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UNIVERSIDAD POPULAR DEL CESAR

MICROBIOLOGIA DE ALIMENTOS
LABORATORIOS
DOCENTE: YUMAR E. RUIDIAZ MENDEZ.
RECUENTO DE ESTAFILOCOCO COAGULASA POSITIVA.
1 OBJETIVO: Determinar el numero de Staphylococcus coagulasa positiva en
muestras de alimentos.
2 ALCANCE: Abarca la determinacin del numero de Staphylococcus coagulasa
positiva en muestras de alimentos
3 RESPONSABILIDAD: El encargado de hacer cumplir el procedimiento de anlisis
es el docente del rea de microbiologa de alimentos, el cual debe tener una
formacin de microbilogo o bacterilogo con una experiencia de 2 aos como
mnimo.
4 DOCUMENTOS DE REFERENCIA:
4.1. HOLGUIN, M. et, al Manual de tcnicas de anlisis para el control de calidad
microbiolgico para consumo humano. Divisin de laboratorios de alimentos y
bebidas alcohlicas INVIMA 2001.
4.2.
LUNA, G. Manual Operativo de anlisis microbiolgico para alimentos
universidad de Pamplona 1998.
5. CONTENIDO:
5.1. FUNDAMENTO: Este mtodo consiste en determinar y hacer el recuento del
numero de colonias de Staphylococcus coagulasa positiva en alimentos el cual se
ponen en evidencia cuando las condiciones de manipulacin son deficientes, los
materiales y equipos estan sucios y materias primas de origen animal estn
contaminados.
5.2. DEFINICIONES:
5.2.1 Agar Baird parker: medio de cultivo que contiene cloruro de litio y telurito
para la inhibicin de la flora acompaante, en tanto que el piruvato y la glicocola
acta favoreciendo selectivamente el crecimiento de estafilococos. Sobre el medio
de cultivo, opaco por su contenido en yema de huevo, las colonias de
Staphylococcus muestran dos caractersticas diagnosticas de proteolisis y liplisis y
se producen halos y anillos caractersticos y debido a la reduccin del telurito a
teluro se desarrolla una colonia negra.
5.2.2.Caldo infusin cerebro corazon: caldo de cultivo que contiene trozos de
corazon adecudo para el crecimiento de muchas bacterias exigentes. El caldo
cerebro corazon es especialmente adecuado para el cultivo de estafilococos
destinados al ensayo de plasmocoagulasa y para la realizacin de hemocultivos.
5.2.3. UFC: Unidades formadoras de colonias.
5.3. CONDICIONES GENERALES:
El Staphylococous aureus es una bacteria
que tiene forma de coco pero su agrupacin es de manera irregular por tanto en la
coloracin de gram se observan como racimos de uvas, Esta bacteria es de gran
importancia a nivel alimentario ya que produce una toxina termoestable la cual
puede producir intoxicacin alimentara, adems por estar en la piel y en las
mucosas de los seres humanos es indicador de una manipulacin inadecuada por
parte de los manipuladores de alimentos.
5.4.
5.4.1.

MATERIALES Y REACTIVOS:
Cajas de petri estriles

5.4.2.
5.4.3.
5.4.4.
5.4.5.
5.4.6
5.4.7
5.4.8.
5.5.
5.5.1.
5.5.2.
5.5.3.
5.5.4.

Beaker estril
Erlenmeyer estril
Agar Baird parker
Caldo cerebro corazon
Plasma deshidratado
telurito de potasio al 3.5%
Emulsin de yema de huevo.
EQUIPOS:
Incubadoras
Contador de colonias
Incubadora a 35C +/- 2C.
Estufa

