INTRODUCCION

Paul Ehrlich, a comienzos del s. XX se refiri a la posibilidad de que el

sistema inmunitario reaccionara contra los tejidos del mismo individuo y
cre el trmino autoinmunidad. Despus de un siglo de investigacin se
conocen muchos aspectos de la patognesis de la autoinmunidad, pero an
quedan amplias lagunas en el entendimiento total de este fenmeno.
Actualmente se considera que las enfermedades autoinmunes son
trastornos que resultan de fallas en la regulacin del sistema inmunitario. El
fenmeno de autoinmunidad no es infrecuente y puede ocurrir por va de las
clulas T o ms comnmente por va de las clulas B con la produccin de
auto anticuerpos. En realidad, muchas veces ambas vas operan
simultneamente. En principio, la auto reactividad del sistema inmunitario
no es siempre una actividad anormal y solamente aquellas reacciones
autoinmunes que ocasionan dao tisular y enfermedad, deben considerarse
patolgicas. Dada la amplia variedad de reacciones autoinmunes
normales, a veces es difcil establecer una relacin entre dicha reactividad
y
la
patognesis
de
las
enfermedades
autoinmunes.
Una de las caractersticas ms notoria de las enfermedades que resultan de
procesos autoinmunitarios es la presencia de auto anticuerpos, es decir,
inmunoglobulinas con especificidad para componentes antignicos de
nuestros propios tejidos. Algunos de estos anticuerpos participan
directamente en la gnesis de las reacciones que producen el dao tisular,
pero en algunos casos el papel que representan es incierto y en otros su
significado es desconocido. Sin embargo, la deteccin de estos anticuerpos
en el suero de las personas es de utilidad como marcadores de procesos
autoinmunes. Algunos autoanticuerpos reaccionan contra componentes
presentes en todas las clulas. Otros con antgenos particulares de tejidos y
rganos. Los anticuerpos contra antgenos de distribucin general
usualmente se asocian con enfermedades de carcter sistmico (ejs: lupus
eritematoso sistmico, esclerosis sistmica, artritis reumatoide, sndrome de
Sjgren, polimiositis/dermatomiositis),en contraste con los anticuerpos
rgano especficos que tienen ms relacin con enfermedades limitadas a
dichos rganos (ejs. diabetes mellitus autoinmune, tiroiditis autoinmune,
enfermedad de Graves, hepatitis autoinmune, anemia hemoltica
autoinmune, pnfigo bulloso, miastenia gravis, sndrome de Goodpasture,
etc.).
Una de las caractersticas ms notoria de las enfermedades que resultan de
procesos autoinmunitarios es la presencia de auto anticuerpos, es decir,
inmunoglobulinas con especificidad para componentes antignicos de
nuestros propios tejidos. Algunos de estos anticuerpos participan
directamente en la gnesis de las reacciones que producen el dao tisular,
pero en algunos casos el papel que representan es incierto y en otros su
significado es desconocido. Sin embargo, la deteccin de estos anticuerpos
en el suero de las personas es de utilidad como marcadores de procesos
autoinmunes. Algunos autoanticuerpos reaccionan contra componentes
presentes en todas las clulas. Otros con antgenos particulares de tejidos y
rganos. Los anticuerpos contra antgenos de distribucin general
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usualmente se asocian con enfermedades de carcter sistmico (ejs: lupus

