Efecto Inhibitorio

Biblioteca Digital.
Oficina de Sistemas e Informatica - UNT
UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

FACULTAD DE MEDICINA
IN
FO
R
MA
TI
CA
ESCUELA DE ESTOMATOLOGA
EFECTO INHIBITORIO in vitro DEL EXTRACTO ETANLICO DE
MA
S
Caesalpinia Spinosa TAYA SOBRE CEPAS DE Enterococcus Faecalis

ATCC 29212.
TE
TESIS
SI
S
PARA OPTAR EL GRADO DE

BACHILLER EN ESTOMATOLOGA
DE
AUTOR
OF
IC
IN
CINTYA LISET FLORES ARMAS

ASESOR
MG. GUSTAVO GUARDIA MNDEZ.

CO-ASESOR
DRA. ELVA MEJIA DELGADO.
TRUJILLO PER
1
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Per.
Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/
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RESUMEN
CA
El objetivo del presente estudio de tipo experimental fue determinar el efecto
MA
TI
inhibidor in vitro del extracto etanlico de vainas de Caesalpinia spinosa (Taya)

frente a cepas de Enterococcus faecalis. Se realiz la prueba de susceptibilidad,
utilizando el mtodo de difusin en discos. Las cepas de E. faecalis fueron sembradas
FO
R
en placas que contenan medio de cultivo Mueller Hinton, se colocaron discos con las
diferentes concentraciones del extracto etanlico de Taya. Las placas se incubaron a
IN
37 0C midindose los halos con una regla vernier despus de 24 horas; todos los
MA
S
discos presentaron halo de inhibicin, y los tamaos de estos aumentaron en relacin

directamente proporcional a las concentraciones utilizadas. Se emple tambin el
TE
Mtodo de dilucin en tubos, ensayando concentraciones de 60%, 40%, 20% y 10%

del extracto etanlico de vainas de C. spinosa; a los cuales se le agreg el inculo de
SI
S
E. faecalis. Se llevo a estufa a 37C por 24 horas, luego se sembr en placas con
DE
Agar Mueller Hinton para determinar las Unidades Formadoras de Colonias (UFC).
Despus de 48 horas se realiz el conteo de UFC. Todas las concentraciones
presentaron efecto inhibitorio del crecimiento de E. faecalis. La concentracin
IN
mnima inhibitoria hallada fue la del 40 %.
OF
IC
Se concluye que el extracto etanlico de vainas de Caesalpinia spinosa taya posee

actividad inhibitoria in vitro sobre el crecimiento de cepas de Enterococcus faecalis.
Palabras clave: Caesalpinia spinosa, Enterococcus faecalis, Concentracin Mnima
Inhibitoria, Unidades Formadoras de Colonia
2
ABSTRACT
CA
The aim of this experimental study was to determine the inhibitory effect in
MA
TI
vitro of the etanolic extract pods Caesalpinia spinosa (Taya) against strains of
Enterococcus faecalis. The susceptibility test was made, using the method of
dissemination in discs. The strains of E. faecalis were sown in plates
FO
R
containing culture medium Mueller Hinton, and placed discs with different
IN
concentrations of the ethanolic extract of Taya. These were incubated at 370C

measured halos with a vernier rule after 24 hours; all discs presented halo of
MA
S
inhibition, and sizes of these increased in relation directly proportional to the

concentrations used. Employment is also the method of dilution in tubes,
TE
tested concentrations of 60 %, 40 %, 20% and 10% of the ethanolic extract of

pods of C. spinosa; which was added the inoculum of E. faecalis.
SI
S
The minimum inhibitory concentration found was 40 %.
DE
The conclusion of this study is that the ethanolic extract from pods of
Caesalpinia spinosa "taya" has in vitro inhibitory activity on the growth of
strains of Enterococcus faecalis.
IC
IN
Key Words: Caesalpinia spinosa, Enterococcus faecalis, Minimum
OF
Inhibitory Concentration, Colony Forming Units
3
I.
INTRODUCCIN
CA
Durante el tratamiento de conductos radiculares el objetivo de la preparacin
MA
TI
biomecnica es limpiar y modelar adecuadamente el conducto radicular antes de la

obturacin. Sin embargo, en muchos casos donde se realiza una necropulpectoma
los conductos radiculares muestran bacterias an despus de una meticulosa
IN
FO
R
preparacin quirrgica de conductos radiculares.1
Estos microorganismos conducen al fracaso del tratamiento endodntico, as,
MA
S
muestras de dientes obturados con frecuencia presentan bacterias facultativas Grampositivas que incluyen Enterococos, Estreptococos y Lactobacilos, presentndose una
TE
periodontitis apical persistente. 2
SI
S
Baumgartner y cols.19923, quienes estudiaron las bacterias que se aislaban en los
DE
5mm apicales de dientes con lesin periapical. Encontraron ms de 50 especies de

bacterias de las cuales 34, el 68%, eran anaerobias estrictas. Las especies aisladas
ms frecuentemente fueron: Actinomyces spp., Lactobacillus spp., Bacteriodes no
IC
IN
pigmentados, Veillonella spp., Enterococcus faecalis, Fusobacterium nucleatum y
OF
Streptococcus mutans.
Diversos estudios han revelado que la microbiota de los dientes con fallas en el
tratamiento endodntico difieren de la microbiota encontrada normalmente en los
conductos de dientes no tratados. 4-7 La microbiota que se encuentra en los dientes con
4
fracaso en el tratamiento endodntico es predominantemente anaerobia facultativa y

Gram positiva, siendo el Enterococcus faecalis la especie que se asla con mayor
MA
TI
CA
frecuencia.8
El Enterococcus faecalis es una bacteria en forma de coco dispuesta en cadenas o

pares, Gram positiva, anaerobia facultativa, no esporulada e inmvil y que ha sido
FO
R
identificada como una causa frecuente de infeccin del sistema de conductos
IN
radiculares en dientes con fracaso en el tratamiento endodntico. La temperatura

ptima de crecimiento in vitro de este microorganismo es de 35C, no obstante, se ha
MA
S
observado crecimiento entre 10C y 45C.9
TE
Una caracterstica notable de esta especie es su capacidad para sobrevivir y crecer en

microambientes que pudieran ser txicos para otras bacterias, entre estos en presencia
SI
S
de Hidrxido de Calcio.10 Su erradicacin del conducto radicular es difcil utilizando
DE
preparaciones qumicomecnicas e irrigantes como desinfectantes, as como pastas y
sustancias antibacterianas.11
IC
IN
E. faecalis posee una pared celular con antgenos del grupo D, el cual es un cido
OF
lipoteicoico que se encuentra asociado con la membrana citoplasmtica de la bacteria

y que contiene residuos de glicerol. Adems, posee gran cantidad de mureina y cido
teicoico.12
5
Tambin se han realizado otras investigaciones dirigidas a aclarar el papel que juegan
los factores de virulencia de E. faecalis, en la colonizacin por parte de esta bacteria
CA
en un medio tan pobre en nutrientes, como el conducto radicular medicado. La
MA
TI
adhesin a la superficie de la dentina constituye un paso esencial que determina el

potencial patgeno de este microorganismo, en el conducto radicular medicado.13, 14
Puesto que la dentina contiene colgeno y otras protenas, se sugiere que las proteasas
FO
R
sintetizadas por E. faecalis, as como la protena de unin al colgeno (Ace) pudieran
MA
S
la bacteria colonice el conducto radicular.15
IN
participar o por lo menos influir en la adhesin bacteriana, y por lo tanto permitir que
En los dientes con pulpa mortificada o necrtica, el contenido microbiano txico de
TE
la cavidad pulpar determina la opcin por sustancias antispticas. La medicacin

intraconducto ser entonces un auxiliar valioso en la desinfeccin del sistema de
SI
S
conductos radiculares, sobre todo en lugares inaccesibles a la instrumentacin, como
DE
las ramificaciones del conducto principal y tbulos dentinarios. 16
La eleccin de una medicacin intraconducto entre sesiones requiere de las mismas
IC
IN
consideraciones que la aplicacin de cualquier frmaco en otra regin del organismo
OF
humano. Por lo tanto es necesario considerar. Cantidad, localizacin y tiempo de

aplicacin.16
Una variedad de agentes antimicrobianos han sido evaluados por su habilidad para
eliminar el E. faecalis del sistema del conducto radicular. Esto incluye preparaciones
6
entre
citas,
tales
como
Hidrxido
de
calcio,
Paramonoclorofenol,
Paramonoclorofenol Alcanforado y combinaciones de antibitico-esteroideas, as
CA
como irrigantes tales como hipoclorito de sodio, digluconato de clorhexidina, Acetato
MA
TI
de clorhexidina y componentes iodino.17
En un estudio in vivo e in vitro realizado por Spangberg et al se evalu el efecto
FO
R
sobre la irritacin tisular (permeabilidad capilar) y la citotoxicidad de varios
IN
medicamentos: PCMF alcanforado, fenol alcanforado, cresatina, formocresol e

