THE COMPOSITION OF THE DESOXYPENTOSE

NUCLEIC
ACIDS OF THYMUS AND SPLEEN*
BY ERWIN CHARGAFF, ERNST VISCHER,t RUTH
DONIGER, CHARLOTTI!: GREEN, AND FERNANDA
MISANI
(From the Department of Biochemistry, College of
Physicians and Xurgeons, Columbia UniveqGty, New York)
(Received for publication, July 28, 1948)
While the early workers in this field, such as Miescher and
Hopne-Seyler, appear to have conjectured the
macromolecular and complex character of the nucleic acids
that they were the first to isolate, this view soon was
abandoned in favor of the chemically more attractive tetra
nucleotide hypothesis, and those students of nucleic acid
chemistry (e.g. (1, 2)) who still felt that much remained to be
discovered worked against the current of their time.
In the more recent past, the development of methods for the
study and the characterization of high polymers has brought
about a revival of interest in the chemistry of macro
molecules occurring in nature.
As regards the desoxyribonucleic acid of calf thymus, the
high molecular character of this extremely asymmetric
compound has been demonstrated repeatedly (3-6).
That this nucleic acid was considered as the prototype of all
desoxypentose nucleic acids is understandable, since it is
the only compound of its kind readily available for a detailed
chemical investigation, but the implicit assumption on the
part of many workers that desoxypentose nucleic acid is a
single chemical individual, regardless of the source from
which it is obtained, is incorrect.
A comparison of the results contained in the present
communication with those submitted in an accompanying
paper (7) will be of interest in this connection.
A recent study from this laboratory (8), as well as a review
article (9), has provided a fuller discussion of the pertinent
literature.
The problem of nucleic acid specificity also has been
considered repeatedly (10, 11).
The great part in the activities of the living cell, ascribed at
present to the desoxypentose nucleic acids, makes it
imperative to perfect a foundation that will make possible
the direct consideration of problems of structure,
composition, and specificity.
Whatever chemical changes are produced in nucleic acids
in the course of cellular development or by radiations or
mutagens, such as the compounds of the mustard series,
will hardly be of the kind that can be revealed by the mere
inspection of optical or other physical characteristics.
* This work has been supported by a research grant form
the United States Public Health Service.
+ Swiss-American Student Exchange fellow.

LA COMPOSICIN DE LOS CIDOS

DESOXIPENTOSA DEL TIMO Y EL BAZO.*

NUCLEICOS

DE

Erwin Chargaff, ERNST VISCHER, t RUTH Doniger, CHARLOTTI !:

VERDE, Y FERNANDA MISANI
(Desde el Departamento de Bioqumica de la Facultad de Mdicos y
Cirujanos de la Universidad de Columbia, Nueva York)
(Recibido para su publicacin 28 de julio de 1948)
Mientras que los primeros trabajadores en este campo, como
Miescher y Hopne-Seyler, parecen haber conjeturado el carcter
macromolecular y complejo de los cidos nucleicos que eran los
primeros en aislar, este punto de vista pronto fue abandonado en
favor del tetra qumicamente ms atractivo hiptesis de nucletidos,
y los estudiantes de la qumica del cido nucleico (por ejemplo, (1,
2)) que todava senta que an queda mucho por descubrir trabajado
en contra de la corriente de su tiempo.
En el pasado ms reciente, el desarrollo de mtodos para el estudio
y la caracterizacin de los altos polmeros ha provocado un
resurgimiento del inters por la qumica de macromolculas
presentes en la naturaleza.
En cuanto el cido desoxirribonucleico de timo de ternera, el alto
carcter molecular de este compuesto extremadamente asimtrica
se ha demostrado en varias ocasiones (3-6).
Que este cido nucleico fue considerado como el prototipo de todos
los cidos nucleicos de desoxipentosa es comprensible, ya que es el
nico compuesto de este tipo fcilmente disponible para una
investigacin qumica detallada, pero la suposicin implcita por
parte de muchos trabajadores que el cido nucleico de
desoxipentosa es un solo individuo qumico, independientemente de
la fuente de la que se obtiene, es incorrecto.
Una comparacin de los resultados contenidos en la presente
comunicacin con las presentadas en un documento de
acompaamiento (7) ser de inters en esta conexin.
Un estudio reciente de este laboratorio (8), as como un artculo de
revisin (9), ha proporcionado una discusin ms completa de la
literatura pertinente.
El problema de la especificidad del cido nucleico tambin se ha
considerado en repetidas ocasiones (10, 11).
La gran parte de las actividades de la clula viva, adscrito en la
actualidad a los cidos nucleicos desoxipentosa, hace que sea
imprescindible para perfeccionar una fundacin que har posible la
consideracin directa de los problemas de la estructura, la
composicin y la especificidad.
Sean cuales sean los cambios qumicos que se producen en los
cidos nucleicos en el curso del desarrollo celular, o por radiaciones
o mutgenos, tales como los compuestos de la serie de mostaza,
difcilmente ser del tipo que puede ser revelado por la mera
inspeccin de las caractersticas fsicas pticos u otros
* Este trabajo ha sido financiado por una forma de becas de
investigacin del Servicio de Salud Pblica de los Estados Unidos.
+ Suizo-Americano de Intercambio Estudiantil compaero.

A chemical comparison with respect to identity of the

extremely complex compounds of cellular origin, such as
nucleic acids, proteins, or polysaccharides, must be based
on the nature and the proportions of their constituents, on
the sequence in which these constituents are arranged in
the molecule, and on the type of linkages which hold them
together.
Evidently, a decision will be much easier if, as in the
proteins, the number of different constituents is very large,
quite apart from the important aid rendered by
immunochemical procedures.
In the case of the nucleic acids, the relatively small number
of different components made very attractive the postulation
of identity and regularity which, however, has never been
demonstrated adequately.
It will be understood that analytical deviations from strictly
integral, simple proportions, admissible for substances of
comparatively small size, become very significant when
applying to compounds whose molecular weights range in
the millions.
The present study attempts to provide a survey of the
distribution of the purines and pyrimidines in hydrolysates of
the desoxypentose nucleic acids derived from calf thymus
and beef spleen.
It is based on the same microprocedures for the separation
and estimation of the nitrogenous constituents of nucleic
acids (12) that already have served for the investigation of
the composition of pentose nucleic acids (8).
The paper last mentioned also included a consideration of
the hydrolysis methods employed and a critical discussion
of the validity of the experimental results. These points,
therefore, need not be reviewed here again.
A synopsis of the results with several nucleic acid
preparations is later provided in Table V, which lists the
molar proportions in which the four nitrogenous constituents
were found.
In contrast to the pentose nucleic acids (8), cytosine was
the base present in the lowest concentration.
Although, in respect to composition, the agreement between
nucleic acids of thymus and of spleen is surprisingly good,
no claim as to identity should be made.
It will be seen that the distribution of purines and
pyrimidines was far from that required by a tetranucleotide:
for 10 molecules of cytosine, there were found about 16
molecules of adenine, 13 of guanine, 15 (or 13) of thymine.
The correlation of the results submitted here with previous
findings in the literature is difficult for a number of reasons.
Almost all preparations of desoxypentose nucleic acid that
were made the object of detailed analytical studies had
been isolated with the use of strong alkali and were
probably degraded to some extent.
Moreover, since animal nucleic acids were regarded as of