eritematoso sistmico, esclerosis sistmica, artritis reumatoide, sndrome de
Sjgren, polimiositis/dermatomiositis), en contraste con los anticuerpos
rgano especficos que tienen ms relacin con enfermedades limitadas a
dichos rganos (ejs. diabetes mellitus autoinmune, tiroiditis autoinmune,
enfermedad de Graves, hepatitis autoinmune, anemia hemoltica
autoinmune, pnfigo bulloso, miastenia gravis, sndrome de Goodpasture,
etc.).
MARCO TEORICO
1. DEFINICION
Los ANA son inmunoglobulinas que reaccionan contra diferentes
componentes autlogos nucleares (ADNcd, SSA/Ro, protenas del
centrmero, etc.) y citoplasmticos (v. g. aminoacil tRNA sintetasa o Jo-1,
mitocondrias, etc.). Estos ltimos, no obstante, son antgenos
citoplasmticos y los anticuerpos que los reconocen son referidos tambin
como ANA. Si bien existe controversia en relacin a si es correcto o no
llamar a los patrones citoplasmticos como ANA para simplificar la forma de
referirse a los autoanticuerpos que reconocen antgenos ubicuos del ncleo
o citoplasma sin importar su ubicacin, nos referiremos a ellos como ANA.
Desde la perspectiva de laboratorio, los anticuerpos que reconocen
antgenos en ambos compartimentos son detectados en un solo sustrato
antignico tico (clulas HEp-2) y ambos se reportan como ANA (patrn
nuclear y citoplasma). Por otra parte, la identificacin de los antgenos
reconocidos por los ANA fue originalmente estudiada purificando protenas
nucleares mediante tcnicas de extraccin con soluciones salinas; de ah
surgi el nombre de antgenos extrables del ncleo o mejor conocidos como
ENA (del ingls, extractable nuclear antigens), de los cuales existen ms de
100 antgenos conocidos. Sin embargo, los ms estudiados y mejor
caracterizados son: SSA/SSB, RNP-U1/Sm, Sm, Scl70 y Jo-1.
2. CLASIFICACION DE LOS ANA
En circulacin pueden estar presentes tres tipos de ANA. Uno de ellos est
presente en todos los individuos a ttulos relativamente bajos y forman
parte del repertorio de los ANA naturales. Por ello, es importante establecer
valores de referencia ajustados a las poblaciones tnicas que los van a usar
como referencia. En un trabajo realizado en el 2005 se mostr la
importancia de establecer los valores normales de ANA tomando en cuenta
el grupo tnico, el patrn observado y los ttulos de los anticuerpos. Un
segundo tipo de ANA son los que se producen como resultado de procesos
infecciosos. En este sentido, los ANA cuyo origen son los procesos
infecciosos no se asocian a manifestaciones clnicas de enfermedad
autoinmune y sus ttulos bajan en cuanto se resuelve el proceso infeccioso
que les dio origen. El tercer tipo es el de los ANA autoinmunes, los cuales
reflejan la prdida de la tolerancia inmunolgica y su origen es

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multifactorial. Su produccin depende de carga gentica, medio ambiente,

cambios hormonales, etc.
3. TECNICA UTILIZADA
El sustrato utilizado para la deteccin de los ANA es muy importante, ya que
existen antgenos cuya concentracin en las clulas de los tejidos es muy
baja en contraste con lo que sucede en las clulas HEp-2, que por ser una
lnea celular epitelial su concentracin esta aumentada. Otra caracterstica
de estas clulas es que tienen ms de 46 cromosomas, ms de dos
nuclolos y, por ser clulas muy activas metablicamente, tienen una gran
cantidad de mitocondrias. Su ncleo es ms grande que el de cualquier
clula epitelial normal, por ello la observacin de patrones nucleares y
citoplsmaticos se convierte en una tarea relativamente fcil. Sin embargo,
es importante confirmar la especificidad de los autoanticuerpos detectados
mediante ELISA, EIT o tcnicas con sensibilidad y especificidad similar o
mayores. La tcnica de inmunofluorescencia usando sustratos de origen
animal permite la demostracin de ciertos patrones morfolgicos de
fluorescencia en el ncleo de las clulas. En el pasado estos patrones
tuvieron importancia porque se asociaban con la presencia de determinados
anticuerpos y con ciertas enfermedades. Actualmente la relevancia de los
mismos ha sido suplantada en gran medida por la posibilidad de detectar
anticuerpos de diversa especificidad en forma directa. Un resultado positivo
del examen por ANA, aunque muchas veces es de utilidad, no es
patognomnico de una enfermedad en particular y si no se interpreta en
funcin de la presentacin clnica y tomando en cuenta el ttulo o la
concentracin de anticuerpos presente, ms bien puede causar confusin.
4. FUNDAMENTO DEL METODO
Los anticuerpos anti-nucleares (ANA) del suero se unen a sus
correspondientes antgenos presentes en las clulas HEp-2. Una vez unidos,
los anticuerpos se ponen de manifiesto mediante la incubacin con un
anticuerpo contra las inmunoglobulinas humanas conjugado con
fluorescena y se visualizan por microscopa de fluorescencia.
5. PATRONES DETECTADOS MEDIANTE IFI
A continuacin se describen las caractersticas de los patrones que con
mayor frecuencia se detectan por IFI en clulas HEp-2 en sueros de
pacientes con enfermedades autoinmunes.
5.1.

PATRON HOMOGENEO

Se caracteriza por una tincin homognea en el ncleo, cuya intensidad

puede variar dependiendo de la concentracin de los anticuerpos presentes
en el suero. La placa de la cromatina en clulas en divisin puede estar
teida de manera compacta (fig. 1A), delineada (fig. 1B) o difusa (fig. 1C) y
los nuclolos pueden o no estar teidos.

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Fig.1 A) homogneo compacto, B) metafase delineada, C) metafase defusa

y lincion de nuclolos.
5.2.

PATRN PERIFRICO

Se caracteriza por tincin regular alrededor del ncleo; el centro de este

patrn muestra menos tincin (fig. 2). La placa de la cromatina se tie de
forma delineada o compacta.

