Manual de Coleta de Exames Microbiológicos

Hospital Universitrio/UFSC
Servio de Anlises Clnicas

Laboratrio de Microbiologia
Exames Microbiolgicos
Manual de Coleta para
ATENO
O resultado liberado pelo laboratrio de microbiologia consequncia da
qualidade
da
amostra
recebida.
COLETA
e/ou
TRANSPORTE
INADEQUADOS podem ocasionar falhas no isolamento do verdadeiro agente
etiolgico e favorecer o desenvolvimento de microbiota normal ou contaminante
induzindo a tratamentos inapropriados. A identificao correta do stio de coleta
possibilitar a anlise adequada do crescimento microbiano na cultura
1- REQUISIO MDICA
Utilize preferencialmente os pedidos de exames via sistema de
Administrao Hospitalar, mais seguro!
TODA requisio de exames microbiolgicos deve conter:
Identificao do paciente: Nome completo, nmero de pronturio ou registro.
Local de internao: Clnica e leito
Data da solicitao
Identificao da amostra: stio de coleta e tipo de amostra
USO de antimicrobianos
Suspeita Clnica
Exames solicitados
Identificao do mdico requisitante: carimbo
2- IDENTIFICAO DAS AMOSTRAS
Nome completo do paciente
Identificao da amostra
Horrio da Coleta
3- CONSIDERAES GERAIS
- Coletar amostra, sempre que possvel, antes da antibioticoterapia;
- A amostra deve ser coletada do stio anatmico onde o microrganismo
suspeito possa ter mais chance de ser isolado;
- Fazer antissepsia antes de coletar as amostras;
- Aguardar 72 horas aps mudana na antibioticoterapia para coletar novas
amostras do mesmo stio de infeco;
- Utilizar frascos e meios de transporte apropriados
- Enviar a amostra ao laboratrio o mais breve possvel
- Em situaes onde o prprio paciente ir realizar a coleta (urina, fezes),
instruir de maneira clara o paciente e certificar-se de que ele entendeu suas
orientaes.
Sumrio
HEMOCULTURA............................................................................................... 4
HEMOCULTURA DE CATETER..........................................................................7
UROCULTURA............................................................................................... 10
COPROCULTURA........................................................................................... 12
FEZES PARA PESQUISA DE TOXINA DE CLOSTRIDIUM....................................14
SWAB RETAL PARA PESQUISA DE VRE OU BGN MULTIRRESISTENTE.............15
PONTA DE CATETER...................................................................................... 16
FLUIDOS CORPORAIS................................................................................... 17
LIQUOR......................................................................................................... 19
CULTURA OCULAR........................................................................................ 20
FERIDAS/ ABSCESSOS E TECIDOS MOLES.....................................................22
TRATO RESPIRATRIO.................................................................................. 25
SWAB DE OROFARINGE................................................................................. 27
SWAB OUVIDO/ORELHA................................................................................. 28
AMOSTRAS GENITAIS.................................................................................... 29
HEMOCULTURA
1 AMOSTRA/HEMOCULTURA = 1 PUNO
VENOSA DISTRIBUIDA EM 2 FRASCOS DE
HEMOCULTURA
MOMENTO DA COLETA: Hemocultura um exame de URGNCIA!!!

A coleta deve ser realizada logo no incio dos sintomas,
preferencialmente antes do inicio da antibioticoterapia
Pacientes com quadro agudo de sepse ou outra condio
(osteomielite, meningite, pneumonia ou pielonefrite). Coletar duas
hemoculturas consecutivamente de dois stios anatmicos diferentes
antes de iniciar a antibioticoterapia,
Pacientes com endocardite bacteriana subaguda, febre de
origem desconhecida (abcessos ocultos, febre tifide, brucelose) ou
fungemia: Coletar trs hemoculturas, de stios anatmicos diferentes ,
duas simultneas e uma em intervalo de aproximadamente 1 a 2 horas.
Pacientes em antibioticoterapia: coleta deve ser feita na menor
concentrao do agente, ou seja, minutos antes da prxima dose de
antimicroabiano.
VOLUME DE SANGUE recomendado
Neonatos a 1 ano (<4 Kg): 0.5 a 1.5ml, sempre que possvel coletar
pelo menos 1ml;
Crianas de 1 a 6 anos: 1ml por ano de idade dividido em duas
hemoculturas (punes de stios diferentes). Por exemplo: 3 anos, coletar 1,5ml
por puno em dois stios diferentes distribuindo cada puno em um frasco,
totalizando 3 ml. Se a criana tiver baixo peso, ou coletas de sangue prvias,
consultar o mdico responsvel antes de efetuar as coletas
Crianas entre 14 a 37kg: coletar 10 a 20 ml divididos em duas
punes de stios diferentes distribuindo cada puno em um frasco
Adultos e crianas maiores que 37kg: coletar 40ml divididos em duas
punes de stios diferentes distribuindo cada puno em dois frascos, 10ml
por frasco.
TIPO DE FRASCO DE HEMOCULTURA
Verifique e confirme se o paciente est utilizando antimicrobiano. Esta
informao ir definir o frasco que dever ser utilizado:
Adulto:
Sem antibioticoterapia: frasco azul (at 10ml) + frasco roxo (at 10ml)
Com antibioticoterapia: frasco verde (at 10 ml) + frasco laranja (at 10ml)
Peditrico: Frasco amarelo para todos (at 5 ml)
PROCEDIMENTO DE COLETA (Veias perifricas):
1Passo: Preparo do material
Identificar todos os frascos
Colar a etiqueta e anotar a hora da coleta e a puno (1
aero e anaerbio ou 2 aerbio e anaerbio)
ou anotar o nome do paciente, leito, hora e puno (1
aero e anaerbio ou 2 aerbio e anaerbio)
NO escrever ou colar etiqueta sobre o cdigo de barras
do frasco
Calar as luvas
Remover o lacre e limpar a tampa de borracha da garrafa
utilizando algodo embebido em lcool 70%, manter o algodo
sobre o frasco at o momento da coleta.
2 passo: Escolher o melhor local de puno para a coleta
Colocar o garrote e apalpar livremente as veias do paciente para
escolher a mais calibrosa e menos mvel
Soltar ou afrouxar o garrote
3 passo: Antissepsia
Utilizar algodo embebido em clorexidine alcolico 0,5% ou lcool
70%, friccionando a pele em crculos semi-abertos a partir do
ponto a ser puncionado, deixar secar por 30 segundos
Utilizando novo algodo aplicar novamente clorexidine ou o
lcool, repetindo o procedimento acima
No voltar a tocar no local onde foi feita a antissepsia,
se for necessria nova palpao utilizar luvas estreis
ou fazer rigorosa antissepsia na luva antes de tocar o
local
4 passo: Coleta
Colocar ou apertar novamente o garrote e puncionar a veia com
agulha e seringa ou dispositivo para coleta a vcuo sem tocar
diretamente no local de puno
1 puno = dois frascos de 10 ml (ADULTO)
Observar o volume correto na guia de marcao da
etiqueta do prprio frasco
Sistema a vcuo, os frascos devem permanecer em p
durante toda a coleta para evitar refluxo para a veia do
paciente:
1 frasco aerbio (azul ou verde)
2 frasco anaerbio (roxo ou laranja)
5 passo: Tratar o local da puno
Ao retirar a agulha, fazer compresso local com algodo seco,
sem friccionar
6 passo: Para coleta com seringa
Transferir a amostra para os frascos de hemocultura previamente
identificados sem trocar a agulha
etiqueta do prprio frasco (volume mximo de 5 ml no
frasco amarelo ou 10ml nos demais frascos)
Homogeneizar delicadamente os frascos
TRANSPORTE E ARMAZENAMENTO
As amostras devem ser enviadas imediatamente ao laboratrio
No refrigerar os frascos de hemocultura, eles devem permanecer a
temperatura ambiente at serem introduzidos no equipamento de automao
no setor de microbiologia, dentro de no mximo 4 horas.
HEMOCULTURA DE CATETER
Normalmente a hemocultura no deve ser coletada atravs do cateter,
coletar somente para diagnstico de infeco relacionada ao cateter
Nos casos de suspeita de Infeco relacionada a cateter coletar:
1 frasco aerbio do cateter (IDENTIFICAR CATETER)
1 frasco aerbio de veia perifrica (IDENTIFICAR
PERIFRICO)
fundamental identificar corretamente cada frasco com o local da
puno, pois a confirmao de infeco relacionada ao cateter se dar quando
o frasco coletado do cateter positivar no mnimo 2 horas antes do frasco
coletado por puno perifrica.
O coletador deve utilizar o mesmo tipo de frasco para a amostra do
cateter e para a amostra perifrica, e distribuir o mesmo volume de amostra
em cada frasco, somente assim o exame poder ser considerado.
10ml frasco azul (CATETER) = 10 ml frasco azul (PERIFRICO)
Evite coletar amostra de cateter dentro de uma hora aps a