yoduro de potasio yodado; y concluyeron que el PMCF alcanforado es el antisptico
ms txico e irritante, seguido de la cresatina; y el menos txico fue el yoduro de
TE
MA
S
potasio yodado.18
Soekanto et al. , evaluaron la toxicidad de varios medicamentos (fenol, PMCF, fenol
SI
S
alcanforado, PMCF alcanforado, alcanfor) sobre clulas pulpares de ratas a distintas
DE
concentraciones, y concluyeron que todos los medicamentos mostraron citotoxicidad,

incluyendo al alcanfor solo, el cual se pensaba que era un vehculo que reduca la
toxicidad del fenol y PMCF, sin embargo, segn este estudio el alcanfor por s mismo
OF
IC
stos.19
IN
mostr citotoxicidad y su adicin al fenol y al PMCF increment la toxicidad de
Llamas et al, evaluaron en ratas el efecto in vitro del PMCF y el PMCF alcanforado
sobre los macrfagos y demostraron que estos compuestos disminuyeron
significativamente la capacidad de adhesin de macrfagos al sustrato. Tomando en
7
cuenta que la adhesin es el primer paso de la fagocitosis por parte de macrfagos

adems de la presentacin del antgeno, tanto el PMCF como el PMCF alcanforado
CA
pueden inhibir la funcin del macrfago y modular las respuestas inflamatorias e
MA
TI
inmune en los tejidos periapicales. Por lo tanto, cuando son usados intraconducto,
pueden retardar los procesos reparativos. Quiz estos medicamentos slo deban ser
FO
R
usados en tratamientos de conductos de dientes con pulpas necrticas.20
IN
Todo esto indica la necesidad de un retorno a lo natural, con el objeto de encontrar

nuevos principios biolgicamente activos, para disminuir los efectos txicos del uso
MA
S
de estas sustancias.21
TE
Paralelo al desarrollo tecnolgico de la industria farmacutica se ha desplegado un

importante inters por parte de los investigadores en estudiar sustancias naturales que
DE
SI
S
posean algunas propiedades farmacolgicas con efecto antimicrobiano.22
Las plantas medicinales han sido utilizadas desde pocas primitivas en el tratamiento
de enfermedades. Durante mucho tiempo los frmacos naturales y sobre todo las
IC
IN
plantas medicinales, fueron el principal e incluso el nico recurso del que disponan
OF
los mdicos. Esto hizo que se profundizara en el conocimiento de especies vegetales

con propiedades medicinales y que se ampliara la investigacin a cerca de los
productos que de ellas se extraen.23
8
Nuestro pas est considerado entre los 12 pases de mayor diversidad biolgica de la
tierra, conocidos como pases megadiversos tanto por el nmero de especies y de
MA
TI
CA
recursos genticos como por la variedad de ecosistemas.24
El uso de plantas es de gran importancia en la medicina tradicional. El conocimiento

cientfico de ciertas especies es desconocido y es necesario que aprendamos a
FO
R
investigar los recursos naturales. Este conocimiento permitir determinar los
IN
principios activos de las plantas medicinales y estudiar su actividad en el organismo
MA
S
atribuye a diversas especies vegetales.24
para despus aislarlos, obtenerlos y avalar los usos que la medicina popular le
TE
En nuestro medio algunas plantas medicinales en el rea de salud dental estn siendo
utilizadas en diversas formulaciones farmacuticas, as tenemos: enjuagues bucales,
DE
SI
S
colutorios, soluciones tpicas y pasta dental .24
La Caesalpinia spinosa (Taya) es una planta producida en varias zonas del pas. En
el Per, se encuentra en los valles interandinos secos entre 1000 y 3100 msnm, los
IC
IN
departamentos de mayor produccin son Cajamarca (41%), Ayacucho (16%), La
OF
Libertad (13%), Hunuco (13%), tambin se reporta su presencia en Huancavelica,

Apurmac. 25
9
En Per, numerosos estudios han reportado la presencia de taninos, flavonoides,

gomas, alcaloides y protenas en la Taya, que se pueden hallar tanto en la vaina como
MA
TI
CA
en la semilla.26
Esta planta muy utilizada en la actualidad en la industria por sus altas

concentraciones de tanino y cido glico, es conocida adems por su alto poder
FO
R
astringente por coagular las albminas de las mucosas y de los tejidos, creando una
IN
capa aislante y protectora que reduce la irritacin y el dolor; por tal motivo son
usados externamente para detener pequeas hemorragias locales; en inflamaciones de
MA
S
la cavidad bucal, catarros, bronquitis, quemaduras, hemorroides, e internamente

contra la diarrea, enfriamiento intestinal, afecciones vesiculares, y como
TE
contraveneno en caso de intoxicacin por alcaloides vegetales.27
SI
S
Los taninos tienen la propiedad de formar complejos con macromolculas,
DE
particularmente con las protenas; as forman enlaces puentes de hidrgeno, y una

unin covalente, colocndose entre las fibras de colgeno de la piel, emplendolos en
medicina en tratamientos de excoriaciones y quemaduras de la piel donde las
IN
protenas forman una capa protectora antisptica bajo la cual se regeneran los
OF
IC
tejidos.28
En caso de la Caesalpinia spinosa "taya"; solo el extracto obtenido de la cscara de
la Caesalpinia spinosa, tena efecto inhibitorio mas no la pepa, que mostr un efecto
10
inhibitorio nulo. Siendo este un aporte significativo para aquellas frmulas
CA
tradicionales que utilizan el fruto completo de la taya.29
MA
TI
La utilizacin de solventes orgnicos (como alcohol y acetona) tienen la ventaja de

preservar mejor los extractos e inhibir el crecimiento de bacterias, hongos y otros,
adems de desnaturalizar las enzimas que pueden degradar los compuestos
FO
R
biolgicamente activos. En el caso de los extractos usando como solvente agua, estos
IN
dan muestras viscosas y gelatinosas las cuales se hicieron difciles de procesar (dados
estos factores, no podran difundirse adecuadamente en el agar, y los resultados
MA
S
obtenidos seran inconcluyentes).29
idea
representativa
del
TE
El uso de cepas bacterianas tanto Gram positivas como Gram negativas permiti una
efecto
inhibitorio
sobre
dichos
microorganismos.
SI
S
Demostrndose un efecto preferencial por las Gram positivas, debindose an probar
DE
su efecto en un mayor nmero de cepas bacterianas.29
En la evaluacin del extracto de taya usando el fruto (vaina) completo, se observ
IC
IN
actividad inhibitoria sobre cepas Gram positivas. Los componentes del fruto
OF
relacionados con dicha actividad corresponden exclusivamente a la cscara de la

vaina, donde la pepa no muestra actividad inhibitoria.29
As mismo, en varios trabajos de investigacin se concluye que la cscara (vaina) de

Caesalpinia spinosa demuestra una buena accin inhibitoria sobre Staphylococcus
11
aureus y Bacillus subtilis. 30,31 Mediante tcnica de difusin en disco. Los extractos
fueron preparados usando como solvente alcohol-acetona (1:1). Se observ actividad
CA
inhibitoria sobre cepas Gram positivas para el extracto de la vaina de tara ms no
MA
TI
para el de la semilla. No se determin la concentracin mnima inhibitoria.29
De igual manera en un estudio publicado en Journal of Ethnopharmacology,
FO
R
manifiesta que la taya tambin presenta actividad antibacteriana contra Bacillus
IN
cereus, Staphylococcus epidermidis, Bacteroides fragilis.32
MA
S
En otro estudio se hizo el ensayo antimicrobiano sobre extractos etanlicos al 80% de

nueve plantas obtenidos por maceracin durante 5 das, una de las muestras
TE
ensayadas fue la C. spinosa (vainas); se utilizaron cinco cepas Gram positivas y tres
Gram negativas usando el mtodo de microdilucin del caldo de cultivo (broth
SI
S
microdilution). Los resultados son poco relevantes para la muestra mencionada a

33
, sin
DE
excepcin del ensayo contra E. faecalis donde el CMI fue de 0.5 mg / ml
embargo no se menciona las diferentes concentraciones a las que fue comparada la
IC
IN
accin del extracto etanlico de C. spinosa.
OF
Teniendo en cuenta las propiedades curativas, y el amplio y variado efecto

antibacteriano que presenta la Caesalpinia spinosa, nace el inters de determinar su
efecto antimicrobiano frente a uno de los agentes etiolgicos con mayor capacidad
de supervivencia durante los procedimientos endodnticos, el Enterococcus faecalis.
12
Es as que con el presente estudio se propone determinar el efecto in vitro y la

concentracin mnima inhibitoria que presenta el extracto etanlico de vainas de
CA
Caesalpinia spinosa taya sobre el crecimiento de E. faecalis, ya que es muy poca la
MA
TI
informacin a la accin in vitro de este agente y en nuestro medio no existen trabajos

similares en donde se demuestre el efecto antibacteriano de esta sustancia.
FO
R
De obtener el efecto inhibitorio del extracto etanlico de vainas de C. spinosa (taya)
IN
sobre el crecimiento de cepas de Enterococcus faecalis se abrir una puerta de

posibilidades en la teraputica de piezas dentarias con necrosis pulpar, que reducir
MA
S
los fracasos endodnticos ocasionados por infecciones persistentes y que evitar la

exposicin local y sistmica a sustancias txicas, ya que esta solucin podra
TE
constituirse en una alternativa de origen natural para la medicacin intraconducto.
SI
S
1.1. Enunciado del problema:
Existe efecto inhibitorio in vitro del extracto etanlico de vainas de Caesalpinia
DE
spinosa (Taya) sobre el Enterococcus faecalis ATCC 29212?
IN
1.2. Hiptesis:
presenta efecto
IC
El extracto etanlico de vainas de Caesalpinia spinosa
OF
inhibitorio in vitro sobre cepas de Enterococcus faecalis ATCC 29212.
13
1.3. Objetivos:
1.3.1. Objetivos Generales:
Conocer el efecto inhibitorio in vitro del extracto etanlico de vainas de
CA
MA
TI
Caesalpinia spinosa (Taya) sobre cepas de Enterococcus faecalis ATCC

