Formacin de Calcio Carbonato polimorfos inducidas por Living

micro algas
RESUMEN
El carbonato de calcio (CaCO3) se produce en los tres polimorfos calcita,
aragonita y vaterita. La formacin de estos cristales en soluciones
inorgnicas est influenciada por parmetros tales como pH, temperatura o
impurezas. Vivir microalgas de agua dulce tambin puede inducir la
formacin de CaCO3 cuando viven en un entorno adecuado que contenga
cantidades saturadas de Ca2 +.
A travs de este biomineralizacin biolgicamente inducida slo la
formacin de la calcita polimorfo ha informado todava. Se investigaron los
precipitados que se han formado en soluciones que contienen la
Scenedesmus microalgas de agua dulce oblicuo y diferentes cantidades de
zinc (0, 3,27 y 6,53 mg Zn2 + / l) por DRX y SEM. Como referencias
precipitados de las mismas soluciones, pero sin algas fueron investigados.
Hemos podido demostrar que la presencia de microalgas que viven tiene
una gran influencia sobre la precipitacin de cristales de carbonato de
calcio. En los medios de algas que contienen o sin la mnima cantidad de
zinc se forman siempre calcita y aragonita. En el medio correspondiente con
6,53 mg Zn2 + / l aragonita pura se construyeron cristales. En cambio, en
las soluciones inorgnicas, libre de algas sin zinc, calcita pura se precipita.
Tanto inorgnicos soluciones con zinc muestran mayor precipitacin de
calcita y aragonito precipitacin dbil. As, las clulas de las algas avanzan
significativamente la formacin de aragonita, que se ve reforzada por la
presencia de cationes de zinc en los medios. Posible Se discuten
mecanismos.
Palabras clave: polimorfos CaCO3; Biomineralizacin; Zinc; Las
microalgas; DRX
1. Introduccin
La formacin del carbonato de tres de calcio (CaCO3) polimorfos calcita,
aragonito y vaterita en inorgnica soluciones ha sido el tema de muchos
estudios [1-4]. Era propone que primero una fase amorfa inestable se
construye que transforma a la vaterita fase metaestable o aragonita,
seguido por la transformacin a la fase estable calcita [1]. La precipitacin
de los polimorfos puede ser afectada por diferentes factores como la
temperatura, el pH de la medio, la relacin de concentracin de los
componentes individuales, sobresaturacin, la fuerza inica o impurezas [3].
Las investigaciones de Ogino et al. (1987) [1] revel que la aragonita
formacin se favorece a temperaturas ms altas (> 40 C) en solucin
acuosa, que tambin ha contado con el apoyo En otros experimentos [4]. A
temperatura ambiente, la pH de la solucin en un entorno constante
composicin es el factor ms importante para la formacin de la polimorfos
[3]. A 24C, vaterita es el producto principal en el intervalo de pH entre 8,5

