Unidad IV. Espectroscopia Uv Visible 2015

ESPECTROSCOPIA UV-VISIBLE
La espectroscopia de absorcin se comenz a utilizar para la determinacin de alcaloides. Las

primeras referencias acerca del estudio del espectro de ultravioleta se remontan a 1833, en el que Brewster
trabaj con la descomposicin y dispersin de la luz en slidos y fluidos. En la revista Philosophical
Transactions of the Royal Society de 1852, est documentado el primer trabajo serio, realizado por Stokes.
En 1885, William N. Hartley utiliz el espectrgrafo de cuarzo original de Miller y report el primer espectro
ultravioleta en compuestos narcticos en la misma revista que public a Stokes, y describi los espectros
de 32 alcaloides, entre los que se encontraban la morfina, codena, tebana, papaverina, diacetilmorfina,
entre otros. Hartley determin que todos esos alcaloides contenan un ncleo condensado, derivado del
benceno o de la piridina por la extensin de la banda de 2600 a 3000 Angstroms (fig. 1). Mostr tambin
el efecto de las sustituciones de alquilo y acetilo sobre la curva de absorcin. Posteriormente en 1903, en
el Journal of the Chemical Society, Dobbie public los espectros de otros alcaloides como la cotarnina,
berberina, coridalina, laudanina, quinina, neopina y otros alcaloides de isoquinolina y discuti acerca de la
constitucin molecular de esos compuestos basndose en los espectros obtenidos.
Segn Lothian, quien en 1949 hizo un anlisis crtico de los primeros trabajos en espectroscopia de
absorcin, en su libro Absorption Spectrophotometry menciona: Unfortunately, much of the work done
prior to about 1910 was valueless, since the methods employed were entirely qualitative, or at best semiquantitative, compared with those available today. Some uniformity was introduced however, by Hartley
and other workers after him who developed a method in which the wavelenghts at which various
thicknesses of a given solution ceased to transmit were recorded photographically.
MCQ. JANETT CECILIA SNCHEZ ARANA
Henri, en 1913, fue el primero en graficar el logaritmo del coeficiente de extincin molar contra la
longitud de onda (fig. 2), de acuerdo a la ecuacin:
. Ntese que el espectro para la codena
muestra un mximo a 2830 Angstroms.
En Physikalische Zeitschrift en 1913, Henri ampli el concepto de cromforo establecido por Hartley,
es decir, que el espectro de absorcin no resulta de la accin de la radiacin incidente sobre la molcula
total, sino sobre partes especficas de la molcula. Mostr que la cetonas simples exhiben una banda de
absorcin con un ndice de absorbencia de casi 15 entre 270 y 300 nm con un mximo a 280 nm.
Hans Fischer en 1925, crey que las impurezas juegan un papel mnimo en el anlisis
espectrofotomtrico y estableci que la espectrofotometra no modifica la molcula al mismo tiempo que
es identificada. En la figura 3 se muestran tres espectros obtenidos por Fischer, en donde grafica el
logaritmo del coeficiente de extincin molar contra A, el nmero de onda. La similaridad de las curvas de
absorcin del cido benzoico, benzoilecgonina y cocana se muestran en la figura 3.
Eisebrand en 1926, public que la morfina puede ser determinada en cantidades tan bajas como 0.2
mg, utilizando el espectro de absorcin.

En 1927 Acta Phytochimica public que Kitasato fotografi el espectro de absorcin de 42 alcaloides
y clasific los alcaloides en cuatro clases principales con las siguientes estructuras bsicas:
La espectrofotometra es una tcnica que mide la interaccin de molculas con la radiacin

electromagntica. La luz que se encuentra en la luz visible y la luz ultravioleta de los espectros
electromagnticos presenta una energa de 150- 400 kJmol-1. La energa de la luz es usada para promover
electrones de un estado de excitacin a otro. Un espectro es obtenido cuando la absorcin de luz es
medida en funcin de una frecuencia o longitud. Molculas con electrones deslocalizados en sistemas
aromticos a menudo absorben la luz a 150-400 nm (ultravioleta) o en la regin visible de 400-800 nm.
La espectrofotometra de absorcin es usualmente usada con molculas disueltas en un solvente
transparente. La absorbancia de un soluto depende linealmente de la concentracin y por consiguiente la
espectrofotometra de absorcin es ideal para hacer mediciones cuantitativas. La longitud de absorcin y
la fuerza de absorbancia de una molcula no slo depende de la naturaleza qumica, si no del ambiente
molecular en donde se encuentre el cromforo. La espectrofotometra de absorcin es por lo tanto una
excelente tcnica para seguir reacciones de unin a ligando, catlisis enzimticas y transiciones
conformacionales en protenas y cidos nucleicos. Las mediciones espectroscpicas son muy sensibles y
se requieren pequeas muestras de material para el anlisis.
El espectrofotmetro es el nombre genrico de todos los aparatos basados en esta tcnica. El

espectrofotmetro puede estar equipado con un slo detector o un detector multicanal, configurados por
medidas con un solo rayo (SB) o doble rayo (DB) y designados para la medicin de una longitud fija o para
adquirir una espectro de absorcin completo.
El espectrofotmetro de un solo detector es el ms comn y en este caso particular la banda de
longitud de la fuente de radiacin es trasmitida por el selector de longitud a la muestra y finalmente al
detector como se muestra en la figura 5a y 5b. Con el equipo SB un rayo pasa a travs de la muestra y este
coincide con el detector. En los equipos DB (figura 5b), el rayo es desviado a una longitudes seleccionada
con un espejo rotatorio obteniendo dos rayos, pasando alternativamente por la celda que contiene la
muestra y la celda de referencia. El rayo que viene de la muestra y de la referencia se mezcla, y ste es
llega hasta el detector.
Componentes del espectrofotmetro
En la actualidad son muchos los tipos y modelos de espectrofotmetros que existen, esto complica
la descripcin de sus partes o por lo menos el orden de estas. No obstante aqu seguiremos la clasificacin
ms general.
El espectrofotmetro consta de 5 partes:
Fuente de radiacin
Selector de longitud de onda o analizador
Recipiente para contener la muestra
Detector de energa radiante.
Sistema de registro de datos.

A continuacin se enumeran las caractersticas de varios componentes del espectrofotmetro UV-
visible.
1.- Fuentes de radiacin: Las fuentes de radiacin son generalmente lmparas de tungsteno o tungstenohalgeno para proveer de una radiacin continua adecuada del espectro visible al infrarrojo cercano. Para
la capacidad de radiar con los UV se necesita una lmpara de H2 o D2. Una lmpara de D2 es generalmente
preferida que una lmpara de H2 por que emite una radiacin tres veces mayor. Por simplicidad, una
lmpara de D2 y H2 puede servir como una sola fuente para emitir en la regin UV-visible aunque la
radiacin en el espectro visible es ms pequea que la emitida por una lmpara de tungsteno y al mismo
tiempo poco estable. En algunos instrumentos la fuente de radiacin es modulada con un dispositivo
mecnico.
Fuentes continuas: Emiten radiacin en un amplio rango de longitud de onda cuya intensidad vara de
manera gradual en funcin de dicha . Esta radiacin es constante respecto al tiempo. Se utiliza sobre todo
en absorcin molecular. En UV-Vis e IR. Las ms comunes son:
Lmpara de filamento de tungsteno, para visible y UV prximo.
Lmpara de filamento de haluros de tungsteno, emiten con mayor intensidad y

la ms comn es la de yoduro de tungsteno.
Lmpara de hidrgeno y deuterio, para la regin ultravioleta.