administrao de antimicrobianos, espere e colete um pouco
antes da prxima dose!
TIPO DE FRASCO DE HEMOCULTURA

Verifique e confirme se o paciente est utilizando antimicrobiano. Esta
informao ir definir o frasco que dever ser utilizado:
Sem antibioticoterapia: frasco azul (at 10ml)
Com antibioticoterapia: frasco verde (at 10 ml)
Neonato: frasco amarelo: (at 5 ml)
PROCEDIMENTO DE COLETA:
1Passo: Preparo do material
Identificar dois frascos do mesmo modelo
Colar a etiqueta e anotar a hora da coleta e o stio
anatmico de maneira clara (perifrico e cateter)
ou anotar o nome do paciente, leito, hora e stio anatmico)
NO escrever ou colar etiqueta sobre o cdigo de barras
do frasco
Calar as luvas
Remover o lacre e limpar a tampa de borracha da garrafa
utilizando algodo embebido em lcool 70%, manter o algodo
sobre o frasco at o momento da coleta
2 passo: Escolher o melhor local de puno para a coleta perifrica

Colocar o garrote e apalpar livremente as veias do paciente para
escolher a mais calibrosa e menos mvel
Soltar ou afrouxar o garrote
3 passo: Antissepsia da coleta perifrica
Utilizar algodo embebido em clorexidine alcolico 0,5% ou lcool
70%, friccionando a pele em crculos semi-abertos a partir do
ponto a ser puncionado, deixar secar por 30 segundos
Utilizando novo algodo aplicar novamente clorexidine ou o
lcool, repetindo o procedimento acima
No voltar a tocar no local onde foi feita a antissepsia,
se for necessria nova palpao utilizar luvas estreis
ou fazer rigorosa antissepsia na luva antes de tocar o
local
4 passo: Coleta
Colocar ou apertar novamente o garrote e puncionar a veia com
agulha e seringa ou dispositivo para coleta a vcuo sem tocar
diretamente no local de puno
Coletar 1 frasco AERBIO 10 ml
etiqueta do prprio frasco
Sistema a vcuo, o frasco deve permanecer em p durante
toda a coleta para evitar refluxo para a veia do paciente:
frasco aerbio (azul ou verde)
5 passo: Tratar o local da puno
Ao retirar a agulha, fazer compresso local com algodo seco,
sem friccionar
6 passo: Para coleta com seringa
Transferir a amostra para o frasco de hemocultura previamente
identificado, sem trocar a agulha
etiqueta do prprio frasco (volume mximo 10ml ou 5 ml)
Homogeneizar delicadamente os frascos
7 passo: coleta do segundo frasco atravs do cateter
Fazer antissepsia do dispositivo (cateter) utilizando algodo
embebido em lcool 70%, deixar secar por 30 segundos.
Desconectar o dispositivo, atarraxar uma seringa e coletar
aproximadamente
3ml
de
sangue,
que
sero
desprezados
Utilizando nova seringa, coletar o sangue para cultura

