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Facultad de Ciencias
Escuela de bioqumica.
Integrantes:
OBJETIVOS
Resultados:
Propiedades de las protenas.
Solucin
Volumen de HCl
gastado (ml)
Meq de HCl
gastado
4,5
0,045
2,5
0,025
Agua
0,03
0,0003
Al hacer la comparacin del volumen gastado durante la titulacin con HCl en las diferentes
soluciones, se pudo observar que el suero proteinizado necesito una mayor cantidad de HCl, dada la
capacidad amortiguadora de las protenas.
Determinacin del pI de la casena.Se determin el punto isoelctrico de la casena, utilizando diferentes volmenes y concentraciones
de cido actico (0,01 M; 0,10 M; 1,00 M ) y una solucin de casena 6 mg/ml en 0,1 M acetato de
Sodio, todos ellos distribuidos en 9 tubos de ensayo, enumerados segn las indicaciones entregadas
en la gua de laboratorio.
Mediante una medicin cualitativa se pudo observar el efecto del pH sobre las protenas, cada
muestra detall diferencias claras, en unas se pudo ver una turbidez latente, en otras la protena
haba precipitado y en las restantes pareciera no haberse presentado mayor cambio al verse una
solucin translucida.
El pH para cada tubo se determin por la siguiente frmula:
pH pK a log
Sal
cido
(Ecuacin 1)
pK a
del cido actico: 4,745
Para poder realizar los clculos correspondientes, se reemplazan los valores en la ecuacin
anteriormente presentada.
C1 x V1 =C2 x V2 (Ecuacin 2)
Ejemplo de clculo de dilucin del cido utilizando a ecuacin 2 para el tubo 1:
pH 4,745 log
pH 5,97
0,01
6 10
4
5,97
5,67
5,443
5,143
4,745
4,443
4,143
3,842
3,541
10 min
20 min
pH
Separacin por salazn de las protenas del suero sanguneo.Las protenas presentan una capacidad de precipitacin en presencia de sales neutras en
altas concentraciones, provocadas por la deshidratacin de la protena. Es esta misma
propiedad la que se ha aprovechado para producir la separacin de la seroglobulina del
suero sanguneo con la presencia de la sal de sulfato de amonio.
Para este procedimiento se tom 1 ml de suero sanguneo, al cual se le agreg otro ml de
sulfato de amonio. Dejando a as la solucin a media saturacin. Parte de la solucin tendi
a la precipitacin, por lo cual mediante la centrifugacin a 2500 rpm durante 10 minutos se
separ el precipitado del sobrenadante. Posteriormente se procedi a la comprobacin de la
presencia de protenas en el sobrenadante separado y el precipitado al agregar 0,5 ml
aprox., de cido tricloro actico (TCA) al 10 %. Al final ambas soluciones precipitaron.
Tal como se presentan los resultados en la Tabla 1.3:
Fraccin
Presencia de protena
coagulable por cido
Sobrenadante
Precipitado(solubilizado
)
Tabla 1.3 Precipitacin de la seroglobulina del suero sanguneo bovino con sulfato de
amonio. + = Presencia de protena coagulable. Despus de la precipitacin se separ el
sobrenadante del precipitado y este se disolvi. Verificando la presencia de protena coagulable
al agregar TCA al 10%, observando en ambos casos precipitacin.
Temperatura
Precipitacin
Resoluci
n
Ambiente
(20C)
No
Frigorfica
(-10C)
El tubo que se hallaba con el etanol a temperatura ambiente present una mayor
densidad de precipitado, caracterstica que la mezcla frigorfica no present, debido
a que el fro acta como una medida para la protena, evitando la denaturacin.
Discusin:
En la separacin de protenas del suero sanguneo por salazn, se pudo ver que
la seroglobulina precipit por medio de la adicin de la sal de sulfato de amonio
que provoc media saturacin al interior de la solucin. Como consecuencia la
seroalbmina que tambin estaba presente la mezcla quedo rezagada en el
sobrenadante, lo que demuestra que las protenas poseen solubilidades
caractersticas con cada tipo o concentracin de sal. Lo que nos permite separar
mezclas de protenas. Est experimento en especfico corresponde a una
precipitacin reversible, lo que da como caracterstica de que la protena no
sufre una denaturacin. Estos tipos de precipitaciones se dan gracias a las
fuerzas inicas a las cuales precipitan las protenas es caracterstica para cada
una de ellas, en iguales condiciones de pH y temperatura.
El agua posee una alta constate dielctrica, por lo cual hace que disminuya la
interaccin entre las molculas proteicas del medio. Favoreciendo la solubilidad
de stas. En cambio los solventes orgnicos tales como el etanol, el cual
utilizamos en el experimento, tiene constantes dielctricas bajas, por lo cual al
momento de ingresarlas al medio acuoso baja la constante dielctrica del medio,