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MIR 3 ao
Alergeno
Allos= otro, ergon= actividad.
genes= produccin,
descendencia.
Antgenos, normalmente de
naturaleza proteica, que
sensibilizan al husped
provocando reacciones
alrgicas.
Anafilaxia
Dermatitis atpica
Veneno de insectos
Frmacos
Alergenos de
alimentos
Intrnsecos
Extrnsecos
Contaminantes
Humo del tabaco
Infecciones vricas
Sexo y predisposicin gentica
Estacin del ao en que se nace
Higiene
Peso al nacer
Fuentes
alergnicas
Aeroalergenos:
plenes,
hongos,
harina de cereales, productos de las
plantas,
epitelio
y
orina
de
animales, plumas de aves, caros
del polvo domstico, insectos.
Orales: alimentos, frmacos.
Inyectados: insectos, y frmacos.
Aeroalergenos:
Va de exposicin ms importante es la inhalacin, aunque
tambin pueden llegar por ingestin y por inyeccin:
1. Plenes: que son una de las fuentes principales de alergenos,
responsables del 10-20% de enfermedades alrgicas, la ms
importantes de las cuales es la rinitis. Los ppales plenes
alergnicos derivan ms de plantas polinizadas por el viento
(anemfilas) que de plantas polinizadas por insectos, y los
plenes de importancia clnica varan de acuerdo con su
ubicacin. En Espaa, por reas geogrficas, la 1 causa de
polinosis son las gramneas en el centro y norte de la pennsula,
el olivo en el Sur y la parietaria en las regiones costeras
mediterrneas (Barcelona, Murcia y Valencia). Los granos de
polen desaparecen de la atmsfera los das de lluvia, y son
liberados cuando predomina un tiempo seco y caluroso. El final
de la primavera y el verano son las pocas con recuentos
mximos de polen. La cantidad de polen necesaria para
desencadenar la sintomatologa es superior al principio que al
final de la estacin polnica.
Aeroalergenos:
2. Alergenos de hongos: Aspergillus, Cladosporium, penicilllium y
Alternaria spp as como los championes, hongos de los helechos
etc, constituyen fuentes importantes de alergenos. Las
condiciones que influyen en la liberacin de las esporas son
extremadamente variables pero sumamente especficas para una
determinada especie. De los hongos, el Aspergillus y Alternaria
parece que son sumamente importantes para el asma.
3. Alergenos derivados de animales: son de importancia clnica
primordial tanto domstica como familiar. Es especialmente
frecuente la alergia a perros y gatos. En el entorno laboral es
frecuente la alergia a ratas, caballos, conejos, ratones, jerbos
y cobayas. Los alergenos derivan de la caspa, del epitelio, del
pelo, de la orina y de la saliva, aunque es posible que los
alergenos procedan de la misma fuente ( ej orina o saliva
depositadas en el pelo)
Aeroalergenos:
4. Alergenos de los artrpodos: incluyen cucarachas, polillas,
mosquitos, mariposas, caros del polvo y saltamontes. Los caros
del polvo domstico suponen la fuente de alergenos clnicamente
ms importante en todo el mundo. Las especies de caros son
universales, pero las ms importantes son las localizadas en los
domicilios privados, que suelen vivir en las alfombras, las
tapiceras y colchones, proliferan mejor a 25C y a una
humedad relativa del 80%
5. Alergenos profesionales: oscilan desde compuestos qcos de
bajo Pm ht prots complejas derivadas de animales o plantas. La
exposicin recurrente puede ocasionar una enfermedad crnica
con escasa variabilidad perceptible, lo que hace difcil asociar la
enfermedad con la exposicin.
De la fuente al extracto
Determinacin de la alergenicidad
Determinacin de la alergenicidad
Pruebas de alergoabsorcin
Radioinmunoelectroforesis
cruzada
Inmunotransferencia
Pruebas de alergoabsorcin
El alergeno o el extracto alergnico se une a una matriz
insoluble como el plstico, nitrato de celulosa, celulosa
(papel) o bolas de agarosa y se incuba con el suero del
paciente con sospecha de hipersensibilidad al alergeno. Los
Ac IgE se unen al alergeno unido a la matriz insoluble y
posteriormente, son detectados mediante un Ac especfico
para IgE. Este Ac se conjuga bien con un istopo, en una
prueba de radioalergoabsorcin , o bien con una enzima (pej:
peroxidasa de rbano) en una prueba de alergoabsorcin
enzimtica y la cantidad de IgE unida se determina mediante
sistemas de deteccin adecuados.
Respuesta
RAST
Respuesta
Inhibicin del
RAST
Alergeno
Ensayo de inhibicin:
Es una variante de la alergoabsorcin: Se aaden
concentraciones variables del alergeno a alcuotas del
suero del paciente alrgico antes de la incubacin con
el alergeno unido a la matriz, es decir, hay una
incubacin previa en fase lquida. Cuanto ms potente
sea el alergeno en fase lquida, quedar menos IgE
libre para unirse al alergeno en fase slida.
Los resultados se expresan en la cantidad de alergeno
necesaria para inhibir en un 50% la unin mxima,
siempre que se comparen extractos parecidos; cuanto
menor sea la concentracin necesaria, ms potente ser
la fuente alergnica. La pendiente de la curva de
inhibicin obtenida proporciona informacin respecto a
la diversidad de alergenos que contiene un extracto.
