AVALIAO DE LEVEDURAS ISOLADAS DE REAS AGRCOLAS COMO

SOLUBILIZADORAS DE ROCHAS E MINERAIS.

DILARRI, G.1,2; JNIOR, R.B.1,2; SCARCELLA, A.S.A.1,2; SANTANA, R.I.M.1,2; ROSA-MAGRI,
M.M.1,3
1

Universidade Federal de So Carlos UFSCar, Araras, SP.; 2Discente; 3Orientador.

dilarri@hotmail.com, mrciarosa@yahoo.com.br

INTRODUO
Micro-organismos conhecidos como promotores de crescimento vegetal
(MPCV) podem ser encontrados naturalmente na rizosfera das plantas, e
apresentam a habilidade de produzir compostos capazes de estimular o
desenvolvimento vegetal por meio de diferentes mecanismos, como a produo de
hormnios vegetais, siderforos, alm da solubilizao de fosfatos e
disponibilizao de minerais na soluo do solo, promovendo uma melhor nutrio
para as plantas, auxiliando assim seu crescimento vegetal. O emprego de MPCV
uma das alternativas para a agricultura moderna enfrentar o desafio de promover o
aumento da produo de culturas atravs de tcnicas sustentveis (SANTOS;
VARAVALLO, 2011).
As leveduras so fungos unicelulares normalmente ovais, esfricos ou quase
cilndricos, maiores que as clulas bacterianas, sendo que pode se distinguir delas
no somente pelo tamanho, mas tambm pela presena de ncleo (MADIGAN;
MARTINKO; PARKER, 2004). Essas por sua vez so micro-organismos conhecidos
por participarem ativamente em diversos processos biotecnolgicos importantes.
Algumas espcies de leveduras, encontradas naturalmente na rizosfera das
plantas, apresentam a habilidade de produzir compostos capazes de promover o
crescimento vegetal. As principais aes diretas desses micro-organismos nas
plantas esto na produo de fitormnios de crescimento, no auxlio nutrio da
planta (solubilizao de fosfatos e outros nutrientes), na produo de siderforos, e
no controle biolgico de fitopatgenos; porm pouco ainda se conhece sobre a
funo e comportamento deste grupo microbiano no ambiente.
O estudo nesta rea vem a demonstrar a expanso do conhecimento sobre
o comportamento da levedura em solos com cultivo agrcola, e a descoberta de
como esse grupo microbiano pode auxiliar no processo de produo, contribuindo
para o equilbrio do ecossistema e minimizando a aplicao de produtos txicos no
ambiente, como adubos qumicos, fungicidas, responsveis pela poluio do solo,
lenol fretico, rios e lagos, alm de considerados potenciais causadores de
doenas e morte de animais e seres humanos.
OBJETIVO
O objetivo a avaliao do potencial de leveduras como solubilizadoras de
rochas e minerais em solo com cultivo agrcola, para o desenvolvimento de
manejos mais sustentveis de produo, contribuindo para minimizao da
aplicao de adubos qumicos em agroecossistemas, alm da analise do potencial

das leveduras em disponibilizar minerais ao solo como o fosfato e outros minerais

