UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA

FACULTAD DE CIENCIAS MDICAS

UNIDAD DIDACTICA DE INMUNOLOGIA Y MICROBIOLOGIA
TERCER AO

ACTIVIDAD PRACTICA NO. 15

METODOS DIAGNOSTICOS DE HEPATITIS
Dr. Fernando Mrida

INTRODUCCION
Para el diagnstico de las enfermedades, el mdico debe tomar en consideracin el patrn
epidemiolgico de la enfermedad, as como sus sntomas y signos es decir lo que el paciente
presenta en la historia clnica, como en la mayora de las enfermedades den las hepatitis los datos
del laboratorio pueden ser tiles para confirmar el diagnstico.
En las hepatitis, se puede confirmar el diagnstico con la bsqueda de los agentes infectivos
directamente o por la respuesta que estimula la presencia del virus en el hospedero.
Para el primer parmetro o aspecto se utiliza, la microscopa electrnica, en la bsqueda del
antgeno viral, ya sea el virus completo o la deteccin de cidos nucleares, as mismo se utilizan
tcnicas especiales, por ejemplo ELISA. Hemaglutinacin, inmunocromatografa en membrana,
Western Blot y PCR, la mayora de los cuales por su alto costo solo los realizan laboratorios de
referencia.
En forma indirecta el diagnstico se puede realizar por medio de la determinacin de anticuerpos,
como ensayos inmunoenzimaticos y la inhibicin de la hemaglutinacin. As mismo el diagnstico
anatomo-patolgico es de gran ayuda.
Objetivo General
Esta prctica tiene como objetivo general que el estimulante conozca los aspectos ms
importantes relacionados con la hepatitis y los mtodos ms utilizados en nuestro medio para la
deteccin de antgenos y anticuerpos contra la hepatitis.
Objetivos especficos
Conocer las pruebas de Inmunocromatografa en Membrana que se utilizan en Hepatitis B
(antgenos virales y anticuerpos virales)
Conocer las pruebas de ELISA en microplaca que se utilizan en la determinacin de anticuerpos
contra el virus de la Hepatitis A.
Conocer las tcnicas de PCR y electroforesis en gel

Materiales proporcionados por el laboratorio

a. Cassettes de prueba rpida en combo para deteccin de marcadores serolgicos de
Hepatitis B
b. Microplaca de ELISA con reacciones positivas y negativas para anticuerpos contra el virus
de la Hepatitis A
c. Gel de Agarosa con bandas de ARN virales, teidas con bromuro de etidio.
d. Transiluminador con luz ultravioleta, con pantalla bloqueadora de rayos UV.

Fundamentos:
Deteccin de Antgenos y Anticuerpos mediante la tcnica de Inmunocromatografa en
Membrana (Pruebas rpidas)
En estas pruebas se procede a formar un complejo antgeno anticuerpo (especfico) los cuales se
diseminan en un papel filtro y reaccin con un marcador cromgenico, reaccin que se observa sin
ningn aparato, son sencillas (2 pasos), baratas y rpidas (menos de 20 minutos).
Prueba rpida en combo (panel) para identificacin de marcadores de Hepatitis B en suero.
Esta es una prueba de un solo paso que detecta simultneamente la presencia de dos antgenos
del Virus de la Hepatitis B y de tres anticuerpos contra sus respectivos antgenos.
Deteccin de antgenos:
La membrana dentro del cassette est impregnada de una mezcla compuesta de oro coloidal u
otra sustancia unida a anticuerpos, contra el antgeno de superficie (anti-HBs) y contra el antgeno
e (anti-HBe) en carriles separados.
Si en el suero se encuentran dichos antgenos virales, estos se unirn al complejo anticuerpo-oro y
migran por capilaridad hacia una zona T, en donde se encontrara otro anticuerpo. Tambin
especfico para los antgenos unindose este al complejo anterior por los antgenos virales
precipitndose formando una banda cuando no existe antgenos, el anticuerpo conjugado
reaccionara con un anticuerpo especifico contra l y se depositara en una banda de control (vase
Fig-1)
Deteccin de anticuerpos:
Para la deteccin de anticuerpos Anti-HBs, la membrana contiene oro coloidal y otra sustancia
unida a antgenos de superficie, si el paciente tiene anticuerpos, estos se difunden reaccionando
con os antgenos de superficie unidas con el oro, formando complejos, difundindose hacia la zona
denominada T en donde se encuentran anticuerpos anti-anticuerpo observndose precipitacin
por una banda de color