Una comparacin qumica con respecto a la identidad de los

complejos extremadamente compuestos de origen celular, tales
como cidos nucleicos, protenas o polisacridos, deben ser
basados en la naturaleza y las proporciones de sus constituyentes,
en la secuencia en la que estos componentes estn dispuestos en la
molcula, y en el tipo de vnculos que los mantienen unidos.
Evidentemente, una decisin ser mucho ms fcil si, como en las
protenas, el nmero de diferentes componentes es muy grande,
muy aparte de la importante ayuda prestada por los procedimientos
inmunoqumicos.
En el caso de los cidos nucleicos, el relativamente pequeo nmero
de diferentes componentes hace muy atractiva la postulacin de la
identidad y la regularidad que, sin embargo, nunca se ha
demostrado adecuadamente.
Se entender que las desviaciones de anlisis de estrictamente
integrales, proporciones simples, admisibles para las sustancias de
tamao relativamente pequeo, se vuelven muy importantes cuando
se aplica a los compuestos cuyos pesos moleculares varan en los
millones.
El presente estudio intenta proporcionar un estudio de la distribucin
de las purinas y pirimidinas en hidrolizados de los cidos nucleicos
de desoxipentosa derivados del timo de ternera y el bazo de res.
Se basa en los mismos microprocedimientos para la separacin y
estimacin de los componentes nitrogenados de cidos nucleicos
(12) que ya han servido para la investigacin de la composicin de
los cidos nucleicos de pentosa (8).
El documento ltimo mencionado tambin incluy una consideracin
de los mtodos de hidrlisis empleados y una discusin crtica de la
validez de los resultados experimentales. Estos puntos, por lo tanto,
no necesitan ser revisados aqu de nuevo.
Un resumen de los resultados con varias preparaciones de cido
nucleico ms tarde se proporcionada en la Tabla V, que enumera las
proporciones molares en la que los cuatro constituyentes
nitrogenados fueron encontrados.
En contraste con los cidos nucleicos de pentosa (8), citosina era la
base presente en la concentracin ms baja.
Aunque, en lo que respecta a la composicin, el acuerdo entre los
cidos nucleicos de timo y de bazo es sorprendentemente bueno,
ninguna reclamacin sobre la identidad debe ser hecha. Se ver que
la distribucin de las purinas y pirimidinas estaba lejos de la
requerida por un tetranucleotido: para 10 molculas de citosina, se
encontraron aproximadamente 16 molculas de adenina, 13 de
guaninade, 15 (o 13) de timina
La correlacin de los resultados presentados aqu con los resultados
anteriores en la literatura es difcil por un nmero de razones.
Casi todas las preparaciones de cido nucleico de desoxipentosa
que fueron hechas el objeto de estudios analticos detallados han
sido aisladas con el uso de lcali fuerte y fueron probablemente
degradadas hasta cierto punto.
Por otra parte, desde que "los cidos nucleicos de animales" eran

one kind only, the older workers paid no attention to the

possible contamination of their material with pentose nucleic
acids, and this may, in preparations derived from sources
other than thymus and fish sperm, have contributed to
serious errors.
For the same reason, preparations of different, and often
unstated, origin were frequently analyzed indiscriminately.
Two studies are usually adduced in support of the equimolar
distribution of the four nitrogenous constituents.
Steudel in 1906 (13) reported on the composition of the
nucleic acids of thymus and of herring sperm.
His percentage figures, though interpreted by him as
evidence for the tetranucleotide structure, actually trend
toward the values arrived at in the present study; they
correspond to the following mole proportions: adenine 2.0,
guanine 1.5, cytosine 1.0, thymine 1.7. Levene and Mandel
(14), however, reported figures for a nucleic acid from an
unnamed source, probably from spleen (15), that seemed to
uphold the tetranucleotide hypothesis.
The composition of a highly polymerized preparation of
thymus desoxyribonucleic acid appears to have been
considered in one instance only, and this by a quite indirect
method.
Gulland et al. (16) interpreted the results of electrometric
titrations (17) in conjunction with the determination of the
ratio of purine nitrogen to non-purine nitrogen in the
hydrolysate (1.6) as signifying that their product contained,
for every 4 gm.-atoms of phosphorus,n1.0 mole each of
thymine and of guanine, 1.2 moles of cytosine, and 0.8 mole
of adenine.
These deductions, which are based on a comparison of the
titration curves of the nucleic acid itself and of the so called
thymic acid to which it gives rise by acid degradation, are
not in accord with the findings presented here.
But it should be pointed out that the actual results of the
titration of Gullands nucleic acid corresponded to three
dissociations attributable to the amino group and to two
dissociations of the purine-pyrimidine hydroxyl per 4 P
atoms (17, 18), which is in excellent agreement with the
molar proportions calculated for Preparation 3 in Table V
(3.9 amino groups for 2.6 purine-pyrimidine hydroxyls) and
in satisfactory agreement with the other preparations.
The present study concludes with an attempt to characterize
the sugar component of the desoxypentose nucleic acid of
spleen, hitherto unidentified, by comparing its partition
behavior with that of desoxyribose from thymus nucleic acid.
The techniques employed have been discussed in a
previous paper (B), but because of the instability of the
desoxy sugars the hydrolysis was carried out in a different
manner.
The nucleic acids were in part degraded enzymatically to

