Les risques biologiques

lis aux techniques de gnie

gntique en laboratoire

LInstitut national de recherche et de scurit (INRS)

Dans le domaine de la prvention des risques
professionnels, lINRS est un organisme scientifique
et technique qui travaille, au plan institutionnel,
avec la CNAMTS, les Carsat, Cram, CGSS
et plus ponctuellement pour les services de ltat
ainsi que pour tout autre organisme soccupant
de prvention des risques professionnels.
Il dveloppe un ensemble de savoir-faire pluridisciplinaires
quil met la disposition de tous ceux qui, en entreprise,
sont chargs de la prvention : chef dentreprise,
mdecin du travail, CHSCT, salaris.
Face la complexit des problmes, lInstitut
dispose de comptences scientifiques,
techniques et mdicales couvrant
une trs grande varit de disciplines, toutes
au service de la matrise des risques professionnels.
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INRS, 2012.
Graphisme et illustrations : Sophie Boulet.

Les risques biologiques

lis aux techniques de gnie
gntique en laboratoire

Christine DAVID
et Vronique CARON (INRS)

ED 6131

Juillet 2012

Nous adressons nos remerciements Bernard Cornillon (Inserm) pour sa collaboration,

ainsi quaux diffrents spcialistes consults en cours de rdaction :
- Marie-Laurence MOUSEL (Institut Pasteur de Paris),
- Radia ZERGAOUI (Vectalys),
- Jean-Pierre DE CAVEL (Institut Pasteur de Lille),
et aux mdecins du travail ayant particip la rflexion.

Sommaire

Sommaire

Introduction..................................................................................................... 4

1. Rappels...................................................................................................... 6
1.1 Les cellules............................................................................................ 6
1.2 Les gnes et protines.......................................................................... 7
1.3 Les virus................................................................................................. 8
1.4 Cas particulier des Rtrovirus.............................................................. 11

2. lments ncessaires la production dOGM..................... 12

2.1 Les plasmides....................................................................................... 13
2.2 Les phages............................................................................................ 14
2.3 Les Baculovirus. ................................................................................... 15
2.4 Les vecteurs viraux dfectifs............................................................... 15
2.5 Les cellules htes................................................................................. 17

3. valuation des risques lis la production dOGM.......... 18

3.1 Lorganisme donneur.......................................................................... 19
3.2 La squence insre............................................................................. 19
3.3 Les vecteurs......................................................................................... 20
3.4 Lorganisme receveur......................................................................... 24
3.5 LOGM.................................................................................................. 24

Conclusion...................................................................................................... 26
Annexes.......................................................................................................... 27

> Introduction
D

epuis la dcouverte de la structure en double hlice de lADN en

1953 par James Watson et Francis Crick, lhomme a saisi lintrt
quil pouvait tirer de modifications des informations portes par

cette molcule de vie. Il devenait possible denlever un gne dune cellule

dune espce et de linsrer dans une cellule dune autre espce. Les premiers
organismes gntiquement modifis (OGM) sont ainsi apparus dans les annes
soixante-dix, notamment en 1978, avec la cration dune souche dEscherichia

coli modifie par insertion dun gne humain codant pour linsuline. Les
annes suivantes ont vu lessor de nouvelles techniques accompagnant le
dveloppement de nouvelles applications.
Au-del de la recherche fondamentale, les OGM peuvent tre employs dans
le secteur mdical pour caractriser, diagnostiquer les maladies, produire des
molcules usage thrapeutique (insuline, antithrombine) ou dvelopper
des thrapies gniques. Les OGM sont galement utiliss dans le secteur agricole
pour aider les plantes lutter contre les insectes ravageurs ou pour augmenter
leur qualit nutritionnelle. Dans le cadre du dveloppement durable favorisant
les nergies renouvelables, des recherches portent sur la cration dOGM
pouvant produire des biocarburants.
Selon le Haut Conseil des biotechnologies (HCB), on dsigne par OGM
tout organisme dont le matriel gntique a t modifi autrement que
par multiplication ou recombinaison naturelle. Quel que soit lOGM, sa
cration ncessite les mmes lments : un gne dintrt (appel insert)
issu dorganismes ou de cultures cellulaires, un vhicule (appel vecteur)
introduisant ce gne vers sa nouvelle cellule cible. Les cellules donneuses et
receveuses peuvent tre dorigine microbienne, vgtale, animale ou humaine.
Quant au vecteur, il peut provenir de bactries ou de virus pouvant, lorigine,
tre pathognes pour lhomme.