atravs do cateter
No mesmo tipo de frasco aerbio selecionado para coleta
perifrica (verde ou azul), adicione o mesmo volume de
frasco utilizado na coleta perifrica (mximo 10 ml)
etiqueta do prprio frasco e coletar exatamente o mesmo
volume da coleta perifrica
Utilizar mesmo tipo de frasco aerbio (azul ou
verde)
Homogeneizar delicadamente os frascos de
hemocultura para evitar coagulao
As amostras devem ser enviadas imediatamente ao laboratrio
No refrigerar os frascos de hemocultura, eles devem permanecer a
temperatura ambiente at serem introduzidos no equipamento de automao
no laboratrio de microbiologia, dentro de no mximo 4 horas.
UROCULTURA
Obter a primeira urina da manh sempre que possvel ou reter a urina na
bexiga por no mnimo 2 horas antes de realizar a coleta. A permanencia da
urina na bexiga por pelo menos 4 horas o ideal pois diminui o nmero de
resultados falso negativos.
No forar a ingesto de lquido a fim de induzir a mico do paciente,
lquidos em excesso iro diluir a urina, diminuindo a contagem de colnias ou
gerando resultados falso negativos
A amostra de urina deve ser preferencialmente coletada no laboratrio
O frasco deve ser identificado corretamente, o coletador deve conferir os
dados do paciente ao receber a amostra e anotar na etiqueta o horrio da
coleta, bem como se a coleta foi realizada por saco coletor, sonda de alvio ou
puno
NUNCA coletar urina de comadre ou papagaio ou do saco coletor de
pacientes sondados
Urina de jato mdio:
Feminina: retirar a roupa da cintura para baixo para facilitar a higiene e
a coleta. Lavar as mos, separar os grandes lbios. Higienizar a rea genital de
frente para trs com gaze embebida em clorexidina aquosa a 0,2% ou sabo,
novamente de frente para trs enxaguar a rea limpa com gaze umedecida em
gua para retirar a clorexidina ou o sabo (repetir o procedimento com gua
duas vezes). Mantendo os grandes labios separados, desprezar o primeiro jato
no vaso sanitrio e sem interromper a mico, posicionar o frasco de coleta no
caminho do jato urinrio recolhendo o jato mdio. Transferir aproximadamente
10 ml da urina para o tubo cnico, fechar e colocar na estante. O frasco
utilizado para recolher a urina deve ser desprezado no lixeiro e o tubo cnico
com a amostra deve ser entregue ao coletador.
A coleta do jato mdio urinrio deve ser evitada durante o perodo
menstrual. Na necessidade de coletar amostra neste perdo a paciente deve
ser orientada a utilizar absorvente interno e posteriormente realizar o

procedimento de higiene intima conforme descrito acima
Masculina: Retrair o prepcio (se necessrio), higienizar a genitlia

externa com gaze embebida em clorexidina aquosa 0,2% ou sabo, dando
ateno especial ao meato uretral, enxaguar a regio para retirar a clorexidina
utilizando outra gaze umedecida em gua (repetir o preocedimento com gua
duas vezes). Desprezar o primeiro jato no vaso sanitrio e sem interromper a
mico, posicionar o frasco de coleta no caminho do jato urinrio recolhendo o
jato mdio. Transferir aproximadamente 10 ml da urina para o tubo cnico,
fechar e colocar na estante. O frasco utilizado para recolher a urina deve ser
desprezado no lixeiro e o tubo cnico com a amostra deve ser entregue ao
coletador.
Urina infantil
Fazer a higiene da regio genital, coxas e ndegas com gaze embebida em
gua e sabo ou clorexidina aquosa 0,2%. Utilizando outra gaze embebida em
gua enxaguar retirando o sabo ou a clorexidina. Fixar o saco coletor
assepticamente. Trocar o saco a cada 45 minutos repetindo a higiene a cada
troca. Se houver contaminao fecal a amostra deve ser desprezada e o
procedimento reiniciado. NO enviar ao setor a amostra caso a criana tenha
defecado.
Aps a mico, retirar cuidadosamente o coletor, fechar e enviar ao laboratrio
Pacientes com Cateter urinrio
Fechar a sonda 30 minutos antes da coleta.
Utilizando gaze embebida em lcool 70%, realizar a desinfeco da poro
superior da cnula, aspirar a urina utilizando seringa e agulha estreis. A urina
pode ser enviada ao laboratrio na prpria seringa ou pode ser transferida para
o tubo cnico e em seguida enviada ao laboratrio. NUNCA colete urina da
bolsa coletora do cateter
Urina coletada por sonda de alvio
A passagem de sonda de alvio uma deciso do mdico e o procedimento
feito pela equipe de enfermagem. recomendado desprezar o fluxo inicial
(aproximadamente 30ml) antes de recolher a amostra para cultura
Esta tcnica indicada para coleta infantil quando houver dvidas na
interpretao dos resultado da cultura de urina
Puno suprapbica
A amostra coletada por seringa e agulha diretamente da bexiga, o
procedimento realizado pelo mdico do paciente e indicado para cultura de
anaerbios e coleta infantil quando houver dvidas na interpretao dos
resultado da cultura de urina
Urina de Primeiro Jato
Higienizar a rea genital conforme descrito para urina jato mdio, coletar os
primeiros 10ml de urina.
Aps a coleta, anotar na etiqueta o horrio da coleta.
A urina deve ser enviada imediatamente ao laboratrio, se mantida a
temperatura ambiente deve ser processada na microbiologia dentro de no
mximo 1 (uma) hora aps a coleta. Quando no for possvel processar a

urina dentro de uma hora, a amostra deve ser refrigerada (2 a 8C) at o
momento da semeadura, por no mximo 24 horas.
COPROCULTURA
Coletar a amostra durante a fase aguda da diarria, preferencialmente
antes da antibioticoterapia;
coleta;
No utilizar papel higinico para coletar as fezes, pois ele pode ser
impregnado com sais de brio, que so inibidores de patgenos fecais
Em caso de crianas, admite-se a coleta sobre fralda descartvel nova,
do lado contrrio, recolhendo-se as fezes logo aps a evacuao, pois as
fraldas podem ser impregnadas com sais de brio, que so inibidores de
patgenos fecais
Evite a contaminao da amostra fecal com urina ou gua do vaso
sanitrio
Fezes coletadas pelo paciente
Utilizar SEMPRE o meio de transporte:
Meio de transporte
Carry Blair
Coletar as fezes em um recipiente limpo e seco, fornecido pelo

