Roteiro de Aulas Prticas Disciplina de Biofsica

AULA PRTICA: SOLUES

1. INTRODUO
O estudo das solues importante nos processos biolgicos, porque
cerca de 60% da massa corporal liquida, contendo vrios solutos orgnicos e
sais minerais. Por outro lado, a maioria das drogas administradas no homem e
em outros animais so solues.
Uma propriedade caracterstica das solues a concentrao.
Relacionado a ela, uma soluo pode ser classificada como: saturada,
concentrada ou diluda. As solues dos organismos so consideradas aquosas e
diludas.
As substncias puras (PA) no higroscpicas, solveis e estveis
temperatura ambiente so denominadas de PADRO PRIMRIO e sua
concentrao pode ser determinada a partir de sua massa medida em balana
analtica e do volume da soluo. A concentrao molar de um padro primrio
pode ser calculada pela equao:
Cm = m/(MM x V)
onde, m a massa dada pela balana; MM a massa molecular e V o volume
da soluo expressa em litro.
A concentrao exata das substncias que no so padro primrio no
pode ser determinada a partir de sua massa, dada pela balana, porque elas
contm impurezas. Ento, neste caso usa-se uma soluo de padro primrio
para determinar sua concentrao. Isto feito pela titulao volumtrica que
permite determinar a concentrao de uma soluo reagindo-a com outra de
concentrao conhecida, usando-se a equao:
V1C1 = V2C2
onde, V1 o volume da soluo de concentrao conhecida (C 1) e V2 o volume
da soluo de concentrao desconhecida (C 2). A concentrao expressa
normalmente em molaridade e o volume em mL.
2. OBJETIVO
Preparar uma soluo de concentrao percentual (% m/v) de NaHCO 3 e
determinar sua concentrao com exatido, por titulao com uma soluo
padro primrio de HCl, como expresso pela reao:
NaHCO3 + HCl NaCl + CO2 + H2O
3. MATERIAL

NaHCO3 (MM = 84 daltons)

Proveta de 100 mL e Erlenmeyers (3)
Funil e Garrafa lavadeira
Bureta e Pipetas volumtricas
HCl 0,050M
Indicador verde de bromocresol (1% m/v):Faixa de viragem: pH =4 (amarelo)
e pH =5,4(azul)

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4. MTODO
A) Preparo da soluo de NaHCO3
1- Adaptar, se necessrio, o funil na boca da proveta de 100 mL.
2- Transferir todo o bicarbonato de sdio para dentro da proveta.
3- Lavar o recipiente, que continha NaHCO 3, trs vezes com gua destilada e
transferir para a proveta, para garantir a transferncia de todo o sal.
4- Adicionar gua at cerca de 80 mL. Completar o volume para 100 mL
cuidadosamente, com o auxlio da garrafa lavadeira.
5- Tampar a proveta e agitar para homogeneizar a soluo.
B) Preparo da soluo na Bureta
1- Preparar a bureta, fazendo a ambientao com
final da ambientao, despejar o lquido na pia.

5mL de HCl 0,05 M e ao

2- Encher a bureta com HCl 0,05 M at que o nvel da soluo fique bem acima
da graduao do zero.
3-Abrir a torneira da bureta, deixando que o lquido ocupe toda a coluna,
retirando o ar da coluna e da sua extremidade final.
4- Zerar a bureta, abrindo a torneira, at que o nvel da soluo atinja a
graduao zero. Se necessrio complete com mais HCl 0,05 M.
C)Titulao cido-base
1- Transferir com a pipeta, 5 mL da soluo de NaHCO 3, para cada um dos trs
erlenmeyers, obtendo trs amostras para dosagem.
2- Adicionar uma gota do indicador verde de bromocresol a cada um das
solues amostra.
3- Titular cada amostra de NaHCO3, gotejando HCl ao erlenmeyer e agitando,
at que a soluo mude para a cor AMARELA (ponto final da titulao). Anotar
o volume de HCl gasto. Repetir este procedimento com as outras duas
solues amostra.
4- Anotar os volumes de HCl gastos em cada titulao e obter a mdia:

1 ________ mL

; 2 ________ mL

; 3 _________mL

MDIA: _______mL

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5. QUESTES

1) Calcular

a concentrao molar de NaHCO 3, usando o volume mdio das

titulaes.

