Ao de la Diversificacin Productiva y del fortalecimiento de la Educacin

UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CALLAO

FACULTAD DE INGENIERIA AMBIENTAL Y DE RECURSOS NATURALES

IDENTIFICACION DE PROTEINAS MEDIANTE EL

RACTIVO DE BIURET
Basilio Rojas Mnica Caroline
Contreras Reynaga Kevin Irwing
Hinostroza Antonio Edilberto
Honores Suarez Milagros Sheilla
Mendoza Guevara Julia Gianella
Pintado Pilco Jean Pierre
Ruiz Castillo, Lizeth Paola

PROFESOR

: HERMAN AYALA VERA

ASIGNATURA

: BIOQUIMICA

SEMESTRE

: 2015-V

CICLO

: IV

GRUPO HORARIO
MESA

: 90-G Viernes: 3-6 pm

:1

FECHA DE ENTREGA: 27 de Febrero del 2015

Reconocimiento de protenas mediante el reactivo de Biuret

I.-Marco Terico

Son macromolculas orgnicas, constituidas bsicamente por carbono (C), hidrgeno (H),
oxgeno (O) y nitrgeno (N); aunque pueden contener tambin azufre (S) y fsforo (P) y, en
menor proporcin, hierro (Fe), cobre (Cu), magnesio (Mg), yodo (I), etc.
Estos elementos qumicos se agrupan para formar unidades estructurales llamados
aminocidos, a los cuales podramos considerar como los "ladrillos de los edificios
moleculares proteicos".
Se clasifican, de forma general, en Holoproteinas y Heteroproteinas segn estn formadas
respectivamente slo por aminocidos o bien por aminocidos ms otras molculas o
elementos adicionales no aminoaciditos.1

AMINOACIDOS
Son las unidades estructurales que constituyen las protenas. Todos los aminocidos que se
encuentran en las protenas, salvo la prolina.2
Un aminocido es una molcula orgnica con un grupo amino (-NH2) y un grupo carboxilo (COOH). Los aminocidos ms frecuentes y de mayor inters son aquellos que forman parte
de las protenas. Dos aminocidos se combinan en una reaccin de condensacin entre el
grupo amino de uno y el carboxilo del otro, liberndose una molcula de agua y formando un
enlace amida que se denomina enlace peptdico; estos dos "residuos" de aminocido forman
un dipptido. Si se une un tercer aminocido se forma un tripptido y as, sucesivamente,
hasta formar un polipptido. Esta reaccin tiene lugar de manera natural dentro de las
clulas, en los ribosomas.3

-Web 1
-Web 2
-Web 3

CLASIFICACIN DE

LAS PROTENAS.

Las protenas se clasifican en dos clases principales atendiendo a su composicin. Las

protenas simples u Holoproteinas son las que estn compuestas exclusivamente por
aminocidos. Las protenas conjugadas o Heteroproteinas son las que estn compuestas por
aminocidos y otra sustancia de naturaleza no proteica que recibe el nombre de grupo
prosttico.
Las protenas conjugadas pueden a su vez clasificarse en funcin de la naturaleza de su
grupo prosttico. As, se habla de glucoprotenas, cuando el grupo prosttico es un glcido,
lipoprotenas cuando es un lpido, metaloprotenas cuando es un ion metlico, fosfoprotenas

cuando es un grupo fosfato, etc. Otro criterio de clasificacin de las protenas es la forma
tridimensional de su molcula.
Las protenas fibrosas son de forma alargada, generalmente son insolubles en agua y suelen
tener una funcin estructural, mientras que las protenas globulares forman arrollamientos
compactos de forma globular y suelen tener funciones de naturaleza dinmica (catalticas,
de transporte, etc.)4
ESTRUCTURA PRIMARIA

La estructura primaria es la secuencia de aminocidos de la protena. Nos indica qu

aminocidos componen la cadena polipeptdica y el orden en que dichos aa. Se encuentran.
La funcin de una protena depende de su secuencia y de la forma que sta adopte.