laboratrio.
Retirar o swab da embalagem, passar o lado que contm o algodo nas
fezes (de preferncia nas partes da amostra contendo muco, sangue ou pus,
quando presentes).
Abrir o tubo contendo meio de transporte;
Colocar a parte de algodo impregnada de fezes dentro do meio de
transporte (parte gelatinosa do tubo)
Identificar o tubo, de forma legvel, com nome do paciente, dia e a hora
da coleta;
Transferir para o frasco com tampa fornecido pelo laboratrio uma
poro da amostra de aproximadamente 5 ml de fezes diarreicas, ou 5g de
fezes formadas (poro do tamanho de uma nz), fechar bem o frasco.
Identificar, de forma legvel, com nome do paciente, dia e a hora da coleta
Encaminhar o tubo com o swab e o frasco imediatamente ao laboratrio
ou refrigerar por no mximo 24hs
Swab Retal
Passar a ponta de um swab estril aproximadamente 1 cm alm do
esfncter anal. Cuidadosamente rodar o swab para coletar amostra das criptas
anais, retirar o swab. Certifique-se de que existe colorao fecal no algodo.
Colocar o swab no meio de transporte (Cary-Blair) e enviar ao laboratrio.
Para facilitar a coleta o swab pode ser umedecido em salina ou gua
destilada estril.
Contedo de colostomia, ileostomia ou duodenal
Colocar em um recipiente bem fechado, a prova de vazamento ou no vial
do meio de transporte e enviar imediatamente ao laboratrio
Fezes em meio de transporte devem ser refrigeradas (4C) e
transportadas ao laboratrio dentro de at 24h para melhor recuperao dos
patgenos.
Na coleta de fezes sem meio de transporte, a amostra deve ser
transportadas ao laboratrio de microbiologia e processadas dentro de 1 hora.
FEZES PARA PESQUISA DE TOXINA DE CLOSTRIDIUM

C. difficile um patgeno oportunista que causa diarria e colite em
pacientes hospitalizados, as toxinas so responsveis por 25% das diarrias
associadas a uso de antimicrobianos. A utilizao de clindamicina e
cefalosporinas altamente associada com a doena, mas qualquer agente
antimicrobiano pode desencadear a produo de toxina, bem como agentes
antineoplsicos. C. dificille produz duas toxinas , a enterotoxina (toxina A) e
citotoxina (toxina B). As toxinas so muito instveis, por isso, as amostras
devem ser refrigeradas logo aps a coleta e transportadas sob refrigerao at
o laboratrio (caixa com gelo).
Este um exame de alto custo e no recomendado para pacientes
assintomticos. Pacientes com testes positivos no devem repetir o teste
(verificao de cura), somente se eles se tornarem sintomticos aps trmino
do tratamento. No repetir o teste dentro de 72 horas.
Coletar as fezes em um recipiente limpo e seco, fornecido pelo
laboratrio.
Transferir para o frasco com tampa fornecido pelo laboratrio uma
poro da amostra de aproximadamente 5 ml de fezes diarreicas, ou 5g de
fezes moles (poro do tamanho de uma nz), fechar bem o frasco. Identificar,
de forma legvel, com nome do paciente, dia e a hora da coleta.
Refrigerar imediatamente
CRITRIOS DE REJEIO:
No sero processadas amostras de fezes formadas ou duras (somente
amostras lquidas ou moles)
Refrigerar imediatamente e transportar ao laboratrio
refrigerao dentro de no mximo 24 horas
sob
AMOSTRA DEVE SER REFRIGERADA IMEDIATAMENTE
SWAB RETAL PARA PESQUISA DE VRE OU BGN

MULTIRRESISTENTE
Cultura de Vigilncia
A pesquisa de colonizao por Enterococcus spp. resistentes a
vancomicina e ou bacilos gram negativos multirresistentes (Acinetobacter
baumannii e Enterobacterias produtoras de carbapenemase), deve ser
solicitada somente nos casos referenciados pela CCIH/HU. Coletar UM swab
para cada exame (um para pesquisa de VRE e um para pesquisa de BGN
multirresistente)
Swab Retal
Coletar um swab para cada exame:
1 swab para pesquisa de VRE e
1 swab para pesquisa de BGN multirresistente
Passar a ponta de um swab estril aproximadamente 1 a 2 cm alm do
esfncter anal. Cuidadosamente rodar o swab para coletar amostra das criptas
anais, retirar o swab. Certifique-se de que existe colorao fecal no algodo.
Colocar o swab no meio de transporte (AMIES) e enviar ao laboratrio.
Para facilitar a coleta o swab pode ser umedecido em salina ou gua
destilada estril.
Meio de transporte: AMIES:

CRITRIOS DE REJEIO:
Swabs para pesquisa de VRE ou de BGN multirresistentes enviados ao
laboratrio sem vestgios de fezes (swabs limpos) devem ser rejeitados e
novos swabs devem ser coletados
Enviar o swab imediatamente ao laboratrio.
PONTA DE CATETER
Enviar a ponta do cateter para cultura somente se houver sinal de
infeco (inflamao no stio de insero, febre, sinais de sepse ou bacteriemia
documentada sem foco de infeco aparente).
Se houver evidncia de pus e infeco do tecido local, limpar a
superfcie da pele dos debris e coletar o pus do tecido profundo utilizando swab
estril. Se houver pus suficiente no local, a coleta adequada da amostra por
aspirao com seringa e agulha.
coleta. Anotar na etiqueta se o cateter retirado era de nutrio parenteral, pois
nestes casos importante pesquisar Malassezia furfur.
PROCEDIMENTO DE COLETA
Os mesmos cuidados de desinfeco utilizados na introduo do cateter
devem ser adotados no momento da retirada;
Limpar a pele com lcool 70% antes de remover o cateter;
Utilizando tcnicas asspticas, segurar a poro exposta do cateter e remover
cuidadosamente o cateter do paciente comum instrumento estril, cuidar para
evitar o contato com a pele. Segurar a poro distal sobre um recipiente estril
e cortar a ponta, aproximadamente 5cm (marca no cateter), com tesoura estril
ou lmina de bisturi, deixando-a cair dentro do recipiente estril;
NO DOBRAR OU ENROLAR A PONTA DO CATETER, necessrio que a
ponta do cateter esteja reta para rolar sobre a placa do meio de cultura