5.6.
PROCEDIMIENTO:
5.6.1.
Recuento de ESTAFILOCOCOS COAGULASA POSITIVA.
5.6.1.1. Mezclar muy bien la muestra ( liquida) para asegurar su
homogenizacin.
5.6.1.2.
Desinfectar con alcohol al 75% el sitio por donde se vaya a extraer la
muestra.
5.6.1.3.
Abrir aspticamente ( con el mechero en medio) y adecuadamente la
muestra.
5.6.1.4. Si es slida tomar porciones de diferentes sitios de la muestra.
5.6.1.5. Pesar 11 gramos de la muestra en balanza analtica si es slida, sobre un
papel
graff estril o medir 11 mililitros si es liquida en recipiente estril.
5.6.1.6. Macerar, picar o triturar.
5.6.1.7.
Aadir al recipiente de dilucin que contiene 99 ml de agua peptonada
para
obtener la dilucin de 10-1.
5.6.1.8. Mezclar al agitar vigorosamente el recipiente para homogenizar.
5.6.1.9.
Preparar la dilucin 10-2 trasfiriendo 1 ml de la dilucin 10 -1 a un tubo
de
ensayo que contiene 9 ml de agua peptonada, agitar cuidadosamente.
5.6.1.10. Preparar la dilucin 10-3 trasfiriendo 1 ml de la dilucin 10 -2 a un tubo
de
ensayo que contiene 9 ml de agua peptonada, agitar cuidadosamente.
5.6.1.11. Transferir por duplicado alcuotas de 0.1 ml de cada una de las
diluciones
consecutivas en cajas de agar Baird parker previamente temperadas.
5.6.1.12. Extender el inoculo sobre la superficie del agar, con la ayuda de la varilla
de HOCKEY, hasta que La superficie quede seca.
5.6.1.13. Invertir las placas e incubarlas a 35C + / - 2C durante 48 horas.
5.6.1.14. Seleccionar las cajas que presenten entre 20 y 200 colonias aisladas y
contar las colonias negras
y brillantes, con bordes reducidos blancos, rodeados de zonas claras que
contrastan con el medio
opaco, zona de precipitado. Anotar el nmero de colonias con las
caractersticas anteriormente
sealadas y multiplicar por el factor de dilucin y luego por 10.
5.6.1.15. Tomar un mnimo de 3 colonias y realizar la prueba de coagulasa.
5.6.2.
PRUEBA DE COAGULASA
5.6.2.1. Trasferir el numero de colonias a confirmar a un numero igual de tubos
que contienen 5 ml de Caldo infusin cerebro corazn (BHI).
5.6.2.2.
Hacer un control positivo sembrando una cepa de estafilococo
coagulasa positiva en un caldo

BHI
5.6.2.3.
Incubarlas a 35C + / - 2C durante 18 24 horas
5.6.2.4.
Pasado este tiempo transferir 0.3 ml de cada uno de los cultivos de BHI
a tubos que contienen
0.3 de plasma deshidratado de conejo con EDTA.
5.6.2.5.
Trasferir a un tubo 0.3 ml de plasma deshidratado de conejo como
control negativo.
5.6.2.6.
Incubarlas a 35C + / - 2 C
5.6.2.7.
Observar cada hora durante 6 horas. En caso negativo descartar hasta
las 24 horas.
5.6.2.8.
Una vez finalizado el tiempo de incubacin, hacer la lectura con base en
los tubos
que presentan coagulacin del plasma comparndolos con los controles
positivos y negativos.
9
Sobre el nmero total de colonias despus de las 48 horas de incubacin
y la proporcin de colonias confirmadas por la prueba de la coagulasa,
hacer el calculo de estafilococos coagulasa positiva utilizando como
factor de correccin la relacin:
colonias positivas
Colonias examinadas.

5.7. CALCULO E INTERPRETACIN DE LOS RESULTADOS:


EJEMPLO:
RECUENTO DE 10-2 = 35 Colonias * 1000 = 35000
Colonias examinadas= 5
Colonias positivas= 4
35000 * 4
5

28000 ufc/ gr o ml.

Ausencia de colonias expresar los resultados como:


Estafilococo coagulasa positiva menor de 100 ufc/ gr o ml.

5.8 ANEXOS:

N.A

5.9. REGISTRO: Registro de verificacin y aprobacin.

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