considerados como de un tipo solamente, los trabajadores de ms

edad no prestaron atencin a la posible contaminacin de su
material con cidos nucleicos de pentosa, y esto puede, en
preparaciones derivadas de otras fuentes de timo y esperma de
peces, haber contribuido a graves errores.
Por la misma razn, preparaciones de diferentes, y a menudo no
declaradas,
origen
fueron
analizadas
frecuentemente
indiscriminadamente.
Dos estudios son usualmente evidenciados en apoyo de la
distribucin equimolar de los cuatro componentes nitrogenados.
Steudel en 1906 (13) inform sobre la composicin de los cidos
nucleicos de timo y de esperma de arenque.
Sus cifras porcentuales, aunque interpretadas por l como evidencia
de la estructura tetranucletida, en realidad la tendencia hacia los
valores obtenidos en el presente estudio; ellas corresponden a las
siguientes proporciones molares: adenina 2.0, guanina 1.5, citosina
1.0, timina 1.7. Levene y Mandel (14), sin embargo, reportaron cifras
para un cido nucleico a partir de una fuente no identificada,
probablemente del bazo (15), que pareca defender la hiptesis del
tetranucletido.
La composicin de una preparacin altamente polimerizada de cido
desoxirribonucleico de timo parece haber sido considerada slo en
un caso, y esto mediante un mtodo bastante indirecto.
Gulland et al. (16) interpretaron los resultados de las valoraciones
electromtricas (17), en conjuncin con la determinacin de la
relacin de nitrgeno purina a nitrgeno no purina en el hidrolizado
(1.6) como que significa que su producto contena, por cada 4 gm.
-tomos de fsforo, n1.0 mol de cada uno de timina y de guanina,
1.2 moles de citosina, y 0.8 mol de adenina.
Estas deducciones, que son basadas en una comparacin de las
curvas de valoracin del mismo cido nucleico y del tan llamado
cido tmico a la que da lugar por la degradacin de cido, no estn
de acuerdo con los resultados presentados aqu.
Sin embargo, cabe sealar que los resultados reales de la valoracin
del cido nucleico de Gulland corresponden a tres disociaciones
atribuibles al grupo amino y para dos disociaciones del hidroxilopurina pirimidina por 4 tomos de P (17, 18), que est en excelente
acuerdo con las proporciones molares calculadas para la
Preparacin 3 de la Tabla V (grupos amino 3.9 para 2.6 purinapirimidina hidroxilos) y en acuerdo satisfactorio con las otras
preparaciones.

El presente estudio concluye con un intento de caracterizar el

componente de azcar del cido nucleico de desoxipentosa de bazo,
hasta ahora no identificado, mediante la comparacin de su
comportamiento de particin con la de desoxirribosa del cido
nucleico del timo.
Las tcnicas empleadas han sido discutidas en un artculo anterior
(B), pero debido a la inestabilidad de los desoxi azcares la hidrlisis
fue llevada de una manera diferente.
Los cidos nucleicos fueron en parte degradados enzimticamente a

the nucleoside stage and the sugars liberated by a short

treatment with very dilute acid.
The two carbohydrates agreed completely in their partition
behavior in three different solvents.
It may be tentatively concluded that the desoxypentose
nucleic acid of spleen contains 2-desoxyribose.
In conclusion, a few words should be said about a matter of
more general concern.
To what extent constancy of composition applies to macro
molecules of biological origin is unknown and can, perhaps,
not even be ascertained by existing methods.
It is not impossible that many ostensibly homogeneous
preparations of cellular origin actually are mixtures of
closely related chemical individuals, representative of
different positions within the cell.
This may be particularly true of the desoxypentose nucleic
acids derived from the cell nucleus, if current conceptions of
the specific structure of chromosomes and genes are taken
into account.
Since, in that case, the constant composition of the nucleic
acids of the same cell type is merely a statistical expression
of the unchanged state of the cell, it becomes a matter of
real interest to compare the distribution of constituents in
desoxypentose nucleic acids derived from different deficient
mutants of the same species.
EXPERIMENTAL
Material
Desoxyribonucleic Acid of Calf Thymus-Three highly
polymerized preparations were used.
The figures for their N and P contents, and the other data
which are given in Table I, refer to the dry substances.
Preparation 1 was isolated as the sodium salt from thymus
by a method which followed, with a few modifications, that
of Hammarsten (I).
Preparation % was a potassium salt derived from the
sodium salt, Preparation 1, by a purification method that
made use of the well known precipitating action of
lanthanum salts (1, 19).
One experiment only will be described.
The lanthanum salt, produced by the addition of 6 cc. of 2
per cent aqueous lanthanum acetate to a solution of 200.8
mg. of the sodium nucleate in 400 cc. of saline, was
collected by centrifugation in the cold and washed twice with
0.2 per cent lanthanum acetate.
It was then suspended in 50 cc. of M potassium chloride
containing 5 per cent potassium oxalate (pH 7.2), and the
mixture was shaken mechanically for 43 hours.
The bulky conglomerate of fibers, produced by the addition
of 150 cc. of absolute alcohol to the viscous milk, was
filtered off without delay, washed with 66 per cent and with
absolute alcohol, and taken up in 40 cc. of water.
The very turbid solution was freed of lanthanum oxalate by

la etapa de nuclesido y los azcares liberados por un tratamiento

corto con cido muy diluido.
Los dos hidratos de carbono de acuerdo completamente en su
comportamiento de particin en tres solventes diferentes.
Se puede concluir tentativamente que el cido nucleico de
desoxipentosa de bazo contiene 2-desoxirribosa.
En conclusin, hay que decir algunas palabras sobre una cuestin
de inters ms general.
En qu medida la constancia de la composicin se aplica a las
macromolculas de origen biolgico es desconocida y puede, tal
vez, ni siquiera ser acertadas por los mtodos existentes.
No es imposible que muchas preparaciones aparentemente
homogneas de origen celular en realidad son mezclas de individuos
qumicos estrechamente relacionados, representativos de diferentes
posiciones dentro de la clula.
Esto puede ser particularmente cierto de los cidos nucleicos de
desoxipentosa derivados del ncleo de la clula, si las concepciones
actuales de la estructura especfica de cromosomas y genes son
tomadas en cuenta.
Dado que, en ese caso, la composicin constante de los cidos
nucleicos del mismo tipo de clula es simplemente una expresin
estadstica del estado sin cambios de 'la clula, se convierte en una
cuestin de inters real para comparar la distribucin de los
componentes en los cidos nucleicos de desoxipentosa derivados de
diferentes mutantes deficientes de la misma especie.
EXPERIMENTAL
material
cido desoxirribonucleico de timo de ternera - Tres altamente
preparaciones polimerizadas fueron usadas.
Las cifras de su contenido de N y P, y los dems datos que se dan
en la Tabla I, se refieren a las sustancias secas.
Preparacin 1 se aisl como la sal de sodio del timo por un mtodo
que sigui, con algunas modificaciones, que de Hammarsten (I). '
Preparacin% 'era una sal de potasio derivado de la sal de sodio,
Preparacin 1, por un mtodo de purificacin que hizo uso de la
accin precipitante bien conocida de sales de lantano (1, 19).
Un experimento solamente ser descrito.
La sal de lantano, producida por la adicin de 6 cc. de 2 por ciento
acuosa de acetato de lantano a una solucin de 200,8 mg. de la
nucleada de sodio en 400 cc. de solucin salina, se recogi por
centrifugacin en fro y lavada dos veces con 0.2 por ciento de
acetato de lantano.
Entonces fue suspendido en 50 cc. de cloruro de potasio M que
contiene 5 por ciento de oxalato de potasio (pH 7.2), y la mezcla se
agit mecnicamente durante 43 horas.
El conglomerado voluminoso de fibras, producido por la adicin de
150 cc. de alcohol absoluto a la leche viscosa, se separ por
filtracin sin demora, se lav con 66 por ciento y con alcohol
absoluto, y se recogi en 40 cc. de agua.
La solucin muy turbia fue liberada de oxalato de lantano por
centrifugacin durante 1 hora a 1.900 g, y el sobrenadante se dializa,