y 10. Aragonite preferiblemente formado a pH 11; cuando el pH es mayor

que 12, calcita es el producto dominante. La precipitacin de los diferentes
polimorfos tambin pueden ser modificados por impurezas en el solucin.
Cuando el radio inico de las impurezas es menor que la de los cationes Ca2
+, lo que es el caso para Zn2 + cationes [5], aragonita se deposita [6]. Esta
influencia se explica por fenmenos de adsorcin en el cristalino las caras
de los ncleos. Kitano et al. (1976) [7] examin especficamente el
comportamiento de adsorcin de Zn2 + en Polimorfos de CaCO3 en
soluciones acuosas. Ellos mostraron influencia del metabolismo de las algas
en su acuosa medio ambiente [16]. A travs de la fotosntesis del asimilar
algas CO2 y / o 3, y liberar OH- [16,17].
Esto conduce a un aumento del pH y la concentracin de aniones carbonato
en la solucin. Tambin es en gran parte acepta que el pH afecta a ambos
Nmero de superficie de la clula sitios y qumica de metal dentro de la
solucin acuosa de unin: en el intervalo cido, los grupos funcionales de la
clula pared son estrechamente protonada, lo que limita el enfoque de
cationes metlicos. Las paredes celulares de las algas verde consisten
polisacridos y protenas [18,19]. Con el aumento de pH, ms grupos
funcionales, tales como carboxilo o amino grupos, estn expuestos, lo que
aumenta la biosorcin de iones metlicos en las paredes celulares cargadas
negativamente. En el primer paso, Ca2 + se une en la pared celular, y
despus aniones se acumulan y CaCO3 se precipita extracelular. Este
mecanismo se llama biolgicamente inducido [16], debido a que la
calcificacin no se controla activamente por los organismos. En el
biolgicamente controlada biomineralizacin, se producen diferentes tipos
de biominerales bajo el control gentico de los organismos. Hasta ahora, en
la presencia de microalgas de agua dulce slo el extracelular formacin
inducida biolgicamente de la calcita es reportado. HCO2
CO3 Iones
metlicos cargados positivamente tambin se pueden unir en la superficie
de las clulas de los organismos vivos [por ejemplo, 20-27]. El zinc es un
metales traza esencial para todos los organismos, pero pueden ser txicos
cuando est presente en altas cantidades. La exposicin de las microalgas
para subletal concentraciones Zn2 + causaron la inhibicin de, por ejemplo
la fotosntesis [28]. Cuando las algas se enfrentan a elementos txicos como
Zn2 + en su entorno, que desintoxican mediante la adopcin de los iones.
La absorcin se divide en dos pasos: el primero es un biosorcin rpida
sobre la pared celular, durante el segundo paso, los iones son transportados
en el las clulas [29]. Posteriormente, el interior de las clulas puede ser
desintoxicado quelando los cationes Zn2 + a, por ejemplo no txico agujas
nano a base de zinc-fosfato-[30]. El objetivo de este estudio fue investigar el
papel de algas que viven en la precipitacin de diferentes polimorfos de
carbonato de calcio. Para los experimentos de la unicelulares alga especie
Scenedesmus oblicuo (Chlorophyta) fue cultivada en medios con y sin Zn2 +
y los resultados se compararon con los medios de comunicacin inorgnica
sin algas. Esta especie de alga fue elegido porque los experimentos
preliminares han demostrado que se calcifica fcilmente cuando se cultivan
en medios sobresaturada con respecto a Ca2 +.