Estas fuentes continuas se encuentran en la siguiente tabla. Una lmpara
ordinaria de filamento de tungsteno da una distribucin de de 320 a 2500 nm (Figura

25.4). Estas lmparas funcionan generalmente a temperatura cercanas a 2900 K,
produciendo una radiacin til entre 350 y 2200 nm aproximadamente.
Las lmparas de tungsteno/halgeno, tambin llamadas
cuarzo/halgeno, contienen pequeas cantidades de yodo
dentro de la cubierta de cuarzo donde est alojado el
filamento. El cuarzo permite que el filamento funcione a 3500
K aproximadamente, lo que produce mayores intensidades
y amplia el rango de , tienen una vida til de ms del
doble que una de tungsteno. En presencia de yodo, el
tungsteno sublimado reacciona y cede molculas de WI2 gaseoso que
luego difunden de nuevo hacia el filamento caliente y all se
descompone y vuelve a depositarse como tomos de W.
Las lmparas de deuterio (y de hidrgeno) se usan

para proporcionar radiacin continua en la regin UV.
Una lmpara de deuterio consta de un tubo cilndrico
con deuterio a baja presin, con una ventana de cuarzo
por la que sale la radiacin
Fuentes discontinuas o de lneas: Emiten un nmero limitado de lneas espectrales, cada una de
las cuales abarca un intervalo determinado de longitudes de onda. Tambin se le conoce
como fuentes pulsantes, ya que emiten radiacin en forma interrumpida a modo de rfagas.
Se emplean en absorcin atmica, espectroscopia de fluorescencia y espectroscopia Raman.
La ms comn es la lmpara de vapores de mercurio.
2.- Selector de longitud: Una porcin de la radiacin emitida por la fuente es colectada y dirigida al
selector de longitud o a la muestra con algunos lentes o espejos. En instrumentos con un solo detector, el
selector de longitud es normalmente puesto antes del compartimento en donde se encuentra la muestra
para minimizar el calentamiento o fotodescomposicin de la muestra por radiacin a longitudes no
monitoreadas. Si este efecto no es significante, el selector de longitud puede ser pasado despus de la
celda del compartimento de la muestra. Con espectrofotmetros multicanales, el detector multicanal debe
ser colocado en el plano focal del espectrgrafo; la celda con la muestra tiene que ser puesta antes que el
selector de longitud e iluminado con radiacin blanca.
Los fotmetros emplean la interferencia con filtros para seleccionar la longitud deseada, nicamente
se necesita tener los filtros correspondientes.
2.1. Filtros
Los filtros estn compuestos por un material que trasmite selectivamente una longitud de onda,
absorbiendo todas las dems. Existen dos tipos de filtros:
Filtros de interferencia: Se basan en las interferencias pticas, para as proporcionar bandas de

radiacin estrechas. Constan de un dielctrico trasparente (fluoruro de calcio o magnesio) que est
delimitado por dos pelculas metlicas semitransparentes. Al incidirle la radiacin parte de esta se refleja
en las pelculas metlicas producindose interferencias constructivas o destructivas, reforzando o
disminuyendo la radiacin.
Filtros de absorcin: Absorben una amplia gama de longitudes de onda y deja trasmitir el resto.
Normalmente se componen de una gelatina coloreada o un vidrio coloreado. Tienen un ancho de banda
mayor que los de interferencia. Dentro de estos se encuentran los filtros de corte, que trasmiten casi el
100% en una zona de espectro, pero a partir de un determinado valor la trasmitancia es igual a cero.
2.2. MONOCROMADORES
Son capaces de dar bandas espectrales mucho ms estrechas que los filtros y adems pueden
ajustarse fcilmente dentro de la zona del espectro. La calidad de un monocromador depende de la pureza
de la radiacin de salida, de su capacidad para resolver longitudes de onda adyacentes, de su poder de
captacin de luz y de su ancgura espectral. Tienen diferentes partes:
Rendija de entrada: Reducen al mximo la luz difusa y evita que la luz dispersa entre en el sistema.
Lente colimadora: Produce un haz paralelo de radiacin electromagntica.
Prisma o red de difraccin: dispersan la radiacin en sus longitudes de onda individuales.
Lente: para enfocar la radiacin electromagntica.
Rendija de salida: impide que la luz difusa atraviese la cubeta.
Tipos:
Monocromador de red
Monocromador de prisma
Monocromador de red: Consiste en una superficie dura, pulida y pticamente plana, en la que se ha
gravado un nmero de surcos paralelos prximos y a distancias iguales entre s. Al incidir la radiacin
electromagntica sobre estos se descompone en distintas longitudes de onda, que se reforzarn o no,
dependiendo del ngulo de refraccin con el que salgan.
Para las regiones ultravioleta y visible tiene de 300 a 2000 surcos /mm y para el infrarrojo de 10 a
200 surcos/ mm.
Red de escalerilla: Como su nombre indica tiene forma de escalera. Esta geometra proporciona
una difraccin muy eficiente de la radiacin.
Red en escalera: Similar a la anterior pero con menos surcos.

Red cncava: Similar a la anterior pero formada en una superficie cncava. Este diseo permite un
monocromador sin espejo o lentes colimadores.
Red hologrfica: El gravado de los surcos se hace con tecnologa lser. (Red littrow).
Monocromador de prisma: Fragmentos con forma de cua, de vidrio, cuarzo, cloruro sdico u otro
material que permita el paso de la radiacin. La radiacin que penetra en el prisma se dispersa en mayor
o menor medida debido al ndice de refraccin que este tiene.
Hay dos tipos de diseo:
Cornu: Compuesto por 2prismas fsicamente unidos, uno

es dextrgiro (desva la radiacin hacia la derecha) y el otro es
levgiro (desva la radiacin hacia la izquierda). Debido a esto,
el haz paralelo se desdobla en distintas longitudes de onda.
Littrow: Prsma en el que una cara es un espejo. Cuando llega la radiacin electromagntica hay un
cambio de direccin y una reflexin debido al espejo por lo que la radiacin se desdobla
en distintas longitudes de onda. Es ms pequeo y compacto que el de cornu.
En un espectrofotmetro con un detector, una imagen de la fuente es enfocada en la entrada de una

abertura del monocromador que hace que el rayo se disperse. En espectrofotmetros de un solo rayo es
usado un monocromador de baja dispersin con una abertura fija (tpicamente de 2 a 20 nm) y un ajustador
manual de longitud como se muestra en la figura 6. Los espectrofotmetros SB y DB de alta calidad estn
basados en monocromadores como medios de dispersin. Dependiendo del instrumento, el espectro de
puede ser variado, de 10 nm a 0.5 nm.
Los espectrofotmetros de barrido (scanning) usualmente proporcionan amplios rangos de

longitudes de onda para analizar (de 1 a 2000 nm min-1), algunos espectrofotmetros tpicos comerciales
de doble rayo son mostrados en la figura 7. Los espectrofotmetros rpidos basados en un componente
ptico de oscilacin en el monocromador son capaces de adquirir espectros en un segundo o menos.
Muchos espectrofotmetros de longitud fija o de barrido de varias longitudes ya sean automticos o
manuales, permiten la colocacin de filtros en el tren ptico para reducir la prdida de radiacin de
diferencias significativas en la longitud. En espectrofotmetros multicanales la resolucin de la longitud es
determinada por el tamao del pixel en el diodo. Por lo tanto, la entrada a la abertura del espectrgrafo
es fijada a la misma anchura de abertura que la anchura de un diodo; la resolucin es del orden de 1 a 2
nm.
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3.- Compartimiento de la muestra y celdas para la muestra. El compartimiento de la muestra es un