La manipulation de cultures cellulaires de toutes origines, lusage de vecteurs

viraux comme outil, lapparition de nouveaux vecteurs, la complexification des
techniques, rendent lvaluation et la prvention des risques professionnels
particulirement dlicate dans les laboratoires construisant et manipulant des
OGM.
Toute construction ou manipulation dOGM en milieu confin ncessite une.
Dclaration dutilisation ou demande dagrment auprs du Haut Conseil
des biotechnologies. Pour cela, le demandeur doit faire une premire analyse
des risques de lOGM, quil retranscrit dans sa dclaration dpose auprs du
ministre en charge de la recherche. Cette demande est examine par le comit
scientifique du HCB, qui value les risques associs aux OGM utiliss et propose
un avis de classement et de confinement. Cet avis est transmis au ministre en
charge de lenseignement suprieur et de la recherche, qui dlivre alors les
agrments ncessaires.
Ce guide a pour objectif daider les personnes en charge de la surveillance
mdicale et de la prvention, mieux comprendre et valuer les risques
biologiques lis la construction et la manipulation des OGM en laboratoire.
La premire partie rappelle les mcanismes molculaires de base. La seconde
prsente les diffrents lments ncessaires la production dun OGM : insert,
vecteur, organisme donneur et receveur (les manipulations sur animaux
et vgtaux ne seront pas abordes ici). La troisime partie, qui peut se lire
indpendamment des prcdentes, expose les dangers potentiels de chacun de
ces lments. Des arbres dcisionnels reprennent les principales questions que
peuvent se poser les mdecins ou les prventeurs, afin dvaluer les dangers de
chaque lment participant la construction de lorganisme gntiquement
modifi.

>1. Rappels

1.1. Les cellules

Les organismes vivants comme les animaux, les insectes, les plantes, les levures
sont constitus de cellules eucaryotes. Ces
cellules sont enveloppes dune membrane
plasmique enfermant la machinerie servant
leur survie (ribosomes, mitochondries).
Chaque cellule contient un noyau dlimit
par une membrane et contenant le patrimoine gntique sous forme de molcules
dADN1.

Figure 1 - Schma dune cellule eucaryote.

Membrane plasmique

Cytoplasme
Noyau

Ribosome

Mitochondrie

Gnome (ADN)

Par contre, les bactries sont des cellules

procaryotes dpourvues de noyau (ADN
libre dans la cellule) et de certains lments
de la machinerie cellulaire (mitochondries).

Figure 2 - Schma dune cellule procaryote.

Membrane plasmique

Cytoplasme

Paroi

Ribosome

Gnome (ADN)

(1) ADN : acide dsoxyribonuclique.

1.2. Les gnes et protines

Une molcule dADN double-brin (voir figure
3.1) comporte une succession de gnes qui
codent chacun pour un peptide (une squence dacides amins). Le passage du
gne au peptide se fait en plusieurs tapes :
la transcription dun brin dADN en un
brin image dARN2 messager,
la traduction du brin dARN messager en
un peptide.

Une ARN-polymrase se fixe sur le brin

dADN (au niveau du promoteur dun gne),
synthtise un brin dARN messager (ARNm)
et se dcroche au niveau de la squence de
terminaison (voir figure 3.2).
Dans les cellules eucaryotes, certaines
squences non codantes des ARNm (les
introns) sont ensuite limines pour aboutir
un ARNm mature. Cet ARNm passe dans
le cytoplasme puis est traduit en peptide par
lintermdiaire dun ribosome (voir figure 3.3).

La squence codante du gne est entoure

de squences jouant un rle lors de la transcription :
un promoteur permettant linitiation de la
transcription de lADN en ARN,
une ou des squences de rgulation de
transcription : silencer, enhancer (tous
les gnes ne sont pas exprims dans toutes
les cellules, ni avec la mme intensit),
un codon dinitiation qui marque le dbut de
la squence dADN qui va tre transcrite.
une squence de terminaison qui marque la fin de la transcription.

Le peptide ainsi produit (voir figure 3.4)

peut subir des transformations post-traductionnelles, notamment par ajout dautres
peptides, de groupes fonctionnels de type
glycosyl, actyl, mthyl, phosphate, ou par
cration de ponts ou de clivages entranant
des changements de conformation dans
lespace (voir figure 4, page suivante).

