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2.
3.
Sin embargo, esta tcnica tiene limitaciones sobre todo para estudiar
aguas con elevada turbidez o que contengan bacterias No Coliformes.
Para estas aguas, y tambin en caso de que no se haya utilizado
anteriormente la tcnica del filtro de membrana, es preferible llevar a
cabo pruebas paralelas mediante la tcnica de fermentacin en tubos
mltiples para demostrar la aplicabilidad y comparabilidad de aqulla.
Principio del mtodo:
Recuento de Coliformes en Filtro de Membranas (Mtodo):
Se hace pasar al vaco parte de la muestra por una membrana de
filtracin de acetatos de celulosa con poros y dimetro de 0.45 m que
capte la bacteria, en tanto que permita el paso libre del H 2O.,
la membrana de filtracin se coloca aspticamente en una caja de petri
en medio de cultivo nutritivo, o en un cojincillo absorbente saturado con
un medio de cultivo nutritivo, se incuba, se examina la membrana con
microscopio de poca potencia y se cuentan las colonias.
MARCO TERICO
Los coliformes totales son las Enterobacteriaceae lactosa-positivas y
constituyen un grupo de bacterias que se definen ms por las pruebas
usadas para su aislamiento que por criterios taxonmicos. Pertenecen a
la familia Enterobacteriaceae y se caracterizan por su capacidad para
fermentar la lactosa con produccin de cido y gas, ms o menos
rpidamente, en un periodo de 48 horas y con una temperatura de
incubacin
comprendida
entre
30-37C.
Son bacilos gramnegativos, aerobios y anaerobios facultativos, no
esporulados. Del grupo <<coliforme>> forman parte varios gneros:
Escherichia, Enterobacter, Klebsiella, Citrobacter, etc. Se encuentran en
el intestino del hombre y de los animales, pero tambin en otros
ambientes:
agua,
suelo,
plantas,
cscara
de
huevo,
etc.
Una elevada proporcin de los coliformes que existen en los sistemas de
distribucin no se debe a un fallo en el tratamiento en la planta, sino a
un recrecimiento de las bacterias en las conducciones. Dado que es
difcil distinguir entre recrecimiento de coliformes y nuevas
contaminaciones, se admite que todas las apariciones de coliformes son
nuevas contaminaciones, mientras no se demuestre lo contrario.
Dentro del grupo de los coliformes totales existe un subgrupo que es el
de los Coliformes fecales. Los coliformes fecales son coliformes totales
que adems fermentan la lactosa con produccin de cido y gas en 24-
Metodologa
Determinacin de Coliformes totales y coliformes fecales por la
metodologa de Filtro de Membrana
A. Procedimiento para la preparacin de los materiales y equipos a
utilizar.
El equipo de filtracin debe estar esterilizado al comienzo de cada serie
de filtraciones que pueden ser 30 o ms muestras. Una filtracin en
serie se considera interrumpida si hay un intervalo de 30 minutos o ms
entre las filtraciones de las muestras.
Agua
Agua
Agua
Agua
residual
residual
residual
residual
cruda
efluente primario
efluente secundario
efluente terciario
Volumen necesario
10- 10- 10- 10-
10-
10-
10-
x
x
x
x
X
X
X
x
x
x
x
10-2
10 ml
10-3
10 ml
10-4
10 ml
90 ml de
dilucin
amortigua
da
Muestra
de agua
cruda
Volumen a filtrar
90 ml de
dilucin
amortigua
da
10 ml
90 ml de
dilucin
amortigua
da
10 ml
90 ml de
dilucin
amortigua
da
10 ml
10 ml
Equipo de filtracin
estril
Transferir la membrana
utilizando pinzas estriles
Volumen de
muestra
original
filtrada 0.1
ml
35
C
Volumen de
muestra
original
filtrada
0.001 ml
Volumen de
muestra
original
filtrada 0.01
ml
44
C
35
C
44
C
35
C
Volumen de
muestra
original
filtrada
0.0001 ml
44
C
35
C
44
C
dilucin Resultados
2 diluciones X 90 ml
=180 ml
180ml
+
800ml
(dilacin =980ml
amortiguadora para lavar cada
filtro)
980 ml + 20 de excedente
=1000ml
Solucin stock A
Fosfato didico 34g
de potasio
Agua destilada
Solucin stock B
Sulfato
de 50g
magnesio
heptahidratado
Aguas destilada 1000ml
1000ml
UFC/100ml
CT (37C)
Incontable
UFC/100ml
CF(44C)
Incontable
10-2
Incontable
Incontable
-3
10
24 colonias
8 colonias
= 24,000 UFC/100ml de = 8,000 UFC/100ml de
CT.
CF
10-4
Incontable
5 colonias
= 5,000 UFC/100 ml de
CF
UFC/100ml
CT (37C)
Incontable
UFC/100ml
CF (44C)
Incontable
10-2
Incontable
Incontable
10-3
Incontable
Incontable
10-4
60 colonias
CT
=
UFC/100ml
51 colonias
600,000 CF= 510,000 UFC/100ml
ANLISIS DE RESULTADOS
Recuento de las colonias Tras la incubacin, se observan las colonias
bacterianas sobre la superficie del agar. Cada colonia representa a una
unidad formadora de colonia (UFC). Usualmente una UFC se corresponde
con una clula viable.
Cuando se obtienen recuentos de ms de 200 colonias sobre una misma
membrana pueden dar resultados errneos debido a la superpoblacin,
ya que lo que aparece como una colonia puede ser originado por varias
bacterias bajo condiciones de hacinamiento
Cuestionario
1. Cul es el uso recomendado de los filtros de membrana?
Se debe utilizar filtros de membrana con un diametro de poro que
permita una completa retencin de las bacterias colifotmes. Solo se
Conclusin
El conteo
diferencia
iguales y
coliformes
Concepto
Ponderacin
1.
1 punto
2.
1 punto
4.
1 punto
5.
2 puntos
7.
1 punto
1 punto
9.
1 punto
10.
0.5 puntos
Total
Observaciones:
0.5 puntos
1 punto
10
Calificacin
Universidad Tecnolgica de
Puebla
Carrera: Qumica rea Tecnologa Ambiental
Grupo: A
13-agosto- 2013