5.3.

PATRON MOTEADO

Los patrones de ANA que se observan con mayor frecuencia son los
moteados, tanto fino como grueso. La descripcin de estos patrones ha
generado confusin, en el sentido de que varios autores definen el patrn
moteado grueso como aquel en el que el ncleo se observa teido con
grnulos gruesos y el patrn moteado fino lo definen como ncleo teido
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con grnulos finos. No hay problema cuando los grnulos son muy gruesos o
muy finos, en puntos intermedios la interpretacin es subjetiva. Nuestra
propuesta es que el patrn moteado grueso se debe definir como tincin en
el ncleo con grnulos finos o gruesos, los nuclolos estn teidos y la placa
de la cromatina en clulas en divisin no se tie, es decir, no hay
reconocimiento de los componentes de la cromatina (fig. 3). En cuanto al
patrn moteado fino, este se caracteriza por tincin del ncleo con grnulos
finos o gruesos, los nuclolos no se tien as como tampoco se tie la placa
de la cromatina en clulas en divisin (fig. 4). Esta definicin de los patrones
moteado grueso y fino es ms fcil de entender e interpretar.

5.4.
PATRON CENTROMERICO
Tiene como caractersticas que los ncleos se tien con puntos finos
distribuidos de manera homognea en el nucleoplasma de las clulas en
interface (fig.5). La tincin en las clulas en divisin muestra un punteado
fino localizado en la placa de la cromatina.

5.5.

PATRON NUCLEORAR

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Tiene como caracterstica una tincin intensa de los nuclolos (fig. 6). La
placa de la cromatina en las clulas en divisin se tie de manera difusa
debido a reactividad cruzada de los anticuerpos dirigidos contra los RNA
nucleolares con el ADN de la cromatina.

5.6.

PATRON LAMINAR NUCLEAR

El patrn de la lmina nuclear o laminar es aquel en el que se observa

tincin concentrada alrededor del ncleo y no se extiende hacia el
citoplasma (fig. 7). A diferencia del patrn perifrico, la placa de la
cromatina en las clulas en divisin es negativa.

5.7.

PATRON CETRIOLAR

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se identifica por la tincin intensa de los centriolos en clulas en divisin.

Las estructuras teidas se pueden identificar desde la fase G2, donde se
ven dos puntos muy juntos, y en metafase, donde se localizan en los polos
de la clula (fig. 8A). Cuando se tien los centriolos, los filamentos del huso
acromtico y las clulas en interfase tienen un patrn moteado fino. El
patrn se define como NuMA-1(del ingle s, nuclear mitotic apparatus) (fig.
8B). La tincion de los centriolos y del huso mittico sin tincin del
nucleoplasma en clulas en interfase se define como NuMA-2.

CONCLUSIONES
Los ANA son inmunoglobulinas que reconocen componentes autlogos tanto
del ncleo como del citoplasma. No obstante, en su descripcin original se
llamaba as solo a los que estaban dirigidos contra componentes del ncleo.
La determinacin de ANA mediante IFI es la principal prueba de tamizado
inicial cuando se sospecha de enfermedades autoinmunes. Sin embargo, la
presencia de ANA puede no ser necesariamente de origen autoinmune, es
decir, pueden ser naturales o infecciosos. La definicin de los diferentes
patrones de ANA determinados mediante IFI en clulas HEp-2 debe incluir el
anlisis de clulas en interfase y clulas en divisin, debido a que existen
antgenos que solo son expresados en ciertas fases del ciclo celular. Los ANA
se deben interpretar en base a valores de referencia o puntos de corte
establecidos por patrn de tincin y en el grupo tnico con el que se van a
comparar. La aplicacin de guas o algoritmos que ayudan a la identificacin
del eptope o de los eptopes que reconocen los ANA tienen impacto no solo
a nivel clnico, sino tambin econmico.

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BIBLIOGRAFIA
1. ANTICUERPOS ANTINUCLEARES, Una familia diversa. Carlos A. JavierZepeda file:///C:/Users/PC/Downloads/Lectura_ANA%20(1).pdf
2. Anticuerpos antinucleares Javier Cabiedes ~ y Carlos A. Nu nez-A
lvarez Laboratorio de Inmunologa, Departamento de Inmunologa y
Reumatologa, Instituto Nacional de Ciencias Mdicas y Nutricin
Salvador Zubiran, Mxico DF, Mxico
3. file:///C:/Users/PC/Downloads/Lectura_ANA_2%20(1).pdf
4. ANTICUERPOS
ANTI-NUCLEARES
HEp-2
(ANAHEp-2)
Inmunofluorescencia
Indirecta
CLULAS
HEp-2
file:///C:/Users/PC/Downloads/Procedimiento_IFI%20(1).pdf

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