Figure 3 - Synthse des protines

3.1 - ADN double brin
5

3.2 - Transcription dun brin dADN en ARNm

par lARN polymrase
Dans le noyau
5

5
ARN Polymrase

3.3 - Traduction de lARN messager en un peptide

3.4 - Protine

Dans le cytoplasme
5

3
Ribosome

(2) ARN : acide ribonuclique.

Figure 4 - Production des protines dans les cellules procaryotes et eucaryotes.

Cytoplasme

Cellule procaryote

Transcription

ADN

gne A

gne B

ARNm

Traduction

protine A protine B

Cellule eucaryote
Noyau
Cytoplasme

ADN

gne A
exon

intron

exon

intron

exon

Transcription

Epissage (introns ts)

Groupes fonctionnels

Passage dans cytoplasme

ARNm.
nuclaire
htrogne

ARNm
mature

Traduction

Modification post-traductionnelle

1.3. Les virus

Les virus sont des parasites obligatoires vivant dans un hte (cellule animale ou vgtale, bactrie), dont ils dtournent leur profit
une partie de la machinerie cellulaire. Leur
gnome (ADN ou ARN) contient le minimum
dinformation pour assurer linfection et les
premires tapes de leur rplication dans
lhte. Cet acide nuclique est entour dune
capside et souvent dune enveloppe, toutes
deux constitues de protines. Ces protines
servent notamment la reconnaissance spcifique de la cellule hte lors de linfection.
Labsence de lune ou de plusieurs de ces
protines peut altrer, voire supprimer, linfectiosit du virus.

protine A

Une fois la cellule hte reconnue par le virus,

le gnome viral y pntre (voir figure 5) et
utilise la machinerie de la cellule pour se
rpliquer et synthtiser les protines de sa
capside et celles de lenveloppe sil en possde une. De nouveaux virus se forment dans
la cellule et en sortent, provoquant ou non
la lyse cellulaire. Certains virus sentourent
dun fragment de membrane cellulaire ou de
membrane nuclaire qui devient alors une
partie de lenveloppe virale.
Les virus ARN prsentent une tape spcifique aprs linfection, la rtrotranscription,
pendant laquelle le gnome ARN est transform en son image ADN.

Figure 5 - Exemple de rplication de virus ADN nu (a) et envelopp (b) dans une cellule eucaryote.
a) Virus nu

Pntration du virus

ADN viral
Transcription
Rplication

ARNm viral
ADN .
viral

Traduction

Protines .
virales
Assemblage

b) Virus envelopp
Noyau
Sortie du virus
Pntration du virus

ADN viral
Rplication

Transcription

ARNm viral
ADN .
viral

Traduction

Protines .
virales
Assemblage

Sortie du virus

Figure 6 - Rplication dun Rtrovirus.

3 ARN du Rtrovirus
R

U3

U5 gag pol env

Transcription inverse de lARN en ADN

LTR

LTR

3 ADN double brin

du Rtrovirus

5
U3

autres gnes

U5

U3

U5

Pntration de lADN rtroviral dans lADN de la cellule hte

ADN double brin

de la cellule hte

Intgration de lADN rtroviral dans lADN de la cellule hte

Provirus

LTR

LTR

Provirus intgr .
dans lADN .
de la cellule hte

Transcription

ARN du Rtrovirus reproduit

dans la cellule hte

LTR (long terminal repeat) contenant les squences U3, R et U5 : impliques dans lintgration .
de lADN viral dans le gnome de la cellule hte et servant de promoteur de transcription.
 3 en 5 : promoteur de transcription du provirus et activateur agissant sur les squences ADN .
U
du provirus. U3 en 3 sert parfois de promoteur de transcription du gnome cellulaire situ en aval.
R : squence rpte
U5 en 3 : rle dans la terminaison de la transcription de lARN viral
L e gne gag code pour des protines de la capside, le gne pol pour la transcriptase inverse .
et lintgrase, le gne env pour une protine de lenveloppe virale.