compartimiento ajustado a la luz con una tapa que da seguridad sosteniendo una o ms celdas con la
muestra. La radiacin trasmitida por el selector de longitud (o de una fuente en un espectrofotmetro
multicanal) es dirigida a la celda que contiene la muestra. En la mayora de los espectrofotmetros existen
otros accesorios pticos usados para colimar el rayo de luz y enfocarla hacia el centro de la celda que
contiene la muestra y la referencia. El cambio en la amplitud de la luz al pasar por la muestra puede ser
mnima, as que todos los rayos viajan aproximadamente al mismo lugar. A menudo, diferentes lentes o
espejos trasmiten la luz a la muestra y despus al detector.
Es crtico que en el compartimiento de la muestra se permita insertar la celda de la muestra
fcilmente y as mismo removerse para que la muestra pueda localizarse de la misma manera y por lo tanto
ser reproducible. Una base para mltiples muestras puede ser de movimiento rotatorio o de movimiento
lineal para que puedan ser cargadas varias muestras y colocadas en el mismo compartimiento en donde
pasa el rayo de luz, esto puede ser de manera manual o automatizada.
Algunos espectrofotmetros pueden regular la temperatura de las muestras mediante la circulacin
constante de agua en el compartimiento de la muestra, el agua debe de tener la temperatura que se
necesita para la muestra. Alternativamente, existen dispositivos termoelctricos que son utilizados para el
control de la temperatura. En este mismo compartimiento existe un agitador electromagntico que
funciona para mezclar algunas soluciones que se le agregan a la muestra.
Existe una amplia variedad de celdas (diferentes materiales, tamaos y formas). Los materiales ms
comunes de los que estn constituidos son vidrio, cuarzo, slice o varios plsticos. Las ms utilizadas son
las celdas de cuarzo y slice para medir la absorbancia a longitudes de 300 nm, donde las celdas de vidrio
y otros plsticos absorben significantemente. La mayora de las celdas tiene la forma y las dimensiones
que se muestran en la figura 8. La celda estndar de un espectrofotmetro se muestra en la figura 8a, sta
presenta 1 cm de longitud interna y tiene un volumen interno de 2.5 mL. Para muestras pequeas existen
semimicro y micro celdas (figura 8b) de 1 cm de longitud interna pero con un pequeo volumen interno.
Algunas celdas pueden ser compradas con 1 mm a 5 cm de longitud interna. Las celdas con una pequea
longitud interna (micro celdas) son utilizadas para soluciones de alta absorcin. Celdas con longitud de 10
cm presentan una forma cilndrica (figura 8c) y son apropiadas para medir la absorcin de soluciones o
gases. En algunos espectrofotmetros simples o fotmetros son utilizadas unas celdas en forma de tubo
que son de bajo costo (figura 8d).
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En las celdas estndar, las soluciones se agregan manualmente o en algunos casos automticamente
con un dispensador electrnico. Diferentes celdas pueden ser utilizadas para diferentes soluciones. La
celda de la muestra se vaca despus de ser ocupada y posteriormente se enjuaga para seguirse utilizando.
La muestra tambin puede ser aumentada con el uso de varios tipos de celdas de flujo (figura 8e)
que rellenan la celda de manera automatizada. Las soluciones de prueba y enjuagado se bombean a la
celda y son detenidas para medir la absorbancia; es como un sistema de retroalimentacin, en donde
primero se bombea la muestra, se mide la absorcin y despus se enjuaga. El tiempo de bombeo es
ajustado para asegurar que las soluciones previas son completamente remplazadas por la siguiente
solucin o muestra. Este sistema es utilizado con dispensadores automatizados para proveer un alto
anlisis secuencial de un lote o varias muestras. Las celdas de flujo pueden ser utilizadas para medir la
absorcin de un flujo, con anlisis basados en flujos continuos o discontinuos. Los buffers pueden
mezclarse con los reactivos y bombeados al flujo de la celda. La proporcin del flujo y los datos adquiridos
con el tiempo son controlados para medir la absorbancia debido a que la absorbancia se mide a tiempos
apropiados. Existen celdas diseadas especialmente para detectores de absorcin en HPLC (figura 8f), en
estas celdas regularmente se utilizan volmenes de 0.5 a 2 L y la proporcin del flujo es crtico para
obtener una buena elusin.
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4.- Detectores. Los primeros detectores fueron el ojo humano y las pelculas o placas fotogrficas,
posteriormente se han sustituido por trasductores que convierten la energa radiante en una seal
elctrica.
El detector ideal debe de responder a un amplio rango de longitudes de onda, tener alta sensibilidad,
una elevada relacin entre seal/ruido, una respuesta constante. Adems la seal producida debe de ser
proporcional a la potencia y amplificable.
Se utilizan dos tipos de detectores, los que responden a los fotones y los que responden al calor.
4.1. Detectores de fotones: Cuando la radiacin incide sobre el detector puede producir un
desprendimiento de electrones (efecto fotoelctrico) o promover electrones a otros niveles energticos
(fotoconduccin).
Existen diferentes tipos de detectores de fotones:
Clulas fotovoltaicas: Al incidirle la radiacin

electromagntica al ctodo promueve electrones a niveles
energticos ms altos, provocando huecos que favorecen el paso
de corriente elctrica. Se utilizan en la zona visible.
Detectores semiconductores: Al igual que el anterior se basan en la fotoconduccin.

sensibles al infrarrojo cercano.
Fototubos: Constan de un ctodo semicilndrico y un nodo. Cuando le llega la radiacin al

ctodo se desprenden los electrones. Aplicando una diferencia de potencial entre el ctodo y el nodo se
crea una corriente elctrica. Se utilizan en la regin ultravioleta-visible.
Fotomultiplicador: Como los anteriores se basa en el efecto fotoelctrico. Llevan
ctodos adicionales llamados dnodos que vuelven a emitir ms electrones amplificadondo la seal.
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4.2. Detectores de calor: Son detectores de trmicos compuestos por un cuerpo negro que absorbe
toda la radiacin que le llega aumentando su temperatura que es lo que medimos. Se utiliza sobre todo
en el infrarrojo. Existen varios tipos de detectores de calor:
Termopar: Consiste en dos metales unidos por dos puntos, uno protegido de la radiacin
electromagntica y otro expuesto a ella por lo que aumenta la temperatura. Entre las dos uniones se genera
un potencial que vara dependiendo de la diferencia de temperatura.
Bolmetro o termmetro de resistencia: Compuesto por materiales que forman un
puente elctrico y presentan un cambio de resistencia relativamente grande con los cambios de
temperatura.
Clulas de Golay o termmetro de gas: Compuesto por un gas encerrad en un
compartimiento de pared elstica, al llegar la radiacin el gas aumenta su temperatura y aumenta el
volumen provocando cambios en la pared elstica. Eso hace que se modifique el haz de radiacin sobre
un espejo y eso es lo que se mide.
5.- Procesamiento de la seal y lectura. El detector da una seal que contiene informacin sobre el poder
de radiacin trasmitido por una solucin de muestras o referencia. La seal puede ser procesada por un
hardware o software para extraer la informacin deseada y para convertirla a una forma conveniente y
desplegarla en un dispositivo de lectura.
En todos los espectrofotmetros se requiere una seal anloga procesada. Con un
espectrofotmetro de un solo detector o con un fotmetro, un amplificador operacional (op amp), una
configuracin de voltaje (I-V) es transformada por el fotodiodo en un voltaje de amplitud conveniente.
Con instrumentos no computarizados el procesamiento de la seal se logra con un circuito anlogo
aunque los despliegues digitales son muy comunes. Con equipos computarizados de un solo detector, la
seal de amplitud de voltaje es digitalizada por un convertidor anlogo-digital. Los datos digitales son
almacenados en la memoria para despus ser procesado por el software. Los espectrofotmetros
multicanales son siempre computarizados debido a la gran cantidad de datos generados en poco tiempo.
As la informacin espectral de tpicamente 300 a 1000 fotodiodos puede ser leda, amplificada, digitalizada
y almacenada en algunos milisegundos.
Con espectrofotmetros no computarizados de un solo rayo pensando para medir a una longitud
de onda fija, la conversin del voltaje es desplegada directamente dentro de un dispositivo para trasmitir
la lectura. La lectura directa de la absorbancia es necesaria para convertir la foto seal a un voltaje
proporcional a la absorbancia con circuitos logartmicos antes de desplegarla. El dispositivo de lectura en
este caso es tpicamente un anlogo o voltmetro digital. Si la fuente es modulada, es necesario sincronizar
la deteccin electrnica para extraer la informacin de la amplitud antes de desplegarla o hacer la
conversin aritmtica.
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El procesamiento de la seal con espectrofotmetros de doble rayo no computarizados es ms
complicada. La amplitud de la seal de la muestra y de la referencia se extrae primeramente de la seal
modulada, entonces la relacin o el logaritmo de la relacin de la seal de la muestra y la referencia es
computarizada. Para instrumentos de barrido (scanning), los datos del espectro son trazados en tiempo
real en un registrador anlogo.
Con espectrofotmetros basados en microcomputadoras, los pasos discutidos anteriormente son
digitalizados, las seales de la muestra y la referencia son almacenadas por un software. El dispositivo de
lectura puede ser un medidor digital, un trazador, una impresora o una cmara de video o una combinacin
de estos dispositivos.
En todos los espectrofotmetros, el ruido equivalente al ancho de banda (f) es controlado por
algunas constantes de tiempo limitantes o la integracin de tiempo que este arriba de 1 s en instrumentos
simples o controlando un rango de .01 a 10 s con los instrumentos ms sofisticados. En espectrofotmetros
multicanales, f es determinada por la integracin del tiempo en donde el fabricante asegura que se
encuentra antes de la saturacin de los diodos por la alta intensidad.
La interaccin de la radiacin con la materia puede dar lugar a distintos tipos de procesos que
incluyen; dispersin, reflexin, absorbancia, fluorescencia/fosforescencia o, por ejemplo, reacciones
fotoqumicas que pueden originar la ruptura de enlaces.
Las interacciones entre la materia y la energa en la regin visible del espectro se manifiestan en
forma de color. Cuando una fuente de luz blanca, que emite radiacin en todo el intervalo visible del
espectro de la radiacin electromagntica, incide sobre una sustancia coloreada, parte de la radiacin se
va a absorber y el resto pasar a travs, o se reflectar si se trata de un material slido. Nuestros ojos
detectar y perciben el color de la luz que no se absorbe, es decir de la radiacin trasmitida o reflactada por
el objeto. As por ejemplo, una hoja de una planta es verde porque la clorofila absorbe en las regiones de
azul (470 nm) y roja (650 nm) del espectro de luz visible. De forma anloga el zumo de naranja tiene este
color por que se absorbe todas las longitudes de onda del visible excepto la luz naranja (~ 600 650 nm)
y si vemos una pelota de color naranja es porque la radiacin visible que incide sobre ella se absorbe,
excepto la luz naranja que se ve reflejada.
La regin ultravioleta (UV) se subdivide en dos zonas espectrales, el UV de vaco o lejano, situado
por debajo de los 200 nm y el UV cercano que corresponde al intervalo de 200 a 400 nm. En algunos casos,
sin embargo, se considera que el lmite superior del UV es 380 nm y el inferior 190 nm. El lmite inferior
viene definido, fundamentalmente por factores instrumentales tales como, la falta de sensibilidad del
detector, la baja trasmitancia de los componentes pticos a estas longitudes de onda y la absorcin de
oxgeno del aire. Adems, la mayora de los disolventes usados en UV presentan trasmitancias muy
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reducidas a bajas longitudes de onda. Por todo ello, el ultravioleta de vaco es una zona de poca utilidad
analtica para el anlisis de rutina debido a restricciones instrumentales y experimentales que se encuentran
al trabajar a tan bajas longitudes de onda.
Para entender las interacciones de la radiacin con la materia vamos a considerar la estructura
electrnica de las molculas. Una molcula puede presentar varios tipos de orbitales: de tipo , y del tipo
. Los primeros presentan una densidad electrnica de simetra cilndrica alrededor del eje internuclear y
corresponden a la formacin de enlaces sencillos entre tomos o de uno de los enlaces en el caso de
enlaces dobles o triples. Estos orbitales pueden ser de dos tipos: enlazantes (), de menor energa que los
orbitales atmicos de partida, y antienlazantes (*), ms energticos que los orbitales atmicos de partida.
Los orbitales de tipo se forman a partir de la combinacin de orbitales atmicos de tipo p
perpendiculares al eje del enlace. Se caracterizan porque la densidad electrnica mxima entre los dos
ncleos est por encima y por debajo del plano nodal. Pueden ser tambin enlazantes () o antienlazantes
(*) (Figura 6.2.). Cuando se forma un enlace doble uno de ellos ser del tipo , y dos en el caso de enlaces
triples.
Los orbitales moleculares no enlazantes (), la ltima categora de orbitales moleculares, no

