CARTOGRAFA Y SECUENCIACIN:

Hay dos categoras principales de tcnicas de cartografa gentica:

ligamiento o cartografa gentica, que identifica slo el orden relativo a los
genes a lo largo del cromosoma; y cartografa fsica, un conjunto de
mtodos ms precisos que permite determinar las distancias entre genes
dentro del cromosoma. Ambos tipos de cartografa utilizan marcadores
genticos, que son caractersticas fsicas o moleculares detectables que se
diferencian entre los individuos y se transmiten por herencia.
La cartografa mediante ligamiento se desarroll a principios de la dcada
de 1900 gracias al trabajo del bilogo y genetista estadounidense Thomas
Hunt Morgan. Al observar la frecuencia con que determinadas
caractersticas se heredaban unidas en numerosas generaciones de moscas
de la fruta, lleg a la conclusin de que estos rasgos que con frecuencia se
heredan juntos deban estar asociados con genes prximos en el
cromosoma. Basndose en sus investigaciones, Morgan logr elaborar un
mapa aproximado que recoga el orden relativo de estos genes asociados en
los cromosomas, y en 1933 recibi el Premio Nobel de Fisiologa y Medicina
por su obra.
Los mapas de ligamiento humanos se han elaborado sobre todo siguiendo
las pautas de herencia de familias extensas a lo largo de muchas
generaciones. Inicialmente, estos estudios se limitaban a los rasgos fsicos
heredados, fcilmente observables en todos los miembros de la familia.
Pero actualmente hay tcnicas de laboratorio muy refinadas que permiten a
los investigadores crear mapas de ligamiento ms detallados comparando la
posicin de los genes diana en relacin con el orden de marcadores
genticos o de segmentos especficos y conocidos del ADN.
La cartografa fsica determina la distancia real entre puntos diferenciados
de los cromosomas. Las tcnicas ms precisas combinan robtica, uso de
lser e informtica para medir la distancia entre marcadores genticos. Para
realizar estos mapas se extrae ADN de los cromosomas humanos y se
rompe aleatoriamente en numerosos fragmentos. A continuacin, stos se
duplican muchas veces en el laboratorio para analizar en las copias idnticas
as obtenidas, llamadas clones, la presencia o ausencia de marcas genticas
especficas distintivas. Los clones que comparten varias marcas proceden
por lo general de segmentos solapados del cromosoma. Las regiones de
solapamiento de los clones pueden a continuacin compararse para
determinar el orden global de las marcas a lo largo del cromosoma y la
secuencia exacta que ocupan inicialmente los segmentos de ADN clonados.
Para determinar la secuencia real de nucletidos hacen falta mapas fsicos
muy detallados que recojan el orden exacto de las piezas clonadas del
cromosoma. En el Proyecto Genoma Humano se utiliza primordialmente un

mtodo de secuenciacin desarrollado por el bioqumico britnico y dos

veces premio Nobel, Frederick Sanger. Este mtodo consiste en replicar
piezas especficas de ADN y modificarlas de modo que terminen en una
forma fluorescente de uno de los cuatro nucletidos. En los modernos
secuenciadores automticos de ADN, el nucletido modificado situado al
extremo de una de estas cadenas se detecta con un haz de lser y se
determina el nmero exacto de nucletidos de la cadena. A continuacin se
combina esta informacin en un ordenador para reconstruir la secuencia de
pares de bases de la molcula original de ADN.
Duplicar el ADN con precisin y rpidamente tiene una importancia crtica,
tanto para la cartografa como para la secuenciacin. Inicialmente los
fragmentos de ADN humano se replicaban mediante clonacin en
organismos unicelulares que se dividen rpidamente, como bacterias o
levaduras. Esta tcnica exige mucho tiempo y mucho trabajo. A finales de la
dcada de 1980 se generaliz el uso de un mtodo revolucionario de
reproduccin de ADN llamado reaccin en cadena de polimerasa (RCP). Esta
tcnica es fcil de automatizar y puede copiar una sola molcula de ADN
varios millones de veces en unas pocas horas. En 1993, el bioqumico
estadounidense Kary Mullis recibi el Premio Nobel de Qumica por idear
esta tcnica.

La cartografa fsica determina la distancia real entre puntos

diferenciados de los cromosomas. Las tcnicas ms precisas combinan
robtica, uso de lser e informtica para medir la distancia entre
marcadores genticos. Para realizar estos mapas se extrae ADN de los
cromosomas humanos y se rompe aleatoriamente en numerosos
fragmentos. A continuacin, stos se duplican muchas veces en el
laboratorio para analizar en las copias idnticas as obtenidas, llamadas
clones, la presencia o ausencia de marcas genticas especficas
distintivas. Los clones que comparten varias marcas proceden por lo
general de segmentos solapados del cromosoma. Las regiones de
solapamiento de los clones pueden a continuacin compararse para
determinar el orden global de las marcas a lo largo del cromosoma y la
secuencia exacta que ocupan inicialmente los segmentos de ADN
clonados.
Para determinar la secuencia real de nucletidos hacen falta mapas

fsicos muy detallados que recojan el orden exacto de las piezas

clonadas del cromosoma. En el Proyecto Genoma Humano se ha
utilizado primordialmente un mtodo de secuenciacin, desarrollado por
el bioqumico britnico y dos veces premio Nobel Frederick Sanger, que
consiste en replicar piezas especficas de ADN y modificarlas de modo
que terminen en una forma fluorescente de uno de los cuatro nucletidos.