10

1.4. C as particulier des Rtrovirus

Les Rtrovirus, dont font partie par exemple
les Lentivirus, ont un mcanisme de rplication particulier. Leur gnome se trouve sous
forme dARN (voir figure 6). Il faut lintervention dune enzyme particulire, la transcriptase inverse, pour produire un ADN double
brin partir de lARN simple brin viral.
LADN viral est ensuite intgr par une autre
enzyme (lintgrase) nimporte quel endroit
du gnome de la cellule. Le provirus (lADN
viral intgr) est alors assimil au gnome
cellulaire et se transmet aux cellules filles.
Les provirus peuvent tre parfois activs.
Dans ce cas, le provirus est transcrit en ARN
qui pourra tre traduit en protine ou encapsid pour produire un nouveau virus.

Ces notions auront leur importance lors de

lutilisation de vecteurs construits partir de
ces virus. Les vecteurs sont, par exemple,
dlts des gnes gag (codant pour des
protines de capside), pol (codant pour la
transcriptase inverse et lintgrase) et env
(codant pour une protine de lenveloppe
virale). Cette dltion les empche de sortir
de la cellule infecte. Dautres vecteurs sont
dlts en U3 (vecteur DU3 ou SIN : self inactivating vector), ce qui inhibe la transcription
du provirus.

11

>2. lments

ncessaires
la production
dOGM

Les constructions gntiques, effectues en

laboratoire, consistent globalement couper
des gnes dintrt prsents dans les cellules dun organisme, les assembler, les modifier et les intgrer dans dautres cellules.
Ces constructions gntiques peuvent avoir
plusieurs objectifs :
conserver des fragments dADN ou ADNc3
pour constituer des banques gnomiques,
produire une protine (insuline),
produire un organisme transgnique (animal ou vgtal),
tudier la rgulation dun gne
Les techniques utilises pour intgrer une
squence gntique dans une cellule ncessitent :
un fragment de gnome dintrt (insert) :
ADN ou ADNc.

une cellule hte recevant le fragment
dintrt.
un vecteur servant introduire le fragment
dintrt dans la cellule hte.
Il existe diffrents types de vecteurs, dorigine virale ou non, dont le choix se fait en
fonction de :
la taille et le type de linsert,
lhte dans lequel doit sexprimer le transgne,
la dure et le contrle de lexpression du
transgne,
linnocuit du vecteur.
Parmi les vecteurs les plus courants (plasmides, phages, Baculovirus), les vecteurs
viraux tendent se dvelopper. En effet, ils
savrent plus efficaces que les autres vecteurs (linfection virale possde un meilleur
rendement que la transfection4 par un plasmide) et surtout permettent, dans certains
cas, lintgration de linsert dans le gnome
de la cellule hte et donc son expression durable et transmissible aux cellules filles.

12 12

(3) ADNc : ADN complmentaire synthtis partir de lARNm.

(4) Transfection : introduction dun ADN tranger dans une cellule, ne faisant pas
intervenir de virus.

2.1. Les plasmides

Lun des premiers plasmides construits en

laboratoire est le pBR322 issu de la bactrie
Escherichia coli. Ce plasmide porte les gnes
de rsistance lampicilline et la ttracycline, ainsi que de nombreux sites de restriction, reconnus par des enzymes qui coupent
le plasmide et permettent ainsi lintroduction
de gnes dintrt (voir figure 7).

Les plasmides ne se trouvent naturellement

que dans les bactries. Il sagit de squences
dADN double brin, circulaires, qui se rpliquent indpendamment du gnome de la
bactrie hte. Ils se multiplient dans la cellule bactrienne et passent naturellement
dans les cellules filles ou dans des cellules
bactriennes despces diffrentes, ventuellement pathognes.

Les plasmides ne peuvent pas naturellement

pntrer dans les cellules eucaryotes. Par
contre, ils peuvent sy multiplier si on les
introduit artificiellement et quon leur ajoute
une origine de rplication eucaryote. Certains
plasmides, dits navette, ont deux origines
de rplication, procaryote et eucaryote, et
peuvent donc se rpliquer dans les deux
types de cellules.