2) Qual a massa total de NaHCO3 ? Qual a massa titulada?

3) A

concentrao osmolar da soluo de NaHCO 3 _______ OSM e sua

concentrao percentual ________ % (m/v).

4) O que e como atua um indicador?

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AULA PRTICA: pH
1. INTRODUO
O pH mede apenas a quantidade dos ons H + j dissociados (acidez
aparente ou momentnea). Ele no mede os ons H + dissociveis, que ainda
esto presos numa molcula, ou seja, ainda no dissociados. Fazendo-se uma
titulao com uma base apropriada, pode-se medir a acidez total que reflete a
quantidade total de ons H+ (dissociados e dissociveis).
2. CONHECIMENTOS PRVIOS

Concentrao de on H+ e OHConstante de equilbrio

Constante de dissociao - dissociao da gua
Indicadores - ponto de viragem
Conceito de pH
cidos, bases (forte e fraco)
EXPERIMENTO 1: ACIDEZ APARENTE

1. OBJETIVO
Mostrar como se comporta a acidez aparente, tambm conhecida como
acidez real ou atual. Comprovar que ela reflete a concentrao dos ons H +
dissociados.
2. MATERIAL
123456-

cido clordrico (HCl) 0,1M

cido actico (CH3COOH) 0,1M (pK= 4,7)
Indicador misto n 1 (Tropeolina 0,60mg% + verde de Bromocresol 25mg %)
Pipetas
Tubos de ensaio
Padro cor para o pH utilizando o Indicador misto n 1.

3. MTODOS
1- Em uma srie de 6 tubos de ensaio, colocar 9 mL de HCl 0,1M no primeiro
tubo e 9 ml de H2O nos 5 tubos restantes.

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2- Acrescentar 1 mL de HCl 0,1M ao segundo tubo, misturar bem e transferir 1
mL desta mistura para o terceiro tubo. Assim, o segundo tubo tambm ficar
com 9 mL.
3- Diluio seriada: Repetir o procedimento do item anterior, transferindo 1mL
do segundo tubo. Seguir retirando do tubo anterior e transferindo para o
sucessor at o sexto tubo. Do ltimo tubo retire 1mL e despreze. Assim, cada
tubo ficar com 9 mL de soluo.
4- Acrescente 1 gota do Indicador misto n 1 a cada tubo.
5- Compare as cores obtidas nos diversos tubos de ensaio com as cores padres,
para este indicador. A tabela aproximada de cores do padro para cada pH,
para o Indicador misto n 1 est indicada no quadro a seguir:
pH
Cor

Vermelha

Alaranjado

Laranja

Amarelo

Verde-amarelo

Verde

6- Calcule a concentrao do cido em cada tubo de ensaio e complete a Tabela

1, expressando em potncia de 10.
7- Lave os tubos de ensaio com gua apenas e repita os procedimentos com o
cido actico 0,1M e anote a concentrao na Tabela 1.
8- A partir da comparao das cores descritas no tem (5) e visualizada pelo
padro, indique o pH de cada tubo e anote na tabela 1.
9- Agora, calcule o pH em cada soluo e anote tambm na Tabela 1.
Tabela 1: Comparao do pH determinado experimentalmente utilizando
indicadores de pH com valores tericos calculados.
cido

Tubo 1
Concentrao

HCl

pH observado
pH calculado
Concentrao

CH3COOH
pH observado
pH calculado

4. QUESTES

Tubo 2

Tubo 3

Tubo 4

Tubo 5

Tubo 6

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1- Qual a correlao matemtica entre concentrao e pH para cada um desses
cidos? Explique.

2- A determinao de pH utilizando indicadores precisa? Explique.

