: la radiacin es absorbida y reemitida
con cambios en su energa.
Turbidimetra fundamento
La turbidimetra puede realizarse en espectrofotmetros de visible o violeta. Cuando
laconcentracin de partculas en suspensin se mide por turbidimetra, la suspensin se
poneen una cubeta similar a un tubo de ensayo, que permite realizar las medidas de las
energaincidentes y transmitidas. La fuente de radiacin ms frecuentemente usadas es
la lmpara dewolframio, pero pueden utilizarse otras fuentes de radiacin visible. Si
ponemos en la cubetasuspensiones coloreadas se debe usar un filtro para evitar que
influya sobre los resultadosdando valores excesivamente altos. Los Turbidmetros
pueden incorporar cualquier detectorque sea sensible a la longitud de onda transmitida.
http://es.slideshare.net/jhonnyrojanop/turbidimetria-ambiental