29212.
FO
R
1.3.2. Objetivos Especficos:
Determinar cualitativamente el efecto inhibitorio in vitro del extracto
IN
etanlico de vainas Caesalpinia spinosa al 10%, 20%, 40% y 60%

sobre el crecimiento del Enterococcus faecalis ATCC 29212.
Determinar cuantitativamente el efecto inhibitorio in vitro del extracto
MA
S
etanlico de vainas Caesalpinia spinosa al 10%, 20%, 40% y 60%
TE
sobre el crecimiento del Enterococcus faecalis ATCC 29212.

Determinar la concentracin mnima inhibitoria del extracto etanlico de
SI
S
vainas de Caesalpinia spinosa (Taya) sobre el crecimiento de cepas de
OF
IC
IN
DE
Enterococcus faecalis.
14
II. MATERIAL Y MTODOS
2.1.1
CA
MATERIAL DE ESTUDIO:
Material biolgico:
MA
TI
2.1
Cepa de Enterococcus faecalis ATCC 29212, procedente de

Microbiologics Laboratory, obtenida en el Instituto Nacional
IN
2.1.2. Material botnico:
de Caesalpinia spinosa taya o tara, vainas
MA
S
Las vainas
FO
R
de Salud, Lima- Per.
secas, recolectadas en la distrito de Otuzco. En el laboratorio
TE
se seleccion las vainas que no tenan dao alguno en su
SI
S
cubierta; quedando aptas para su procesamiento.
MTODOS Y TCNICAS:
DE
2.2
2.2.1
Tipo de Investigacin: El presente trabajo presenta un diseo
experimental, in vitro, prospectivo y transversal.
OF
IC
IN
2.2.2
Muestra: La muestra estar constituida por cepas de

Enterococcus
Microbiologics
faecalis
ATCC
Laboratorio,
29212.
adquiridos
Proveniente
en
el
del
Instituto
Nacional de Salud, Lima- Per. La cepa se enfrent a cuatro

concentraciones (10%, 20%, 40% y 60%) del extracto
etanlico de vainas de Caesalpinia spinosa Taya.
15
VARIABLES Y ESCALAS DE MEDICIN:
Variable
Indicador
Extracto etanlico de
Concentracin de
Caesalpinia spinosa
Caesalpinia spinosa al Cuantitativa
Variable independiente
10%, 20%, 40% y
Escala
Ordinal
FO
R
MA
TI
Tipo
CA
2.3
Efecto inhibitorio In Vitro
Escala de Duraffourd
sobre cepas
MA
S
IN
60%.
Variable dependiente
Razn
Cuantitativa
Ordinal
Dimetro de halo
inhibitorio
TE
Enterococcus faecalis.
Cualitativa
DE
SI
S
Unidades Formadoras
de Colonias.
2.4 Definicin de trminos operacionales:
Extracto etanlico de vainas Caesalpinia spinosa (Taya): Extracto
OF
IC
IN
cuyo solvente es etanol y que contiene los principios activos de la

planta Caesalpinia spinosa preparado a las concentraciones del 10%,
20%, 40%, 60%.
16
Efecto inhibitorio in vitro: Capacidad para detener la reproduccin o

muerte de una bacteria. Se determinara cualitativamente segn la
Escala
de
Duraffourd:
Escala
MA
TI
CA
escala de Duraffourd y cuantitativamente segn CIM.
utilizada
para
determinar
FO
R
cualitativamente el efecto inhibitorio in vitro, segn dimetro de halos
IN
de inhibicin
Nula (-), para un dimetro inferior a 8 mm.
Sensibilidad lmite (sensible = +) para un dimetro
MA
S
comprendido entre 8 a 14mm

Medio (muy sensible =++) para un dimetro entre 14 y 20mm
Finalmente para un dimetro superior a 20 mm el
TE
DE
SI
S
microorganismo es sumamente sensible (+++)
Concentracin inhibitoria mnima: Concentracin mnima de una
IN
sustancia que impide el crecimiento bacteriano in vitro.Se considera
OF
IC
CIM aquella en la que se presenta un crecimiento < de 30 UFC
17
2.5 Diseo Procedimental:
CA
2.5.1. Preparacin del inculo:
MA
TI
Cada cepa se diluy en Tioglicolato estril hasta que se obtuvo una

turbidez semejante al tubo 1 del Nefelmetro de Mc Farland, el cual contena
FO
R
1 x 108 UFC
IN
2.5.2. Obtencin del extracto etanlico de vainas de Caesalpinia spinosa34:

Se prepar extracto etanlico de vainas de Caesalpinia spinosa (Taya),
MA
S
para lo cual se seguir el siguiente procedimiento:
TE
Se obtuvieron un kilogramo de vainas secas de Taya teniendo en

cuenta su tamao, color y estado.
SI
S
A continuacin, se pusieron a secar al horno a una temperatura de 40C
DE
por un periodo de 36 h. con la finalidad de eliminar de forma eficiente la

humedad.
Luego, se procedi a moler las muestras secas utilizando un mortero,
IC
IN
hasta obtener un pulverizado homogneo, de esta muestra solo se tom
OF
50 gr de la muestra molida y se colocaron en un frasco oscuro de vidrio

con 500 mL de etanol comercial de 70 (C2 H5 OH), y fue llevado a
maceracin por 10 das.

Despus se filtr el macerado utilizando papel Whatman N 4 en un
matraz estril, la solucin obtenida fue de 330 ml esta se distribuy en 3
18
vasos de precipitacin de 10 ml y en un vaso de 300 ml y se llev una

estufa a 40 C hasta la evaporacin total del alcohol, obteniendo 0.85
CA
gramos de polvo seco de extracto de taya por cada 10 ml de la muestra
estriles.
FO
R
2.5.4. Estandarizacin de la solucin Stock 35:
MA
TI
despus de 12 das de evaporacin. El extracto se recibi en viales
IN
Se pes 0.9693 g de extracto seco en un vial estril y luego se agreg

0.65 ml. de etanol, para obtener la Solucin Stock cuya concentracin
MA
S
final fue del 60 %.
Luego de obtenida la Solucin Stock se procedi a preparar las
TE
concentraciones al 10%, 20%, 40% y 60%.
SI
S
2.5.5. Determinacin de la concentracin mnima inhibitoria (CMI) in
DE
vitro de Caesalpinia spinosa.
Se determin la concentracin mnima inhibitoria (CMI) mediante la
IC
IN
tcnica de dilucin en tubos, se coloc 0.5 ml de extracto etanlico de
OF
Caesalpinia spinosa al 10%, 20%, 40% y 60% en tubos diferentes, a este

se agreg 0.2 ml de la cepa preparada en Tioglicolato. Se realiz 10
repeticiones por cada concentracin y 10 ms para el tubo control.
Luego, los 50 tubos de ensayo fueron colocados en la Jarra Has Pack,
incubados en la estufa a 37 C por 24 horas.
19
Posteriormente se tom 0.1 ml. de la dilucin de cada uno de los tubos
CA
placas, y se sembr en placas petri que contenan medio de cultivo Mueller
MA
TI
Hinton, se us el asa de Driglasky para dispersar la muestra, todo el

procedimiento se llev a cabo dentro del dimetro de 10 cm. de la llama de un
mechero.Dichas placas fueron colocadas dentro de la Jarra Has Pack, llevadas
FO
R
a la estufa a 37C por 48 horas.
IN
Finalmente se observ el crecimiento bacteriano y se realiz el conteo de las
2.5.6.
Determinacin
del
efecto
antibacteriano
(prueba
de
TE
susceptibilidad):
MA
S
Unidades Formadoras de Colonias (UFC).
SI
S
Para la prueba de susceptibilidad, se prepararon 4 diluciones a las
DE
concentraciones del 10%, 20%, 40%, 60% de extracto etanlico de

