UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERA

Facultad de Ingeniera Ambiental

MICROBIOLOGA SANITARIA I

INFORME DE LABORATORIO N8
Ttulo:
CONTROL MICROBIOLGICO DE AGUAS. DETERMINACIN
DEL NMP DE COLIFORME TOTALES Y COLIFORMES
TERMOTOLERANTES POR LA TCNICA DE TUBOS MLTIPLES.
RECUENTO DE BACTERIAS HETERTROFAS EN PLACA.
Docente:
MSc. Martn Martnez Vila
Integrantes:
Vsquez Pea Julian Gustavo 20132141E
Flores Crdenas Karen Kimberly 20123502I

2015

INFORME DE LABORATORIO N8

I.

2015

OBJETIVOS
Determinar el nmero de microorganismos existentes en el agua de muetra.

II.

MARCO TEORICO

Bacterias Indicadoras de Contaminacin

Las condiciones bacteriolgicas del agua son fundamentales desde el punto de vista
sanitario. La norma bacteriolgica de calidad establece que el agua debe estar exenta de
patgenos de origen entrico y parasitario intestinal que son los responsables de transmitir
enfermedades como salmonelosis, shigelosis, amebiasis, etc.
Los microorganismos indicadores de contaminacin deben cumplir los siguientes
requisitos: fciles de aislar y crecer en el laboratorio; ser relativamente inocuos para el
hombre y animales; y presencia en agua relacionada, cualitativas y cuantitativamente con
la de otros microorganismos patgenos de aislamiento ms difcil. Tres tipos de bacterias
califican a tal fin:
Coliformes fecales: indican contaminacin fecal.
Aerobias mesfilas: determinan efectividad del tratamiento de aguas.
Pseudomonas: sealan deterioro en la calidad del agua o una recontaminacin.
Desde el punto de vista bacteriolgico, para definir la potabilidad del agua, es preciso
investigar bacterias aerobias mesfilas y, coliformes totales y fecales.
La gran sensibilidad de las bacterias aerobias msfilas a los agentes de los agentes de
cloracin, las ubica como indicadoras de la eficacia del tratamiento de potabilizacin del
agua.
Las bacterias coliformes habitan el tracto intestinal de mamferos y aves, y se caracterizan
por su capacidad de fermentar lactosa a 35C. Los gneros que componen este grupo son
Escherichia, Klebsiella, Enterobacter, Serratia, Citrobacter y Edwardsiella. Todas pueden
existir como saprofitas independientemente, o como microorganismos intestinales,
excepto el gnero Escherichia cuyo origen es slo fecal.
Esto ha llevado a distinguir entre coliformes totales (grupo que incluye a todos los
coliformes de cualquier origen) y coliformes fecales (trmino que designa a los coliformes

INFORME DE LABORATORIO N8

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de origen exclusivamente intestinal) con capacidad de fermentar lactosa tambin a 44,5C.