essenciais para o crescimento vegetal.
METODOLOGIA
Os isolados de leveduras que foram avaliados neste projeto foram obtidos da
superfcie de folhas e colmos, e da rizosfera de plantas de cana-de-acar e milho,
cultivadas em latos solos vermelho-escuro, pertencente Universidade Federal de
So Carlos (UFSCar), campus de Araras-SP (ROSA, 2009). No total de trinta e seis
leveduras selecionadas pelo isolamento, que esto atualmente armazenadas no
banco de microrganismo do Laboratrio de Microbiologia Agrcola e Molecular
(LAMAM) localizado na UFSCar, Araras-SP. So as leveduras com os respectivos
cdigos: M3F189; M2F66; M1C117; M1F100; M1F99; M3S53; M3F138; M3S43;
M1F01; M2F100; M3F24; M2F661; M4C06; M3C86; M3F177; M2C121; M510;
M153; M2F68; M77; M2F45; M3C92; M3C98; M3F14; M3C73; M3S53; M4S164;
M3C79; M3C59; M3S44; M1S112; M3F173; M3C106; M3C94; M1F112; M1F122. As
trinta e seis leveduras isoladas foram todas reativadas e mantidas em meio YEPD
(Yeast-Extract-Peptone-Dextrose) com antibitico Ampicilina. Para o crescimento,
as culturas foram incubadas a 30C por 48 horas, sendo posteriormente repicadas
com ala de platina, tambm em meio YEPD, at a obteno de culturas puras que
foram utilizadas para os testes de BDYA (Batata-Dextrose-Yeast-Agar).
Para a realizao dos testes, teve-se o conceito de manter todas as
leveduras em condies iguais, para isso todos os testes foram realizados aps um
repicamento e conteno em estufa no mesmo perodo de 96 horas 30C, sendo
o meio de YEPD com antibitico Ampicilina, alm de ter sido realizado triplicatas
dos testes para comprovar sua veracidade.
O teste de solubilizao alm do meio estril de BDYA deve ser colocado
reagentes qumicos que vo reproduzir os minerais do solo e o fosfato que sero
solubilizados, para isso tem primeiro a filtrao dos reagentes K 2HPO4 (monoHidrogenofosfato de potssio) e CaCl2 (Cloreto de Clcio) deixando eles
completamente estreis, a seguir estes so vertidos no meio na quantidade de
10%-50ml/1000ml de K2HPO4 e 10%-100ml/1000ml de CaCl 2 quando o meio
estiver morno ocorrendo a reao qumica do {K 2HPO4---CaCl2} o meio ir ficar
translcido,vertendo por fim o meio nas placas de Petri.
Os reagentes formados possuem a similaridade de um composto minrio
encontrado em solo, sendo este um bom representante para se ter um teste inicial
e a constatao da solubilizao de minerais do solo e do fosfato.
A seguir as placas so divididas em quatro quadrantes, essa diviso o
tamanho ideal para o crescimento das leveduras, sem que uma possa invadir o
quadrante da outra, tendo assim a certeza do resultado testado sobre as leveduras
que vierem a crescer na placa.
Logo aps a diviso dos quadrantes, as leveduras so repicadas nos
espaos determinados da placa com a ala de platina e em seguida so encubadas
no perodo de 120 horas 30C.
O resultado visvel com a solubilizao dos reagentes {K 2HPO4---CaCl2}
tendo formado assim um circulo transparente ao redor da levedura que tem a
capacidade de solubilizao, j a levedura que no tem essa capacidade
continuar com o meio translcido ao seu redor sem nenhuma alterao.
Com isso comprovado solubilizao no solo por micro-organismos que
vem a produzir fosfatos orgnicos atravs de reaes de hidrlise, com a produo

de fsforo solvel (NAHAS et al., 1994). Para a avaliao da atividade das

fosfatases ser utilizado o procedimento de acordo com (TABATABAI E BREMNER,
1969)
RESULTADOS E DISCUSSO
O resultado final que de trinta e seis leveduras isoladas comprovou-se que
treze solubilizam e disponibilizam minerais para o solo, sendo as respectivas
leveduras: M3F14; M3C73; M3S53; M4S164; M3C79; M3C59; M3S44; M1S112;
M3F173; M3C106; M3C94; M1F112; M1F122, formando assim o circulo transparente
ao redor delas no meio BDYA solubilizando completamente o {K 2HPO4---CaCl2}
demonstrando que estas por sua vez disponibilizam minerais para o solo, o que vem
a contribuir para o enriquecimento do solo disponibilizando nutrientes para o
crescimento vegetal da rea.
O resultado do experimento se manteve constantes nos trs testes, alm da
conservao igual de meio e perodos de incubao, comprovando assim a
veracidade do experimento.
Os isolados M3F189; M2F66; M1C117; M1F100; M1F99; M3S53; M3F138;
M3S43; M1F01; M2F100; M3F24; M2F661; M4C06; M3C86; M3F177; M2C121;
M510; M153; M2F68; M77; M2F45; M3C92; M3C98 no fazem solubilizao de
minerais do solo, fato constatado devido presena dos reagentes qumicos
{K2HPO4---CaCl2} ao redor da levedura, no formando o circulo soluto transparente
ao seu redor como nas positivas, mesmo aps as 120 horas de crescimento na
estufa na temperatura de 30C.

CONSIDERAES FINAIS OU PROPOSIO

Dos trinta e seis isolados de leveduras de reas agrcolas treze (M3F14;
M3C73; M3S53; M4S164; M3C79; M3C59; M3S44; M1S112; M3F173; M3C106;
M3C94; M1F112; M1F122) so capazes de solubilizar os minerais do solo
indicando que as leveduras so um grupo capaz de ser empregado na promoo
de crescimento vegetal, alm de minimizarem adubos qumicos de
agroecossistemas, ressaltando a importncia desses microrganismos na rizosfera.
Apesar do potencial biotecnolgico, outros testes esto em desenvolvimento, para
a avaliao de sua ao em bioensaios in vivo.

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PALAVRAS-CHAVES: Promoo de crescimento vegetal, solubilizao de rochas e
minerais, produo de fosfato orgnico.