INSTITUTO POLITCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLGICAS

LABORATORIO DE BIOQUMICA
ALUMNOS:

Cruz Montiel Mario Arturo

Lorena
GRUPO: 3FV1

PRACTICA NO8
Separacin de Fosfolpidos por
cromatografa en capa fina y
determinacin de colesterol en yema
de huevo
INTRODUCCION:
Los lpidos son el cuarto grupo principal de
molculas presentes en todas las clulas. A
diferencia de los cidos nucleicos, las
protenas y polisacridos, los lpidos no son
polimricos. Sin embargo, se agregan, y en
este estado llevan a cabo su funcin ms
importante como matriz estructural de las
membranas biolgicas
Los lpidos exhiben mayor variedad
estructural que las otras clases de las
molculas biolgicas. Hasta cierto grado, los
lpidos son una categora general de
sustancias similares nicamente por ser en
gran medida hidrfobas y solo escasamente
solubles en agua
Se clasifican en:
cidos grasos
Triglicridos
Fosfogliceridos
Esfingolipidos
Esteroides

OBJETIVOS:
Separar los fosfolpidos presentes en
una muestra problema por
cromatografa en capa fina
aprovechando su baja polaridad y
aprovechando su naturalesa (si
incluyen o no grupos amino, fosfatos,
etc)
Determinar la concentracin de
colesterol en yema de huevo por

Herrera Mora Sara

SECCION: IV

medio de una curva tipo realizada

con un estndar de colesterol
RESULTADOS:
A continuacin se enuncian los valores de RF
determinados en cromatografa de capa fina
El RF: se obtiene a partir de dividir la
distancia recorrida por la muestra problema,
entre lo que recorri el disolvente, as pues

Dist recorrida por la muestra

=RF
d ist . recorrida por el eluyente

MOLIBDATO (frente de la mancha 6.2

cm)
Valor de RF
MANCHA1
4 cm
0.64
MANCHA2
5 cm
0.80
MANCHA 3 5.5
0.88
BISMUTO
CM
MANCHA 1
MANCHA 2
MANCHA 3
MANCHA 4

1.7
3.5
4.5
5.1

VALOR DE
RF
0.27
0.56
0.72
0.82

NINHIDRINA
CM
MANCHA 1
MANCHA 2
MANCHA 3

2.1
4
5.9

VALOR DE
RF
0.33
0.64
0.95

CM

VALOR DE

YODO

MANCHA1
MANCHA2
MANCHA3

1.7
3.4
4.8

RF
0.27
0.54
0.77

Cromatografa obtenida
DETERMINACION DE COLESTEROL
EN YEMA DE HUEVO:
Por medio de la reaccin de Lieberman
Burchard realizamos una curva tipo para
interpolar nuestra muestra problema (yema
de huevo)

CONCENTRACION DE COLESTEROL
B 1
2
3
4
5
ABS
0 0.
0.1 0.0 0.3 0.4
07
88
46
55
44
1
COLESTER 0 20
40
60
80
10
0
OL(g)

PB
0.2
10
47

DISCUSIN:
Realizamos 4 cromatografas de la misma
muestra de huevo porque solo de esta forma
identificamos mayor variedad de fosfolpidos
presentes en la yema dndose a conocer

mediante la aplicacin de diferentes tipos de

reveladores. La prueba de molibdato
presenta el mayor nmero de
interpretaciones debido a que es una prueba
general para fosfolpidos y se visualiza con
manchas de color azul; podramos decir que
solo para este experimento nos bastara
aplicar solamente el revelador molibdato
porque cubre todas las expectativas; sin
embargo, la fosfatidil serina y la fosfatidil
colina no se llegan a separar por completo,
por lo que se tendran que realizar otras
pruebas para evitar confusiones. Otro punto
importante a aclarar es que la mancha que
representa a lpidos neutros como el
colesterol no presenta el color azul
caracterstico de la prueba sino se expresa
una tonalidad plida y amarillenta.
La prueba de ninhidrina es especfica para
fosfolpidos que presenten grupos amino y es
positivo con manchas de color violeta solo
para fosfatidil-serina y fosfatidil-etanol-amina.
En cuanto a la prueba de Yodo, ste nos
permiti visualizar de color caf lpidos con
dobles enlaces dando positivo para lpidos
neutros ( en este caso el colesterol),
fosfatidiletanolamina y lecitina. La
esfingomielina posee solamente un doble
enlace en la primera cadena hidrocarbonada
pero dio negativo, probablemente sera por la
cantidad de muestra que no es suficiente
para ponerlo de manifiesto, adems de que
sus cadenas con ms largas con respecto a
los dems.
Finalmente, se trabaj con el revelador
Bismuto, que nos permite observar
fosfolpidos que presenten colina en su
estructura con machas anaranjadas, y
encontramos a la isolecitina, esfingomielina y
lecitina
Determinacin de colesterol:
Los valores estn alrededor del promedio
estndar de colesterol (335 mg/yema en
huevo de gallina y 235 mg/yema en huevo de
pata). A pesar de que existieron problemas al
momento de realizar la curva tipo.
CONCLUSION:
Se separaron e identificaron diferentes
tipos de fosfolpidos con basndonos en

que algunos contienen grupos

especficos como (aminas, fosfatos, etc)
Determinamos la concentracin de
colesterol de una yema de huevo
basndonos en los valores obtenidos en
una curva tipo realizada con un estndar
de colesterol

PREGUNTAS EXTRA:
SINTESIS DE HORMONAS
ESTEROIDEAS A PARTIR DE
COLESTEROL

BIBLIOGRAFA:
Antonio Pena, bioqumica, Editorial
Limusa, 1998, pag (297,298,299)
Fundamentos de bioqumica, Universitad
de Valncia, 2007, pag 290, 291
Silvia Quesada Mora, Manual de
experimentos de laboratorio para
bioqumica, ed EUNED 75, 76