En laboratoire, les plasmides utiliss sont

conus pour ne pas tre facilement changs
entre bactries par conjugaison5. De plus, on
introduit dans ces bactries, par exemple un
gne de rsistance un antibiotique (ampicilline, ttracycline). Les bactries sont
alors cultives sur un milieu contenant lantibiotique : seules les bactries contenant le
plasmide avec le gne de rsistance pourront
pousser sur ce milieu.
Les plasmides sont facilement isols et purifis. Ils peuvent tre introduits artificiellement dans les cellules htes par :
lectroporation : une impulsion lectrique
courte induit la formation de pores dans la
membrane plasmique de la cellule, permettant lentre de la squence dADN ;
choc osmotique ou thermique qui permet
douvrir les pores cellulaires naturels ;
lipofection : fusion de la membrane cellulaire avec des liposomes contenant une
squence dADN ;
ajout de polycations (par exemple lhypochlorure de dithylaminothyl dextrane ou
DEAE-dextrane) qui facilitent les interactions entre lADN et la machinerie dendocytose6 de la cellule.

Figure 7 - Exemple de structure de plasmide.

Sites de restrictions reconnus
par des enzymes coupant le plasmide

Gne
de rsistance
lampicilline

(5) Conjugaison : change de plasmides par contact entre bactries.

(6) Endocytose : mcanisme par lequel une cellule englobe une particule.

Gne
de rsistance
la ttracycline

Origine de rplication
du plasmide (ORI)

13 13

Autres constructions vectorielles

Il existe de nombreuses constructions gntiques labores par diffrentes quipes de recherche, par exemple :
Les cosmides sont des plasmides comprenant des gnes dencapsidation du bactriophage , permettant dinfecter les bactries
Escherichia coli, dans lesquelles ils se multiplient de faon autonome.
Ces cosmides sont utiliss comme vecteur, pouvant intgrer des inserts de 40 kb7, ce qui les
rend intressants pour constituer des banques
gnomiques8.
Les BAC (Bacterial Artificial Chromosomes)
ont t construits partir dun plasmide F et
permettent de cloner de grands fragments
dADN (100 300 kb) dans une souche spcifique dE.coli qui tolre les BAC.

2.2. Les phages

Les phages ou bactriophages sont des virus de bactries. Comme la bactrie hte
Escherichia coli est la plus utilise en biotechnologie, les phages spcifiques de cette
bactrie (, M13, QB, phage T) sont les plus
employs. Ces phages peuvent tre modifis
artificiellement afin de leur faire porter des
gnes dintrt.
Les phages se fixent sur la paroi bactrienne et
injectent leur ADN dans la cellule (voir figure 8).

Les YAC (Yeast Artificial Chromosomes) sont

des chromosomes artificiels de levure qui se
multiplient dans la levure hte comme des chromosomes normaux. Ils permettent de cloner de
trs grands fragments dADN (600 1 400 kb)
et sont souvent utiliss pour la production de
banques gnomiques.
Les YRP (Yeast Replicating Plasmids) et les
YEP (Yeast Episomal Plasmids) sont des vecteurs permettant de rpliquer les gnes trangers, sans intgration dans le gnome de la
levure hte.
Les YIP (Yeast Integrating Plasmids) sont des
plasmides permettant dinsrer les gnes trangers au gnome de la levure hte.

La machinerie de la bactrie est ensuite utilise pour rpliquer lADN viral et synthtiser
les protines servant produire de nouveaux
phages. Aprs accumulation des phages
dans la cellule, celle-ci finit par clater et librer ces phages qui vont infecter dautres
bactries.
Les phages sont utiliss en laboratoire pour
constituer des banques gnomiques ou de
protines. En effet, leur efficacit de pntration dans E. coli est bien plus grande que
celle des plasmides.

Figure 8 - tapes de pntration du gnome phagique dans la bactrie.

Phage

Paroi
bactrienne
Arrive

14 14

Pntration et percement

Injection de lADN

(7) Kb : kilobase correspondant 1000 bases dun acide nuclique. Les bases peuvent tre de 5 types : adnine, guanine, thymine, cytosine, uracile.
(8) Banque gnomique : fragments dADN ou ADNc conservs dans des cellules.

