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RESUMEN
En esta revisin, vamos a ofrecer un breve recordatorio de los fenmenos epigenticos en general, y la
metilacin del ADN en particular. A continuacin, se subrayan las caractersticas de la organizacin in vivo del
genoma que limitan la aplicabilidad de los resultados in vitro. Nosotros utilizaremos varios ejemplos para
sealar las conexiones entre la metilacin del ADN y la arquitectura nuclear. Finalmente, vamos a esbozar
algunas de las esperanzas y desafos para la investigacin futura en el campo. El estudio de la metilacin del
ADN, sus efectores, y sus roles, ilustra la complementariedad de enfoques in vitro y la biologa celular.
1. Introduccin
1.1. La metilacin del ADN es una marca
epigentica esencial que controla la
expresin de genes
2. La metilacin del ADN es una arquetpica
marca epigentica Est a cargo del
material gentico, pero no influye en su
secuencia. Puede regular las actividades
genmicas, y puede ser mantenida a
travs de la mitosis y la meiosis.
3. La metilacin del ADN es esencial en los
mamferos: su prdida conduce a la
detencin del crecimiento o apoptosis en
las clulas normales as como en lneas
de cncer].La presencia de la metilacin
del ADN es absolutamente requerida
para el desarrollo embrionario en ratn.
El papel clave de la metilacin del ADN
es el control de la expresin gnica, y
secuencias metiladas sufren represin
transcriptional.
4. Aqu vamos a revisar los hallazgos
recientes y conceptos sobre el control de
la expresin gnica mediante la
metilacin del ADN, con nfasis en los
aspectos biolgicos celulares y una
restriccin a las clulas de mamferos.
Nosotros estableceremos primero el
fondo con algunos recordatorios acerca
de los actores, los efectores y los
objetivos de la metilacin del ADN.
5.
9.
10.
11. Fig. 1. La metilacin de las citosinas. (A) La naturaleza qumica de la metilacin del ADN. Bosquejo
de una citosina y su contraparte modificada. (B) Los grupos metilo en citosinas modificadas son
accesibles en el surco mayor.Las dos hebras de la hlice de ADN son de color azul y prpura, y los
grupos metilo se destacan en rojo. Dos vistas del mismo ADN se muestran, se diferencian por una
rotacin de 90.
12. La marca de metilo se traducida en la
represin transcripcional por la accin de
protenas que reconocen ADN metilado e
inhiben la expresin del gen mediante la
expresan
diferencialmente
del
cromosoma maternal y la paterna
cromosoma: Ellos son los principales
reguladores de desarrollo embrinico y
vida adulta. En la mayora de los casos el
alelo inactivo est marcada por la
metilacin del ADN, y la expresin
monoallica se pierde en ausencia de
metilacin. Como una acotacin, la data
reciente indica que muchos genes
pueden expresarse monoallicamente en
las clulas somticas, pero an no est
claro si esto depende en absoluto de la
metilacin del ADN].Segundo: los
transposones y otras secuencias
repetidas que constituyen una gran
fraccin del genoma de los mamferos.
Tercero: un nmero de genes estn
metilados en una manera especfica de
tejido. Un subconjunto interesante de
ellos son el cncer/ antgenos de
testculo (C / T), que son no metilados y
expresados en el testculo, y metilados y
reprimidos en todos los dems tejidos.
16. La metilacin del ADN est desregulada
en el cncer (Fig.2).Las clulas
tumorales a menudo tienen un patrn
anormal de la metilacin del ADN donde
algunos genes supresores de tumores
son metilados e inactivos. Por el
contrario,
algunas
secuencias
normalmente metiladas, tales como ADN
repetido, genes impresos, y C/T
antgenos, pueden llegar a ser
desmetilados (Fig. 2). Metilacin del ADN
anormal es un evento causal temprano
durante la transformacin celular.
Agentes desmetilantes se pueden
restablecer la expresin de los genes
supresores de tumores silenciados y han
sido aprobados para uso clnico contra
algunas leucemias.
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18.
19. Fig. 2. El loci que se somete a la metilacin del ADN en mamferos. Al menos tres tipos diferentes de
loci pueden ser metilados en las clulas normales (mitad izquierda de la figura).Genes supresores de
tumores, as como la gran mayora de los genes con un promotor isla CpG, no son metilados. En las
clulas tumorales (media derecha), las secuencias repetidas se convierten en desmetiladas, los
genes impresos se convierten de forma desmetilados aberrantemente (o metilados en ambos alelos,
una situacin no representado aqu). Algunos genes que eran no metilados pueden llegar a ser
metilados y transcripcionalmente silenciados, y esta es una causa frecuente para la inactivacin de
genes supresores de tumores. Finalmente algunos genes que estaban metilados pierden la marca,
como el cncer/testculo (C / T) antgenos.
20. En experimentos in vitro no se
reproducen algunas propiedades del
ncleo
21. En el trabajo in vitro ha sido crucial en la
elaboracin de los diferentes elementos
de regulacin del gen por metilacin del
ADN. Se ha dado informacin sobre los
mecanismos de metilacin del ADN, las
propiedades de unin de protenas metilvinculantes, y la forma en que estos
factores regulan la expresin gnica.
22. Sin embargo debemos tener en cuenta
que el interior del ncleo se diferencia de
un tubo de ensayo en varios aspectos
importantes. Mencionaremos
tres. Primero, el entorno nuclear est
densamente lleno de macromolculas. La
32. DN
MT3
b
33.
34.