Caesalpinia spinosa. Dichas diluciones se conservarn a 4 C para el estudio
IC
IN
microbiolgico en frascos mbar.
OF
Para esta prueba se utiliz el mtodo de Difusin en Discos. Se prepararon
discos de papel filtro estriles, los cuales fueron cargados con 50 l de cada
concentracin del extracto etanlico.
20
Luego con una aguja estril estos fueron colocados sobre placas petri que
contenan cultivos de Enterococcus faecalis ATCC 29212 en medio Mueller
CA
Hinton. Se hicieron 16 repeticiones por cada concentracin
MA
TI
Todo el procedimiento se llev a cabo dentro del dimetro de 10 cm. de la

llama de un mechero. Posteriormente las placas se incubaron a 37C en
microanaerobiosis haciendo uso de la Jarra de Has Pack.
FO
R
La lectura se llev a cabo a las 24 horas. Se midieron los halos de inhibicin
IN
de cada una de las concentraciones, incluyendo el rea del disco de papel de

filtro, con un calibrador vernier o pi de rey.
Al hacer la lectura, se clasific los dimetros de los halos de inhibicin
OF
IC
IN
DE
SI
S
TE
MA
S
teniendo en cuenta a escala de Duraffourd.36
21
3. ANLISIS
ESTADSTICO
INTERPRETACIN
DE
LA
INFORMACIN
MA
TI
frecuencias de una entrada con sus valores absolutos.
CA
Para analizar la informacin se construyeron cuadros de distribucin de
Para establecer si la distribucin de los promedios de halos de inhibicin
FO
R
difieren entre si segn la concentracin del extracto etanlico de taya en la

efectividad antibacteriana tipo cuantitativa, se utiliz la prueba de Anlisis de
IN
varianza .En los casos que hubo distribucin significativa se aplic la prueba
de comparaciones mltiples o Prueba de Duncan.
MA
S
Para establecer si la distribucin de los halos de inhibicin difieren entre si

segn la concentracin del extracto etanlico de Taya
en la efectividad
TE
antibacteriana tipo cualitativa, se utiliz la prueba Chi cuadrado.
SI
S
Ambas con una significancia al 5 %.

Con la informacin recolectada se construy una base de datos que sern
DE
procesados de manera automatizada con el soporte del paquete estadstico
OF
IC
IN
SPSS - 15.0.
22
III.
RESULTADOS
cuyo propsito fue de
CA
En el presente estudio de tipo experimental in vitro,
MA
TI
determinar el efecto inhibitorio del extracto etanlico de vainas de Caesalpinia

spinosa Taya sobre Enterococcus faecalis ATCC29212, y para la cual se utilizaron
4 concentraciones 10%, 20%, 40% y 60%, y un grupo control, se hallaron los
FO
R
siguientes resultados:
Despus de realizada la prueba de susceptibilidad y de haber medido los halos de
IN
inhibicin, se clasific los dimetrosde acuerdo a la escala de Duraffourd38
MA
S
obteniendo que:
De las 16 repeticiones al 10%, 15 presentaron eficacia lmite y 1 efecto
TE
medio. De las 16 repeticiones al 20%, 14 presentaron efecto lmite y dos

efecto medio, de las 16 repeticiones al 40% todas presentaron efecto medio ,
SI
S
y de las 16 repeticiones al 60% 15 presentaron efecto medio y 1 efecto alto en
DE
la inhibicin de Enterococcus faecalis ATCC 29212.

Los promedios de los dimetros de halo de inhibicin de crecimiento del
IN
Enterococcus faecalis al 10% fue de 12.9mm, al 20% de 13.5mm, al 40% de

16.16 y al 60% de 17.31
IC
OF
El promedio de unidades formadoras de colonias obtenida a las 4 diferentes

diluciones fueron: al 10% -35 UFC, al 20% -30 UFC promedio, al 40%- 3
UFC promedio, y al 60% -0UFC.
23
Tabla No1: Efecto inhibitorio in vitro cualitativo del extracto etanlico de

vainas Caesalpinia spinosa al 10%, 20%, 40% y 60% sobre el crecimiento
CONCENTRACIN
MA
TI
CA
del E. faecalis ATCC 29212, segn escala de Duraffourd.
ESCALAS DE DURAFFOURD
TOTAL
Muy sensible
10%
15
20%
14
16
40%
16
16
60%
16
16
TOTAL
29
35
64
16
MA
S
IN
FO
R
Sensible
Fuente: Datos obtenidos por el grupo investigador, ao2011
SI
S
TE
Sensible = + de 8 - 14mm
Muy sensible = ++ para un dimetro entre 14 y 20mm
En la tabla No 1, se observa el efecto inhibitorio in vitro cualitativamente del
DE
extracto etanlico de vainas Caesalpinia spinosa al 10%, 20%, 40% y 60% sobre el
OF
IC
IN
crecimiento del Enterococcus faecalis ATCC 29212, segn las pautas de Duraffourd,
24
Tabla No2: Efecto inhibitorio in vitro cuantitativo del extracto etanlico de

vainas Caesalpinia spinosa al 10%, 20%, 40% y 60% sobre el crecimiento del
CA
E. faecalis ATCC 29212, segn dimetro de halo inhibitorio y mediante el
208.074
155.672
363.743
3
60
63
Cuadrados medios
69.358
2.595
26.732 0.000
IN
Tratamiento
Error
Total
Gl
FO
R
Fuente de variacin Suma de cuadrados
MA
TI
Anlisis de Varianza
MA
S
En la tabla N 2, se muestra el anlisis de varianza, y se obtuvo como resultado
TE
que existe una diferencia estadstica altamente significativa del dimetro del
SI
S
halo de inhibicin del crecimiento del Enterococcus faecalis de acuerdo a la
OF
IC
IN
DE
concentracin del extracto etanlico de Caesalpinia spinosa aplicada.
25

vainas Caesalpinia spinosa al 10%, 20%, 40% y 60% sobre el crecimiento
CA
del E. faecalis ATCC 29212, segn dimetro de halo inhibitorio y mediante
Concentraciones
ni
MA
TI
la Prueba de Duncan
Grupos alfa=0.05
16
12.94
20%
16
13.56
40%
16
60%
16
IN
10%
FO
R
16.16
MA
S
17.31
TE
SI
S
En la tabla N 3, se muestran los promedios del dimetro de halo de inhibicin

de crecimiento del Enterococcus faecalis despus de aplicar la tcnica de
DE
difusin en discos. Se realiz la Prueba de Duncan, que compar cada uno de los
promedios de los halos, demostrando que no existe diferencia significativa entre
IN
los dimetros promedios de los halos inhibitorios del extracto etanlico al 10 % y
IC
al 20%; pero existe diferencia significativa entre el este grupo homogneo y el de
OF
40% y 60%. Tambin existe diferencia significativa entre el tamao de halo

inhibitorio formado al 40% de
concentracin
de extracto etanlico de C.
spinosa y el grupo del 60 % (p=0.05).
26
TE
MA
S
IN
FO
R
MA
TI
CA
Grfico N 1: Efecto inhibitorio in vitro cuantitativo del extracto etanlico de

vainas de Caesalpinia spinosa a diferentes concentraciones sobre E. faecalis
ATCC29212
SI
S
En el Grfico N 1, se aprecia que conforme aumenta la concentracin del
DE
extracto etanlico de Caesalpinia spinosa aumenta el dimetro de halo de
OF
IC
IN
inhibicin, es decir aumenta el efecto inhibitorio
27

vainas Caesalpinia spinosa al 10%, 20%, 40% y 60% sobre el crecimiento del
MA
TI
CA
E. faecalis ATCC 29212, segn UFC y mediante el Anlisis de Varianza.
Fuente de variacin Suma de cuadrados Gl Cuadrados medios F

Tratamiento
9,778.100
3
3,259.367
1,783.240
36
Total
9,843.900
39
1.828
FO
R
65.800
IN
Error
P
0.000
Fuente: Datos obtenidos por el grupo investigador, ao 2011
MA
S
En la tabla N 4, se muestra el anlisis de varianza, el cual determina que existe una

diferencia estadstica altamente significativa en el crecimiento de UFC de
TE
Enterococcus faecalis de acuerdo a la concentracin del extracto etanlico de
OF
IC
IN
DE
SI
S
Caesalpinia spinosa aplicada. (p = 0.000).
28

vainas Caesalpinia spinosa al 10%, 20%, 40% y 60% sobre el crecimiento de
IN
FO
R
MA
TI
CA
E. faecalis ATCC 29212, segn UFC y mediante la Prueba de Duncan
MA
S
Fuente: Datos obtenidos por el grupo investigador, ao 2011
TE
En la tabla N 5, se muestran los promedios de UFC de Enterococcus faecalis

despus de la aplicacin del extracto etanlico de C. spinosa
a diferentes
OF
IC
IN
DE
SI
S
concentraciones, se realiz la Prueba de significancia de Duncan.
29
Grfico N 2: Efecto inhibitorio in vitro cuantitativo de UFC de

Enterococcus faecalis ATCC29212 en funcin a cada una de las cuatro
SI
S
TE
MA
S
IN
FO
R
MA
TI
CA
concentraciones del extracto etanlico de Caesalpinia spinosa.
DE
Fuente: Datos obtenidos por el grupo investigador
IN
En el grfico N 2, se muestra que conforme se aumenta la concentracin del
IC
extracto etanlico de Caesalpinia spinosa el nmero de unidades formadoras de
OF
colonias promedio de Enterococcus faecalis disminuye, es decir el efecto

inhibitorio aumenta.
30
Tabla No 6: Determinacin de la concentracin mnima inhibitoria del
CA
extracto etanlico de vainas de Caesalpinia spinosa sobre cepas de
MA
TI
Enterococcus faecalis ATCC 29212.
UNIDADES FORMADORES DE COLONIAS