2.3. Les Baculovirus

Les Baculovirus sont des virus de larves
dinsectes pouvant se prsenter sous deux
formes :
sous forme de polydre, enfermant plusieurs particules virales, leur permettant de
rsister dans lenvironnement et de passer
dune larve une autre ;
sous forme dune simple particule virale se
propageant dune cellule lautre lintrieur dune mme larve.
Cette particule virale simple peut se multiplier
dans les cultures de cellules dinsecte. Les
gnes intervenant dans la formation du polydre sont alors supprims du gnome viral,
pour laisser place des gnes dintrt pouvant avoir une taille trs importante (50 kb).
En effet, la taille de la capside du Baculovirus
sadapte la taille de lADN quelle emballe.
Le Baculovirus peut pntrer de nombreuses
lignes cellulaires de mammifres, mais son
gnome ne peut pas y tre transcrit, il ny a
donc pas production de particules virales. Par
contre, linsert quil porte sera transcrit parce
quun promoteur aura t plac en amont.
En recherche, lintrt de ce systme Baculovirus-cellule dinsecte est quil permet
des modifications post-traductionnelles des
protines nouvellement synthtises comme
cest le cas chez les vertbrs. Les baculo-

virus sont donc employs pour produire en

grande quantit des protines ncessitant
des modifications post-traductionnelles (ajout
de groupements glycosyl, actyl, mthyl,
phosphate).

2.4. Les vecteurs viraux dfectifs

Les vecteurs viraux dfectifs utiliss en laboratoire sont des gnomes de virus sauvages dont certains gnes ont t limins,
pour limiter leur diffusion et leur pathognicit. Ainsi, les Lentivirus sont dpourvus des
gnes vpu, vpr, vif, nef impliqus dans leur
pathognicit et dautres gnes ncessaires
la ralisation du cycle viral, comme le gne
gag (codant pour des protines de capside), le
gne env (codant pour des protines denveloppe), le gne pol (codant pour la transcriptase inverse et lintgrase). Chez les vecteurs
adnoviraux9, les gnes early impliqus dans
la rplication des virus sont supprims. Les
vecteurs dfectifs sont donc a priori incapables de se multiplier naturellement.
De nombreux vecteurs viraux peuvent tre
utiliss selon les buts recherchs : apporter
durablement un malade la protine qui
lui manque (thrapie gnique) ou tudier la
fonction dune protine en lintroduisant dans
un systme o elle nexiste pas naturellement (voir tableau 1).

Tableau 1 - Exemples de virus servant la construction de vecteurs viraux.

Virus

Intgration de linsert dans le

gnome de la cellule hte

Infection de toutes les

cellules quel que soit le
stade de division cellulaire

Exemple

Rtrovirus

oui

ninfecte que les cellules en

division (pas les neurones)

MLV (Murine Leukemia virus)

oui

oui

VIH 1

non
oui
(max : 5 kb)
oui
non

oui

Ad5 humain

oui

AAV 2

oui
oui

HSV 1
Canarypox virus

Rtrovirus du genre
Lentivirus
Adnovirus (ADV)
Virus associ aux
Adnovirus* (AAV)
Herps virus (HSV)
Poxvirus

* Virus associ aux Adnovirus : un petit virus gnralement non pathogne.

(9) Vecteurs adnoviraux : vecteurs issus dun Adnovirus.

15

Si lon souhaite que le vecteur dfectif se

multiplie, il faut lintroduire :
soit dans une ligne cellulaire spcifique,
possdant les gnes manquant du virus
dfectif (cellules transcomplmentantes)
(voir tableau 2) ;
soit dans une ligne cellulaire normale, en
mme temps que des plasmides portant les
gnes viraux manquants (plasmides auxiliaires), appele aussi cellule dempaquetage ou cell packaging (voir figure 9).
Par mesure de scurit, ces gnes sont rpartis sur plusieurs plasmides. Cette technique tend se dvelopper.

Il est galement possible de changer certains

gnes du virus (gnes codant pour des protines denveloppe), afin quil reconnaisse
des cellules htes appartenant des espces
diffrentes. En effet, les protines denveloppe participent la reconnaissance et
la pntration dans les cellules cibles. Ainsi,
en intgrant le gne de la glycoprotine G du
VSV (virus de la stomatite vsiculaire) dans
un Rtrovirus, celui-ci peut reconnatre et
pntrer dans de nombreuses autres lignes
cellulaires reconnues par le VSV.
Les vecteurs rtroviraux de troisime gnration peuvent galement tre dlts en U3,
ce qui inhibe la transcription des provirus
(voir 1.4 Cas particulier des Rtrovirus).
Linsert peut nanmoins tre transcrit
puisquun promoteur spcifique au gne
dintrt aura t plac en amont.

Ces cellules pourront produire des vecteurs viraux recombinants pouvant infecter
dautres cellules. Par contre, sans le recours
aux cellules transcomplmentantes ou aux
plasmides auxiliaires, le virus dfectif ne
pourra pas se multiplier.