Enviar ao laboratrio de microbiologia imediatamente.
No refrigerar a amostra
FLUIDOS CORPORAIS
Lquidos sinovial, pleural (empiema ou toracentesis), peritoneal (abdominal,
ascite ou paracentesis), pericardico, culdocentesis (bolsa entre parede anterior
do reto e posterior do utero), aminitico (amniocentesis).
Coletar amostra antes do incio da antibioticoterapia melhora a
sensibilidade diagnstica
A coleta realizada pelo mdico resposvel pelo paciente
Fazer anti-sepsia do stio da puno e realizar assepticamente aspirao
percutanea ou cirrgica da amostra.
Transferir assepticamente a amostra para um frasco de hemocultura
aerobico: azul ou verde (no mximo 10ml) e se necesrio para um frasco de
hemocultura anaerobico roxo ou laranja (no mximo 10ml)
Remover o lacre do frasco de hemocultura e limpar a tampa de

borracha utilizando algodo embebido em lcool 70%, manter o
algodo sobre o frasco at o momento da coleta, dispensar no
mximo 10 ml de liquido dentro do frasco de hemocultura.
Retenha um pouco de lquido na seringa (no mnimo 1ml) para

realizao de bacterioscopia e semeadura direta da amostra.
Evitar enviar ao laboratrio seringas com agulha anexada devido ao
risco de acidente com perfurocortante, risco de contaminao e vazamento da
amostra.
Ideal remover a agulha e vedar a seringas com tampas (Luer-Lok) e
transportar imediatamente ao laboratrio.
Os fluidos corporais estreis podem tambm ser transferidos para tubos
de coleta de sangue. Neste caso, utilizar os tubos com tampa vermelha (a
amostra pode coagular durante o transporte) ou tubo com heparina. Tubos com
EDTA e citrato devem ser evitados, pois inibem a maioria dos microrganismos.
CRITRIOS DE REJEIO:
Amostras coaguladas,
Amostras em recipiente com vazamento
Enviar ao laboratrio imediatamente;
LIQUOR
A coleta da amostra um procedimento mdico. Deve ser feita antes do
inicio da antibioticoterapia para aumentar a sensibilidade diagnstica.
Recomenda-se a coleta sequencial do liquor em no mnimo 3 frascos estreis
devidamente identificados e numerados de 1 a 3. Quando so solicitados
somente bioquimica (proteinas totais e glicose), bacteriologia (cultura para
germes comuns e gram) e hematologia (citologia total e diferencial), a coleta
sequencial de 3 frascos com 2ml de liquor cada suficiente, sendo que os
mesmos devem estar devidamente identificados e numerados:
1 (bioquimica),
2 (bacteriologia),
3 (hematologia).
Citometria de Fluxo exige a coleta de um 4 frasco especifico com volume
entre 2 a 10ml.
A supeita de micobactrias com solicitao de pesquisa e cultura de
BAAR e PCR para M. tuberculosis exige um 5 frasco especifico com volume
mnimo de 5ml para ter boa sensibilidade.
Pesquisa de antigeno direto (latex para germes comuns) apresenta
baixa sensibilidade, especialmente para N. meningitidis. Deve ser
desencorajada. Quando solicitada ser realizada somente quando a citologia
apresentar mais que 5 clulas/ml.
CULTURA OCULAR
A maioria das amostras oculares deve ser coletada pelo oftalmologista,
estas amostras devem ser inoculadas diretamente nos meios de cultura
fornecidos pelo laboratrio, no prprio consultrio mdico ou na clnica.
Conjuntiva:
A coleta deve ser realizada com swab estril de alginato de clcio,
rolando o swab sobre a conjuntiva antes da aplicao de medicao tpica.
Coletar amostras de ambos os olhos com swabs separados.
Infeces Oculares meios de cultura que devem ser solcitados ao
laboratrio:
Condio
Clnica
Meio de cultura
Indicado
Patgeno primrio
Comentrio
Conjuntivite
Agar Sangue
Agar Chocolate
MacConkey (se
paciente
hospitalizado)
Enterobacterias e P. aeruginosa podem

ser
importantes
em
pacientes
hospitalizados. Pesquisa de Chlamydia
deve ser feita em neonatos
Ceratite
Agar Sangue
Agar Chocolate
MacConkey
Cultura
para
fungo
Cultura
para
micobacteria
Endoftalmite
Agar Sangue
Agar Chocolate
MacConkey
Cultura
para
fungo
Cultura
para
micobacteria
Cultura
para
anaerbio
Agar Sangue
Agar Chocolate
MacConkey
Cultura
para
anaerbio
Agar Sangue
Agar Chocolate
H. influenzae,
S. aureus,
S. pneumoniae,
S. pyogenes.
Moraxela
spp.
N.
gonorrhoeae
Trauma ou ulcera de
crnea: P. aeruginosa, S.
aureus, S. pneumoniae, S.
grupo viridans, Moraxella
spp,
micobacterias
de
crescimento
rpido,
Nocardia spp.
Lentes de contato:
BGN,
incluindo
P.
aeruginosa, Serratia spp,
Bacillus
spp
e
Acanthamoeba spp.
Traumtica ou ps cirurgica:
S. aureus, Staphylococcus
coagulase
negativa,
Streptococcus do grupo
viridans, Bacillus spp, P.
acnes, Anaerbios incluindo
Clostridium spp
Celulite
periorbital
Celulite
Orbital
S. aureus
S. pyogenes
H. influenzae
S aureus
S. pneumoniae
Infeces mistas aerobios e anaerbios

podem ser secundarias a sinusites ou
MacConkey
Cultura
para
fungo
Cultura
para
anaerbio
BGN
incluindo
aeruginosa
H influenzae
S. pyogenes
Anaerobios

P.
traumas. Culturas de sangue devem ser

coletadas. Fungos como Aspergillus e
Mucor podem ser importantes em
diabticos e imunocomprometidos
Inoculao nos meios de cultura:

Inocular na seguinte ordem 1 Agar Chocolate, 2 Agar Sangue e
quando necessario 3 MacConkey, rolando o swab na superficie do agar

formando um Z.
Para cultura de anaerbios a amostra deve ser inoculada
diretamente em caldo de thioglicolato
Confecionar dois esfregaos em lmina de vidro para colorao.
Lminas especiais devem ser utilizadas para pesquisa de Chlamydia
(lamina azul com circulo transparente no qual deve ser confeccionado o
esfregao).
Tubo com agar Sabouraund deve ser inoculado quando houver
solicitao de cultura para fungos.
No refrigerar os meios de cultura inoculados
FERIDAS/ ABSCESSOS E TECIDOS MOLES