3- Compare os valores de pH apresentados nos tubos 5 e 6 e explique os valores

encontrados.
EXPERIMENTO 2: ACIDEZ TOTAL
1. OBJETIVO
Mostrar que a acidez total reflete os ons H + livres (dissociados) e
combinados (dissociveis), atravs de uma titulao.
2. MATERIAL

cido clordrico (HCl) 0,05M

cido actico (CH3COOH) 0,05M
Hidrxido de sdio (NaOH) 0,05M
Erlenmeyers
Pipetas
Bureta
Fenolftalena a 1% p/v

3. MTODO
1- Colocar em cada um dos 3 erlenmeyers, 5mL de HCl 0,05M
2- Adicionar 1 gota de fenolftalena a cada frasco
3- Titular ao ponto final, rosa suave estvel, com NaOH 0,05M
4- Repita os passos (1), (2) e (3) utilizando o cido actico
4. RESULTADOS
1- Faa a mdia do consumo de NaOH nas titulaes para cada cido.
2- Sendo uma titulao de neutralizao, por que os resultados no foram os
mesmos (comparando os dois cidos), uma vez que todas as solues
apresentam a mesma estequiometria.?
3- Associar os resultados obtidos com o conceito de acidez total.
A acidez total de cada cido a mesma? Explique.

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AULA PRTICA: SOLUES TAMPO

1. INTRODUO
Nos
diversos
compartimentos
biolgicos,
a
concentrao
hidrogeninica exerce profunda influncia no desempenho das
biomolculas. Da a importncia de se conhecer, no s os processos
utilizados para medir esta concentrao, mas tambm mecanismos
capazes de atenuar variaes de pH : as solues tampo. O desempenho
das solues tampo depende de dois fatores termodinmicos: a relao
A/D (fator intensivo, ou intrnseco) e da quantidade de tampo (fator
extensivo ou extrnseco).
2. CONHECIMENTOS PRVIOS

Conceito de pH
Conceito de soluo tampo
Constante de dissociao
Equao de Handerson-Hasselbach
Indicadores de pH

3. MATERIAL
1.
2.
3.
4.
5.
6.

Solues Tampo Fosfato de Sdio 0,05M de pH 5,8, 6,8 e 7,8

cido Clordrico (HCl) 0,1M
Hidrxido de Sdio (NaOH) 0,1M
Indicador misto no 2
Sries de padres de pH (2,0 5,8 6,8 7,8 10,0)
Tubos de ensaio
EXPERIMENTO: PARMETROS DE TAMPONAMENTO

PARTE 1: RELAO A/D e pK

1. OBJETIVO
Mostrar que o poder de tamponamento depende da relao entre as
concentraes de aceptor e doador de prtons (relao A/D) e do pK do
sistema tampo.
2. MTODOS

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1. Dispor os tubos de ensaio de maneira paralela a formar 2 sries
com 3 tubos cada uma: srie A (para adio de cido) e srie B
( para adio de base).
2. Colocar 5mL de cada tampo em cada uma das 2 sries. Assim
teremos dois tubos contendo a mesma soluo tampo. Uma
correspondente srie A e outra para a srie B
3. Acrescentar 1 gota de indicador misto n o2 a cada tubo e observar
a cor desenvolvida em cada tubo, comparando com os padres
de pH.
4. Acrescentar 3 gotas de HCl 0,1M a cada um dos 3 tubos que
formam a srie A e 3 gotas de NaOH 0,1M a cada um dos 3 tubos
que compem a srie B. Se no houver nenhuma soluo que
tenha sado da faixa de tamponamento, adicionar mais
gotas em todos os tubos da srie, at que se observe esta
alterao.
5. Comparar a nova colorao desenvolvida com os padres de pH.
3. QUESTES
1. Qual a composio qumica desse tampo?
2. Explique como a partir de um mesma composio qumica
possvel ter pH diferentes, como os utilizados (5,8; 6,8 e 7,8).
3. As alteraes observadas no pH das diferentes solues podem
ser explicadas a partir da relao entre os componentes da
soluo tampo. Explique para cada srie as alteraes
observadas.
4. Qual soluo tampo resistente adio de maior quantidade
de cido? E de hidrxido? Por que?
5. Como se comporta o tampo de pH 6,8?
6. Qual a importncia do pK de um sistema tampo?