Enterococcus faecalis
FO
R
CONCENTRACION
DE EXTRACTO
ETANLICO DE
Caesalpinia spinosa
DE
109
109
109
10%
34
35
20%
30
10
PROMEDIO
109
109
109
109
109
109
109
109 UFC
35
35
35
36
36
35
35
35 UFC
SI
S
34
29
30
29
32
28
30
32
30
31
30 UFC
3 UFC
0 UFC
IN
40%
DE
CONTROL
MA
S
TE
IN
NMERO DE REPETICIONES
IC
60%
OF
Fuente: Datos obtenidos por el grupo investigador, ao 2011.
En la tabla N 6 se muestra las UFC registradas en las 10 repeticiones por cada

concentracin de extracto etanlico de Caesalpinia spinosa y el promedio de estas
por concentracin. La dilucin al 40% present menos de 30 UFC constituyendo la
CMI mientras que en la del 60% no se encontr UFC.
31
IV.
DISCUSIN
etanlico de Caesalpinia spinosa a cuatro diferentes
MA
TI
vitro del extracto
CA
El presente estudio de tipo experimental, demostr el efecto inhibitorio in
concentraciones 10%, 20%, 40% y 60% frente a cepas de Enterococcus faecalis; si
FO
R
bien existe un trabajo que demuestra la actividad de Caesalpinia spinosa frente a

Enterococcus faecalis, donde se menciona que la CMI fue de 0.5 mg / ml
33
, no se
IN
detalla cmo fue determinado este, ni el parmetro de concentraciones a partir de las
cuales se determin este valor.
MA
S
Es as que para determinar las concentraciones finales a aplicar, se realiz una

prueba piloto en donde se incluye la CMI
mencionada anteriormente como
TE
referencia, elaborando as concentraciones al 0.25mg/ml, 0.5 mg/ml, 0.75 mg/ml y 1
SI
S
mg/ml y comparando su efecto con la del extracto etanlico al 40% de concentracin,

mediante la prueba de susceptibilidad se determin despus de 24 horas que la nica
DE
concentracin que present efecto inhibitorio fue la concentracin de extracto
etanlico al 40%.
se utilizaron concentraciones de extracto
IN
En funcin a este resultado
IC
etanlico de Caesalpinia spinosa proporcionales cercanas mayores y menores, tales
OF
como 10 %, 20%, 40% y 60%. Determinando a partir de estas concentraciones

finales la CMI.
La concentracin mnima inhibitoria obtenida fue la de 40 %, ya que el
nmero de UFC a partir de esta concentracin fue menor a 30.38 Sin embargo todas
32
las concentraciones tuvieron efecto inhibitorio comparado con el control en donde se

observ un crecimiento de UFC de aproximadamente 109 UFC/ml. (Tabla 5)
CA
Los promedios de dimetros de halos de inhibicin obtenidos despus de
MA
TI
aplicada la prueba de susceptibilidad de difusin en discos, demostr que existe

diferencia altamente significativa del efecto inhibitorio entre los grupos formados.
(Tabla 2), as mismo al comparar el efecto inhibitorio de las 4 concentraciones a
FO
R
travs de la prueba de Duncan obtenemos que no existe diferencia significativa entre
MA
S
de Caesalpinia spinosa. (Tabla 3)
IN
el efecto inhibitorio producido al 10% y 20 % de concentracin del extracto etanlico
Sin embargo al aplicar la prueba de Duncan para comparar el crecimiento de
TE
UFC a las diluciones de 10%,20%,30% y 40% se determin que cada una de estas
presenta un efecto inhibitorio diferente altamente significativo en el crecimiento de
DE
SI
S
UFC de Enterococcus faecalis (p=0.05). (Tabla 4).
Malpartida, realiz un estudio experimental donde compara el efecto del
aceite esencial de Minthostachis mollis (mua), Paramonoclorofenol alcanforado y
IC
IN
Gluconato de clorhexidina al 2 % frente a cepas de E. faecalis, en dnde los
OF
dimetros de halo de inhibicin oscilaron entre 13.8 y 15.02mm, 17.6 y 19.42mm y

23.41 y 23.64 respectivamente.38
En el presente estudio al aplicar el extracto etanlico de Caesalpinia spinosa
se obtuvo de halos de inhibicin promedios entre 12.9 y 17.3mm (Tabla 3), lo que
33
nos estara indicando que este extracto etanlico presenta un efecto inhibitorio mayor
al del
aceite esencial de Minthostathis mollis y un efecto similar al del
CA
Paramonoclorofenol alcanforado, 19
MA
TI
Azaa , en el 2010, realiz otro estudio en donde determina efectividad antibacteriana

in vitro del aceite esencial de Minthostachys mollis griseb (mua) sobre bacterias
prevalentes en patologas periapicales crnicas de origen endodntico, entre ellas el
FO
R
E. faecalis; en el que se aplic la prueba de sensibilidad o susceptibilidad bacteriana
IN
y en donde el aceite esencial de mua al 100 % present un promedio de dimetro

del halo inhibitorio de 9 mm , al 50% present halo promedio de 7.0 mm y al 25% un
MA
S
halo inhibitorio promedio de 5 mm , el paramonoclorofenol que fue un Control + un

promedio de halo inhibitorio de 12mm.
TE
Sin embargo los promedios de halos inhibitorios obtenidos al aplicar el extracto

etanlico de Taya sobre E. faecalis fueron de 12.9 mm al 10%, 13.6mm al 20%,
SI
S
16.1mm al 40% y de 17.3mm al 60% (tabla3); promedios mayores a los formados por
DE
el aceite esencial de mua y al formado por el paramonoclorofenol.

As mismo al comparar cualitativamente los resultados, segn la escala de
DURAFFOURD el esencial de mua al 100% caus sensibilidad lmite sobre E.
IC
IN
faecalis; el extracto etanlico de Caesalpinia spinosa caus sensibilidad lmite al
OF
10% y 20%, pero al aumentar la concentracin caus sensibilidad media y alta

sobre las cepas de E. faecalis. (TABLA 1)
Estos resultados podran deberse a que son especies vegetales diferentes y
tienen un perfil fitoqumico distinto; as tambin, a que la obtencin de principios
34
activos se llev a cabo bajo procesos distintos. El mayor efecto inhibitorio de la

Caesalpinia spinosa podra deberse a que al utilizar un solvente orgnico (etanol) se
CA
preserva mejor los compuestos biolgicamente activos.25
MA
TI
As tambin, estudios hasta ahora realizados demuestran que la taya contiene

taninos, flavonoides, y gomas, de all su efecto antimicrobicida27. La vaina posee la
mayor concentracin de taninos que oscila entre 40% y 60%. Las vainas de
FO
R
Caesalpinia spinosa contienen hasta 25 % de cido glico, que es uno de los mayores
IN
constituyentes de los taninos.26
Probablemente los taninos seran los fitoconstituyentes con mayor propiedad
antibacteriana, al precipitar las protenas (enzimas), implicadas en las diversas rutas
MA
S
microbianas26.
TE
Lock de Ugaz37, en su investigacin demuestra que los fenoles y flavonoides,

constituyentes tambin de Caesalpinia spinosa, tienen propiedades antiinflamatorias,
SI
S
antibacterianas, y antifngicas, cuya accin provoca lesiones en la membrana
DE
citoplasmtica, ocasionando una disfuncin en la composicin interna de las clulas
OF
IC
IN
bacterianas.
35
1.
MA
TI
CA
V. CONCLUSIONES
El extracto etanlico de Caesalpinia spinosa (Taya) presenta efecto

inhibitorio in vitro sobre cepas de Enterococcus faecalis ATCC 29212 a las
IN
2.
FO
R
24 horas de su aplicacin.
El extracto etanlico de vainas de Caesalpinia spinosa (Taya) presenta
MA
S
efecto inhibitorio in vitro cualitativo lmite para las concentraciones del 10%
y 20% y efecto inhibitorio medio para las concentraciones del 40% y 60% ,
TE
sobre cepas de Enterococcus faecalis ATCC 29212 ,segn la escala de
El efecto inhibitorio in vitro cuantitativo del extracto etanlico de vainas de
DE
3.
SI
S
Duraffourd.
Caesalpinia spinosa sobre el E. faecalis ATCC29212 a las concentraciones
de 10%, 20%, 30% Y 60% fue directamente proporcional al dimetro de los
OF
IC
IN
halos de inhibicin, y a la formacin de UFC.
4.
La concentracin inhibitoria mnima in vitro fue de 40 % para el extracto
etanlico de vainas de Caesalpinia spinosa frente a las cepas de

Enterococcus faecalis ATCC 29212.
36
MA
TI
CA
VI. RECOMENDACIONES
1. Realizar estudios comparativos in vitro del efecto del extracto etanlico de
FO
R
Caesalpinia spinosa con medicamentos intraconducto .
IN
2. Ejecutar estudios experimentales in vitro con Caesalpinia spinosa frente a
patgenos de la cavidad bucal, para ampliar el espectro de actividad
MA
S
antimicrobiana de esta.
TE
3. Obtener otros tipos de extractos de Caesalpinia spinosa para comparar con el
SI
S
extracto etanlico, y determinar la eficacia antibacteriana.
DE
4. Realizar pruebas in vivo para valorar la efectividad y la toxicidad que pueden
proporcionar los componentes activos de Caesalpinia spinosa, as como la
IN
dosis teraputica y la concentracin ptima para ser utilizado como
OF
IC
medicamento intraconducto en tratamientos endodnticos.
37
IV. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
Bystrm A, Sngvist G. The antibacterial action of sodium hypoclorite and
CA
1.
MA
TI
EDTA in 60 cases of odontology therapy. INT ENDOD J. 1985; 18(1):35-40.