Consideraes:
Coletar amostras somente de feridas que tenham sinas clnicos de
infeco ou que no cicatrizam por longo perodo.
Coletar a amostra antes do inicio da antibioticoterapia
Evidencias do processo infeccioso podem ser documentadas pela
presena de leuccitos (PMN) no esfregao corado pelo Gram. Assim, a
qualidade da amostra deve ser avaliada pelo Gram, que ser utilizado
como guia para interpretao e seguimento da cultura. A presena de
clulas epiteliais indica contaminao da amostra com microbiota da pele
e mucosa e pode comprometer o significado da cultura.
Evitar coleta com swab se amostras apiradas ou biopsias podem
ser obtidas. Culturas de leses secas e crostas NO devem ser coletas.
Antissepsia da superficie:
Feridas fechadas e aspirados: desinfectar a superfcie como na
coleta de hemocultura com clorexidine alcoolica a 0.5%
Feridas abertas: desbridar, e rinsar completamente com salina
estril antes da coleta.
COLETA:
Aspirado de feridas ou abscessos:
Amostras coletadas com seringa e agulha podem ser colocadas
em frasco estril ou tubo de coleta de sangue sem anticoagulante (tampa
vermelha) para submeter ao laboratrio.
Se cultura para anaerbio for solicitada, uma parte da amostra
deve ser transferida para frasco de hemocultura anaerbio (roxo ou
laranja)
Seringa com agulha atarrachada no deve ser encaminhada ao
laboratrio devido ao risco de acidentes perfurocortantes, bem como,
perigo de vazamento e contaminao da amostra. O i deal remover a
agulha e vedar a seringas com tampas (Luer-Lok) e transportar imediatamente
ao laboratrio.
Swabs de feridas:
Feridas superficiais, nas quais no h fluido/exsudato suficiente
para ser aspirado, podem ser coletadas com swabs
Coletar swabs somente de feridas clinicamente infectadas ou

daquelas feridas crnicas que no cicatrizam;
Culturas para aerbios e anaerbios so indicadas para
todas as feridas profundas e mordeduras que tenham sinais
clnicos de infeco
Aps desbridamento da ferida, rolar gentilmente o swab sobre a
superficie aproximadamente 5 vezes, focando nas reas onde houver
evidncia de infeco (pus e tecido inflamado).
Aps a coleta o swab deve ser colocado imediatamente em
meio de transporte (Amies) e enviado ao laboratrio.
Se houver indicao de cultura para anaerbios, dois swabs
devem ser coletados.
Confeccionar um esfregao em lmina de vidro para bacterioscopia
utilizando um swab seco
Tecido queimado:
Bipsia a tcnica mais indicada para coleta de queimados. A
coleta do fragmento pode ser feita por bisturi ou por punch (lmina circular na
extremidade de um tubo que permite a remoo de um cilindro, composto de
epiderme, derme e pequena poro do tecido celular subcutneo). Aps a
remoo o fragmento deve ser colocado imediatamente em frasco contendo
soluo fisiolgica estril e mantido a temperatura ambiente. O envio da
amostra ao laboratrio dentro de 30 minutos melhora a recuperao de
microrganismos, sendo que o tecido deve ser processado em no mximo 2
horas.
Culturas para aerbios e anaerbios so indicadas.
Cultura superficial de tecido (coleta por swab) identifica apenas os
microrganismos que colonizam a superfcie da leso, no considerando a
invaso tecidual. Hemoculturas no momento da coleta por swab, auxiliam no
monitoramento do paciente. A coleta da amostra deve ser realizada aps
limpeza e remoo do tecido superficial desvitalizado, rolando o swab
delicadamente sobre a superfcie do tecido vitalizado, aproximadamente 5
vezes, focando nas reas onde h evidencias de tecido inflamado.
Microrganismos podem no estar distribudos uniformemente em uma
queimadura, recomenda-se a coleta de amostras em diferentes reas da leso.
Se houver indicao de cultura para anaerbios coletar um swab para cada tipo
de cultura (aerbio e anaerbio). Os swabs devem ser colocados
imediatamente em meio de transporte (Amies) e enviados ao laboratrio
Amostras de tecidos e bipsias

A coleta do fragmento pode ser feita por bisturi ou por punch (lmina
circular na extremidade de um tubo que permite a remoo de um cilindro,
composto de epiderme, derme e pequena poro do tecido celular
subcutneo). Aps a remoo o fragmento deve ser colocado imediatamente
em frasco contendo soluo fisiolgica estril e mantido a temperatura

ambiente. O envio da amostra ao laboratrio de microbiologia dentro de 30
minutos melhora a recuperao de microrganismos, sendo que o tecido deve
ser processado em no mximo 2 horas.
Fluidos de drenagem
So aceitos para culturas fluidos de drenagem biliar, toraxica e
abdominal. Os tubos de drenagem no devem ser enviados para cultura
pois so altamente contaminados por microbiota da pele. A amostra no
deve ser coletada das bolsas coletoras. Culturas de drenagem cirurgica
de procedimentos cirurgicos limpos no so indicadas se no houver
sinais de infeco.
Os fluidos devem ser coletados por aspirao direta do fluido
fresco da rea que est sendo drenada ou por aspirao do fluido fresco
no tubo de drenagem aps descontaminao da superficie do tubo.
Colocar o fluido aspirado em um tubo estril e enviar
imediatamente ao laboratrio.
No inocular em frascos de hemocultura.
IDENTIFICAO DA AMOSTRA
Descrever o tipo de amostra (Esta informao importante
para seleo dos meios de cultura e interpretao dos resultados):
Tecido profundo, tecido superficial, inciso cirurgica, abscesso,
fluido de drenagem...
Descrever a localizao anatmica (brao, perna, cabea e
pescoo...)
Anotar a data e hora da coleta
Listar terapia antimicrobiana prvia a coleta da amostra
Enviar ao laboratrio imediatamente; O envio da amostra ao laboratrio de
microbiologia dentro de 30 minutos melhora a recuperao de microrganismos,
sendo que a amostra deve ser processada em no mximo 2 horas.
Manter a temperatura ambiente. No refrigerar ou incubar antes ou
durante o transporte
CRITRIOS DE REJEIO:
No sero processadas amostras recebidas em frascos com

formalina;
Amostras com numerosas clulas epiteliais, especialmente

recebidas em swabs;
Swabs coletados sem meio de transporte (swab seco)
Swabs coletados em meio de transporte com mais de 24hs de
coleta;
TRATO RESPIRATRIO
TRATO RESPIRATRIO INFERIOR
Escarro expectorado
Para esta amostra o paciente ir participar ativamente da coleta,

