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Definicin
Es el estudio de los MICROORGANISMOS, el mundo subvisible de los seres vivos.
Entre los microorganismos que infectan o coexisten con el hombre, vamos a
considerar a las bacterias, hongos, virus y protozoos. La microbiologa mdica
incluye tambin el estudio de parsitos multicelulares que causan enfermedad al ser
humano, que en algn momento de su vida exhiben formas microscpicas.
Hay 5 grupos de microorganismos: algas, bacterias, hongos, protozoos y virus.
Excepto por el tamao estos grupos no estn relacionados entre s; solo tienen una
propiedad en comn su pequeo tamao. Si no estn relacionados entre s, entonces
porque se los agrupa, para estudiarlos de forma conjunta? la respuesta es de tipo
prctico,.Las tcnicas para identificar, cultivar, y estudiar los grupos de m.o. son
semejantes. La microbiologa es una
internas asociadas a membranas, su material nuclear esta compuesto por una nica
molcula de ADN circular, que constituye el NICO cromosoma bacteriano, sin una
membrana nuclear que los separe del citoplasma.
Las ALGAS ,HONGOS Y PROTOZOOS son EUCARIOTAS , al igual que las plantas
y animales, tienen un ncleo rodeado de una membrana , llamada membrana
nuclear, y otras estructuras internas definidas por membranas , llamadas orgnulos.
Los VIRUS son ACELULARES, no son clulas , son partculas de cido nucleico ,
RNA o DNA , pero nunca ambos, gralmente estn incluidos en una cubierta proteica,
son incapaces de realizar las actividades necesarias para su reproduccin , solo
pueden reproducirse dentro de una clula hospedadora. En otras palabras los virus
son parsitos intracelulares obligados. Pueden infectar a animales, plantas y otros
m.o. Otra caracterstica importante es que son extremadamente pequeos , no
pueden
observarse
mediante
microscopio
ordinario
deben
estudiarse
TAXONOMIA
La Taxonoma es la ciencia que estudia la clasificacin , identificacin y
nomenclatura de las bacterias, es una ciencia dinmica , su dinamismo esta
asociado a los avances de la metodologas usadas para su estudio.
La Clasificacin consiste en ordenar las bacterias en grupos.
La Identificacin permite encuadrar un organismo determinado en un grupo
taxonmico especfico, dentro de una clasificacin previamente establecida. Ej. Un
coco gram positivo que se agrupa en racimos , y ademas es catalasa positivo y
produce coagulasa y fermenta la glucosa , se identifica como Staphylococcus
aureus, porque esas propiedades corresponden a una especie previamente definida
con ese nombre.
La Nomenclatura permite definir un organismo sin tener que enumerar sus
propiedades y comunicarnos sin equivocarnos. El nombre de una especie
determinada tiene el mismo significado cualquiera sea la oportunidad en la que se
use y el idioma en que se hable. El sistema binomial de Ligneo , Gnero y especie,
es la forma de nomenclatura que se sigue usando, con el agregado de variedades,
tipos y otras subcaracterizaciones. Siempre el nombre genrico se escribe con
mayscula y el epteto especfico con minscula, la subespecie o variedad se escribe
, con un epteto especfico tambin en Minscula. Estos nombres deben escribirse
siempre con letra cursiva o subrayados. Una publicacin que reune los nombres de
las bacterias de importancia mdica es el BERGEYS MANUAL OF SISTEMATIC
BACTERIOLOGY, las bacterias en este manual estn situadas en el reino
Procaryotae en el que se reconocen 4 divisiones: - con pared celular y gram
negativas, - con pared celular y gram positivas, - sin pared celular,- arquibacterias y
otras. Tener en cuenta que nunca se identificar a un m.o si no se cuenta con
medios de cultivo, aislamiento y
enriquecimiento apropiados
y si no se usan
BIOSEGURIDAD EN EL LABORATOIO
En el laboratorio debemos tener en cuenta algunos peligros , que tenemos que
considerar para disminuir los riesgos de accidentes , adems de recordar la
presencia de otros elementos nocivos
No fumar
No beber
No comer
No maquillarse
Para estas acciones deben existir espacios destinados para tal fin.