En: Efecto inhibidor del aceite esencial de Minthostachysmollis en
FO
R
comparacin al paramonoclorofenol alcanforado y gluconato de clorhexidina

al 2 % frente a cepas de Enterococcus faecalis. Malpartida Quispe F. Rev
IN
del COP de Regin Lima. Setiembre 2010; 15 (32): 9-12.
MA
S
2. Kvist T, Molander A, Dahln G, Reit C. Microbiological evaluation of one

and two visit endodontic treatment of teeth with apical periodontitis:
20
enero
2011],
Disponible
en:
SI
S
[citado
TE
Arandomized, clinical trial. J Endod. [en lnea] 2004; 30 (8): 572-576.
DE
http://www.jendodon.com/article/S0099-2399(05)60238-5/fulltext
3. Baumgartner JC, Cuenin PR. Efficacy of Several Concentrations of Sodium
IN
Hypochlorite for Root Canal Irrigation. J endodon 1992; 18(12): 605 612.
IC
En Evaluacin in Vitro de la eficacia antibacteriana del Hipoclorito de
OF
Sodio al 1%, 2.5% y 5.25% a diferentes Temperaturas frente a cepas de

Enterococcus faecalis (ATCC 29212). Barrantes Valdivia, Gonzalo Miguel.
[tesis para optar
el ttulo de cirujano dentista].2009. Escuela de
Estomatologa. Universidad Nacional de Trujillo
38
MA
TI
teeth with apical periodontitis. Int Endod J 1998; 31: 1-7.
CA
4. Molander A, Reit C, Dahlen G, Kvist T. Microbiological status of root-filled
5. Peculiene V, Balciuniene I, Eriksen HM, Haapasalo M. Isolation of
IN
population. J Endod 2000; 26: 593-5.
FO
R
Enterococcus faecalis in previously root-filled canals in a Lithuanian
Peculiene V, Reynaud AH, Balciuniene I, Haapasalo M. Isolation of yeasts
MA
S
6.
and enteric bacteria in root-filled teeth with chronic apical periodontitis. Int
TE
Endod J 2001; 34: 429-34.
SI
S
7. Sundqvist G, Fidgor D, Sjgren U. Microbiology analyses of teeth with
DE
endodontic treatment and the outcome of conservative retreatment. Oral Surg
Oral Med Oral Pathol 1998; 85: 86-93.
IC
IN
8. Pinheiro E, Gomes B, Ferraz C. Evaluation of root canal microorganisms
OF
isolated from teeth with endodontic failure and their antimicrobial

susceptibility. Oral Microbiol Immunol 2003; 18: 100-3.
39
9. Haasapalo M, Endal U, Zandi H, Coil JM. Eradication of endodontic

infection by instrumentation and irrigation solutions. EndodTopics 2005; 10:
MA
TI
CA
77- 102.
10. Distel J, Hatton J, Gillepsie MJ. Enterococcus faecalis colonization and
FO
R
biofilm formation in medicated root canals. J Endod 2001; 28: 689-93.
IN
11. Murray P., Tenover F., Yonken R. Manual de Microbiologa Clnica, 6a eEd.
MA
S
Washington, 1995.
12. George S, Kishen A, Song K. The Role of Environmental Changes on
TE
Monospecies Biofilm Formation on Root Canal Wall by Enterococcus
SI
S
faecalis. J Endod 2005; 31: 867-72.
DE
13. Duggan J, Sedgley C. Biofilm formation of Oral and Endodontic
Enterococcus faecalis. J Endod 2007; 33: 815-8.
IC
IN
14. Giardino L, Ambu E, Savoldi E, Rimondini R, Cassanelli C, Debbia E.
OF
Comparative evaluation of antimicrobial efficacy of NaOCl, MTAD and

Tetraclean against Enterococcus faecalis biofilm. J Endod 2007; 33: 852-5.
40
15. Hubble TS, Hatton Jf, NallapareddySr, Murray BE, Gillepsie MJ. Influence
of Enterococcus faecalis proteases and the collagen-binding protein, Ace, on
MA
TI
CA
adhesion to dentin. Oral MicrobiolImmunol 2003; 18: pp 121-6.
16. Soares IL Goldberg F. Endodoncia: Tcnica y Fundamentos. Primera
FO
R
edicin. Editorial Mdica Panamericana. Argentina 2002.
IN
17. Eddy R, Joyce A, Roberts S, Buxton T, Liewehr F. An in vitro of
MA
S
Endodon 2005; 31: 672 5.
antibacterial efficacy of chlorine dioxide on e. faecalis in bovine incisors. J
TE
18. Spangberg,L et al. Biologic effects of endodontic antimicrobial agents. J
SI
S
Endod 1979; 5:166-175.
DE
19. Soekanto,A et al. Toxicity of camphorated phenol and camphorate
parachlorophenol in dental pulp cell culture. J Endod 1996; 22:284-286.
IC
IN
20. Llamas,R. et al. In vitro effect of Parachlorophenol and camphorated
OF
parachlorophenol on macrophages. J Endod 1997; 23:728-730.
21. Arias, ME.; Gmez NM, Cudmani M., Vattuone M. Antibacterial activity of
ethanolic and aqueous extracts of Acacia aroma Gill. ex Hook et Arn. Life
41
Sciences [revista en lnea] 2004 [fecha de acceso 4 de diciembre del 2010];

75, 191-202.URL Disponible en:
CA
http://www.aseanbiodiversity.info/abstract/51003253.pdf
MA
TI
22. Aricapa B. Actividad antimicrobiana sobre organismos cariognicos.

Pontificia Universidad Javeriana. Bogot Colombia.2009. [fecha de acceso
de
Diciembre
2010].
URL
disponible
en:
FO
R
23
IN
http://www.javeriana.edu.co/biblos/tesis/ciencias/tesis324.pdf
23. Chaves M., Gamboa F., Mora A. Evaluacin de dos mtodos para la
MA
S
preservacin de cepas de Streptococcus mutans, centro de investigaciones

Pontificia Universidad Javeriana. Bogot- Colombia. En Actividad
TE
antimicrobiana sobre organismos cariognicos. Aricapa B. Pontificia
acceso
23
SI
S
Universidad Javeriana. Bogot Colombia. Bacteriologa,2009. [fecha de

de
Diciembre
2010].
URL
disponible
en:
DE
http://www.javeriana.edu.co/biblos/tesis/ciencias/tesis324.pdf
IN
24. Garca C. Mara. Plantas medicinales utilizadas en Odontologa (Parte I).
OF
IC
Revista Kiru 3(2), 2006. pp80-85
25. Agroindustria, MINAG, Per Produce el 80% de la Tara a Nivel Mundial. 10

de agosto 2009. En Monografa de Tara-Caesalpinia spinosa (Molina)
42
Kuntze.Lima. Cabello L. Isabel Per; Octubre 2010. [fecha de acceso 23

de octubre 2010]. URL Disponible en:
CA
http://www.biocomercioperu.org/admin/recursos/contenidos/Monografia%20
MA
TI
de%20tara%20-%20final.pdF
26. Lpez C, Garr V, Yrei V, Gallardo T. Accin antimicrobiana Caesalpinea
FO
R
tintoria (Molina) kuntze o Tara, de diferentes regiones del Per. Rev. Ciencia
IN
e Investigacin [revista en lnea] 1998 [fecha de acceso 5 de enero del 2010];

1(1).URL Disponible en:
MA
S
http:// sisbib.unmsm.edu.pe/bvrevistas/ciencia/v01_n1/acciona.htm
TE
27. De la Cruz LP. Aprovechamiento Integral y Racional De La Tara. Rev. Inst.