La existencia de una contaminacin microbiolgica de origen fecal se restringe a la
presencia de coliformes fecales, mientras que la presencia de coliformes totales que
desarrollan a 35C, slo indica existencia de contaminacin, sin asegurar su origen.
Los enterococos fecales cuyo desarrollo ocurre a 35C se usan como indicadores
complementarios de contaminacin fecal.
La validez de todo examen bacteriolgico se apoya en una apropiada toma de muestra
(recipiente estril de boca ancha y metodologa precisa), y en las adecuadas condiciones
de transporte desde el lugar de la fuente de agua hacia el laboratorio (refrigeracin,
tiempo)
El sistema de conservacin de la muestra debe ser confiable, y la misma analizada
inmediatamente o al cabo de un corto perodo entre extraccin y anlisis.
El anlisis cuantitativo de bacterias indicadoras de contaminacin en una muestra de agua
puede realizarse por dos metodologas diferentes:
Recuento directo de microorganismos cultivables por siembra de la muestra sobre
o en un medio de cultivo agarizado.
Recuento indirecto (basado en clculos estadsticos) despus de sembrar diluciones
seriadas de la muestra en medios de cultivos lquidos especficos. Se considera, al
cabo de una incubacin adecuada, los nmeros de cultivos positivos y
negativos. Esta metodologa se denomina Tcnica de los Tubos Mltiples y los
resultados se expresan como nmero ms probable (NMP) de microorganismos.
Adems de otros mtodos, se puede recurrir a aquellos en los que se aplica biologa
molecular como por ejemplo, la tcnica de hibridacin in situ por fluorescencia (FISH)
utilizando sondas marcadas en base a secuencia nucleotdica del gen 16S.
En este captulo slo se describir el primer mtodo en el cual la muestra se concentra por
filtracin sobre membrana, denominada Tcnica de la Membrana Filtrante. En ella, se
procede a filtrar un volumen determinado de muestra (normalmente 100 mL) a travs de
membranas de steres de celulosa generalmente con dimetro de poros de 0,45 m y en
algunos casos de 0,22 m. Posteriormente, la membrana se deposita sobre un medio de
cultivo selectivo y bajo condiciones favorables (temperatura y tiempo de incubacin) y
sobre la membrana desarrollan colonias aisladas con aspectos caractersticos que permiten
la identificacin y el recuento. Conociendo el volumen de muestra filtrada es posible
determinar el nmero de UFC por unidad de volumen. La obtencin de resultados

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confiables requiere un intercambio de nutrientes a travs de los poros de la membrana, por

ello se debe evitar la filtracin de aguas con alto contenido de material en suspensin que
pueden obstruir las membranas. Adems, el nmero de colonias desarrolladas sobre la
membrana debe ser inferior a un determinado valor (variable segn los microorganismos
y la composicin del medio que condiciona el tamao de las colonias) generalmente
comprendido entre 80 y 100. A valores superiores, la proximidad de las colonias puede
conducir a resultados inexactos. Los medios de cultivos usados, las temperaturas y tiempos
de incubacin, y el color de las colonias tpicas de bacterias indicadoras de contaminacin
se detallan en la tabla 5.

Medio EC:
Uso
Medio utilizado para el recuento de coliformes totales, coliformes fecales y Escherichia coli
en agua, alimentos y otros materiales.
FRMULA (en gramos por litro)
E. C. Medio
Triptena...........................20.0.

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Lactosa..............................5.0.
Sales biliares N 3..............1.9.
Fosfato dipotsico ............4.0.
Fosfato monopotsico ......1.5.
Cloruro de sodio ..................5.0.
pH final: 6.9 0.2
Instrucciones
Suspender 37,4 g del polvo en 1 litro de agua purificada. Dejar reposar 5 minutos. Calentar
con agitacin frecuente y llevar a ebullicin para su total disolucin. Distribuir en tubos de
ensayo que contengan campanitas de Durham. Esterilizar en autoclave a 121C durante 15
minutos.
Caractersticas del producto
Medio de cultivo deshidratado: color beige claro, homogneo, libre deslizamiento.
Medio de cultivo preparado: color mbar claro.

Verde Brillante Bilis

Uso
Este medio est recomendado para el recuento de coliformes totales y fecales, por la
tcnica del nmero ms probable.
Fundamento
En el medio de cultivo, la peptona aporta los nutrientes necesarios para el adecuado
desarrollo bacteriano, la bilis y el verde brillante son los agentes selectivos que inhiben el
desarrollo de bacterias Gram positivas y Gram negativas a excepcin de coliformes, y la
lactosa es el hidrato de carbono fermentable. Es una propiedad del grupo coliforme, la
fermentacin de la lactosa con produccin de cido y gas.
FRMULA (en gramos por litro)
Bilis de buey deshidratada.............................20.0
Lactosa............................................................10.0
Peptona............................................................10.0
Verde brillante...................................................0,0133
pH final: 7.2 0.2
Instrucciones
Suspender 40 g del polvo en 1 litro de agua purificada. Disolver y distribuir 10 ml por tubo
con campanita de Durham. Calentar a 100 C durante 30 minutos. No esterilizar en
autoclave.
Caractersticas del producto

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Medio de cultivo deshidratado: color verde, homogneo, libre deslizamiento.