centrifugation for 1 hour at 1900 g, and the supernatant was

dialyzed, filtered through infusorial earth, and again dialyzed
for 10 days against many changes of ice-cold distilled water.
After one more centrifugation the solution was frozen and
evaporated in a vacuum.
The potassium desoxyribonucleate (Preparation 2, Table I)
weighed 166.1 mg. (83 per cent of the starting material) and
formed a white fiber felt which gave a clear, very viscous
solution in water.
This potassium nucleate served as the standard in the
determinations (20) of the desoxypentose contents of the
other preparations which, in terms of this one, varied from
95 to 102 per cent.
1 This preparation was made in collaboration with Dr. A.
Bendich.
Preparation 3 was isolated by a procedure somewhat
similar to that of Gulland et al. (16). 2
Desoxypentose Nucle+ic Acid of Beef Spleen-1800 gm. of
cleaned, fresh beef spleen were ground mechanically and
washed by suspension in several 2 liter portions of ice-cold
physiological saline.
The tissue material was removed by pressing through four
layers of cheese-cloth, suspended in 1500cc. of cold M
sodium chloride solution (21), and kept overnight in the
refrigerator.
The insoluble residue was again extracted at 4, this time
with 10 per cent NaCl solution. The combined extracts were
centrifuged at 19009 for 1 hour and 1.5 volumes of 95 per
cent ethanol were added to the supernatant.
The sediment, obtained by the centrifugation of the chilled
mixture, was taken up in 800 cc. of cold 10 per cent NaCl,
the solution was clarified at 19OOg, and the nucleoprotein
precipitated by the addition of 1.5 volumes of ethyl alcohol.
The stringy precipitate was spooled on a glass hook and
thereby separated from the granular material, which was
discarded.
It then was suspended in physiological saline and
deproteinized (22) in the usual manner by nine treatments
with chloroform-octanol (8: 1).
The threads, precipitated by the addition of 2 parts of
ethanol, were lifted and the simultaneously produced
granular sediment reworked and converted largely to
threads by four precipitations from saline with alcohol (cf.
(23)).
The viscous saline solution of the combined threads was
diluted sufficiently to permit clarification by centrifuging, and
the nucleic acid again precipitated with alcohol.
Its saline solution was then dialyzed against running tap
water for 60 hours, against ice-cold distilled water for 24
hours, and evaporated in the frozen state in a vacuum,
when the sodium desoxypentose nucleate was obtained as
a white fluff weighing 1.13 gm. (Preparation 4, Table I).

se filtr a travs de tierra de infusorios, y de nuevo se dializa durante

10 das contra muchos cambios de agua destilada enfriada con
hielo.
Despus de una centrifugacin ms la solucin se congel y se
evapor en el vaco.
El potasio desoxyribonucleado (Preparacin 2, Tabla I) pesaba 166.1
mg. (83 por ciento del material de partida) y form una fibra de fieltro
blanco que dio una solucin clara, muy viscosa en agua.
Este potasio nucleado sirve como el estndar en las
determinaciones (20) de los contenidos de desoxypentosa de los
otros preparados que, en trminos de ste, variaron de 95 a102 por
ciento.
1 Esta preparacin fue hecha en colaboracin con el Dr. A. Bendich.
Preparacin 3 se aisl por un procedimiento algo similar a la de
Gulland et al. (16). 2
cido nucleico de desoxipentosa de Bazo de carne-1800 gm. de
limpiado, bazo de carne fresca se trituraron mecnicamente y se
lav por suspensin en varias porciones de 2 litros de helado de
solucin salina fisiolgica.
El material de tejido se elimin por prensado a travs de cuatro
capas de estopilla, suspendidas en 1500cc. solucin de cloruro de
sodio de fro M (21), y se mantuvo durante la noche en el
refrigerador.
El residuo insoluble se extrajo de nuevo en 4 ", esta vez con
solucin de NaCl al 10 por ciento. Los extractos combinados se
centrifugaron a 19009 durante 1 hora y 1.5 volmenes de 95 por
ciento de etanol fueron aadidos al sobrenadante.
El sedimento, obtenido por la centrifugacin de la mezcla enfriada,
se recogi en 800 cc. de 10 por ciento de NaCl fro, la solucin se
aclar en 19OOg, y la nucleoprotena precipit por la adicin de 1.5
volmenes de alcohol etlico.
El precipitado fibroso se pone en cola en un gancho de vidrio y por
tanto separa del material granular, que fue descartado.
Luego fue suspendido en solucin salina fisiolgica y
desproteinizado (22) de la manera habitual por nueve tratamientos
con cloroformo-octanol (8: 1)
Los hilos, precipitaron por la adicin de 2 partes de etanol, fueron
levantados y el sedimento granular producido simultneamente
reelaborados y se convierten en gran parte a los hilos por cuatro
precipitaciones de solucin salina con alcohol (cf. (23)).
La solucin salina viscosa de los hilos combinados se diluy
suficientemente para permitir la clarificacin por centrifugacin, y el
cido nucleico se precipit de nuevo con alcohol.
Su solucin salina fue luego dializada frente a agua corriente del
grifo durante 60 horas, frente a agua destilada enfriada con hielo
durante 24 horas, y se evapor en el estado congelado en un vaco,
cuando el nucleado de desoxypentose de sodio fue obtenido como
una pelusa blanca de pesaje 1,13 gm. (Preparacin 4, Tabla I).

Table I. Desoxypenlose Nucleic Acids.

Tabla I. cidos nucleidos de desoxipentosa.