investig. Fac. minas metal cienc. geogr. [revista en lnea] 2004 [fecha de
SI
S
acceso 17 de enero del 2010]; 7 (14): 64-73. URL Disponible en:
DE
http://www.scielo.org.pe/pdf/iigeo/v7n14/a09v7n14.pdf
28. Ministerio de Salud de la Nacin. Farmacopea Argentina. 7 ed. Buenos
OF
IC
IN
Aires: Repblica Argentina; 2002.
29. Liu B.; Lengua V., Len M; La Torre D., Huapaya Y., Chauca J., et al.
Evaluacin de la Actividad Antibacteriana in vitro de los Extractos de
Caesalpinia spinosa tara y Eucalyptussp. eucalipto Rev. Horiz. Med.
43
[revista en lnea] 2002 [fecha de acceso 10 de noviembre del 2010]; 2 (2): 15.URL Disponible en:
MA
TI
CA
30. http://www.usmp.edu.pe/medicina/horizonte/2002/Art7_Vol2_N1-2.pdf
31. Bellina VK. Efecto in vitro de tres concentraciones de fluconazol sobre seis
FO
R
cepas de Candida albicans [Tesis Doctoral]. Trujillo, Per: Universidad
IN
Nacional de Trujillo; 2005.
32. Schiaffino JC. Estudio de Mercado de Tara [en lnea]. Cajamarca, Per:
MA
S
Programa de Desarrollo Rural Sostenible; 2004. [fecha de acceso 23 de
TE
setiembre 2009]. URL disponible en:
DE
003819.pdf
SI
S
http://www.bvcooperacion.pe/biblioteca/bitstream/123456789/4100/1/BVCI0
33. Ferreira J, Graas C, De Souza P, Miranda J, Da Silva B. Inhibitory effect of
Caesalpinia spinosa leaflets crude extract on Fusarium solani and Phoma
IC
IN
tarda. Maring [revista en lnea] 2005 [fecha de acceso 5 de octubre 2010];
OF
27 (2):185-8. URL disponible en:
http://periodicos.uem.br/ojs/index.php/ActaSciBiolSci/article/viewFile/1329/
76
44
34. Kloucek, P., Polezny, Z., Svobodova, B., Vlkova, E., Kokoska, L.
CA
Antibacterial Screening of Some Peruvian Medicinal Plants Used in Callera
MA
TI
District. J. of Etthnopharm. 2005, 99:309-312. En Monografa de TaraCaesalpinia spinosa (Molina) Kuntze.Lima. Cabello L. Isabel
Per;
Octubre 2010. [fecha de acceso 23 de octubre 2010]. URL Disponible en:
FO
R
http://www.biocomercioperu.org/admin/recursos/contenidos/Monografia%20
IN
de%20tara%20-%20final.pdf
metanlicos
de
MA
S
34. Alzadora, L.; Solis H.; Rojas, M. Actividad leishmanicida de los extractos
cuatro
ecotipos
de
Lepidiumperuvianum,
Chacn
TE
(Brassicaceae). Rev. Peru. Biol. [revista en lnea] 2007 [fecha de acceso 10

de noviembre 2010]; 13(3): 211-4. URL Disponible en:
DE
SI
S
http://sisbib.unmsm.edu.pe/bvrevistas/biologia/v13n3/pdf/v13n03a10.pdf
35. Rimarachn, J.; Vasquz M. Sensibilidad in vitro de Candida albicans,
Sthaphylococcus aureus y Salmonella Typha al extracto etanlico de Bidens
IC
IN
pilosa L. Amor seco. Facultad de Ciencias Biolgicas. Universidad
OF
Nacional Pedro Ruiz Gallo; 2004.
36. Duraffourd C. y Lapraz J. Cuaderno de Fitoterapia Clnica. Editorial

Masson;
Francia 1983.
45
37. Lock de Ugaz, O. Investigacin Fotoqumica: Mtodos en el estudio de

productos naturales. 2 ed. Per: Editorial Pontificia Universidad Catlica
MA
TI
CA
del Per; 1994.
38. Koneman E. Diagnstico Microbiolgico. Edit Panamerica.
FO
R
Espaa 2009.
6 edicin.
IN
39. Malpartida F. Efecto inhibidor del aceite esencial de Minthostachysmollis

en comparacin al paramonoclorofenol alcanforado y gluconato de
MA
S
clorhexidina al 2 % frente a cepas de Enterococcus faecalis. Rev. del COP

de Regin Lima. Setiembre 2010; 15 (32): 9-12.
TE
40. Azaa I. Efectividad antibacteriana in vitro del aceite esencial de
SI
S
Minthostachys mollis griseb (mua) sobre bacterias prevalentes en

patologas periapicales crnicas de origen endodntico [Tesis para optar el
DE
ttulo de cirujano dentista].2010. Facultad de odontologa. Universidad
OF
IC
IN
Nacional Mayor de San Marcos
46
FO
R
MA
TI
CA
OF
IC
IN
DE
SI
S
TE
MA
S
IN
ANEXOS
47
CA
Tabla N 1: Efecto inhibitorio in vitro del extracto etanlico de vainas de

Caesalpinia spinosa (Taya) sobre cepas de Enterococcus faecalis ATCC 29212,
segn el mtodo de difusin en discos.
CONCENTRACIONES DE EXTRACTO
ETANLICO DE Caesalpinia spinosa
60%
T5
18
Control
F3
0
19
19
16
15.5
15
15.5
16
16
15
19
17
17.5
17
18
16
19
20
20
20
21.5
13
14
14
16
16
16
14
17.5
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
16.1
17.3
20%
40%
16
15
15
14
14
15
13.5
13.5
15
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
13
13
13
13
11.5
14
13.5
13
13
12
12
11.5
11
13.5
13
13
13
12.5
14.5
14
14
14
13.5
13.5
13
13
MA
S
TE
SI
S
DE
12.9
13.6
IN
Prom
(mm.)
IN
10%
FO
R
N/C
MA
TI
DIMETRO DEL HALO DE INHIBICIN (mm)
OF
IC
48
IC
IN
DE
SI
S
TE
MA
S
IN
FO
R
MA
TI
CA
OF
SELECCIN Y PROCESAMIENTO DE Caesalpinia spinosa TAYA

REALIZADO EN LABORATORIO DE MICROBIOLOGA DE LA
FACULTAD DE MEDICINA UNT
49
IN
FO
R
MA
TI
CA
IN
DE
SI
S
TE
MA
S
Secado y seleccin de Caesalpinia spinosa
OF
IC
Vainas de Caesalpinia spinosa Taya seleccionada- Material estril necesario para

procesamiento
50
MA
TI
CA
TE
MA
S
IN
FO
R
Trituracin de vainas de Caesalpinia spinosa
Pesado de polvo 50 gr como

indica el proyecto
OF
IC
IN
DE
SI
S
Producto obtenido de la trituracin

de vainas de Caesalpinia spinosa
51
MA
S
IN
FO
R
MA
TI
CA
Aplicacin de 500 ml de alcohol de 70 a los 50gr de polvo de Taya contenido en

botella mbar; la solucin obtenida estril se dej macerar por 10 das en un lugar
oscuro y a temperatura ambiente.
OF
IC
IN
DE
SI
S
TE
Filtrado despus de 10 das de maceracin
52
MA
S
IN
FO
R
MA
TI
CA
Obtencin de 330 ml de macerado de Caesalpinia spinosa, este se coloc en la estufa

a 37 c para la evaporacin de alcohol .
REALIZACIN DE PRUEBA PILOTO
OF
IC
IN
DE
SI
S
TE
Despus de 12 das de evaporacin, se obtuvo el extracto

etanlico de Caesalpinia spinosa. Obteniendo 62 ml al 40 % de
concentracin y 2.5 gr de extracto al 100 % de concentracin
53
FO
R
MA
TI
CA
Se tomaron microlitros del extracto obtenido y se disolvieron en agua destilada hasta

llegar a las 4 concentraciones requeridas.
IC
IN
DE
SI
S
TE
MA
S
IN
Se obtuvieron las 4
concentraciones de extracto
etanlico de vainas
Caesalpinia spinosa 0.25mg/ml,
0.5 mg/ml, 0.75mg/ml, 1 mg/ml
OF
Se aplicaron las 4 concentraciones ms un control que fue el solvente (agua destilada)

y en el centro un papel filtro con extracto etanlico al 40 % se hicieron dos
repeticiones
54
IN
FO
R
MA
TI
CA
Despus de 24 horas se haya suceptibilidad del Enteroccocus faecalis al extracto
MA
S
etanlico de taya al 40 % de concentracin. Obteniendo halo de inhibicin promedio
TE
de 13.5.
OF
IC
IN
DE
SI
S
A partir de estos resultados se decide obtener nuevas concentraciones 40%, 20 %, 10

%,y del extracto al 100% en polvo seco se obtuvo la concentracin al 60%
55
TE
MA
S
IN
FO
R
MA
TI
CA
Obtencin de 4 concentraciones concentraciones finales
OF
IC
IN
DE
SI
S
REALIZACIN DE PRUEBA DE SUCEPTIBILIDAD
56
Tubos conteniendo Agar TSA jvenes de Enterococos faecalis
MA
TI
CA
Preparacin de inculo standarizado,comparando con tubo de mackfarland
IC
IN
DE
SI
S
TE
MA
S
IN
FO
R
Sembrado de cepas de Enterococcus

faecalis en Placas petri conteniendo Agar
sangre Muller Hinton
OF
Discos de papel filtro embebidos en las 4 concentraciones de extracto etanlico de