2. Materiales y Mtodos
2.1. Organismos y Culturas
Los experimentos se llevaron a cabo con Scenedesmus de estar oblicuo
(cepa 276-1), obtenido a partir del cultivo SAG coleccin Gttingen. Las
algas se cultivan en un medio calcificacin modificado [17], donde
Na2EDTA, KH2PO4, (NH4) Mo7O24 y MnCl2 se omitieron y FeCl3 se redujo a
0,01 mg / l para evitar la formacin de quelato con Zn2 +. La solucin se
satur con respecto a Ca2 +. Los medios de comunicacin contenan
diferentes cantidades de zinc (0 mg Zn2 + / l, 3,27 mg Zn2 + / l o 6,53 mg
Zn2 + / l), aadido como ZnSO4 7 H2O (Roth, Karlsruhe). Preparacin de
los medios de comunicacin: todas las soluciones madre al lado de Na2CO3
se esterilizaron (Autoclave Systec V-75) y se combinan, el pH se ajust a
6,3. Las algas fueron lavadas en desmineralizada agua (Millipore), cont con
un hemocitmetro (Marienfeld, Lauda-Knigshofen) para asegurar la misma
celda la concentracin en todas las culturas y aadido al medio de
(Alrededor de 4,0 108 clulas / l). El cultivo se llev a cabo en un rotativo
agitador (Infors HT Multitron II, 100 rpm) a 26 C y iluminacin permanente
(tubos FL Gro-Lux 15 W, 3500 lx). Debido a la fotosntesis, el pH se
increment a un valor ms de 9 durante varios das. No hasta entonces el
Na2CO3 era aadi para evitar la prdida de aniones y el pH fue de ajustado
a 8,5. En este punto el experimento comenz. La inorgnico, solucin libre
de algas se prepar de forma idntica; el pH se ajust a diario segn la
orgnica, que contiene algas- solucin con 0,1 M NaOH. La duracin del
experimento fue de 72 h. Despus de este tiempo todas las culturas vivan
segn lo revelado por su color verde. 2 CO3
2.2. Medicin SEM
La precipitacin de cristales se investig despus de 2, 4, 6, 24 y 72 h de
duracin del experimento. Para la observacin en una microscopio
electrnico de barrido (Zeiss DSM 982 GEMINI) las muestras se lavaron en
agua desmineralizada (Millipore) utilizando un sistema de filtro de vaco de
vidrio con 0,2 m / 2 m de poro de la membrana filtro de tamao (Millipore) y
luego se sec al aire. Para obtener conductividad electrnica, las
membranas fueron recubiertas con grafito.
2.3. Polvo X-Ray Diffractiometry (DRX)
DRX se utiliz para identificar los polimorfos CaCO3 despus 72 h de
duracin del experimento. Los patrones de difraccin de rayos X eran
grabado con un difractmetro D500 (Siemens). Mediciones se hicieron en la
geometra Bragg-Brentano, usando Radiacin CuK1 (tubos de rayos X de
ajuste de 30 mA y 40 kV) empleando un Johansson monocromador de haz
primario en un rango 2 de 20 a 50.
3. Resultados y Discusin
3.1. Tendencia pH

Al inicio de todos los experimentos el pH de cada cultivo se ajust a 8,5.

Debido a la fotosntesis de la algas, el pH se elev hasta 10,8 despus de 48
h en la cultura sin zinc; despus se mantuvo casi constante (Figura 1). En
presencia de zinc, el cambio de pH se retras y no hizo no alcanzar los altos
valores de la cultura sin zinc. Este que Zn2 + es fuertemente adsorbido en
cristales de aragonita en comparacin con otros polimorfos. Se asumi que
la iones de zinc inhiben la transformacin de aragonita de calcita [1,7]. La
adsorcin Zn2 + en la superficie de la calcita se produce a travs de un
intercambio de Ca2 + en una capa superficial adsorbido [8]. Tambin
aditivos orgnicos muestran un efecto sobre la mineralizacin de carbonato
de calcio (en comentarios: Meldrum, 2003 [9]; Ren et al., 2011 [10]).
Aminocidos como la glicina, cido glutmico y cido asprtico o
polisacridos como celulosa influyen en la precipitacin y la morfologa de
calcita y vaterita [11-13]. Los organismos vivos como fotosinttica lata
microalgas inducir la precipitacin de CaCO3 a travs de la
biomineralizacin. Se sabe que muchos de agua dulce calcita acumulacin
de algas cristales cuando viven en un entorno sobresaturado respecto de
calcio [14,15]. Este es un resultado es debido al hecho de que Zn2 +
cationes restringen la fotosntesis de algas. El pH de cambio se correlaciona
con la concentracin de Zn2 + dentro de la solucin: la cultura con 6,53 mg
Zn2 + / l slo alcanz pH 10,1 a las 72 h, la cultura con 3,27 mg Zn2 + / l
alcanz un pH de 10,5 despus de 48 h y se mantuvo en este valor. Segn
los valores de pH observados en cultivos que contiene algas, el pH en el
medio de comunicacin sin algas eran ajustado a diario con una solucin de
NaOH 0,1 M.
3.2. La precipitacin de cristales y de identificacin de polimorfos
La formacin de precipitados se investig en elpunto de los experimentos de
partida y despus de 2 h, 4 h, 6 h, 24 hy 72 h en soluciones con algas. En el
punto de partida de los experimentos, no hubo precipitacin de las algas
(Figura 2 (a)). Despus de 2 h de incubacin, cristales con algas incrustado
podran ser detectados en los cultivos sin zinc (Figura 2 (b)). En la siguiente
horas los cristales se hicieron ms grandes (datos no mostrados). en el
culturas con zinc, no se produjeron durante la cristalizacin primero 6 h
(datos no mostrados). Despus de 24 h de incubacin, en todas las
soluciones precipitados se pudo encontrar (datos no mostrados). En los
medios de comunicacin con algas y con el zinc, se produjeron cristales
grandes con dimetros de aproximadamente 50 micras. Siempre muchas
algas fueron incorporados en estos cristales. En las soluciones inorgnicas
con Zn2 +, slo Se encontraron muy pequeos precipitados ( por debajo
de 100 nm; REM imagen, datos no mostrados).
Despus de 72 h de incubacin, en todas las soluciones se cristales
encontrado que difera mucho en sus dimensiones y morfologa (Figura 3).
Los precipitados formados en el soluciones orgnicas contenan varios
(Figuras 3 (a) y (c)) o muchas clulas de algas (Figura 3 (b)). El mayor
precipitado, donde se incorporaron siempre muchas clulas de algas, eran