*;Preparations 1, 3, 4, and 5 were sodium salts, Preparation

2 the potassium salt. N was determined by the Dumas
method, P by the gravimetric Pregl-Lieb procedure.
+ Ostwald-Fenske viscosimeter; distilled water, 30.3.
2 We are indebted to Dr. S. Zamenhof for help with this
preparation.
Another sodium desoxypentose nucleate preparation from
beef spleen is listed as Preparation 5 in Table I.
This fraction was prepared by a combination of the
procedures described previously (1, 16, 21).
Physical Properties-All nucleic acid preparations formed
white fluffs or fibers and yielded viscous solutions in water.
Preparations 2, 3, and 4 (Table I) were free from pentose
and protein; Preparations 1 and 5 contained traces of the
latter.
They showed the characteristic absorption spectrum in the
ultraviolet with the maxima and minima listed in Table I
(distilled water as the solvent).
The reasons for the use of the expression E(P), i.e. the
atomic extinction coefficient with respect to phosphorus,
have been explained previously (23).
Viscosity data for some of the preparations likewise are
given in Table I.
It will be seen that solutions stronger than 0.1 per cent
exhibited anomalously high viscosities.
The preparations from spleen gave solutions that were less
viscous than those of the products from thymus.
Composition of Desoxypentose Nucleic Acids
Methods--The procedures for the liberation, separation, and
estimation of the purines and pyrimidines, described in
detail with respect to ribonucleic acids in a recent
publication (8), were followed exactly.
Purines
and Pyrimidines-The purines found in the
hydrolysates were adenine (absorption maximum at 262.5
m,u) and guanine (249 mp); the pyrimidines were cytosine

*, Preparaciones 1, 3, 4, y 5 fueron sales de sodio, Preparacin 2 de

la sal de potasio. N fue determinado por el mtodo Dumas, P por el
procedimiento Pregl-Lieb gravimtrico.
+ Viscosmetro Ostwald-Fenske; agua destilada, 30,3 .
2 Estamos en deuda con el Dr. S. Zamenhof para ayudar con esta
preparacin.
Algna otra preparacin nucleico de desoxipentosa de sodio a partir
de bazo de carne aparece como la Preparacin 5 en la Tabla I.
Esta fraccin fue preparada por una combinacin de los
procedimientos descritos anteriormente (1, 16, 21).
Propiedades Fsicas- Todos las preparaciones de cido nucleico
formaron pelusas blancas o fibras y arrojaron soluciones viscosas en
agua.
Preparaciones 2, 3 y 4 (Tabla I) estaban libres de pentosa y la
protena; Preparaciones 1 y 5 contenan rastros de este ltimo.
Ellos mostraron el espectro de absorcin caracterstico en el
ultravioleta con los mximos y mnimos enumerados en la Tabla I
(agua destilada como el solvente).
Las razones para el uso de la expresin E (P), es decir, el coeficiente
de extincin atmica con respecto a fsforo, han sido explicadas
anteriormente (23).
Datos de viscosidad para algunos de las preparaciones del mismo
modo se dan en la Tabla I.
Ser visto que las soluciones ms fuertes que el 0,1 por ciento
exhibidon anmalamente altas viscosidades.
Las preparaciones de bazo dieron soluciones que eran menos
viscosas que las de los productos de timo.
Composicin Acidos Nucleicos de desoxipentosa
Mtodos - Los procedimientos para la liberacin, la separacin, y la
estimacin de las purinas y pirimidinas, describieron en detalle con
respecto a los cidos ribonucleico en una publicacin reciente (8),
fueron seguidos exactamente.
Purinas y pirimidinas-Las purinas encontraron en los hidrolizados
eran adenina (mximo de absorcin a 262.5 m, u) y guanina (249
mp); las pirimidinas eran citosina (267.5 mp) y timina (264,5 m / .c).

(267.5 mp) and thymine (264.5 m/.c).

In no case was uracil demonstrated on the chromatograms.
The values found for the purine content are arranged in
Table II, those for pyrimidines in Table III.
It was pointed out in a preceding paper (8) that the
pyrimidine figures that served for the calculation of
proportions and composition carried an upward correction of
5 per cent.
This was done in order to take into account the retention of
a small quantity of pyrimidine compounds in the purine
hydrochloride precipitate that was produced by the
treatment of the nucleic acid with methanolic HCl,
preliminary to the liberation of the pyrimidines by means of
concentrated formic acid.
The reasons for this procedure have been given (8).
With the ribonucleic acids, the extent of the loss in
pyrimidines thus incurred could not be estimated easily,
since some adenine, carried over into the pyrimidine fraction
by the thoroughwashing of the purine hydrochlorides, would
have contaminated the uracil fraction (12).
With desoxypentose nucleic acids, however, such
estimations could be performed, as adenine and thymine
are separated without difficulty.
Table II. Purine Content of Desoxypentose Nucleic Acids*

En ningn caso fue uracilo demostado en los cromatogramas.

Los valores encontrados para el contenido de purina estn
dispuestos en la Tabla II, las de pirimidinas en la Tabla III.

*Each value represents the average of at least six parallel

determinations on the same hydrolysate.
The solvent system used for the separations was n
butanoldiethylene glycol-water (in NH3 atmosphere) in
Experiments 4, 7, 12, and 13; in all others, n-butanolmorpholine-diethylene glycol-water was employed (12).
+ The preparations are numbered as in Table I.
Preparations 1, 2, and 3 were derived from calf thymus,
Preparations 4 and 5 from beef spleen.
Table III. Pyrimidine Content of Desoxypentose Nucleic

* Cada valor representa la media de al menos seis determinaciones

paralelas en el mismo hidrolizado.
El sistema disolvente usado para las separaciones se n
butanoldietileno de glicol-agua (en la atmsfera NH3) en los
Experimentos 4, 7, 12, y 13; en todos los dems, se emple aguaglicol n-butanol-morfolina-dietilenol (12).
+ Las preparaciones se numeran como en la Tabla I. Preparacin 1,
2, y 3 se obtuvieron a partir de timo de ternera, Preparaciones 4 y 5
de bazo de ternera.
Tabla III. Contenido de pirimidina de cidos Nucleicos de

Se seal en un artculo anterior (8) que las cifras de pirimidina que

sirvieron para el clculo de las proporciones y composicin realizan
una correccin al alza del 5 por ciento.
Esto se hizo con el fin de tener en cuenta la retencin de una
pequea cantidad de compuestos de pirimidina en el precipitado de
hidrocloruro de purina que fue producido por el tratamiento del cido
nucleico con HCl metanlico, preliminar a la liberacin de las
pirimidinas por medio de cido frmico concentrado .
Se han dado las razones de este procedimiento (8).
Con los cidos ribonucleicos, la medida de la prdida de pirimidinas
as incurridos no podra ser estimada fcilmente, ya que alguna
adenina, transportado en la fraccin de pirimidina por el lavado a
fondo de los hidroclorhidratos de purina, sera haber contaminado la
fraccin uracilo (12).
Con cidos nucleicos de desoxipentosa, sin embargo, tales
estimaciones podran ser realizadas, como adenina y timina son
separadas sin dificultad.