contribuyeron a la estabilidad o inestabilidad de la molcula. Estn formados por pares de electrones no
compartidos. Su energa es equivalente a la de los electrones en los tomos individuales que forman la
molcula.
La energa de los orbitales, y por tanto de los electrones que los ocupan, estn cuantizados. En
ausencia de un estmulo externo la molcula se encontrar en su estado de energa ms bajo que se conoce
como estado fundamental. Cuando la radiacin de la longitud de onda adecuada incide sobre ella se va a
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producir la promocin de un electrn, desde el orbital molecular ocupado de mayor energa (HOMO) al
orbital molecular de menor energa (LUMO). La molcula pasar a encontrarse en su estado de mayor
energa denominada estado de excitacin.
La zona UV-visible ocupa un intervalo de frecuencias o longitudes de onda relativamente pequeos

dentro del espectro de radiacin electromagntica. En este intervalo, las diferencias de energa
corresponden a transiciones entre estados electrnicos de los tomos y de las molculas y por eso tambin
recibe la denominacin de espectroscopia electrnica. Los espectros electrnicos de las molculas se
encuentran en el intervalo de longitudes de onda entre 100 y 800 nm.
Para que una substancia sea activa en el visible debe ser colorida: el que una substancia tenga color,
es debido a que absorbe ciertas frecuencias o longitudes de onda del espectro visible y transmite otras
ms. Por ejemplo: una solucin es amarilla debido a que dentro de la regin visible absorbe radiacin en
el rango de 435 a 480 nanmetros. En este rango de longitudes de onda se encuentra el color azul del
visible, por lo que este compuesto absorbe el color azul y transmite los colores complementarios que dan
origen al color amarillo de la solucin mencionada.
La absorcin y transmisin de las longitudes de onda de la regin visible de esta parte del espectro
no es la misma en substancias que den diferentes tonalidades de amarillo, por lo que podemos tener una
gama diferente de tonalidades como: amarillo canario, amarillo limn, amarillo plido, etc.
La Tabla I nos da una relacin entre rango de longitudes de onda en que absorbe el compuesto,
color absorbido y color observado o transmitido.
El Ultravioleta del vaco se considera aquella regin comprendida de los 100 a los 190 nm. Se le llama
as debido a que el nitrgeno atmosfrico absorbe este tipo de radiacin, por lo que se debe efectuar el
vaco para poder excluir las absorciones de este gas de las absorciones del compuesto en estudio.
Las complicaciones tcnicas asociadas al vaco necesario, adems de la poca utilidad que se obtiene
en el UV del vaco, han hecho que esta tcnica prcticamente no tenga uso y de hecho no hay equipos
disponibles comercialmente para aplicaciones de este tipo de espectroscopia. El espectro Visible y
Ultravioleta, por el contrario, tienen amplia aplicacin y son tcnicas que se emplean continuamente.
El rango visible se considera de los 380 a los 750 nanmetros. El rango del Ultravioleta cercano o del
cuarzo es de 190 a 380 nm.
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La base de la espectroscopia visible y ultravioleta consiste en medir la intensidad del color (o de la

radiacin absorbida en UV) a una longitud de onda especifica comparndola con otras soluciones de
concentracin conocida (soluciones estndar) que contengan la misma especie absorbente. Para tener esta
relacin se emplea la ley de Beer, que establece que para una misma especie absorbente en una celda de
espesor constante, la absorbancia es directamente proporcional a la concentracin.
La coloracin de la solucin se debe a la especie absorbente y esta coloracin puede ser natural o
inducida. La coloracin natural puede ser la base de la cuantificacin de una especie, como por ejemplo:
la clorofila en ciertas plantas, los complejos metlicos que se encuentran presentes en solucin acuosa,
como son los iones Cobre (II), Manganeso (VII), Cobalto (III), etc.
Ms frecuentemente, se induce a la formacin de un complejo colorido que absorba en el visible, y
que sea especfico para el elemento o compuesto que se desea cuantificar colorimtricamente. Ejemplo:
la formacin de un complejo colorido cuando el cloro libre reacciona con la ortotolidina, o la cuantificacin
de glucosa en sangre y orina por la accin del molibdato en determinadas condiciones. O la intensificacin
del color del ion cobre, al formar un complejo amoniaco-cobre, el cual se forma cuando a una solucin
acuosa que contiene iones cobre se le agrega hidrxido de amonio.
19
Para esto se requiere de un control de ciertas condiciones, que inhiben o favorecen la formacin de
compuestos coloridos:
pH: El pH es un factor determinante en la formacin de ciertos complejos o compuestos coloridos.