Figura 1. Cambio de pH en los cultivos con algas y diferentes cantidades

de zinc durante el tiempo experimental de 72 h.

Figura 2. Imgenes de SEM. (a) Algas (flechas negras) sin precipitados al

principio del experimento; (b) los cristales (flecha blanca) con algas
incrustadas se construyeron despus de 2 h en el medio sin zinc.

Figura 3. Los cristales despus de 72 h de incubacin. (a) - (c) cultivos con algas y
diferentes cantidades de zinc: (a) Sin zinc; (b) Con 3,27 mg Zn2 + / l; (c) Con 6,53
mg Zn2 + / l. (d) - (f) soluciones inorgnicas con diferentes cantidades de zinc: (d)
Sin zinc; (e) Con 3,27 mg Zn2 + / l; (f) Con 6,53 mg Zn2 + / l. Flechas algas negras,
blancas flechas-cristales.

encontrado en la solucin orgnica con 3,27 mg Zn2 + / l (Figura 3 (b)). Estos

precipitados aparecen en las imgenes SEM tan grandes cristales individuales, pero
tambin podra haberse formado como muchos cristales ms pequeos y despus
al horno juntos. En el solucin inorgnica de zinc, con dos tipos de cristales
diferentes fueron encontrados (Figuras 3 (e) y (f)). Debido a que el cristal morfologa
asumimos que los cristales en forma de aguja se refieren a aragonito y la calcita
rombodrica a [3]. Los cristales se encuentran despus de 72 h en las soluciones
experimentales se lavaron y despus se analizaron en cuanto a su modificacin por
XRD. Diagramas de difraccin de rayos X representativos son se muestra en las
Figuras 4 y 5. En el caso de soluciones sin clulas de las algas el (104) de reflexin