ESTRUCTURA SECUNDARIA

La estructura secundaria es la disposicin de la secuencia de aminocidos en el espacio. Los

aa., a medida que van siendo enlazados durante la sntesis de protenas y gracias a la
capacidad de giro de sus enlaces, adquieren una disposicin espacial estable, la estructura
secundaria.

Existen dos tipos de estructura secundaria:

La (alfa)-hlice
La conformacin beta

Esta estructura se forma al enrollarse helicoidalmente sobre s misma la estructura primaria.

Se debe a la formacin de enlaces de hidrgeno entre el -C=O de un aminocido y el -NHdel cuarto aminocido que le sigue.
En esta disposicin los aa. No forman una hlice sino una cadena en forma de zigzag,
denominada disposicin en lmina plegada.
-Web 4 esta estructura secundaria la queratina de la seda o fibrona.
Presentan

ESTRUCTURA TERCIARIA

La estructura terciaria informa sobre la disposicin de la estructura secundaria de un poli

pptido al plegarse sobre s misma originando una conformacin globular.
En definitiva, es la estructura primaria la que determina cul ser la secundaria y por tanto
la terciaria.

Esta conformacin globular facilita la solubilidad en agua y as

realizar funciones de transporte , enzimticas, hormonales, etc.
Esta conformacin globular se mantiene estable gracias a la existencia de enlaces entre
los radicales R de los aminocidos. Aparecen varios tipos de enlaces:

El puente di sulfuro entre los radicales de aminocidos que tiene azufre.

Los puentes de hidrgeno

Los puentes elctricos

Las interacciones hidrfobas.

ESTRUCTURA CUATERNARIA

Esta estructura informa de la unin, mediante enlaces dbiles (no covalentes) de varias
cadenas polipeptdica con estructura terciaria, para formar un complejo proteico. Cada una
de estas cadenas polipeptdica recibe el nombre de protmero.
El nmero de protmeros vara desde dos como en la hexoquinasa, cuatro como en
la hemoglobina, o muchos como la cpsida del virus de la poliomielitis, que consta de 60
unidades protecas.5
PROPIEDADES
Especificidad
Las propiedades de las protenas dependen de la estructura tridimensional en el medio
acuoso, es decir, de los aminocidos que se disponen en su superficie, que son los que
constituyen el centro activo; tambin de los aminocidos que se disponen hacia el interior,
ya que son los que dan rigidez y forma a la protena.

Cada protena tiene una conformacin segn su estructura primaria. As, un

pequeo cambio en la secuencia de aminocidos provoca cambios en la estructura primaria,
secundaria, terciaria, y por tanto prdida de la actividad biolgica.

Solubilidad
-Web 5
Las protenas globulares son solubles en agua, debido a que sus radicales polares o hidrfilos
se sitan hacia el exterior, formando puentes de hidrgeno con el agua, constituyendo una
capa de solvatacin. Esta solubilidad vara dependiendo del tamao, de la forma, de la
disposicin de los radicales y del pH.
Desnaturalizacin
Prdida de la estructura tridimensional o conformacin, y por tanto tambin de la actividad
biolgica. Se produce al variar la temperatura, presin, pH, electronegatividad, etc. Esto
provoca la rotura de los puentes de hidrgeno que mantienen las estructuras secundaria y
terciaria, y las protenas se convierten en fibras insolubles en agua. Si las condiciones son
suaves, el proceso es reversible, y si el cambio es ms drstico, es irreversible. 6
REACTIVO DE BIURET
El reactivo de Biuret est hecho de hidrxido de potasio y sulfato de cobre hidratado, junto
con tartrato de sodio y potasio. Tartrato de sodio y potasio se aadi a lo complejo y
estabilizar el reactivo ion cprico cambia de azul a violeta en presencia de protenas, azul a
rosa cuando se combina con polipptidos de cadena corta.
No todas las pruebas de Biuret requieren el reactivo de Biuret. El reactivo se utiliza
comnmente en un ensayo de protenas de Biuret, un ensayo colorimtrico se utiliza para
determinar la concentracin de protenas-tales como UV-VIS a 540 nm de longitud de onda.
La prueba de Biuret es una prueba de producto qumico utilizado para la deteccin de la
presencia de enlaces peptdicos. En la presencia de pptidos, un ion de cobre forma
complejos de coordinacin de color violeta en una solucin alcalina. Varias variantes de la
prueba han sido desarrolladas, tales como el ensayo de BCA y el ensayo de Lowry
modificado.
La reaccin de Biuret se puede utilizar para evaluar la concentracin de protenas debido a
los enlaces peptdicos se producen con la misma frecuencia por cada aminocido en el
pptido. La intensidad del color, y por lo tanto la absorcin a 540 nm, es directamente
proporcional a la concentracin de protena, de acuerdo con la ley de Beer-Lambert.
A pesar de su nombre, el reactivo de hecho no contiene Biuret. La prueba se llama as
porque tambin da una reaccin positiva a los bonos de tipo pptido de la molcula de
Biuret.7