Se emplea regularmente en la estandarizacin de
alergenos.
Radioinmunoelectroforesis cruzada
CRIE
Radioinmunoelectroforesis cruzada
CRIE
En la CRIE, los extractos alergnicos se separan mediante
electroforesis en gel de agarosa, al cabo de la cual el gel se
rota 90 y se contina la electroforesis en una agarosa que
contiene un antisuero contra el extracto alergnico completo
(inmunoelectroforesis cruzada, CIE). Las protenas migran en el
gel hasta que se encuentran con su anticuerpo IgG homlogo, el
cual, debido a las condiciones elegidas, permanece estacionario.
Una vez que ha interaccionado una cantidad suficiente de
anticuerpo con su antgeno homlogo, se forman precipitados que
se corresponden con en n de antgenos que contena la mezcla
original. Para determinar cul de las protenas precipitadas es
alergnica, la placa de CRIE sin teir se lava y se incuba con
el suero problema.
La IgE especfica del alergeno se une a los epitopos que
se encuentran en el precipitado y se detecta empleando
una anti-IgE marcada con isotopos.
Gel de separacin
Extacto alergnico
Transferencia de las
protenas separadas
a una membrana.
Corte en tiras.
Separacin de protenas
mediante SDS-PAGE
Inmunotranferencia
La inmunotransferencia se realiza despus de una
electroforesis en gel de poliacrilamida con
duodecilsulfato sdico. Los componentes proteicos
individuales de un extracto alergnico se someten a
electroforesis tras reduccin de los puentes disulfuro
intra e inter-catenarios. Las protenas se separan en
orden decreciente segn su Pm. Las prots se transfieren
posteriormente a una mbr de nitrato de celulosa y se
incuban con el suero problema. La IgE unida a los
alergenos individuales se visualiza empleando una
anti-IgE marcada.
La inmunotransferencia proporciona informacin sobre
el n y el Pm de los alergenos de un extracto.
Aislamiento
del alergeno
alergeno
PEG
Fusin
Cs esplnicas
(resistentes
a HAT)
Cultivo en
HAT
Mieloma no
secretor
(sensible a HAT)
Tcnica de
los Ac
monoclonales
Aislamiento
de alergenos
Mapeo de
eptopos
Cuantificacin
de alergenos
Cromatografa de
penetrabilidad.
Cromatografa de
intercambio inico.
Cromatografa de afinidad
e hidrofobicidad.
Estandarizacin de alergenos
Alergenos principales
Ventajas
1) Cantidades limitadas.
2) Bajo rendimiento del proceso de purificacin.
3) Obtencin de la forma natural del alergeno,
nunca de formas modificadas.
4) Ausencia de estandarizacin.
5) Concentraciones muy diversas de alergenos.
6) Presencia significativa de productos
indeseables.
7) Desnaturalizacin, dao y degradacin proteica.
Inconvenientes
Alergenos recombinantes
Ventajas
1) Disponibilidad de productos muy bien
definidos.
2) Produccin ilimitada de la protena.
3) Estabilidad del producto.
4) Posibilidad de expresar alergenos modificados.
Inconvenientes
1) Plegamiento.
Alergenos Marcadores
IgE
sIgE
sIgE
La IgE es una molcula glicoproteica compuesta en su mayor parte
por protena y en una pequea proporcin por carbohidrato. Consta
de 4 cadenas de aminocidos, dos cadenas ligeras (L) y dos cadenas
pesadas (H) idnticas entre s.
La cadena L tiene un dominio terminal-N variable (VL) y un
dominio constante (CL ) mientras que la cadena H tiene un dominio
terminal-N variable (VH) y cuatro dominios constantes (CH). La
clase de Ac viene determinada por la secuencia CH, que se designa
como C para la IgE. Las cadenas ligeras, de acuerdo con su
constitucin particular, pueden tener 2 variantes que se han llamado
kappa (K) o Lambda (L) pero hay que aclarar que en una sola
molcula de IgE siempre sern iguales las 2 cadenas ligeras, es
decir, tendr las 2 del tipo K o las 2 del tipo L.
sIgE
Tanto las cadenas ligeras como las pesadas estn formadas por
segmentos de aproximadamente 110 aminocidos a los que se
llaman dominios los mismos que estn unidos entre s de modo
covalente por puentes o uniones disulfuro. En la IgE existen 2
dominios en cada cadena ligera y 5 dominios en cada cadena
pesada. Al igual que como ocurre en los otros tipos de
inmunoglobulinas, hay dominios llamados constantes (porque los
aminocidos que los componen mantienen siempre la misma
secuencia) y dominios variables (porque la secuencia de sus
aminocidos varia de una molcula a otra) que son los que por su
variabilidad de secuencia determinan la especificidad para el
antgeno.
sIgE
Variables a evaluar en la
determinacin de IgE Especfica
Complejidad alergnica
Extracto alergnico
Obtencin extracto
Variables
inmunoensayos
Caractersticas ptimas
de un ensayo de IgE
especfica
EL RETO
Ayudar a establecer cuando un nivel de IgE es lo suficientemente
bajo para realizar de un modo seguro el test de provocacin
The relationship of allergen-specific IgE levels and oral food challenge outcome
Perry T, Matsui E, Conover- Walker M, Wood R: JACI;144-149;2004.04.09
GRACIAS