Cuando el pH influye en la tcnica analtica, se requiere de un control adecuado de este valor para
lo cual se agrega alguna solucin buffer, o estabilizadora de pH.
Temperatura: La temperatura es factor importante, sobre todo en reacciones en las cuales el factor
cintico es la base del anlisis.
Tiempo: En ciertas reacciones, se requiere de un tiempo determinado para que se tenga una lectura
estable de absorbancia de la solucin producida. Es tambin factible, que los complejos o
compuestos formados sean lbiles, esto es, que despus de un cierto tiempo se descompongan a
otros productos diferentes, por lo que el tiempo indicado al que debe hacerse la lectura debe
establecerse en base a la experiencia y los resultados que se tengan.
Orden de Adicin de los Reactivos: Si la adicin de reactivos no es la adecuada, este factor tambin
puede producir resultados inesperados, ya que existe la posibilidad de que substancias
interferentes reaccionen con las substancias aadidas, o que stas reaccionen entre ellas mismas
formndose substancias diferentes a las deseadas.
Concentracin de Sales Concomitantes: Si la muestra contiene gran cantidad de sales disueltas,

sera conveniente separar la muestra de la matriz, ya que es posible que se presenten interferencias
por formacin de complejos inicos asociados.
En esta seccin se muestran los factores que influyen en el uso de la espectrofotometra de absorcin
molecular. Usualmente la concentracin de un analito en una solucin analizada es evaluada de la
absorbancia de la muestra y una curva de calibracin. La curva de calibracin se obtiene generalmente de
la absorcin medida de un estndar externo.
Las molculas absorben radiacin electromagntica
Para la mayora de los compuestos orgnicos, formados bsicamente por enlaces entre tomos de
H, C, N y O, las transiciones electrnicas que se producen en la zona UV-visible implican electrones del
tipo , y . (no enlazantes).
Cuando una onda encuentra a una molcula, puede cambiar la direccin de propagacin (dispersin)
de esa onda, o puede ser absorbida. En este ltimo caso, una molcula absorbe un fotn y su energa
interna aumenta para entrar a un estado inestable, por lo que rpidamente vuelve a liberar esa energa
sobrante y vuelve al estado inicial que es ms estable. El estado inicial se denomina estado fundamental y
el estado ms energtico se llama estado excitado. La absorcin de radiacin produce un paso del estado
fundamental al excitado (excitacin) y en el proceso contrario (llamado relajacin) hay una liberacin de
20
energa. Esta energa liberada en la relajacin puede ser en forma de calor o en forma de radiacin
electromagntica otra vez. Este ltimo proceso de desprendimiento de radiacin se llama de emisin. Estos
procesos se pueden representar como una reaccin qumica y en un diagrama de energa.
El aumento del nivel energtico interno de la molcula produce unos cambios en los enlaces
intramoleculares y/o movimiento de los electrones alrededor del tomo. Estos enlaces se llaman
transiciones y se clasifican en tres tipos:
El espectro Ultravioleta y Visible de las molculas est asociado a transiciones electrnicas entre los
diferentes niveles energticos de ciertos grupos o tomos de la molcula y no caracterizan la molcula
como entidad. En contraste la absorcin de energa en la regin infrarroja estimula la molcula completa
y causa cambios vibracionales y rotacionales en sta, lo cual caracteriza la entidad estructural de dicha
molcula.
As las radiaciones ms energticas (VIS, UV y mayores) comunican suficiente energa como para
alterar el movimiento orbital de los electrones, tanto alrededor de un tomo solo, como de los orbitales
de enlace entre tomos. Las radiaciones menos energticas (IR) producen cambios en los movimientos de
vibracin y rotacin de la molcula. Estas ltimas son muy especficas de cada enlace y por lo tanto de
cada molcula por lo que se utilizan como tcnicas de identificacin.
Una molcula o parte de una molcula que puede ser excitada por absorcin se llama cromforo. En
sistemas biolgicos los cromforos generalmente tienen mximos de absorcin en el rango del UV lejano
al visible. En la tabla 1 se enlistan los valores de mx y para algunos cromforos importantes.
21
22
Cuando dos tomos forman un enlace qumico, los orbitales atmicos de cada uno de ellos se
combinan para formar dos orbitales moleculares, uno de baja energa que es el orbital enlazante y otro de
energa mayor, que es el orbital antienlazante (Figura 1). Los enlaces covalentes que se originan entre los
orbitales de dos tomos que se enlazan qumicamente pueden ser de dos tipos y se conocen como enlaces
y enlaces .
Al efectuarse dicho enlace covalente se forman simultneamente orbitales antienlazantes: * en el
caso de un orbital molecular enlazante y * en el caso de un orbital molecular enlazante .
Los electrones que no participan en la formacin de enlaces covalentes en la molcula, se denominan
electrones n o no enlazantes. En las molculas orgnicas los electrones n estn localizados principalmente
en los orbitales atmicos de tomos como Nitrgeno, Oxigeno, Azufre y del grupo de los halgenos.
El diagrama de energa para los orbitales moleculares enlazante, antienlazante y no enlazante as
como las transiciones electrnicas posibles es el mostrado en la Figura 2.
La absorcin de energa radiante en el UV o Visible por los electrones n, resulta en la excitacin

de estos, los cuales pasan a ocupar alguno de los orbitales antienlazantes. La absorcin de radiacin UV o
Visible es capaz de efectuar dichas transiciones. En la Figura 2 se representan las transiciones posibles en
una molcula. De acuerdo a este diagrama el orden energtico en estas transiciones es:
23
Mientras mayor sea la energa requerida para una determinada transicin, menor es la longitud de
onda de la radiacin que debe suministrarse para conseguir tal fin; por ejemplo: la transicin
para
el propano requiere de radiacin de 135 nm, la cual se encuentra en la regin del UV lejano por lo que es
necesario un equipo de alto vaco si se desea estudiar dicha regin del espectro. La transicin
es
la que requiere de menor energa y mayor longitud de onda. Las cetonas y aldehdos saturados efectan
esta transicin a una longitud de onda de aproximadamente 285 nm. Es necesario hacer notar que
asociado a estas transiciones electrnicas existen cambios rotacionales y vibracionales en la molcula, lo
cual origina que el espectro obtenido sea un espectro de bandas y no un espectro de una o ms lneas
agudas, como s ocurre en un tomo.
1. Transiciones *: Estas requieren gran energa y se producen en el UV de vaco a longitudes

de onda inferiores a 150 nm. Por ejemplo los enlaces C-H absorben en torno a 125 nm y los enlaces C-C
alrededor de 135 nm.
2. Transiciones *: Estas bandas aparecen cuando la molcula orgnica contiene un

heterotomo (O, N, S, F, Cl, Br, I) y un electrn que est en un orbital p de un heterotomo se excita a un
orbital * de la molcula. Se producen en la zona comprendida entre 150 y 250 nm. Por ejemplo, alrededor
de 180 nm para los alcoholes, 190 nm para los teres y derivados halogenuros y 220 nm para las aminas.
3.- Transiciones * y *
Se producen en la zona entre 200 y 780 nm y son las de mayor utilidad analtica. Se requiere la presencia
en la molcula de grupos insaturados que aporten electrones del tipo .
Para que se produzca la transicin * la molcula debe de contener un heterotomo formando
parte de un sistema insaturado (por ejemplo C=O, N=N, NO y NO2). En este caso, se trata de bandas menos
intensas que las de * que se ven muy afectadas por la naturaleza del disolvente. Un ejemplo tpico
son las bandas de absorcin del grupo carbonilo entre 270 y 295 nm.
La absorcin en el UV-visible est asociada a la presencia en la molcula de grupos funcionales
(cromforos que contienen electrones de valencia con energas de excitacin relativamente bajas.
Un cromforo es la parte de la molcula (tomo o grupo de tomos) en la que se localiza la transicin
electrnica responsable de la aparicin de una banda de absorcin molecular. El trmino hace referencia,
a los grupos responsables del color de las sustancias y procede del trmino griego chromus, que significa
color y phorus el que lo lleva. (Cuadro 6.2.)
24
Puede ser un grupo funcional que da origen a transiciones del tipo
. Estos son los que se
encuentran en molculas orgnicas con enlaces saturados y que no contienen tomos con pares
electrnicos no compartidos, ejemplo: C-C y C-H.
Los cromforos que dan origen a las transiciones
son sistemas que contienen electrones en
orbitales y n. Estos se encuentran en las molculas orgnicas saturadas que contienen uno o ms tomos
con pares electrnicos no compartidos ejemplo: C-S-, C-O-, C-N, C-Cl etc.
Los cromforos que dan origen a transiciones del tipo
, son molculas orgnicas no
saturadas, las cuales contienen electrones en los orbitales . Ejemplos de este tipo son los cromforos C=C
y-
.
Algunos tomos o grupos saturados con pares de electrones sin compartir no absorben en la regin
UV-visible. Sin embargo, cuando se unen, o se introducen en, cromforo hipercrmico (incremento de la
intensidad de la absorcin), recibindola denominacin de auxocromos. Por ejemplo, los grupos C-Br, COH, C-NH2 se comportan como auxocromos.
La presencia de varios cromforos en una misma molcula separados por un enlace sencillo da lugar
a sistemas conjugados que presentan un comportamiento caracterstico en el UV-visible. As, el espectro
electrnico de un compuesto que contenga dos enlaces etilnicos separados por varios grupos metlicos,
sern muy semejantes al de una molcula con un doble enlace aslan los dobles enlaces etilnicos. Sin
embargo, si los dos enlaces etilnicos estn situados entre tomos de carbonos adyacentes, caso del 1,3butadieno, CH2=CH-CH=CH2, se produce una disminucin de la diferencia de energa entre el estado
fundamental y el excitado, debido a la conjugacin, que se trata de un desplazamiento batocromico de la
banda de absorcin del cromforo.
25
En los sistemas en que son posibles las transiciones
estado basal; como resultado de esto, la transicin
, el estado excitado es ms polar que el