dominante de calcita (Tarjeta JCPDS N 01-072-1650) se puede encontrar en todas

las muestras en 29.5 (3.02 ) (Figura 4). Adems, el ms dbil (012) -, (110) -,
(113) -, (202) -, (024) -, (018) y (116) reflexin de la calcita estn presentes en la
muestra, que no contiene Zn2 + cationes dentro de la solucin. En la antigua
estudios sobre la precipitacin en soluciones inorgnicas, vaterita se encontr que
era el producto principal en el rango de pH entre 8,5 y 10 y a 24C [3]. En estos
experimentos, la solucin experimental slo contena cloruro de calcio y carbonato
de sodio. En nuestros estudios, un medio de cultivo para las algas con una
composicin ms compleja era utilizado para todos los experimentos, tambin para
la preparacin de las soluciones sin algas. Esta fue probablemente la razn, por
qu la calcita fue construido y no vaterita. En la muestra inorgnica que ha sido
formado en un medio de con 3,27 mg Zn2 + / l intensidades dbiles (cerca de la
deteccin lmite) tambin puede ser detectado en 26.3, 27.2, y 46.0 que puede
atribuirse a la caracterstica (111) -, (021) - y (221) -reflections de aragonita (tarjeta
JCPDS No. 00-003-1067). Las reflexiones de aragonita corresponden con SEM
observacin de una pequea cantidad de un segundo fase acerous (cf. Figura 3 (e)).
El precipitado de la de la muestra, que tiene la mayor cantidad de Zn2 + cationes
dentro de los medios de comunicacin, muestra slo el (104) reflexin dominante
de calcita. Una pequea cantidad de cristales de aragonita se pudo observar en
este medio de observaciones de SEM (Figura 3 (f)), que est por debajo del lmite de
deteccin de XRD. La presencia de clulas de las algas tiene una influencia
significativa en la precipitacin de CaCO3 dentro de los medios en comparacin a
los medios de comunicacin sin clulas de algas, que se demuestra en La figura 5.
En el caso de la Zn2 + medios de comunicacin libres el precipitado est dominado
por las reflexiones de la calcita, pero pequeas intensidades de aragonita tambin
estn presentes (Tenga en cuenta que la fuerte (104) reflejo de calcita a
aproximadamente 29.5 se corta en alrededor de 1.600 a.u. en la Figura 5 (a)). Con
el aumento de concentracin de zinc en las soluciones de la cantidad de calcita
disminuye drsticamente. De hecho, en el caso de medios con 6,53 mg Zn2 + / l no
hay reflexiones de calcita se pueden determinar dentro del diagrama de difraccin
de rayos X correspondiente. Slo las reflexiones de aragonita se presen (t Figura 5
(c)). Por lo tanto, la

Figura 4. diagramas de XRD de precipitados en ausencia de algas (72 h de

incubacin). (a) Sin zinc; (b) Con 3,27 mg Zn2 + / l; (c) Con 6,53 mg Zn2 + /
l.

Figura 5. diagramas de XRD de precipitados en presencia de algas (72 h

de incubacin). (a) Sin zinc; (b) Con 3,27 mg Zn2 + / l; (c) Con 6,53 mg Zn2
+ / l.

clulas de las algas avanzar significativamente la formacin de aragonita,

que se ve reforzada por la presencia de iones de zinc en los medios de
comunicacin. La funcin de algas obviamente como nucleacin
heterognea sitios. Dado que slo cristales asociados con las algas tienen
han encontrado en las soluciones, las paredes celulares son evidentemente
directamente involucrados en la nucleacin. Los sitios de unin de la
paredes celulares tienen una gran afinidad por cationes Ca2 +, la Ca2 +
unida atraer aniones como [16]. Nuestra preliminar experimentos han
demostrado que oblicuo Scenedesmus no calcificarse cuando se cultivan en
la oscuridad, y el pH slo alcanza el mximo de 9. Esto tambin se observ
por otros autores con diferentes especies de microalga [17,31]. Esto
demuestra que las algas no slo actan como nucleacin sitios para la
precipitacin de CaCO3 pero participan activamente a travs de la
fotosntesis dependiente de la luz y por lo tanto alcalinizacin del medio. El
aumento de pH era medible en la solucin a granel, pero fue probablemente
mayor cerca las clulas. Esto tambin se supona por otros autores [14,17].
En presencia de zinc en el medio de la aragonita modificacin se ve
favorecida. En este caso, obviamente, la transformacin en la modificacin
calcita termodinmicamente estable se ve obstaculizada. Un posible
mecanismo que se produce en micro-ambientes creados por las clulas se
sugiere en la figura 6. Una parte de la absorbida Ca2 + en la pared celular
puede ser intercambiada por Zn2 + [18]. La interaccin de Zn2 + con la