Deteccin de Anticuerpos Anti-HBc y Anti-HBe

En este caso la reaccin, se basa en un principio de unin competitivo. Por lo tanto se interpreta
como resultado positivo cuando NO se forma la banda de color.
Deteccin de Antgenos y Anticuerpos mediante la tcnica de ELISA (Ensayo Inmunoabsorbente
ligado a enzimas)
La tcnica de ELISA combina la especificidad de la unin antgeno-anticuerpo con la sensibilidad de
los anlisis enzimticos. Son pruebas en las que se inmovilizan ya sea un antgeno o anticuerpo en
superficies slidas (microplacas de poliestireno). Se realizan en varios procesos. Primeramanete
se pega el antgeno contra el que se va a estudias. Luego se aplica la secrecin plasma del
paciente que contiene el anticuerpo, luego se procede a aplicar un conjugado (anticuerpo ligado a
una enzima) que reaccionaria especficamente al anticuerpo estudaindo, luego se aplicara el
sustrato de la enzima del conjugado (vase pasos en fig. 2)
Lecturas obligatorias:
Murray Patrick. Microbiologa 7ma edicin, capitulo 63
Referencias
Dra. Velez Mller, Patricia. Practica de laboratorio de virus. Facultad de Ciencias Mdicas USAC
documento 2008
Dra. Villagrn de Tercero. Carmen. Video tcnicas de diagnstico viral por PCR. Agosto 2012

GUIA DE TRABAJO Y ESTUDIO: ACTIVIDAD PRACTICA DE HEPATITIS

El estudiante con su grupo debe de completar los datos que se le solicitan en los siguientes
cuadros:
1. Indique las caractersticas principales de los virus de las hepatitis
Virus
Familia
Genoma
Transmisin
Evolucin
A
B
C
D
E
F
2. Explique la fisiopatologa de los siguientes sntomas de las hepatitis
a. Fiebre
b. Exantema

Complicaciones

c.
d.
e.
f.
g.
h.

Orina oscura
Anorexia
Dolor en cuadrante superior derecho
Prurito
Elevacin de transaminasas
Elevacin de las fosfatasas.

3. Tomando como base la figura 63-12 de su libro de texto complete el cuadro haciendo las
curvas que presentan los procesos serolgicos en la evolucin de la Hepatitis B aguda
Interpretacin de marcadores serolgicos de la infeccin por virus de la Hepatitis B
1 mes

2 meses

3 meses

4 meses

5 meses

6 meses

12
meses

24
meses

Ictericia
Sntomas
Diseminacin
del virus
HBsAg
HBeAg
Anti-HBs
Anti-HBc
Anti-HBe
Enzimas
hepticas

4. Indique como se encuentran los marcadores serolgicos de la Hepatitis B en las siguientes

fases
ESTADO PATOLOGICO
ESTADO SANO
Marcador

Aguda

Crnica

Tarda
aguda

Curado

vacunado

Anti-HBc
Anti-HBe
Anti-HBs
HBeAg
HBsAg

5. El estudiante debe leer los casos clnicos que aparecen en su libro de texto (pgina 596) y
responda las interrogantes

PROCEDIMIENTOS A REALIZAR
Identificacin directa e indirecta viral
A. Pruebas rpidas para deteccin de antgenos virales y anticuerpos contra virus de la
hepatitis B

Observar las reacciones de las diferentes pruebas rpidas que se presentan, discutir la
interpretacin y la utilidad en el diagnstico.

B. Microplaca de Elisa para deteccin de anticuerpos contravirus

Observar las reacciones en los diferentes pozos de la microplaca de ELISA que se presenta, discutir
la tcnica de realizacin e interpretar resultados.
C. Gel de Agarosa con ADN amplificado (Virus de la hepatitis B) por PCR para deteccipon de
cido nucleico viral
Observar el gel de Agarosa que se presenta, discutir la tcnica de realizacin, interpretar
resultados.

Lecturas obligadas:
1. Murray, Patrick. Microbiologa 7 edicin captulo 63