Ropa protectora : Se debe trabajar CON GUARDAPOLVO , ya que proteger nuestra
ropa de salpicaduras . Debe llevarse peridicamente y quedar siempre dentro del
rea del laboratorio.
Otras protecciones
- Cuando se trabaja con sustancias corrosivas, es conveniente usar anteojos
protectores para disminuir el riesgo de salpicaduras o de exposicin a vapores que
pueden lesionar la crnea. Es importante TRABAJAR BAJO CAMPANA , cuando se
manipulan solventes. Se debe tener a mano una solucin para enjuague de ojos.
- Debe evitarse el pipeteo directo con la boca . Es conveniente usar
pipetas
Otras recomendaciones
- Proteger de sobrecargas los circuitos elctricos, usando disyuntores y polos a
tierra
- Utilizar una toma a tierra en la instalacin elctrica interior
- Usar tomacorrientes simples en lugar de tomas multiples
- Colocar los interruptores y disyuntores en lugares accesibles
- Usar calefactores con vlvula de seguridad
- Almacenar los gases comprimidos inflamables , lejos de fuentes de ignicin
- Revisar peridicamente los matafuegos
- Mantener los corredores y pasillos libres de obstculos que puedan entorpecer las
salidas
Condiciones grales.
#Todos los reactivos deben estar debidamente rotulados y es importante
acostumbrarse a leer los rtulos. En ellos debe figurar: - Nombre del reactivo
- Si el producto necesita condiciones de almacenamiento especiales
- Si es txico
- Si es voltil
- Si durante el almacenamiento puede aumentar su presin , pudiendo producir la
explosin del recipiente
- Fecha de envase y/o vencimiento
- Temperatura de almacenamiento en determinados casos
# Si el producto es voltil, como x ej el ter, cloroformo o acetona, debe manejarse
bajo la campana , para evitar la aspiracin de vapores. Asimismo no deben
almacenarse en Heladera.
# Toda salpicadura debe ser neutralizada rpidamente y absorbida.
# Al terminar la tarea deben limpiarse las mesadas y ventilar el rea
b-
Productos inflamables
# Destinar reas especiales para el almacenamiento de este tipo de materiales
# Deben manejarse en reas ventiladas, usando la minima cantidad indispensable
para realizar el trabajo, lejos de los mecheros u otra fuente de calor.
c-
Productos txicos
d-
Productos corrosivos
e-
Productos cancergenos
Usar siempre ropa protectora , mascara y guantes descartables
El riesgo depende de - tiempo de exposicin
Frecuencia de exposicin
Contacto directo
f-
Productos explosivos
Son sensibles a golpes o impactos , x ej el cido pcrico y perxidos . No
almacenarlos en heladera comn o cerca de fuentes de calor.
Algunos comparten mas de una categora Ej.
Membrana celular
La
membrana
citoplasmtica
de
las
bacterias
es
una
bicapa
lipdica,
Pared Celular
Por fuera de la membrana citoplasmtica se encuentra la pared celular, rgida de
pptidoglicano, presente en todas las bacterias , excepto , en los micoplasmas.
La presencia de la pared protege a la bacteria de la diferencia de presin osmtica ,
entre el medio interno de la bacteria y el exterior, de no existir la pared , la bacteria
estallara, la rigidez de la pared es la q da forma a la bacteria.
Existen dos tipos de pared bacteriana , que se pueden diferenciar por sus
caractersticas tintoriales . Hans Christian Gram us un mtodo de tincin que
permiti dividir a las bacterias en dos grupos : I - aquellas capaces de retener el
colorante cristal violeta luego de la decoloracin con alcohol acetona,
GRAM
Gram negativos
La pared celular de los gram negativos: el espesor de la pared de una bacteria
gram - , es considerablemente menor q el de una bacteria gram + , la cantidad de
murena es mucho menor, pero igualmente protege y da forma a la bacteria,
CARECE de cidos teicoicos, tiene periplasma que contiene protenas en solucin,
estas protenas son enzimas con distintas funciones.