Tabla II. Contenido de purina de cidos nucleicos de desoxipentosa*

Acids*

desoxipentosa *

*Each value represents the average of at least six parallel

determinations on the same hydrolysate. n-Butanol-water
served as the solvent system.
t See Table II for the explanation.
1
This hydrolysate was also examined for uracil, but none
was found.
The chromatogram segment removed at the location of
uracil yielded an extract that absorbed no ultraviolet light.
When parallel pyrimidine determinations were carried out on
two samples of thymus nucleic acid (Preparation 3, Table I),
the values obtained by the customary technique (8), which
avoided the washing of the purine hydrochlorides, were
cytosine 4.3, thymine 6.8 per cent (Experiment 3, Table III) .3
In the other experiment, the nucleic acid sample was
degraded with the aid of methanolic HCl and the purine
hydrochlorides were centrifuged and separated from the
supernatant in the usual manner.
TABLE IV. Desoxypentose Nucleic Acids; Proportions and
Balances*

* Cada valor representa la media de al menos seis determinaciones

paralelas en el mismo hidrolizado. n-butanol-agua sirve como
sistema disolvente.
t Consulte la Tabla II para la explicacin.
1 Este hidrolizado tambin fue examinado por uracilo, pero no se
encontr ninguno.
El segmento del cromatograma eliminado en el lugar de uracilo
produjo un extracto que absorbe ninguna luz ultravioleta.
Cuando se llevaron a cabo determinaciones de pirimidina paralelas
en dos muestras de cido nucleico del timo (Preparacin 3, Tabla I),
los valores obtenidos por la tcnica habitual (8), lo que evit el
lavado de los hidrocloridratos de purina, eran de citosina 4.3, timina
6.8 por ciento (experimento 3, Tabla III) 3
En el otro experimento, la muestra de cido nucleico fue degradada
con la ayuda de HCl metanlico y los hidroclorhidratos de purina
fueron centrifugados y separados del sobrenadante de la manera
habitual.
TABLA IV. cidos Nucleicos de Desoxipentosa; Proporciones y
Balances *

* The preparations are numbered as in Table I. The

following abbreviations are employed in this table: A. =
adenine; G. = guanine; C. = cytosine; T. = thymine;
N. A. = total nucleic acid.
They were then washed by suspending them in 0.5 cc. of
methanol, and gaseous HCI was again passed through the
mixture for 3 hours.
Following centrifugation, the united supernatants were
evaporated and the residue was hydrolyzed with formic acid
as described previously (8).
The chromatogram now exhibited four spots, belonging to
cytosine and thymine and to some of the adenine (34 per
cent of the total) and guanine (20.5 per cent of the total) that
had been transferred to the pyrimidine fraction by the
washing process.
The values found were cytosine 5.2, thymine 7.2 per cent.
Since thymine is the pyrimidine best separated from
mixtures contaminated with purines (12), it served for the
computation of the relative pyrimidine deficit which, in this

* Las preparaciones estn numeradas como en la Tabla I. Las

siguientes abreviaturas son empeladas en esta tabla: A. = adenina;
G = Guanina; C = Citosina; T = Timina;
N. A. = cido nucleico total.
Posteriormente fueron lavadas mediante la suspensin en 0.5 cc. de
metanol, y HCl gaseoso se pas de nuevo a travs de la mezcla
durante 3 horas.
Despus de la centrifugacin, los sobrenadantes unidos fueron
evaporados y el residuo fue hidrolizado con cido frmico como se
ha descrito previamente (8).
El cromatograma ahora exhibi cuatro puntos, que pertenece a la
citosina y timina y para algunos de la adenina (34 por ciento del
total) y la guanina (20.5 por ciento del total), que haba sido
trasladado a la fraccin de pirimidina por el proceso de lavado.
Los valores encontrados fueron citosina 5.2, timina 7.2 por ciento.
Desde timina es la pirimidina mejor separ a partir de mezclas
contaminadas con purinas (12), que sirve para el clculo del dficit
pirimidina relativa que, en este experimento particular, fue 5.9 por
ciento.

particular experiment, was 5.9 per cent.

3
The purine hydrochloride mixture isolated in this
experiment was subjected to analysis (cf. foot-note 3 (8)).
The values found, viz. adenine 9.7, guanine 8.6 per cent,
were in good agreement with the data assembled in Table II.
Proportions and Balance-The results obtained with the
several preparations are compared in Tables IV and V.
With respect to the expressions used, reference may be
made to the study of ribonucleic acids recently published
from this laboratory (8).
Preparations 2, 3, and 4 are considered slightly more
reliable than Preparations 1 and 5.
TABLE V. Desoxypentose Nucleic Acids; Molar
Relationships*

* The preparations are numbered as in Table I.

Rate of Puke Liberation-The rate of cleavage of the purine
nucleotides of thymus nucleic acid by heating with N sulfuric
acid was followed with Preparation 3 (Table I).
The results assembled as Experiments 5 to 10 in Table II
are indicative of the relative ease with which the purines are
set free; maximal values for adenine and guanine were
obtained after 30 minutes.
Prolonged heating brought about a certain amount of
destruction (Experiments 9 and 10).4
4
One gains the impression that different nucleic acids differ
in their readiness to split off purines on treatment with
methanolic HCl, which is the first step in the determination
of pyrimidines (8).
Whereas with the ribonucleic acids and with the
desoxyribonucleic acid of thymus 15 to 30 minutes were
sufficient to bring about the appearance of purine
hydrochlorides, the corresponding preparations from spleen
and from tubercle bacilli (7) were much more sluggish,
requiring about 2.5 hours.
As a further check, the purine nitrogen was determined in

La mezcla de clorhidrato de purina aislada en este experimento se

someti a anlisis (cf. pie de nota 3 (8)).
Los valores encontrados, a saber. adenina 9.7, guanina 8.6 por
ciento, estaban en buen acuerdo con los datos reunidos en la Tabla
II.
Las proporciones y balance - Los resultados obtenidos con las
diversas preparaciones fueron comparados en las Tablas IV y V.
Con respecti a las expresiones usadas, se puede hacer referencia al
estudio de los cidos ribonucleico publicado recientemente de este
laboratorio (8).
Preparaciones 2, 3 y 4 se consideran ligeramente ms fiable que las
Preparaciones 1 y 5.
TABLA V. cidos nucleicos de dexosipentosa, Relaciones molares*

* Las preparaciones son enumeradas como en la Tabla I.