Caesalpinia spinosa
57
IN
FO
R
MA
TI
Se
CA
utilizaron 10 placas petri ,16 repeticiones por
concentracin, Colocacin de 8 papeles filtro por placa petri. Incubacin por 24 horas
OF
IC
IN
DE
SI
S
TE
MA
S
en jarra Has Pack a 37C
Lectura de halo inhibitorio despus de 24horas de incubacin.
SUSCEPTIBILIDAD AL 10 %
58
MA
S
IN
FO
R
MA
TI
CA
OF
IC
IN
DE
SI
S
TE
59
MA
S
IN
FO
R
MA
TI
CA
OF
IC
IN
DE
SI
S
TE
SUSCEPTIBILIDAD EN CONTROL
60
MA
S
IN
FO
R
MA
TI
CA
OF
IC
IN
DE
SI
S
TE
DETERMINACIN DE CONCENTRACIN MNIMA INHIBITORIA
TCNICA DE DILUCIN DE TUBOS
Tubos conteniendo extracto extanlico de Caesalpinia spinosa (las concentracin del

extracto disminuyen de izq. a der.), y tubo control todos presentan inculo de
Enterococcus faecalis. Se incub por 24 horas a 37 0 C
61
IN
FO
R
MA
TI
CA
Dispersin con Asa de
MA
S
Sembrado de cada uno de los inculos

Driglasky
TE
RESULTADOS DE CMI
SI
S
Todas las concentraciones inhibieron el crecimiento de colonias, pero la inhibicin

total de UFC se dio apartir del 40% determinndose esta como la CMI, despus de 48
horas a 370c
OF
IC
IN
DE
UFC AL 10% DEL EXTRACTO ETANLICO DE Caesalpinia spinosa
62
MA
S
IN
FO
R
MA
TI
CA
OF
IC
IN
DE
SI
S
TE
63
MA
S
IN
FO
R
MA
TI
CA
OF
IC
IN
DE
SI
S
TE
UFC EN PLACA CONTROL
64
ANEXO 02
EVALUACIN DE LA TESIS
El Jurado deber:
las
observaciones
objeciones
c. Firmar los tres miembros del jurado.
MA
TI
relacionadas a los siguientes tems.

b. Anotar el calificativo final.
pertinentes
CA
a. Consignar
FO
R
TESIS:............................
1. DE LAS GENERALIDADES
IN
MA
S
El Ttulo:
.
TE
.
Tipo de Investigacin:
.
SI
S
..
2. DEL PLAN DE INVESTIGACIN
OF
IC
IN
DE
Antecedentes:
..
Justificacin:
.
Problema:
..
.
Objetivos:
.
Hiptesis:
.
Diseo de
Contrastacin:
Tamao
Muestral:
65
Anlisis Estadstico:
3. RESULTADOS:
CA
MA
TI
4. DISCUSIN:
.
5. CONSLUSIONES:
FO
R
6. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS:
IN
7. RESUMEN:
MA
S
TE
.
8. RELEVANCIA DE LA INVESTIGACIN:
SI
S
DE
.
9. ORIGINALIDAD:
IN
...
OF
IC
10. SUSTENTACIN:
10.1Formalidad:
...
10.2Exposicin:
.
66
10.3Conocimiento del Tema:

.
CA
CALIFICACIN
JURADO
MA
TI
(Promedio de las 03 notas del jurado)

Nombre
Cdigo
Firma
FO
R
Presidente: Dr. ..
.
IN
Grado Acadmico:
Secretario: Dr. ..
MA
S
Grado Acadmico:
Miembro: Dr.
.
SI
S
TE
Grado Acadmico:
ANEXO 03
DE
RESPUESTAS DEL TESISTA A OBSERVACIONES DEL JURADO

El Tesista deber responder en forma concreta a las observaciones del
IN
jurado a manuscrito en el espacio correspondiente:
IC
a.
Fundamentando su discrepancia.
Si est de acuerdo con la observacin registrada.
c.
Firmar.
OF
b.
TESIS:
...........................
67
1. DE LAS GENERALIDADES
CA
El Ttulo:
MA
TI
Tipo de Investigacin:
DE
SI
S
TE
MA
S
IN
FO
R
.
2. DEL PLAN DE INVESTIGACIN
Antecedentes:
..
Justificacin:
.
Problema:
..
.
Objetivos:
..
Hiptesis:
..
Diseo de
Contrastacin:
Tamao
Muestral:
Anlisis Estadstico:
3. RESULTADOS:
IN
IC
4. DISCUSIN:
OF
5. CONSLUSIONES:
68
6. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS:
CA
MA
TI
.
7. RESUMEN:
FO
R
IN
8. RELEVANCIA DE LA INVESTIGACIN:
MA
S
TE
9. ORIGINALIDAD:
SI
S
...
10. SUSTENTACIN:
DE
10.1Formalidad:
IN
10.2Exposicin:
IC
OF
10.3Conocimiento del Tema:
69
Nombre
OF
IC
IN
DE
SI
S
TE
MA
S
IN
FO
R
MA
TI
CA
Firma
70

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Oficina de Sistemas e Informatica - UNT

UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

EFECTO INHIBITORIO in vitro DEL EXTRACTO ETANLICO DE

Caesalpinia Spinosa TAYA SOBRE CEPAS DE Enterococcus Faecalis

PARA OPTAR EL GRADO DE

CINTYA LISET FLORES ARMAS

MG. GUSTAVO GUARDIA MNDEZ.

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El objetivo del presente estudio de tipo experimental fue determinar el efecto

inhibidor in vitro del extracto etanlico de vainas de Caesalpinia spinosa (Taya)

discos presentaron halo de inhibicin, y los tamaos de estos aumentaron en relacin

Mtodo de dilucin en tubos, ensayando concentraciones de 60%, 40%, 20% y 10%

presentaron efecto inhibitorio del crecimiento de E. faecalis. La concentracin

mnima inhibitoria hallada fue la del 40 %.

Se concluye que el extracto etanlico de vainas de Caesalpinia spinosa taya posee

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concentrations of the ethanolic extract of Taya. These were incubated at 370C

inhibition, and sizes of these increased in relation directly proportional to the

tested concentrations of 60 %, 40 %, 20% and 10% of the ethanolic extract of

The minimum inhibitory concentration found was 40 %.

strains of Enterococcus faecalis.

Key Words: Caesalpinia spinosa, Enterococcus faecalis, Minimum

Inhibitory Concentration, Colony Forming Units

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Durante el tratamiento de conductos radiculares el objetivo de la preparacin

biomecnica es limpiar y modelar adecuadamente el conducto radicular antes de la

preparacin quirrgica de conductos radiculares.1

Estos microorganismos conducen al fracaso del tratamiento endodntico, as,

periodontitis apical persistente. 2

Baumgartner y cols.19923, quienes estudiaron las bacterias que se aislaban en los

5mm apicales de dientes con lesin periapical. Encontraron ms de 50 especies de

ms frecuentemente fueron: Actinomyces spp., Lactobacillus spp., Bacteriodes no

pigmentados, Veillonella spp., Enterococcus faecalis, Fusobacterium nucleatum y

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fracaso en el tratamiento endodntico es predominantemente anaerobia facultativa y

El Enterococcus faecalis es una bacteria en forma de coco dispuesta en cadenas o

identificada como una causa frecuente de infeccin del sistema de conductos

radiculares en dientes con fracaso en el tratamiento endodntico. La temperatura

observado crecimiento entre 10C y 45C.9

Una caracterstica notable de esta especie es su capacidad para sobrevivir y crecer en

de Hidrxido de Calcio.10 Su erradicacin del conducto radicular es difcil utilizando

preparaciones qumicomecnicas e irrigantes como desinfectantes, as como pastas y

lipoteicoico que se encuentra asociado con la membrana citoplasmtica de la bacteria

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en un medio tan pobre en nutrientes, como el conducto radicular medicado. La

adhesin a la superficie de la dentina constituye un paso esencial que determina el

sintetizadas por E. faecalis, as como la protena de unin al colgeno (Ace) pudieran

la bacteria colonice el conducto radicular.15

En los dientes con pulpa mortificada o necrtica, el contenido microbiano txico de

la cavidad pulpar determina la opcin por sustancias antispticas. La medicacin

conductos radiculares, sobre todo en lugares inaccesibles a la instrumentacin, como

las ramificaciones del conducto principal y tbulos dentinarios. 16

La eleccin de una medicacin intraconducto entre sesiones requiere de las mismas

consideraciones que la aplicacin de cualquier frmaco en otra regin del organismo

humano. Por lo tanto es necesario considerar. Cantidad, localizacin y tiempo de

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Paramonoclorofenol Alcanforado y combinaciones de antibitico-esteroideas, as

como irrigantes tales como hipoclorito de sodio, digluconato de clorhexidina, Acetato

de clorhexidina y componentes iodino.17

En un estudio in vivo e in vitro realizado por Spangberg et al se evalu el efecto

sobre la irritacin tisular (permeabilidad capilar) y la citotoxicidad de varios

medicamentos: PCMF alcanforado, fenol alcanforado, cresatina, formocresol e