Membrana externa
Por fuera del periplasma, se encuentra una estructura exclusiva de las bacterias
gram - , denominada membrana externa, es una estructura asimtrica , esa asimetra
se debe a que la semicapa interior esta compuesta por lipopolisacaridos y la
semicapa exterior esta compuesta por Lipopolisacarido ( LPS) , que tiene actividad
de endotoxina y es altamente txico para el ser humano y otros mamferos.
Cpsulas
Por fuera de la membrana de las bact . Gram y la gruesa pared de los Gram + alg
bacterias presentan una cpsula, que es
Esporas
Las esporas , mejor llamadas endosporas, son formaciones con bajo contenido de
agua, que algunas bacterias producen en condiciones nutritivas desfavorables o bajo
condiciones de estrs, pocas especies de bacilos gram + producen esporas
mediante el proceso de esporulacin , las esporas son rganos de resistencia. La
resistencia de la espora al calor esta dada x su bajo contenido de agua y por la
presencia de dipicolinato de calcio, sustancia solo presente en esporas, la resistencia
a la accin de los agentes qumicos y en alguna medida a las radiaciones esta dada
x las envolturas q rodean a la espora, que desde adentro hacia fuera son : membrana interna
-
La germinacin de una espora comienza una activacin disparada por una elevacin
de temperatura, acidez, o potencial reductor
Divisin celular
Las bacterias se multiplican por fisin binaria, en este proceso el crecimiento
contina hasta que la clula se divide en dos nuevas clulas.
Ejemplo: Escherichia coli
OBSERVACION MICROSCOPICA
La observacin microscpica es el principal apoyo en la investigacin microbiolgica
rutinaria.
Los caracteres morfolgicos de los m.o. son :
-
tamao
Forma
Agrupacin
Coloracin de Gram
Acido resistencia
Cpsula
Espora
Materiales de reserva
Presencia de flagelos
2-
reduce los efectos de distorsin que pueden ocurrir cuando se realiza el fijado
para colorear
2-
Colorante
Es toda sustancia coloreada que puede comunicar su color a otros cuerpos. Son
compuestos orgnicos que tienen alguna afinidad especfica por los materiales
celulares
Existen varios tipos de colorantes
a-
los que son sales : que pueden ser - cidos , que se combinan con el
protoplasma bacteriano, si la clula no ha muerto el proceso de tincin la mata.
b-
2-
Fijacin :
lentamente el preparado por la llama del mechero 3 veces seguidas, con el extendido
hacia arriba, tener cuidado los m.o pueden deformarse si el calentamiento es
excesivo .
Coloracin de Gram
Es la mas usada , segn su reaccin a la tincin las bacterias pueden dividirse en
dos grupos : GRAM positivas y GRAM negativas
Procedimiento:
- cubrir el extendido con violeta de genciana y dejar actuar 5 minutos ,
- volcar el colorante , en este momento todas las bacterias estn teidas de violeta,
pues el colorante penetro en ambos tipos de clula, y sin lavar cubrir con solucin
yodo yodurada , que acta como mordiente, el Yodo entra en la clula y forma con
el violeta un complejo insoluble en agua, dejar actuar 1 a 2 minutos
- Lavar con agua y decolorar con alcohol-acetona , durante 20 , las bacterias G +
retienen por mas tiempo el complejo , permaneciendo de color violeta , las G se
decoloran rpidamente , en este caso las bacterias G + son violetas y las G
incoloras
- Lavar con agua para evitar que siga actuando el decolorante
- Cubrir con fucsina fenicada de Ziehl diluida 1/10 o safranina, durante 20 estos
ltimos son colorantes rojos, son colorantes de contraste se utilizan para poner de
manifiesto a las bacterias G - .
- Despus de la coloracin las bacterias G- son ROJAS y las G+ permanecen
VIOLETAS.
El comportamiento diferente de las bacterias G + y G frente al decolorante , se
debe a diferencias en la pared celular de ambos tipos de bacterias. Se sabe que la
pared celular de los m.o. G+ acta como una barrera, frente a la salida del complejo
, violeta de genciana Yodo. Tener en cuenta q las bacterias G + pueden perder la