ocurrir a mayores longitudes de onda en
solventes polares que en solventes no polares. Este desplazamiento hacia el rojo del espectro visible se
conoce como efecto batocromico.
La conjugacin de un enlace etilnico con un enlace acetilnico da lugar a la aparicin de una banda
de absorcin en la regin 219 a 230 nm, en general, menos intensa que la del dieno correspondiente.
Cuando se conjuga un grupo carbonlico o carboxlico con un enlace etilnico tanto la banda * como
la de * sufren desplazamientos batcrmicos.
En las molculas que contienen tomos con electrones no compartidos o electrones no enlazados,
estos interactan con el solvente por formacin de enlaces hidrogeno con las molculas del mismo. Cuanto
mayor sea la polaridad del solvente mayor ser el grado de asociacin de los tomos con electrones no
compartidos y las molculas de solvente. El efecto de esta situacin es que la absorcin se desplaza a
menores longitudes de onda (desplazamiento al azul), a medida que aumenta la polaridad del solvente.
Este efecto se conoce como efecto hipsocromico.
El efecto batocromico (desplazamiento al rojo o a menores longitudes de onda) tambin es
observado cuando la longitud del sistema conjugado de dobles enlaces en una molcula se incrementa.
Lo mismo es cierto cuando algunos grupos funcionales (principalmente tomos con electrones no
compartidos) se encuentran como sustituyentes en la molcula.
Por simplicidad los cromforos pueden ser clasificados de acuerdo a sus grupos funcionales en:
1.- Etilenos (el enlace doble aislado)
2.- Dienos y Polienos
3.- Poliinos y Eninos
4.- Aldehidos y Cetonas
5.- Acidos a, b Insaturados, Lactonas y Esteres
6.- Aromticos y Heterocclicos
26
Adems de los cromforos orgnicos, hay otros compuestos inorgnicos, complejos rganometlicos y complejos de trasferencia de carga que absorben en la zona UV-visible. Por ejemplo, los
aniones carbonato, nitrato y nitrito presentan mximos de absorcin a 217, 313 y 280, y 280 y 360 nm (dos
mximos para el nitrito), respectivamente, que tienen su origen en transiciones de tipo *.
La mayora de los iones de los metales de transicin y sus complejos absorben en la zona ultravioleta
o visible. Esta absorcin, se debe a transiciones electrnicas entre orbitales de tipo d para los elementos
del primer (3d) y segundo periodo de transicin (4d) y a transiciones electrnicas entre orbitales del tipo f
para los lantnidos (4f) y actnidos (5f).
27
Los espectros de absorcin en el ultravioleta y el visible de los lantnidos y actnidos se caracterizan
por picos de absorcin estrechos y bien definidos que no se ven afectados, prcticamente, por el tipo de
ligando coordinado al in metlico. Este efecto puede explicarse teniendo en cuenta que las transiciones
responsables de la absorcin implican a orbitales internos que se ven afectados por los efectos del
disolvente o por los ligandos que interaccionan con los orbitales externos.
Sin embargo, los iones y complejos de los elementos de la primera y segunda serie de transicin
presentan bandas anchas, poco intensas, muy afectadas por factores tales como, el ndice de coordinacin
del metal, la naturaleza de los ligandos enlazados o la distribucin espacial de los mismos. As, el Ni(II) es
2
verde, el Ni(3 )2+
4 es azul y el Ni(3 )4 es amarillo parduzco o, por ejemplo, los complejos con Co (II)
con ndice de coordinacin 4, presentan mayor coeficiente de absorcin molar que los complejos con
ndice de coordinacin 6.
Los colores de los iones de transicin de sus complejos se deben a transiciones electrnicas que
involucran a orbitales d. En ausencia de un campo elctrico o magntico hay 5 orbitales d
( , , , 2 2 , 2 ) que tienen la misma energa, es decir que estn degenerados. (Figura 6.5). Para
explicar la aparicin de color en los compuestos de transicin se ha propuesto varias teoras. La ms sencilla
es la teora del campo cristalino segn la cual, la diferencia de los orbitales d se debe al campo elctrico
originado por la disposicin simtrica de los ligandos, que pueden ser aniones (Cl) o molculas dipolares
(NH3, H2O), entorno al in central. En estas condiciones, adems de la atraccin electrosttica debida a las
fuerzas de Coulomb, se produce una repulsin entre el campo y los electrones del catin. De esta forma,
los orbitales de ste experimentan un incremento de energas que depende de la intensidad y de la forma
del campo y de la naturaleza de los orbitales.
28
Si la carga negativa de los ligandos est concentrada en determinados puntos, como sucede cuando
el catin se encuentra en el cristal bajo el campo de los ligandos, el efecto individual sobre cada orbital d
es diferente, aquellos que estn orientados hacia los ligandos experimentaran una accin repulsiva ms
intensa, y los orientados en direcciones alejadas, menos intensa. Se produce as una prdida parcial de la
degeneracin y se originan 2 series degeneradas: una de mayor energa, , doblememte degenerada y
otra de menor energa, 2 , triplemente degenerada. La separacin o diferencia de energa entre las series
de orbitales , y 2 se denominan parmetro de desdoblamiento del campo de ligandos, .
La magnitud del desdoblamiento depende de varios factores:
a) De la carga y del nmero atmico del catin.
b) De la fuerza del campo del ligando es decir, de la intensidad con que el ligando desdoblar la
energa de los electrones d
c) De la coordinacin
Los ligandos ms comunes, se pueden ordenar en orden creciente de fuerza del campo en la llamada
serie
espectroqumica:
< < < < < 2 < < 3 < <
< 2 < . Este orden se aplica a casi todos los iones de los metales de transicin y nos
permite predecir cualitativamente la posicin de los mximos de absorcin de distintos complejos de un
determinado in metlico de transicin.
Algunos iones inorgnicos de metales de transicin, por ejemplo, 4 o el 2 72 , o complejos