Tasa de Liberacin Puke - La velocidad de escisin de los
nucletidos de purina de cido nucleico de timo por calentamiento
con cido sulfrico N fue seguida con la Preparacin 3 (Tabla I).
Los resultados ensamblados como Experimentos 5 a 10 en la Tabla
II son indicativos de la facilidad relativa con la que los purines son
puestos en libertad; los valores mximos para la adenina y la
guanina fueron obtenidos despus de 30 minutos.
Calentamiento prolongado provoc una cierta cantidad de
destruccin (Experimentos 9 y 10) 4
4
Uno tiene la impresin de que diferentes cidos nucleicos difieren
en su capacidad para escindir purinas en el tratamiento con HCl
metanlico, que es el primer paso en la determinacin de pirimidinas
(8).
Mientras que con los cidos ribonucleicos y con el cido
desoxirribonucleico de timo 15 a 30 minutos eran suficientes para
provocar la aparicin de clorhidratos de purina, las preparaciones
correspondientes de bazo y de bacilos tuberculosos (7) fueron
mucho ms lento, que requiere alrededor de 2.5 horas
Como comprobacin adicional, el nitrgeno de

purina fue

one preparation by precipitation with silver sulfate (24), the

experimental procedure of Gulland et al. (16) being
followed. The purine nitrogen, thus estimated in the sodium
nucleate, Preparation 3, Table I, following hydrolysis with N
HzEQ for 1 hour at 115125, was found as 8.7 per cent, in
good agreement with the value of 9.0 per cent recorded in
Table IV.5
Sugar Component of Desoxypentose Nucleic Acids
The procedure for the identification by chromatography of
the sugar component of the purine nucleotides following
acid hydrolysis, as applied to the study of the pentose
nucleic acids (8)) could not be extended directly to the
investigation of the desoxypentoses because of the great
lability of these sugars.
It was first necessary to convert the nucleic acids into a
mixture of desoxypentose nucleosides.
Substances of this type have, in the past, served for the
isolation of the pure desoxy sugar (25, 26).
The enzymatic degradation of the nucleic acids to the
nucleoside stage was carried out by a mixture of enzymes
consisting of purified desoxyribonuclease of pancreas (27)6
and of an enzyme preparation, derived from Aspergillus
oryzae, which is designated as mylase P (Wallerstein
Laboratories, New York).
Preliminary assays with this enzyme mixture showed that,
under the conditions of the experiments described below,
about 65 per cent of the nucleic acid phosphorus was
converted to inorganic phosphate within 11 hours.
10 mg. of each nucleic acid preparation were dissolved in
1.5 cc. of Veronal buffer of pH 6.7 (containing 15
micromoles of magnesium sulfate), 0.5 cc. of the enzyme
solution (containing a total of 100 y of desoxyribonuclease
and 5 mg. of mylase P) was added, and the mixture,
protected with 0.01 per cent of ethyl mercurithiosalicylate,
incubated for 20 hours at 30.
It was then deproteinized by being shaken with chloroformoctanol and centrifuged.
Samples of the solutions were removed in order to test, by
chro matography, for the presence of free sugars at this
stage, but none were found.
The remaining solutions were adjusted to pH 1.5 by means
of N HCl and heated in boiling water for exactly 12 minutes.
The hydrolysates were, in portions of 0.01 and 0.02 cc.,
neutralized on the filter paper with gaseous NH8 and
subjected to chromatography in three different
solvent systems (28).
The development was carried out by means of mphenylenediamine dihydrochloride as described previously
(29)) and the fluorescent zones that formed were observed
in ultraviolet light.
5
It might be mentioned here that the attempts to

determinado en una preparacin por precipitacin con sulfato de

plata (24), el procedimiento experimental de Gulland et al. (16)
siendo seguido.
El nitrgeno de purina, por lo tanto estimado en el nucleado de
sodio, Preparacin 3, Tabla I, despus de la hidrlisis con N HzEQ
durante 1 hora a 115.125 ", fue encontrado como el 8.7 por ciento,
en buen acuerdo con el valor del 9.0 por ciento registrado en la tabla
IV.5
Componente de azcar de cidos nucleicos de desoxipentosa
El procedimiento para la identificacin por cromatografa del
componente de azcar de los nucletidos de purina despus de la
hidrlisis cida, tal como se aplica al estudio de los cidos nucleicos
de pentosa (8)) no se podra extender directamente a la
investigacin de los desoxipentosas debido a la gran labilidad de
estos azcares.
Primero era necesario para convertir los cidos nucleicos en una
mezcla de nuclesidos de desoxypentosa.
Las sustancias de este tipo han, en el pasado, servido para el
aislamiento de la azcar desoxi pura (25, 26).
La degradacin enzimtica de los cidos nucleicos a la etapa de
nuclesido se llev a cabo por una mezcla de enzimas que consiste
en desoxirribonucleasa purificada de pncreas (27) 6 y de un
preparado enzimtico, derivado de Aspergillus oryzae, que fue
designado como "mylase P" (Laboratorios Wallerstein, Nueva York).
Ensayos preliminares con esta mezcla de enzimas mostraron que,
bajo las condiciones de los experimentos descritos a continuacin,
alrededor del 65 por ciento del fsforo de cido nucleico fue
convertido en fosfato inorgnico dentro de 11 horas.
10 mg. de cada preparacin de cido nucleico fueron disueltos en
1.5 cc. de tampn Veronal de pH 6,7 (que contiene 15 micromoles
de sulfato de magnesio), 0.5 cc. de la solucin enzimtica (que
contiene un total de 100 y de desoxirribonucleasa y 5 mg. de milasa
P) se aadi, y la mezcla, protegida con 0.01 por ciento de
mercuritiosalicilato de etilo, incubada por 20 horas a 30 ".
A continuacin, se desproteiniz al ser sacudido con cloroformooctanol y se centrifug.
Las muestras de las soluciones se retiraron con el fin de probar, por
croma- CHRO, por la presencia de azcares libres en esta etapa,
pero ninguno se encontraron.
Las soluciones restantes fueron ajustadas a pH 1,5 por medio de N
HCl y calentadas en agua hirviendo por exactamente 12 minutos.
Los hidrolizados eran, en porciones de 0.01 y 0.02 cc., neutralizados
en el papel de filtro con NH8 gaseoso y se someti a cromatografa
en tres diferentes sistemas de solventes (28).
El desarrollo se llev a cabo por medio de dihidrocloruro de mfenilendiamina como se ha descrito previamente (29)) y las zonas
fluorescentes que formaron fueron observadas a la luz ultravioleta.

