VIDEO: PRCTICA SINPSIS NEUROMUSCULAR

Placa motora de batracio: un modelo paradigmtico para el estudio de la

transmisin sinptica de tipo qumica.
La enorme mayora de la informacin con que en la actualidad contamos acerca
del mecanismo de la transmisin sinptica de tipo qumica proviene de estudios
electrofisiolgicos, estructurales y moleculares realizados en la placa motora de
batracio.
Criterios para la identificacin de la molcula transmisora y del receptor
postsinptico activado fueron delineados en base a estudios realizados en este
preparado.
Hiptesis vesicular de liberacin del neurotransmisor elaborada a partir de estudios
electrofisiolgicos y estructurales en esta sinapsis.
Extrapolacin al SNC: Es un contacto sinptico peculiar.
El elemento postsinptico (fibra muscular) recibe una nica fibra presinptica. A
nivel del SNC, una neurona tpica recibe varias centenas a miles de contactos
sinpticos distribuidos en la membrana somato-dendrtica: convergencia.
La eficiencia de este contacto es enorme, transmisin de tipo 1 a 1, es decir un
potencial de accin de la clula presinptica en condiciones fisiolgicas siempre
desencadena un potencial de accin en la clula postsinptica (esto es
particularmente cierto para vertebrados). En condiciones fisiolgicas el potencial
postsinptico (en este caso particular denominado potencial de placa terminal, ppt)
es de amplitud suficientemente como para desplazar el potencial de membrana en
reposo de la fibra muscular (usualmente en el entorno de los -90 mV) por encima
del potencial para la generacin de espigas (nivel de disparo, tpicamente alrededor
de los -55 mV). Es por lo tanto un potencial postsinptico gigante. Esta
especializacin funcional caracterstica de este preparado tiene importantes
correlatos estructurales y fisiolgicos: gran cantidad de sitios de liberacin del
transmisor, elevado contenido quantal.
Esta situacin es extremadamente inusual en el SNC, donde generalmente para
que la clula postsinptica descargue un potencial de accin se requiere la suma
tanto temporal como espacial de cientos de potenciales postsinpticos excitadores.
A este complejo proceso se lo denomina integracin neuronal. Convergencia de
entradas sinpticas.
Es un contacto sinptico excitador: la actividad de la clula presinptica aumenta la
probabilidad de que la postsinptica descargue un potencial de accin. En el SNC
tambin existen acciones sinpticas de tipo inhibidoras, que son muy importantes.
Algunas consideraciones acerca del preparado experimental.
La sinapsis que se emple para la realizacin del presente experimento es la placa
motora del msculo gastrocnemio. Las fibras motoras que lo inervan transcurren
por el nervio citico. Es una sinapsis del Sistema Nervioso Perifrico.
Es una preparacin de tipo in vivo, es decir se trabaja con el animal entero en
contraposicin a las preparaciones in vitro donde se asla una porcin del tejido
que se desee estudiar y el mismo deber ser mantenido en condiciones
apropiadas.
El animal est anestesiado e inmovilizado mediante una destruccin mecnica de
parte de su SNC. Las vas ascendentes sensoriales y las descendentes motoras
estn destruidas.
An cuando el animal est inmobilizado, y por lo tanto carece de los movimientos
ventilatorios caractersticos, el intercambio gaseoso a nivel cutneo asegura la
sobrevida de los tejidos del animal. Una gran ventaja de este preparado: no se
requiere de ventilacin artificial.

Algunas consideraciones acerca del circuito experimental: modalidad de

estimulacin y registro.
Estimulacin extracelular mediante el uso de energa elctrica: dentro de ciertos
rangos de intensidad y duracin es una modalidad fisiolgica de activacin de los
tejidos excitables. Estimulo bipolar: dos electrodos iguales en contacto con el tejido
excitable. Durante la breve duracin del estmulo circular una corriente desde el
electrodo positivo (nodo) hacia el negativo (ctodo) a travs del preparado. En
estas condiciones de estimulacin el potencial de accin se iniciar a nivel del
ctodo (condicin denominada estimulacin catdica). Se podr estimular tanto el
nervio (presinpsis) como el msculo (postsinpsis). En el nervio, el estmulo se
aplicar a nivel de la gotera interna del nervio citico. Estimulador, SIU.
Registro extracelular mediante un par de electrodos iguales en contacto con el
tejido excitable: registro bitpico diferencial. Se registra la cada de potencial
producida por la circulacin en el espacio extracelular de las corrientes que
subyacen al potencial de accin. Registro poblacional: suma de la actividad de
muchas clulas excitables activadas. Amplificadores: seales bioelctricas suelen
ser de escasa amplitud. Registros se visualizan en un osciloscpio: sistema de ejes
cartesianos donde las abscisas representan el tiempo y las ordenadas potencial.
Esencialmente se trata de un voltmetro con gran resolucin temporal.
Registro de la actividad mecnica del msculo. Mediante el empleo de un
transductor de tensin cuya salida alimenta la entrada de un polgrafo, es posible
registrar la actividad mecnica del msculo como consecuencia de la activacin del
las fibras motoras. El msculo es un tejido excitable cuya respuesta tiene dos
componentes: una elctrica y otra mecnica desencadenada por la elctrica
(acople excitacin-contraccin). Durante el curso de la presente prctica se
registrarn ambas componentes.
Estimulacin elctrica del nervio: registro en nervio y msculo.
Se registrar la actividad bioelctrica del nervio (presinpsis) y del msculo (postsinpsis)
como consecuencia de la estimulacin del nervio citico. Se registra por tanto la entrada y
la salida del contacto sinptico.
En el barrido superior del osciloscpio se registra la actividad elctrica del nervio, en
tanto que en el inferior la del msculo.
Criterios para la identificacin del artefacto del estmulo y la seal biolgica: latencia,
conducta frente a la inversin de la polaridad del estmulo y existencia de umbral.
El potencial de accin compuesto de nervio se registra con una latencia menor que el
potencial de accin del msculo. A que se debe las diferentes latencias de estos dos
fenmenos bioelctricos?
Retardo sinptico tpico de las sinapsis qumicas, comparacin con las sinapsis elctricas.
Variacin de la intensidad del estmulo: intensidades subumbral para el nervio no se
registra potencial de accin de nervio ni de msculo, solo se registra artefacto del
estmulo. Intensidades mximas y supramximas.
Estimulacin elctrica del msculo: registro en nervio y msculo.
Se registra actividad nicamente en el msculo: en las sinapsis qumica el flujo de
informacin es unidireccional (estructuralmente asimtricas: del lado presinptico
vesculas conteniendo el neurotransmisor y maquinaria de liberacin, del lado
postsinptico receptores), comparacin con las sinapsis elctricas que generalmente son
bidireccionales.
Estimulacin elctrica del nervio: registro de la actividad elctrica y mecnica del
msculo gastrocnemio. En el barrido superior del polgrafo se registra la respuesta
mecnica del msculo en tanto que en el inferior la respuesta elctrica del mismo. La
respuesta mecnica se registra gracias al empleo de un transductor de tensin cuya