no entanto a superviso direta do pessoal da enfermagem ou fisioterapia
garante um melhor resultado.
Coletar a amostra sempre que possvel antes da antibioticoterapia.
Na suspeita de infeco por micobactrias coletar 3 amostras em
dias consecutivos ou alternados, somente uma amostra por dia.
Orientaes ao paciente:
O primeiro escarro da manh, antes da ingesto de alimentos
considerado a melhor amostra;
O paciente deve escovar os dentes sem creme dental (pasta de
dentes) e enxaguar a boca vrias vezes com a gua, inclusive com
gargarejos;
Quando for o caso, retirar a protese dentria (dentadura) antes da
coleta;
Respirar fundo vrias vezes, e tossir profundamente, a amostra
deve vir do `peito` e no da `garganta`
Recolher o escarro expectorado dentro de um frasco de boca larga
com tampa rosca fornecido pelo laboratrio, encostando a borda do
frasco abaixo do labio anterior, certificando-se que no contaminou a
parte externa do frasco.
Fechar bem o frasco
O escarro obtido deve ser PURULENTO, amostras constituidas
por saliva so imprprias para anlise bacteriolgica pois no
representam o trato respiratrio inferior.
Aspirado Traqueal
A amostra aspirada diretamente dentro do bronquinho (frasco
plastico tipo tubo de Luken).
Amostras coletadas at 72 horas aps inicio ou mudana na
antibioticoterapia podem levar a resultados falso negativos e devem ser
evitadas
Anotar data e hora da coleta e enviar imediatamente ao laboratrio
Lavado Broncoalveolar/ Bronquico
Coleta de amostra do trato respiratrio inferior por broncoscopio
deve ser feita por pneumologista, intensivista ou outro mdico
capacitado.
Em amostras de Lavado Broncoalveolar nos pacientes da UTI com
suspeita de pneumonia por ventilao mecnica, indicado solicitao
de culturas quantitativas.
Aps a coleta, anotar na etiqueta data e hora da coleta.
muito importante que as amostras sejam recebidas no

laboratrio e processadas o mais rapido possvel aps a coleta (menos
que 2 horas)
Amostras devem ser mantidas refrigeradas (2 a 8C) at serem
processadas no laboratrio. Uma demora de mais que duas horas para
processar a amostra pode resultar em diminuio na recuperao de
patgenos fastidiosos como S. pneumoniae e H. Influenzae, e no
crescimento exacerbado de microbiota oral.
CRITRIOS DE REJEIO:
Rejeitar amostras em duplicata recebidas no mesmo dia, a menos

que o laboratrio tenha solicitado nova coleta devido a qualidade ruim da
primeira amostra
No aceitar culturas repetidas em menos que 48 horas
Rejeitar amostras constituidas exclusivamente por saliva
Rejeitar cultura para anaerbio de amostras de escarro, aspirado
traqueal ou lavado broncoalveolar. A amostra adequada para este exame
o escovado bronquico protegido.
SWAB DE OROFARINGE
Procedimento para deteco e identificao de Streptococcus betahemolticos do grupo A, C e G
Utilizar um abaixador de lingua para pressionar gentilmente a lingua
Pressionar e rolar um swab estril sobre as tonsilas e atrs da uvula
(faringe posterior), evitando tocar na lingua, mucosa bucal e uvula. Tocar
preferencialmente nas reas com hiperemia e pontos de supurao (pus ou
placas).
Colocar o swab no meio de transporte de AMIES e enviar ao laboratrio
O swab em meio de transporte deve ser enviado ao laboratrio de
microbiologia dentro de 12 horas, mantido a temperatura ambiente
SWAB OUVIDO/ORELHA
Ouvido/Orelha externa
A amostra do ouvido externo no reflete a causa da otite mdia,
exceto quando houver ruptura recente da membrana do tmpano
Remover secreo superficial com swab umedecido em salina estril
Inserir um swab dentro do canal do ouvido at encontrar resistncia;
Girar o swab e coletar o fluido no swab
Colocar o swab no meio de AMIES e enviar ao laboratrio
Timpanocentese Ouvido/orelha media
Procedimento invasivo realizado pelo mdico, utilizando tcnica de
aspirao por seringa para obter o fluido do timpano.
A amostra deve ser colocada em tubo esteril ou enviada na propria
seringa. O Ideal remover a agulha e vedar a seringa com tampa (Luer-Lok) e
transportar imediatamente ao laboratrio.
Enviar amostra imediatamente ao laboratrio
A amostra aspirada deve ser enviada imediatamente ao laboratrio a
temperatura ambiente. O swab em meio de transporte deve ser enviado ao
laboratrio de microbiologia dentro de no mximo 8 horas, mantido a
temperatura ambiente.
AMOSTRAS GENITAIS
AMOSTRA VAGINAL:
Exames: Bacterisocopia e a fresco, para pesquisa de vaginose bacteriana
(Gardnerella vaginalis, e outros microrganismo facultativos e anaerbios,
principalmente Mobiluncus spp. Prevotella spp e Peptostreptococcus spp),
vaginite por Candida albicans e /ou Trichomonas vaginalis e vaginite
descamativa.
Aps introduo do espculo:
Coletar a secreo do fundo de saco ou da parede vaginal utilizando
swab de Dacron estril.
Confeccionar um esfregao em lmina para bacterioscopia (Gram)
girando o swab delicadamente sobre a superfcie da lmina, no
esfregue o swab sobre a lmina, pois este procedimento destri as
estruturas celulares.
Lave/homogeinize o mesmo swab em 1ml de soluo fisiolgica estril
fornecida pelo laboratrio para o exame a fresco
NOTA: esta coleta pode ser realizada sem espculo: limpe a secreo externa
com auxlio de uma gaze, introduza o swab no introito vaginal e faa
movimento de rotao para coletar o material.
AMOSTRA ENDOCERVICAL
Exames: Pesquisa de Neisseria gonorrhoeae, Pequisa de Chlamydia
trachomatis, Pesquisa de Mycoplasma e Ureaplasma
Introduzir o espculo para visualizar o colo do tero. Se necessrio,
utilizar gua morna para facilitar a introduo do espculo, no utilizar
lubrificantes, pois estes podem ter ao antibacteriana;
Limpar o colo do tero com gaze estril ou swab, removendo secrees
vaginais e muco endocervical;
Introduzir o swab estril 1-2 cm no canal endocervical, girar
delicadamente 180 vrias vezes e retirar cuidando para no tocar nas
paredes vaginais;
O primeiro swab (alginatado) deve ser utilizado para pesquisa de
Neisseria gonorrhoeae, o swab deve ser inoculado imediatamente em
meio de transporte de Amies com carvo;
O segundo swab deve ser utilizado para pesquisa de Chlamydia

trachomatis. Fazer um esfregao fino e homogeneo na rea demarcada
da lmina para IFD e/ou colocar o swab em meio de transporte
especfico para tcnica molecular (PCR);
O terceiro swab de Dacron, poliester ou alginato deve ser utilizado para
pesquisa de Mycoplasma e Ureaplasma, colocar o swab imediatamente
no meio de transporte especfico para realizao da cultura; os
micoplasmas tm grande afinidade pelas clulas de mucosas,
importante efetuar uma boa raspagem da mucosa para garantir a coleta
de uma amostra adequada. O frasco com meio de transporte deve estar
a temperatura ambiente
NOTAS:
1- Coletar separadamente o material endocevical e vaginal, utilizando
swabs diferentes.
AMOSTRA INTROITO VAGINAL E RETAL