-Web 6
-Web 7

II.-Parte Experimental
2.1.- Objetivo general:
Reconocer protenas mediante el reactivo de Biuret.
2.2.- Materiales y reactivos:

De vidrio:

2
4
4
1

Tubos de ensayos 25mL.

Pipetas de 10mL.
Vaso precipitado de 200ml
matraz

De metal:
-

Rejilla

Otros:
-

Lapicero
Hojas bond
Cmara

Reactivos

Biuret
Muestra 1
Muestra 2

Experimento N1:

Objetivo especfico:
Reconocer si la muestra 1 es una protena a travs de su reaccin con el reactivo de Biuret.
1

Procedimiento

Coger un ml de muestra y colocarla en un tubo de ensayo.

2
3

Agregar 5 gotas del reactivo de Biuret

Agitar

1
2
3

Observaciones

Tener cuidado para evitar ms cantidad de la muestra

Echar ms reactivo en el caso que demore en reaccionar
No presenta precipitado, si reacciona. Presenta un color violeta

Experimento N2:

Objetivo especfico:
Reconocer si la muestra 2 es una protena a travs de su reaccin con el reactivo de Biuret.

Procedimiento

Observaciones

1. Coger un ml de muestra y colocarla en un tubo de ensayo.

2. Agregar 5 gotas del reactivo de Biuret
3. Agitar

1. Tener cuidado para evitar ms cantidad de la muestra

2. Diluir la muestra, y colocar dos gotas ms de reactivo para observar mejor la reaccin.
3. Si reacciona. Precipita un color violeta y en el fondo del tubo una tonalidad azul cielo.

III.-RESULTADOS
REACCION EN LA MUESTRA 1
BIURET
MUESTRA 1

MUESTRA 2

BIURET
+

REACCION EN LA MUESTRA 2

3.1.- Conclusin

La muestra 1 posee contenido proteico, por lo que se sospecha de una protena.

La muestra 2 tambin posee contenido proteico, por lo que se sospecha de una protenas.

3.2.- Recomendaciones:

Cerciorarnos que los materiales estn limpios y secos, es especial los tubos de ensayo y pipeta que son con quienes ms
trabajamos.
Verificar que los materiales estn en perfecto estado.
Al querer identificar una sustancia por el olor, debemos de ventilar hacia nuestro olfato, mas no olerlo directamente del
tubo.
Cerciorarnos de que los reactivos que se utilizaran estn completos en el laboratorio.

3.3.-Referenciales:
1)http://www.aula21.net/nutricion/proteinas.htm
2)http://catedras.quimica.unlp.edu.ar/qo3/Apuntes/Biuret.pdf
3) http://www.buenastareas.com/ensayos/Desnaturalizaci%C3%B3n-e-Hidr%C3%B3lisis-DeProte%C3%ADnas/49489.html
4) http://es.slideshare.net/simargue/informe-de-quimica-desnaturalizacion-proteinas
5)http://web.educastur.princast.es/proyectos/biogeo_ov/2BCH/B1_BIOQUIMICA/t15_PROTEIN
AS/informacion.htm
6) http://ocw.unican.es/ciencias-de-la-salud/bioquimica-estructural-y-metabolica/materialesde-clase/Tema%203.%20Proteinas.%20Composicion%20y%20estructura.pdf
7) http://campodocs.com/articulos-utiles/article_104651.html