salida alimenta uno de los canales del polgrafo. El transductor de tensin es un

dispositivo que transforma linealmente energa mecnica en elctrica (esta ltima forma
de energa es mucho ms fcil de cuantificar). La respuesta elctrica precede a la
mecnica (acoplamiento excitacin-contraccin), y presenta un curso temporal
considerablemente ms rpido que esta ltima. El aumento de la frecuencia de
estimulacin del nervio produce la tetanizacin del msculo (suma de fuerza generada).
Reclutando la misma cantidad de unidades motoras el sistema es capaz de regular la
fuerza generada variando la frecuencia con que las activa: cdigo de frecuencia. Tetanos
incompleto y tetanos completo.
Identificacin del neurotransmisor liberado y del receptor postsinptico activado.
Hiptesis: la terminal presinptica libera acetilcolina, la cual acta en receptores
colinrgicos de tipo nicotnicos. De acuerdo a la hiptesis se estudiarn los efectos de la
aplicacin de d-tubocurarina (600 mg/g). Este frmaco es un bloqueador especfico de
tipo competitivo de los receptores colinrgicos nicotnicos. El mismo se aplicar en el
torrente sanguneo mediante una cateterizacin de la arteria aorta a nivel de la cavidad
peritoneal. A los efectos de obtener un control de las acciones de la droga a ser aplicada,
se ligar una de las extremidades posteriores del animal con el objetivo de disminuir el
flujo sanguneo a dicha extremidad y por lo tanto la llegada de la droga. La extremidad
ligada oficiar de control, en tanto que la no ligada de tratamiento. En estas condiciones
se aplicar el mismo estmulo elctrico a ambos nervios citicos en forma simultnea. En
estas condiciones, asumiendo que la ligadura no tiene efectos significativos, es posible
comparar los efectos de la d-tubocurarina en un mismo animal. De que otra forma es
posible realizar controles?
Tras la aplicacin de d-tubocurarina se estimula el nervio y se registra la actividad tanto
del nervio como del msculo. Se observa que el potencial de accin del nervio es normal
en tanto el potencial de accin del msculo de la extremidad tratada est bloqueado. La
actividad elctrica del nervio y msculo es normal en la extremidad control (ligada). A los
efectos de verificar que la accin de la d-tubocurarina es a nivel de la placa motora, se
estimula en forma directa el msculo gastrocnemio de la extremidad tratada. Dicha
maniobra experimental permite apreciar que es posible activar el msculo en forma
directa, pero no estimulando el nervio. De esta forma se concluye que la accin de la dtubocurarina es a nivel de la sinapsis, y que esta accin sinptica es mediada por la
liberacin del neurotransmisor acetilcolina por parte de las fibras motoras presinpticas y
la activacin de receptores colinrgicos nicotnicos en la postsinapsis.
Que maniobras experimentales realizara a los efectos de obtener evidencias
complementarias acerca de la identidad del neurotransmisor y del receptor postsinptico
involucrado?
Fatiga sinptica. La estimulacin en forma repetitiva a alta frecuencia y durante algunos
minutos produce una depresin de la transmisin sinptica en forma progresiva. A este
fenmeno se lo conoce como fatiga sinptica, y es una caracterstica de las sinapsis
qumicas. Dicho fenmeno se debe a un agotamiento del neurotransmisor a nivel del
terminal presinptico. Comparar con las sinapsis elctricas.
Video elaborado por:
Dr. Michel Borde, Prof. Agdo. Departamento de Fisiologa, Facultad de Medicina.
Dra. Ana Celia Silva, Asistente Seccin Fisiologa Animal, Facultad de Ciencias.
Dr. Atilio Falconi, Prof. Adj. Departamento de Fsiologa, Facultad de Medicina.
Material de apoyo elaborado por:
Mag. Sebastin Curti, Prof. Adj. Departamento de Fisiologa, Facultad de Medicina.