Pesquisa de Streptococcus agalactiae (beta hemoltico do grupo B)
Coletar amostra entre a 35 e 37 semanas de gestao.
Informar ao laboratrio se paciente alrgica a penicilina para que seja
testado perfil de suscetibilidade a eritromicina e clindamicina
Coletar um nico swab da vagina distal (introito vaginal sem espculo)
seguido pela coleta retal (inserir o swab atravs do esfncter anal)
amostra swab vaginal/retal, ou coletar dois swabs separados uma para
cada stio
Inserir o swab em meio de transporte de Amies
AMOSTRA URETRAL
Avisar ao paciente que a coleta da amostra pode ser dolorosa, que a mico
seguinte pode ser dolorosa, e que o aumento da ingesto de lquidos pode
ajudar a diminuir a concentrao da urina e, portanto, o desconforto.
O paciente no deve ter urinado por pelo menos 2 horas, a mico

pode diminuir a capacidade de detectar organismos.
Utilizar swab fino com haste flexvel, especfico para coleta uretrogenital.
Umedecer o algodo com salina antes da insero pode ajudar a reduzir
o desconforto
Introduzir o swab lentamente (3-4 cm em homens; 1-2 cm em mulheres),

girar lentamente, mantendo 1 a 2 segundos e retirar delicadamente
Bacterioscopia: Preparar um esfregao rolando o swab na superfcie

de uma lmina de vidro para bacterioscopia (Gram), o mesmo swab
deve ser colocado em soluo fisiolgica estril para pesquisa de
Trichomonas e/ou leveduras
Pesquisa de N. gonorrhoeae: repetir o procedimento descrito acima, e

colocar o swab no meio de transporte de Amies com carvo.
Pesquisa de Chlamydia: repetir o procedimento descrito acima, Fazer

um esfregao fino e homogeneo na rea demarcada da lmina para IFD
e/ou colocar o swab em meio de transporte especifico para tcnica
molecular (PCR)
Pesquisa de Micoplasma e Ureaplasma: repetir o procedimento

descrito acima utilizando swab de Dacron, poliester ou alginato, colocar
o swab imediatamente no meio de transporte especfico para realizao
da cultura; O frasco com meio de transporte deve estar a temperatura
ambiente
AMOSTRA: LESES GENITAIS (vesculas e lceras)

Pesquisa de Haemophylus ducreyi (ppula que evolui para pstula e
lcera, com fundo raso, borda amolecida e bem definida, leso nica ou
mltiplas, apresenta-se sensvel e dolorosa cancro mole); Pesquisa de
Treponema pallidum (leso ulcerada de fundo limpo com borda endurecida,
geralmente indolor cancro duro), Pesquisa de Chlamydia trachomatis
(lcera ou vesicula pequena lifogranulona venrio); Pequisa de Klebsiella
granulomatis(ndulo nico ou multiplo, com curso crnico, aumenta causando
eroso cutnea, evoluindo para lcera profunda e indolor); Herpes simplex
tipos 2 e 1 (mltiplas leses: ppulas, vesculas bolhas, pstula ou lceras,
normalmente dolorosas e sensveis e geralmente recidivantes); Papiloma vrus
humano (verruga genital verruga nica ou multiplas, de colorao escura com
formaes espiculadas)
Limpar a superficie da leso com soluo salina (0.85% NaCl):
Se houver somente eritema ou edema, coletar swab do exsudado ou do
eritema para realizar cultura de leveduras;

Se houver lcera realizar pesquisa de H. ducreyi e T. pallidum
o Se houver crosta na leso, remov-la gentilmente
o Umedecer o swab com salina estril e coletar friccionando
vigorosamente a base da leso para cultura de H. ducreyi
o Alternativamente, raspar delicadamente a leso com uma lmina
de bisturi estril at emergir um fluido seroso (tente evitar o
sangramento).. Irrigar com salina
Cultura para H ducreyi, esfregar vigorosamente a base
com swab estril ou aspirar o fluido com seringa e agulha.
Colocar a amostra diretamente em meio de cultura (gar
chocolate), ou meio de transporte (meio de AMIES) e
confeccionar um esfregao para colorao de Gram
Pesquisa de T pallidum, limpar o fluido, sangue ou debris
celulares com gase estril, aplicar uma leve presso na
base da leso, ocorrer exsudao de fluidos do tecido,
enxugar as primeiras gotas at o surgimento de um fluido
claro e seroso. Recolher o fluido diretamente em uma
lmina e cubrir com lamnula para microscopia de campo
escuro. Se nenhum exsudato estiver presente, adicionar
uma gota de salina, raspar a base da leso e aspirar
novamente a gota de salina colocar o material em uma
lmina e cobrir com lamnula Fazer um esfregao em outra
lmina para colorao de Fontana.
AMOSTRA RETAL
Pesquisa de N. gonorrhoeae
Para realizar cultura de N. gonorrhoeae introduzir o swab 2 a 3 cm
dentro do canal anal, fazer movimentos circulares por 10 a 30 segundos junto a
parede retal, pressionando lateralmente para obter clulas epiteliais colunares
Se houver contaminao fecal visvel, descartar o swab e obter uma outra
amostra.
Aps a coleta, anotar na etiqueta com os dados do paciente a data e
hora da coleta.
Amostras devem ser enviada imediatamente ao laboratrio. Amostras
em meio de transporte devem ser enviadas ao laboratrio de microbiologia

dentro de 6 horas.

Manual de Coleta de Exames Microbiológicos

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