Medio de cultivo preparado: color verde.

Caldo LST
Medio rico en nutrientes, que permite un rpido desarrollo de los microorganismos
fermentadores de la lactosa, an de los fermentadores lentos. La triptosa es la fuente de
nitrgeno, vitaminas, minerales y aminocidos, la lactosa es el hidrato de carbono
fermentable, las sales de fosfato proveen un sistema buffer, y el cloruro de sodio mantiene
el balance osmtico. Es un medio selectivo, ya que el lauril sulfato de sodio inhibe el
desarrollo de la flora acompaante. Por la fermentacin de la lactosa, se produce cido y
gas, ste ltimo se evidencia al utilizar las campanas Durham.

III.

MATERIALES Y EQUIPOS

Nomenclatura de Coliformes Totales / Coliformes Fecales

Incubadora a 35C
Autoclave
Bao Mara 44.5 0.5C
Frascos con agua de dilucin (frascos con tapa rosca con 90ml de agua peptonada)
Caldo Lauril sulfatado triptosa (LST) Doble concentracin 2x, volumen 10ml en
tubos 16150 con tubos Durham invertidos 7510ml.
Caldo EC volumen de 10ml en tubos de 16150 con tubos Durham invertidos
7510ml.
Pipetas estriles 10ml.
Pipetas estriles 1ml.
Caldo Lauril sulfatado triptosa (LST) Simple concentrado (x) volumen 10ml en
tubos de 16150 ocn tubos Durham invertidos.

Recuento en Placa (BM)

Agar TSA.
Placas Petri grandes.
Pipetas.

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IV.

2015

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

Numeracion de Coliformes totales / Coliformes fecales:

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2015

Recuento de Bacterias Hetertrofas:

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V.

2015

RESULTADOS

DETERMINACION DEL NMP DE COLIFORMES:

Resultados de la prueba presuntiva
DILUCIONES

RESULTADOS
Formacin de gas en los 3 tubos

10 (Doble concentracin [2X])

Formacin de gas en los 3 tubos
1 (Concentracin simple [X])
Formacin de gas en los 3 tubos
10-1
Formacin de gas en los 3 tubos
10-2
Formacin de gas en los 3 tubos
10-3

Resultados de la prueba confirmativa3

FORMACION DE GAS EN CALDO BRILA
DILUCIONES

RESULTADOS

10 [2X]

Formacin de gas en los 3 tubos

1[X]

Formacin de gas en los 3 tubos

10-1

Formacin de gas en los 3 tubos

10-2

Formacin de gas en los 3 tubos

10-3

Formacin de gas en un 1 tubo

FORMACION DE GAS EN CALDO EC:

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DILUCIONES

RESULTADOS

10 [2X]

Formacin de gas en 2 tubos

1[X]

Formacin de gas en 2 tubos

10-1

Formacin de gas en los 3 tubos

10-2

Formacin de gas en los 3 tubos

10-3

Formacin de gas en un 1 tubo

2015

RECUENTO DE BACTERIAS HETEROTROFAS

Dilucin
N de colonias

VI.

Muestra original
220

101
44

102
21

103
-

10-4
-

CONCLUSIONES

- Se lleg evidenciar la presencia de coliformes totales al tener resultados positivos en los tubos
del caldo brila.
- Se lleg evidenciar la presencia de coliformes fecales al tener resultados positivos en los tubos
deld caldo EC.

VII.
-

RECOMENDACIONES

Todos los materiales a trabajar debern ser estriles

Todo proceso deber ser en presencia del mechero
La muestra debe ser tomada en un recipiente estril
Prestar atencin hacia los tubos positivos (con aire)

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2015

VIII. BIBLIOGRAFIA

o MANUAL PRACTICO DE MICROBIOLOGIA MASSON Medios de cultivo

pg. 7-10
o http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/lauril.htm

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