pared celular permite un enriquecimiento local de los iones que se supone

para estabilizar la aragonita metaestable modificacin [7] y por lo tanto
evita su transformacin en calcita termodinmicamente estable. Adems,
Zn2 + iones restringir la fotosntesis [28], que est conectado con un pH
ms bajo dentro de los microambientes comparacin al medio libre de zinc
que contiene algas. Como mencionado anteriormente, la formacin de
aragonita se ve favorecida a pH ms bajo en comparacin con la de calcita
[3]. En consecuencia, slo cristales de aragonita en los medios de
comunicacin que contiene algas y grandes cantidades de zinc se detectan.
Por contrario, la calcita se produce casi exclusivamente en el 2 CO3 medios
sin algas y grandes cantidades de zinc. Slo rastros de aragonita se
producen, segn lo revelado por SEM observaciones.
4. Conclusin
Se compararon los precipitados que se han formado en soluciones con y sin
algas y con y sin diferentes cantidades de zinc. Hemos podido demostrar
que la presencia de microalgas que viven tiene una gran influencia en la
precipitacin de cristales de carbonato de calcio. Debido a la fotosntesis, el
pH en el medio orgnico que contiene algas aument y los cristales de
CaCO3 se precipitan. En orgnica medios de comunicacin sin zinc o con
3,27 mg Zn2 + / l siempre calcita y se forman aragonita. En los medios
orgnicos con 6,53 mg Zn2 + / l aragonita se obtiene incluso
exclusivamente. En contraste, en las soluciones inorgnicas sin zinc, calcita
pura se precipita. Ambas soluciones inorgnicas con espectculo de zinc
importante precipitacin de calcita y aragonito precipitacin dbil segn lo
revelado por medidas de DRX y SEM observaciones. Por lo tanto, las clulas
de las algas avanzar significativamente la formacin de aragonita, que se ve
reforzada por el presencia de cationes de zinc en los medios de
comunicacin. Los siguientes efectos de algas y zinc en la solucin se
supona: primero, como las algas se acumulan, un "microambiente"
alrededor de los cmulos se formaron, donde se precipita el CaCO3 (Figura
6). Cuando la alta Zn2 + cantidades estn presentes en la solucin, la
fotosntesis se inhibe y la pH en este "microambiente" es menor en
comparacin con el "Microambiente" alrededor de las algas en solucin sin
Zn. El pH inferior prefiere la construccin de aragonita [3]. En segundo
lugar, la funcin de las algas como nucleacin heterognea sitios donde en
el primer paso de iones Ca2 + y Zn2 + son absorbida en las paredes
celulares cargadas negativamente y en el aniones segundo paso como
estn obligados (Figura 6). La presencia de Zn2 + conduce a la precipitacin
de aragonita [6]. En el "microambiente" alrededor de las clulas ms iones
Zn2 + estn presentes que en el correspondiente in-

Figura 6. Esquema de posible nucleacin heterognea de cristales de

aragonita en presencia de algas y zinc. entre varios clulas agregadas un
"micro-entorno" se construye que conduce a un aumento local de la pH y
los iones Zn2 + aq.

solucin a granel orgnica, ya que estos iones son atrados desde las
paredes de las clulas y con destino en ellos. Iones Zn2 + inhiben la
transformacin de aragonita de calcita [1]. Por lo tanto, la aragonita se
precipita en el medio que contiene algas con alta cantidad de Zn, mientras
que en lo inorgnico correspondiente solucin se encuentra principalmente
calcita.
5. Agradecimientos
Estamos muy agradecidos por el apoyo financiero proporcionado por la
Deutsche Forschungsgemeinschaft (BI 469 / 15-1) dentro el alcance del
proyecto "Biologische Erzeugung von Oxidkeramiken "(PAK 410). Los autores
agradecen a M. Dudek y F. Predel (tanto MPI-IS) por DRX y SEM mediciones,
respectivamente. Prof. Dr. P. A. van Aken (MPI-IS) se dio las gracias por
proporcionar el SEM.