PARTE 2: QUANTIDADE DE TAMPO

1. OBJETIVO
Mostrar que a capacidade de tamponamento de uma soluo
tampo depende da quantidade de tampo existente no meio.
2. MTODO

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1. Preparar 5 tubos de ensaio, utilizando a soluo tampo Fosfato
de Sdio 0,05M de pH 6,8 e o indicador misto no.2, como indicado
a seguir:

Tampo

2 mL

Indicador
no.2

misto 1 gota

4 mL

6 mL

8 mL

10 mL

2 gotas

3 gotas

4 gotas

5 gotas

2. Observar a colorao desenvolvida em cada tubo e comparar

com o padro de pH.

3. Acrescentar 8 gotas de HCl 0,1M a cada tubo e observar os

resultados.

3. QUESTES
1. Explique os resultados encontrados. Qual a quantidade mnima de
tampo necessria para o tamponamento?

PARTE 3: DILUIO DO TAMPO

1. OBJETIVO
Mostrar o efeito da quantidade de uma soluo tampo sobre o pH e
a capacidade de tamponamento da mesma.
2. MTODO
1. Preparar 5 tubos de ensaio, utilizando o tampo Fosfato de Sdio
0,05M, gua e indicador misto no.2, como mostrado no quadro
abaixo:
Tubo

Tampo (mL)

2 mL

2 mL

2 mL

2 mL

2 mL

H20 (mL)

---

2 mL

4 mL

6 mL

8 mL

Indicador misto no.2

1 gota

2 gota

3 gotas

4 gotas

5 gotas

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2.

Observar a colorao desenvolvida em cada tubo. Comparar

com o padro de pH

3.

Acrescentar 1 gota de HCl 0,1M a cada tubo e observar os

resultados.
4- Desprezar o lquido de cada tubo, deixando dentro de cada um
somente 2 mL de soluo e acrescentar, ento, mais 2 gotas de HCL
0,1M. Observe e anote os resultados.

AULA PRTICA: TONICIDADE

INTRODUO
O movimento de gua atravs da membrana plasmtica depende no apenas da
concentrao do soluto e do solvente, mas tambm da natureza do
soluto (fatores moleculares) e do seu mecanismo de transporte (fatores
inerentes s membranas).
OBJETIVO
Estudar a influncia da composio do meio externo sobre o movimento de gua
atravs da membrana plasmtica, utilizando hemcias de mamfero como
modelo. Avaliar o efeito da permeabilidade a solutos diferentes: o cloreto de
sdio (membrana plasmtica impermevel) e a uria (membrana plasmtica
permevel).
CONHECIMENTOS PRVIOS
a) Osmolaridade
b) Coeficiente de reflexo
c) Tonicidade celular
d) Preparo de solues
e) Osmolaridade da hemcea: 0,300 Osmois/L
MATERIAL
1.

Hemcias de mamfero

2.

gua destilada

1.

Soluo de NaCl 0,3 mol/L

3.

Soluo de uria 0,6 mol/L

4.

Tubos de ensaio

5.

Pipetas

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MTODO
1) Prepare as solues, complete o Quadro 1 e determine a concentrao em
osmolar para cada soluo.
2)

Compare os valores obtidos para a concentrao Osmolar de cada soluo

com a osmolaridade intracelular, indicando se cada soluo hiperosmstica,
iso-osmtica ou hipo-osmtica em relao s hemcias, e indique este
resultado na coluna de OSMOTICIDADE

QUADRO 1
TUBO

SOLUO

Volume

Concentrao

(mL)

Osmolar

OSMOTICIDADE
RELATIVA
HEMCEA

1
2
3
4
5
6

gua destilada,
NaCl 0,05 mol/L
NaCl 0,15 mol/L
NaCl 0,3 mol/L
Uria 0,3 mol/L
NaCl 0,3 mol/L

6
6
6
6
6
3

Uria 0,6mol/L

3) Acrescente uma gota de sangue a cada tubo. Observe a aparncia da soluo,

se est Translcida, indicando a hemlise ou se Turva, indicando a no
hemlise.
RESULTADOS
1- Preencha a tabela a seguir avaliando se houve ou no hemlise.
2- Avalie a tonicidade das diferentes solues, utilizando os resultados
experimentais e seus conhecimentos tericos. Preencha a tabela e discuta os
resultados encontrados.
Soluo

HEMLISE:
sim ou no?

TONICIDADE RELATIVA HEMACEA

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