Cabe mencionar aqu que los intentos para caracterizar todos los

characterize all nitrogenous constituents in the same nucleic

acid sample, based on the precipitation of the pyrimidine
nucleotides as uranium salts (8), were extended to the
desoxypentose nucleic acids.
However, this procedure yielded low figures for the
pyrimidines, in confirmation of similar findings with
ribonudeic acids (8).
For Preparation 2 (Table I) cytosine 3.2, thymine 6.3 per
cent were found; for Preparation 4, cytosine 3.7, thymine
6.1 per cent.
In the case of t,he desoxypentose nucleic acids, a portion of
the uranium precipitates was insoluble in 2 N HCl and
concentrated formic acid.
6
We are very grateful to Dr. M. McCarty of the Rockefeller
Institute for a specimen of this enzyme.
7
We should like to thank Mr. Philip P. Gray, Wallerstein
Laboratories, New York, for this preparation.
Only one, very fast moving sugar component was observed
in all hydrolysates, whose position on the chromatogram
was, regardless of the solvent system used, identical for
Preparations 1 and 3 from thymus and for Preparation 4
from spleen (Table I).
The RF vaIues, i.e. the proportion of the distances of the
starting point from the adsorbate and from the solvent front
(30), found (at about 28) for the sugar component of both
the thymus and spleen nucleic acids were as follows: (a) in
isobutyric acid (saturated with HzO), 0.55; (6) in butanolpyridine (to the upper layer, resulting from the mixture of 1
volume of pyridine, 1.5 volumes of water, and 3 volumes of
n-butanol, 1 volume of pyridine was added), 0.60; (c) in nbutanol-ethanol-water (4:1:5), 0.45.8
The Rr values for D-ribose in these solvents, listed in the
same order, were 0.44, 0.49, 0.30; for L-rhamnose 0.48,
0.56, 0.40.
The carbohydrate present in the desoxypentose nucleic acid
of spleen was, therefore, in all likelihood identical with the
sugar of thymus desoxyribonucleic acid, viz. Wdesoxyribose.
We are indebted to Mr. W. Saschek and Miss R. Rother for
the microanalyses.
SUMMARY
The present paper continues the study of the composition of
nucleic acids.
The distribution of the purines (adenine, guanine) and the
pyrimidines (cytosine, thymine) in the hydrolysates of
several highly polymerized preparations of the
desoxypentose nucleic acids of calf thymus and beef spleen
was investigated with the aid of a method recently published
for the separation and estimation of these nitrogenous
constituents in minute amounts.
The composition of both the thymus and spleen
desoxypentose nucleic acids was found closely similar, but

componentes nitrogenados en la misma muestra de cido nucleico,

basada en la precipitacin de los nucletidos de pirimidina como
sales de uranio (8), fueron extendidas a los cidos nucleicos de
desoxipentosa.
Sin embargo, este procedimiento produjo bajas cifras de las
pirimidinas, en la confirmacin de hallazgos similares con cidos
ribonucleicos (8).
Para la preparacin 2 (Tabla I) citosina 3.2, timina 6.3 por ciento
fueron encontradas; para la preparacin 4, citosina 3.7, timina 6.1
por ciento.
En el caso de los cidos nucleicos desoxipentosa, una parte de los
precipitados de uranio era insoluble en HCl 2 N y se concentr cido
frmico.
6
Estamos muy agradecidos con el Dr. M. McCarty del Instituto
Rockefeller para un espcimen de esta enzima.
7
Debemos agradecer al Sr. Philip P. Gray, Laboratorios Wallerstein,
Nueva York, para esta preparacin.
Slo uno, componente de azcar movindose muy rpido fue
onservado en todos los hidrolizados idnticos, cuya posicin en el
cromatograma fue, independientemente del solvente del sistema
utilizado, para las Preparaciones 1 y 3 de timo y para la preparacin
de 4 bazo (Tabla I).
Los valores de RF, es decir, la proporcin de las distancias del punto
de partida desde el adsorbato y desde el frente de disolvente (30),
que se encuentra (a aproximadamente 28 ") para el componente de
azcar de los cidos nucleicos tanto el timo y el bazo fueron los
siguientes: (a) en cido isobutrico (saturado con HZO), 0.55; (6) en
butanol-piridina (a la capa superior, resultante de la mezcla de 1
volumen de piridina, 1.5 volmenes de agua, y 3 volmenes de nbutanol, 1 volumen de piridina se aadi), 0.60; (C) en n-etanolagua-butanol (4:1: 5), 0.45.8
Los valores Rr para D-ribosa en estos solventes, que se enumeran
en el mismo orden, fueron 0.44, 0.49, 0.30; para L-ramnosa 0.48,
0.56, 0.40.
El carbohidrato presente en el cido nucleico de desoxipentosa de
bazo era, por lo tanto, con toda probabilidad idntico con el azcar
de cido desoxirribonucleico timo, viz. W-desoxirribosa.
Estamos en deuda con el seor W. Saschek y Miss U. Brother para
el microanlisis.
RESUMEN
El presente trabajo contina el estudio de la composicin de los
cidos nucleicos.
La distribucin de las purinas (adenina, guanina) y las pirimidinas
(citosina, timina) en los hidrolizados de varias preparaciones
altamente polimerizadas de los cidos nucleicos de desoxipentosa
de timo de ternera y el bazo de carne fueron investigadas con la
ayuda de un mtodo publicado recientemente para la separacin y la
estimacin de estos componentes nitrogenados en cantidades de
minuto.
La composicin de tanto el timo y el bazo de cidos nucleicos
desoxipentosa se encontraron muy similar, pero no estaba de

it was not in accord with the expectations derived from the

tetranucleotide hypothesis.
For 10 molecules of cytosine, 16 molecules of adenine, 13
of guanine, and 15 (or 13) of thymine were found.
8
When thymus nucleic acid was subjected to the treatment
customary for the diphenylamine reaction (20), but with the
omission of diphenylamine, no fluorescent band was
observed in the chromatogram following the application of
m-phenylenediamine.
Control tests were also performed to ascertain the absence
of chromatographically demonstrable sugars from the
enzyme mixture employed.
The sugar component of spleen desoxypentose nucleic
acid, which was liberated from a portion of the nucleosides
obtained by enzymatic digestion, closely resembled the
carbohydrate
similarly
released
from
thymus
desoxyribonucleic acid in its chromatographic behavior in
three different solvents and was tentatively identified as 2desoxyribose.

acuerdo con las expetaciones derivadas de la hiptesis de

tetranucletido.
Para 10 molculas de citosina, 16 molculas de adenina, 13 de
guanina, y 15 (o 13) de timina fueron encontradas.
8
Cuando el cido nucleico del timo se someti al tratamiento
habitual para la reaccin de difenilamina (20), pero con la omisin de
la difenilamina, ninguna banda fluorescente fue observada en el
cromatograma tras la aplicacin de m-fenilendiamina.
Tambin se realizaron pruebas de control para determinar la
ausencia de azcares por cromatografa demostrables de la mezcla
de enzima empleada.
El componente de azcar del bazo desoxipentosa de cido nucleico,
que fue liberado de una parte de los nuclesidos obtenidos por
digestin enzimtica, se pareca mucho a la de hidratos de carbono
liberado de manera similar a partir del cido desoxirribonucleico del
timo en su comportamiento cromatogrfico en tres disolventes
diferentes y tentativamente identificado como 2-desoxirribosa.