moleculares (por ejemplo, benceno-12) presentan bandas de absorcin muy intensas en la zona UV-visible.
As, el yodo es violeta en disolventes inertes, como el tetracloruro de carbono, sin embargo forma
disoluciones rojas a marrones en disolventes aromticos, como el benceno.
Los complejos que se forman se caracterizan por presentar bandas de absorcin intensas en la
regin visible del espectro que se denominan de trasferencia de carga y estn asociadas a la transicin de
un electrn desde un orbital perteneciente al ligando hasta otro perteneciente al tomo central, o
viceversas.
Los complejos de trasferencia de carga se forman cuando uno de los componentes del complejo
(donador) absorbe radiacin y se produce la trasferencia de un electrn desde uno de sus orbitales de
menor energa (transformndose en un catin radical) a un orbital de mayor energa de otro componente
del complejo, que acta como aceptor (convirtindose en un anin radical). El estado excitado por tanto
ser el resultado de un proceso de oxidacin/reduccin interno.
Estas transiciones son particularmente importantes en los complejos de los metales de la segunda y
la tercera serie de transicin y las bandas asociadas son tan intensas que pueden no observarse en el
29
espectro las bandas correspondientes a las transiciones d-d. En estos complejos las transiciones que
implican la transferencia de un electrn desde un orbital enlazante del metal a un orbital no ocupado del
ligando, se conocen como transiciones de transferencia de carga oxidativas, ya que el metal se oxida en el
proceso. Por ejemplo, para el complejo [ 3 (bipiridina)] el estado de menor energa es
[ 3+ ( )3 () ] y el estado excitado [ 4+ ( )3 () ].
Alternativamente si la transferencia del electrn se produce desde el ligando al metal se conocen
como transiciones de transferencia de carga reductoras, ya que el metal se reduce en el proceso. En el caso
de la banda de transferencia de carga que aparecen en el espectro del 4 . El estado fundamental se
puede escribir formalmente como [7+ (2 )4 ] y se produce una transferencia desde un ligando 2 al
metal para dar, [6+ (2 )3 ( )].
La posicin de la banda de absorcin en el espectro depende del potencial de ionizacin del donador
y de la afinidad electrnica del aceptor y, como se ha indicado anteriormente, se trata de bandas anchas,
de intensidad elevada ( > 10 4 L/ mol cm), muy tiles con fines analticos.
La regin del espectro electromagntico que corresponde a las transiciones que involucran a
electrones de la capa de valencia se extiende por longitudes de onda de 100 a 1000nm (regiones
ultravioleta-visible e infrarroja cercana). No toda esta zona es de igual utilidad para la elucidacin de
estructuras orgnicas.
La regin por debajo de 200nm, conocida como Ultravioleta lejano, presenta caractersticas que hacen
complicada su utilizacin:
1. En esta zona absorben las molculas componentes del aire, lo que hace imprescindible trabajar con
equipos evacuados (de aqu el nombre alternativo de la regin: Ultravioleta de vaco).
2. - Los materiales usuales para la construccin de componentes pticos (celdas, lentes, elementos
dispersivos), el cuarzo y el vidrio, absorben fuertemente en esta zona. Se requiere trabajar con otros
materiales, menos verstiles y ms costosos (LiF, CaF2, zafiro, utilizables hasta 115, 125 y 140 nm
respectivamente).
3. -Los solventes absorben fuertemente en esta regin. Los hidrocarburos saturados pueden usarse hasta
170 nm, los hidrocarburos perfluorados hasta 150nm.
4. - La sensibilidad de los detectores es generalmente baja.
5. - La absorcin en esta zona es poco selectiva. Casi todos los compuestos presentan absorcin en esta
regin.
30
La regin entre 200 y 400nm, llamada Ultravioleta cercana, es de gran utilidad en la determinacin
estructural de insaturacin conjugada, aromaticidad o de ciertos grupos insaturados con pares electrnicos
libres (carbonilo, nitro, etc.), sin presentar los serios inconvenientes del Ultravioleta de vaco. Se requieren
materiales pticos de cuarzo si se quiere acceder a la zona de longitudes de onda inferiores a 350nm,
mientras que el vidrio es utilizable en el resto de la regin Ultravioleta cercana y toda la regin visible.
La regin Visible, de 400 hasta cerca de 800nm, es la nica del espectro electromagntico detectable
por el ojo humano. Las transiciones que se presentan en esta zona corresponden a transiciones electrnicas
de muy baja energa. Todos los compuestos coloreados absorben selectivamente en esta regin. Los
compuestos fuertemente conjugados y ciertos complejos de metales de transicin absorben
significativamente en la regin.
Ciertas transiciones electrnicas pueden presentarse a longitudes de onda superiores a 800nm pero
estas no son comunes en los compuestos orgnicos. En la Figura 2.1 se muestra la regin Ultravioleta
Visible del espectro electromagntico, as como sus caractersticas.
Las transiciones electrnicas en molculas se presentan en forma de bandas, como ya se vio

anteriormente, con modificacin simultanea de los niveles de energa vibracionales y rotacionales. En
molculas pequeas en fase gaseosa es posible observar la estructura fina vibracional de las bandas
electrnicas con subestructura rotacional no bien resuelta. En molculas ms complejas la multiplicidad de
los niveles vibracionales hace que el gran nmero de transiciones de similar energa produzca bandas de
absorcin continuas sin estructura fina vibracional evidente. Esto es tambin lo usual cuando se registran
los espectros de absorcin UV en fases condensadas (soluciones, slidos).
Las principales caractersticas de una banda de absorcin son: posicin del mximo, intensidad y anchura.
31
La posicin de una banda, dada por la del mximo de absorcin, depende de la energa de la transicin
(relacin de Bohr) y se reporta usualmente como max /nm o nmero de onda
La intensidad de una banda de absorcin puede expresarse como absortividad molar en el mximo,, o
ms correctamente como intensidad integrada. Esta intensidad depende del cuadrado del momento
dipolo de la transicin (cambio en la distribucin de cargas elctricas durante la transicin). Se producen
absorciones intensas cuando una transicin es acompaada por un gran cambio en la distribucin de
cargas (max del orden de 104), por otra parte las transiciones con pequeo cambio en la distribucin de
cargas producen dbiles bandas de absorcin (max del orden de 102 o inferiores). Dados los valores tpicos
de las absortividades molares en el UV, es comn trabajar con soluciones de concentraciones 10-3 a 10-5
molL-1. La anulacin del momento dipolo de transicin y por lo tanto la ausencia o baja intensidad de una
banda de absorcin est vinculada con la simetra de las funciones de onda y se expresa a travs de las
reglas de seleccin que estudiaremos posteriormente.
La anchura de una banda de absorcin electrnica depende del nmero e intensidad de los
componentes vibracionales de la transicin correspondiente. La distribucin de intensidades entre los
componentes vibracionales de una transicin electrnica depende de los cambios en la geometra de
equilibrio de los estados base y excitados y es interpretada sobre la base del Principio de Franck Condon.
Las tcnicas analticas UV-Visible han recibido gran aceptacin debida, entre otras a las siguientes
razones:
1.-Amplio Campo de Aplicacin: Como ya se ha mencionado, las tcnicas espectroscpicas
UVVis. son ampliamente empleadas ya que son muchas las especies que son activas en el visible, y muchas
mas las que con un tratamiento adecuado son capaces de formar especies coloridas. Lo mismo puede
decirse de la espectroscopia Ultravioleta.
2:-Selectividad Adecuada: Aunque no es muy comn, si es posible tener interferencias en

UV Visible. Cuando esto ocurre, es posible emplear los mtodos para anlisis de multicomponentes. Otra
alternativa es aislar el analito de la interferencia, o separar la interferencia misma.
3.-Buena Exactitud y Precisin: En estas tcnicas espectroscpicas es normal tener errores

relativos del 1 al 3%, por lo cual se puede considerar que se tendrn resultados analticos con un mnimo
de incertidumbre si se procede en la forma correcta.
4.-Facilidad y Conveniencia: Aunque existen instrumentos altamente sofisticados,

acoplados a computadoras y con sistemas pticos y electrnicos de alta precisin, es posible obtener
resultados muy aceptables para anlisis de rutina, con instrumentos o espectrofotmetros de los mas
sencillos en el mercado, a un costo muy accesible.
32
El tratamiento de la muestra vara considerablemente dependiendo de cada aplicacin. La mayora

de las mediciones son determinadas en solucin o slidos que son disueltos. En algunas ocasiones el
anlisis se puede realizar directamente de la absorbancia de la forma qumica original, pero comnmente
es necesario derivatizar el compuesto por que las bandas de absorcin del analito en la forma qumica
original poseen una inadecuada absorcin o absorben a longitudes inusuales. La derivatizacin envuelve
la conversin del analito a una forma absorbente fuerte por una reaccin analtica selectiva con los
reactivos apropiados. La absorbancia del producto de la reaccin es proporcional a la concentracin del
analito por la calibracin externa.
Generalmente, un exceso de reactivo es agregado a la reaccin analtica para llegar al equilibrio antes
de hacer la medicin. Alternativamente, el rango de la reaccin qumica puede estar relacionado con la
concentracin del analito o el analito puede ser titulado con un reactivo estndar que reacciona con una
estequiometra conocida. La reaccin entre la muestra analizada o la muestra estndar y el reactivo puede
llevarse a cabo directamente en la celda de la muestra o en cualquier contenedor conveniente, en el ltimo
de los casos, una alcuota de la reaccin es transferida a la celda de la muestra despus de que la reaccin
es completada. En algunas aplicaciones especializadas como estudios de titulacin, cinticas y
determinaciones, la medida de la absorcin se realiza antes de completar la conversin del analito a una
forma absorbente.
A menudo son necesarios pasos de separacin (filtracin, extraccin con solventes, etc.) para eliminar
interferencias y en algunas aplicaciones el espectrofotmetro es utilizado como una tcnica de deteccin
para cromatografas.
En procedimientos analticos primero se debe determinar la forma absorbente del analito que se va
a utilizar. La naturaleza de las especies absorbidas influye en gran medida en la determinacin de la
concentracin, la sensibilidad de la calibracin, el lmite de deteccin, la precisin, la exactitud y la
linealidad. En el anlisis, la absorbancia de algunas especies puede ser muy grande para obtener una buena
deteccin y precisin. Por otro lado, la naturaleza qumica de algunas especies puede afectar la interaccin
con algunos interferentes o tomar parte en un equilibrio que puede afectar la linealidad, simplemente las
caractersticas espectrales de cada especie determina el potencial para sobrelapar el espectro con otras
especies.
El solvente y algunas condiciones de la solucin como el pH, la fuerza inica y la temperatura deben
ser optimizados y controlados para minimizar las interferencias y mantener la linealidad (para prevenir la
descomposicin por oxidacin, fotodescomposicin u otros mecanismos). Por otro lado se debe de
mantener el equilibrio y maximizar el tiempo de estabilidad de la forma absorbente.
33
Cuando una reaccin analtica es usada para formar un derivado capaz de absorber, la concentracin
del reactivo puede ser optimizada para lograr el objetivo que se sigue. Adicionalmente, el tiempo y la
temperatura requerida para formar el producto, el orden de adicin de los reactivos y la reaccin
concomitante pueden ser considerados. Los reactivos enmascarados, son algunas veces agregados para
bloquear la reaccin concomitante con el reactivo analtico, idealmente, la conversin del analito a una
forma cuantificable por absorbancia. Por otro lado, la eficiencia de conversin podra ser constante a la
concentracin del analito o los concomitantes. Cuando se emplea un solvente para la extraccin se puede
evaluar: el efecto del tipo de solvente en la eficiencia de la extraccin del analito y concomitantes, la
absorbancia molar, y las posiciones espectrales de las bandas de absorcin.
.
La calidad de una tcnica espectrofotomtrica expresada en trminos de incertidumbre, se basa
esencialmente en tres parmetros: sensibilidad, lmite de deteccin y rango de linealidad.
a) Sensibilidad: Es la concentracin requerida para dar un 1% de absorbancia (99% de transmitancia o lo