35. MB
D
37. SRA
38. MeC
P2
39. Kaiso
40. UHR
F1
41. MB
D1
42. ZBTB4
43. UHR
F2
44. MB
D2
45. ZBTB38
46.
48.
49.
26. De
novo
27. Mantenimient
o
28. Cofa
ctor
47. MB
D4
29. DN
MT3
a
30. DNMT1
31. DN
MT3
L
52.
56.
57. Fig. 3. Diferentes parmetros regulan las interacciones de protena ADN in vitro e in vivo. (A) in vitro,
la interaccin involucra slo dos actores, y se determina slo por su concentracin y unin afinidad.
(B) En el ncleo de una clula, la situacin es mucho ms compleja. La protena de unin al ADN
puede interactuar con organismos o puntos de referencia nucleares, como la envoltura nuclear o el
nuclolo. El locus de ADN es parte de un cromosoma y puede ser ms o menos accesible a la
protena.
58. Kaiso: un ejemplo de regulacin por ir
y venir nucleo-citoplsmico
59. La distribucin nucleo/citoplasmica de
Kaiso es variable, y responde a las
seales intracelulares. De hecho, la
activacin de la va Wnt se correlaciona
con un movimiento de Kaiso fuera del
ncleo y en l. La posibilidad de que la
va Wnt podra, a travs de su accin
sobre Kaiso, regular la expresin de
genes metilados es tentadora pero an
no ha sido confirmada. Por ejemplo,
todava no se sabe si la piscina de Kaiso
que lanzaderas en y fuera del ncleo es
la piscina que se dedica a la unin de
64.
65. Fig. 4. La localizacin de la protena de unin-metil ZBTB4 en clulas de ratn. (A) Fibroblastos de
ratn 3T3 fueron transfectados transitoriamente con un vector de expresin para ZBTB4 fusionado a
la protena verde fluorescente GFP. Panel superior: el ncleo, se tieron con DAPI. Panel inferior: la
seal de fluorescencia verde, que colocalizacon los focos DAPI-denso.(B) Esquema interpretativo.
Los focos DAPI denso, conocidos como chromocentros, corresponden a la agrupacin de
pericentromricas repeticiones (flechas) de varios cromosomas. Estas repeticiones estn
fuertemente metilados (crculos rojos).
66. Queda mucho por aprender acerca de
la dinmica de las protenas de metilunin
67. La dinmica in vivo de algunas
heterocromatina de protenas ha sido
bien estudiada. el trabajo en HP1 produjo
el sorprendente resultado de que, a
pesar de que la heterocromatina es
funcionalmente estable, las protenas de
heterocromatina mismas estn en un
rpido reflujo: se intercambian en un de
los dominios de la cromatina fuera
rpidamente. Para HP1, 50% recobraron
despus fotoblanqueadorr de las
regiones heterochromaticas ocurrieron en
alrededor de 2,5 s. El conocimiento de
estos
parmetros
cinticos
da
informacin sobre el mecanismo por el
cual estas protenas actan, y los
posibles medios por los cuales pueden
ser reguladas.
68. Por el contrario, se sabe relativamente
poco sobre la dinmica de las protenas
de unin de metilo.
69. La excepcin es MeCP2, que ha sido
estudiado por FRAP (Fluorescencia de
recuperacin Despus Photobleaching)
en clulas de ratn vivo. Dos poblaciones
de MeCP2 puede ser identificadas. Una,
localizada en el nucleoplasma, es
altamente dinmica con un t1 / 2 de 0,1
s, lo que sugiere que hay una piscina de
protena no unida. La segunda poblacin
se une a los cromocentros. All, su
tiempo de residencia es mayor (t1 / 2 =
25 ss, coherente con los informes
anteriores. Esto es mucho ms largo que
el tiempo de residencia de HP1, y puede
reflejar interacciones adicionales que
retienen la protena de la cromatina. El
otro MBDs no se ha estudiado de manera
similar y, a lo mejor de nuestro
conocimiento, no hay informacin an
77.
78.
79. Fig. 5. Dos eventos de reclutamiento aseguran la confianza de remetilacin ADN despus de la
replicacin. El panel izquierdo. A. Como se replica el ADN, los sitios que fueron metilados
previamente simtricamente (crculo rojo lleno) se convierten en hemimetilado (rojo semicrculo). El
DNMT1 ADN metiltransferasa interacta con la protena PCNA de replicacin, que se desliza a lo
largo del ADN. B. A medida que el tenedor de replicacin avanza, DNMT1 se transfiere a los sitios
hemimetilados, y nueva protena se carga sobre PCNA. C. DNMT1 remetila el sitio hemimetilado se
ve obligado a D. Por ltimo, la carga DNMT1 puede realizar un seguimiento a lo largo del genoma
para remetilar sitios que han sido ignorados. Panel derecho. Un segundo mecanismo para la
orientacin DNMT1 a los sitios hemimetilados no depende de la replicacin del ADN (A). En su lugar,
se trata de la protena UHRF1, que tiene especfica afinidad para los sitios hemimetilados (B), y que
puede reclutar directamente DNMT1 (C).UHRF1 ya no interacta con los sitios totalmente metilados
recreados por DNMT1 (D).
80. 8. Es MeCP2 un componente
estructural del ncleo en clulas
diferenciadas?
81. La cantidad de MeCP2 en las clulas
aumenta a medida que se diferencian, y
alcanza niveles sorprendentemente
altos. Se ha estimado que hay un
promedio de 6 10 6 molculas de