que es lo mismo 0,0044 unidades de absorbancia. A medida que esta concentracin es menor, la
sensibilidad de la tcnica es mayor porque es necesaria menos concentracin para producir para producir
una seal en el detector.
b) Lmite de deteccin: Es la mnima concentracin que se puede medir con la tcnica y con un elevado
nivel de certidumbre. Est relacionado con el ruido de fondo del aparato, es decir, la seal que mide el
aparato cuando se introduce un blanco. Una manera de calcularlo es multiplicar por tres la seal
correspondiente al ruido de fondo.
c) Rango de linealidad: Es el intervalo de concentraciones dentro del cual podemos medir una muestra
problema con un elevado nivel de certidumbre. Generalmente a partir del valor mximo de este rango, la
seal (absorbancia) deja de tener una relacin lineal con la concentracin y la curva se hacer horizontal,
tendiendo a un valor mximo de absorbancia. Las muestras o patrones que estn fuera de ese rango no
se pueden medir con seguridad con la tcnica empleada.
El espectro Ultravioleta de una molcula se obtiene generalmente en forma adicional al espectro

Infrarrojo de la misma especie. Este espectro UV frecuentemente sirve como dato confirmativo de la
ausencia o presencia de ciertos grupos funcionales.
Si se desea ampliar el tema sobre cmo se aplica la espectroscopia UV al anlisis estructural para
identificacin de grupos funcionales en una molcula, recomendamos que se consulten otras referencias,
que tratan este aspecto en mayor profundidad.
34
En algunos casos la espectroscopia UV puede ser fundamental para el estudio de ciertos problemas
especficos. Por ejemplo en la industria de los cosmticos, tintes, colorantes y pinturas. El estudio de los
grupos cromforos y de su influencia en el desplazamiento de ciertos compuestos qumicos hacia la regin
visible hacen de esta tcnica una de las de mayor inters en esta rea.
Desde el punto de vista del estudio estereoqumico y de grupos funcionales en una molcula
orgnica, la espectroscopia UV no rivaliza con otras tcnicas que tienen el mismo propsito, especialmente
con la espectroscopia IR por las razones mencionadas anteriormente, sin embargo, su aplicacin en la
cuantificacin de sustancias que absorben radiacin UV la hacen una tcnica insustituible.
Existe un gran nmero de tcnicas para determinar substancias que no tienen un nmero suficiente
de grupos cromforos para que la banda de absorcin est dentro del espectro Visible; por ejemplo cidos
orgnicos, alcoholes, fenoles, aldehdos, cetonas, etc. Muchos de este tipo de compuestos muestran al
menos una banda de absorcin en el UV cercano y tomando como dato su longitud de onda de mxima
absorbancia se pueden cuantificar en la misma forma en que se determinan compuestos en espectroscopia
Visible.
Resulta conveniente definir algunos trminos usuales en espectroscopia UV-Vis que tienen en parte origen
en antiguas teoras sobre el origen del color de las sustancias.
Grupo cromforo: grupo covalente insaturado que origina bandas de absorcin electrnicas (*).
Ejemplos tpicos son los grupos vinilo, carbonilo, fenilo, nitro.
Grupo auxcromo: grupo saturado(generalmente conteniendo pares electrnicos libres) que unido a un
cromforo altera tanto la posicin como la intensidad de la banda de absorcin de ste. Auxcromos
tpicos son los grupos OH, -NH2, -Cl, -Br, -CH3.
Efectos batocrmico e hipsocrmico: desplazamientos del mximo de absorcin de una banda a
mayores o menores longitudes de onda respectivamente, debido a la introduccin de un sustituyente,
cambio de solvente o pH o cualquier otra causa.
Efectos hipercrmico e hipocrmico: incremento o decremento de la intensidad de una banda de
absorcin debido a la introduccin de un sustituyente, cambio de solvente o pH o cualquier otra causa.
Brown, Ch. 2000. Utraviolet, visible, and near-infrared spectrophotometers. Applied Spectroscopy Reviews, 35 (3),
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Unidad IV. Espectroscopia Uv Visible 2015

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Unidad IV. Espectroscopia Uv Visible 2015

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ESPECTROSCOPIA UV-VISIBLE

La espectroscopia de absorcin se comenz a utilizar para la determinacin de alcaloides. Las

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longitud de onda (fig. 2), de acuerdo a la ecuacin:

. Ntese que el espectro para la codena

muestra un mximo a 2830 Angstroms.

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mg, utilizando el espectro de absorcin.

La espectrofotometra es una tcnica que mide la interaccin de molculas con la radiacin

El espectrofotmetro es el nombre genrico de todos los aparatos basados en esta tcnica. El

Selector de longitud de onda o analizador

Recipiente para contener la muestra

Detector de energa radiante.

Sistema de registro de datos.

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Lmpara de filamento de tungsteno, para visible y UV prximo.

Lmpara de filamento de haluros de tungsteno, emiten con mayor intensidad y

Lmpara de hidrgeno y deuterio, para la regin ultravioleta.

ordinaria de filamento de tungsteno da una distribucin de de 320 a 2500 nm (Figura

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Las lmparas de deuterio (y de hidrgeno) se usan

Filtros de interferencia: Se basan en las interferencias pticas, para as proporcionar bandas de

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Red en escalera: Similar a la anterior pero con menos surcos.

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Hay dos tipos de diseo:

Cornu: Compuesto por 2prismas fsicamente unidos, uno

En un espectrofotmetro con un detector, una imagen de la fuente es enfocada en la entrada de una

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Los espectrofotmetros de barrido (scanning) usualmente proporcionan amplios rangos de

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3.- Compartimiento de la muestra y celdas para la muestra. El compartimiento de la muestra es un

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Clulas fotovoltaicas: Al incidirle la radiacin

Detectores semiconductores: Al igual que el anterior se basan en la fotoconduccin.

Fototubos: Constan de un ctodo semicilndrico y un nodo. Cuando le llega la radiacin al

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Los orbitales moleculares no enlazantes (), la ltima categora de orbitales moleculares, no

La zona UV-visible ocupa un intervalo de frecuencias o longitudes de onda relativamente pequeos

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La base de la espectroscopia visible y ultravioleta consiste en medir la intensidad del color (o de la

pH: El pH es un factor determinante en la formacin de ciertos complejos o compuestos coloridos.

Concentracin de Sales Concomitantes: Si la muestra contiene gran cantidad de sales disueltas,

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La absorcin de energa radiante en el UV o Visible por los electrones n, resulta en la excitacin

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1. Transiciones *: Estas requieren gran energa y se producen en el UV de vaco a longitudes

2. Transiciones *: Estas bandas aparecen cuando la molcula orgnica contiene un

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Puede ser un grupo funcional que da origen a transiciones del tipo

. Estos son los que se

son sistemas que contienen electrones en

, son molculas orgnicas no

, el estado excitado es ms polar que el

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< < < < < 2 < < 3 < <

Algunos iones inorgnicos de metales de transicin, por ejemplo, 4 o el 2 72 , o complejos

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