Tableau 2 - Lignes cellulaires transcomplmentantes utilises en fonction des vecteurs viraux.

16

Virus

Gnes dlts

Ligne cellulaire hte

MLV
(Murine Leukemia virus)

gag, env, pol

HEK293
(cellules rnales
embryonnaires humaines)

VIH1
(Human immunodeficiency virus)

gag, env, pol, vif, vpr, nef, vpu, tat, rev

HEK293 FT

Ad2, Ad5 humain

(Adnovirus de type2 ou 5)

E1, E2, E3

HEK 293 ou HEK911

Figure 9 - Mcanismes de transcomplmentation.

Cellule transcomplmentante

Cellule dempaquetage cotransfecte

avec plasmides auxiliaires
Vecteur
Plasmides .
avec les gnes .
gag, pol, env

Noyau et gnome
cellulaire avec les gnes
gag, pol, env

Production des virus

Ces deux types de cellules peuvent produire des particules

de Rtrovirus dfectif avec insert
gag pol env

Gnome de Rtrovirus complet .

avec ses gnes dempaquetage

Gnome de vecteur .
Rtrovirus dfectif .
avec insert

2.5. Les cellules htes

En fonction de lapplication envisage, le type
de cellules htes sera choisi en concordance
avec les types de vecteurs et dinserts. Ainsi,
diffrents types de cellules htes peuvent
tre envisags :

Les cultures cellulaires primaires

Les cellules mises en culture sont issues directement dorganes ou de tissus prlevs
sur lorganisme. Ces cellules meurent aprs
un certain nombre de divisions in vitro.

Les bactries
Les souches dEscherichia coli choisies sont
gnralement issues de la souche sauvage
E. coli K 12 non pathogne pour lhomme.

Les lignes cellulaires immortalises

Certaines cellules eucaryotes peuvent acqurir la capacit de prolifrer indfiniment in
vitro. On parle alors de lignes tablies ou immortalises. Ce phnomne peut se produire
spontanment en culture ou lors dapparition
de tumeur, mais peut galement tre provoqu par infection avec un virus transformant
(SV4010 ou virus Epstein Barr par exemple) ou
par introduction dun oncogne, par exemple
le gne de la protine T du SV40.

Les levures
La souche la plus utilise est Saccharomyces
cerevisiae (levure du boulanger). Cette levure
trs utilise en agroalimentaire nest pas pathogne pour lhomme.

(10) SV40 : Simianvirus 40.

17

>3. valuation

des risques lis

la production
dOGM

Lvaluation des risques prend en compte

le danger, cest--dire la pathognicit pour
lhomme et lenvironnement, que reprsente
chaque lment ncessaire llaboration de
lOGM :
organisme donneur,
squence insre (ou insert, gne dintrt),
vecteur,
organisme receveur,
OGM final.
Lvaluation des risques doit galement
considrer les manipulations effectues et
les modes dutilisation de lOGM, afin dvaluer les expositions possibles des oprateurs.
Ceux-ci peuvent tre exposs par :
piqre/coupure avec des seringues ou des
objets contamins,
projection sur les muqueuses ou contact
avec la peau lse,

inhalation de bioarosols, pouvant tre
crs par rupture de films liquides prsents
lorifice des tubes, lextrmit des pipettes, sur les anses densemencement,
par vibration de liquide, par pulvrisation
de lyophilisat,
ingestion, en portant les mains ou des objets contamins la bouche ou lors de projections sur les lvres.
Quel que soit le mode de pntration, les
consquences pour loprateur pourraient
tre de diffrents types :

risques dinfections (multiplication chez
loprateur du micro-organisme donneur,
vecteur, receveur ou de lOGM),
risques lis aux produits dexpression de
linsert (ex : toxine, protine oncogne),
risques lis au site dintgration de linsert
(risque doncognicit ou dinsertion au milieu dun gne fonctionnel).

18

Le mdecin du travail ne peut valuer seul

les risques encourus lors de la construction
et de la manipulation des OGM. Cest une dmarche collective pluridisciplinaire, mener
avec les prventeurs et les chercheurs. En
effet, lvaluation des dangers est trs difficile en raison de la grande diversit des lments intervenant dans la construction dun
OGM (ADN, ARN, virus, bactries, plasmides,
cellules humaines ou animales, autres OGM,
etc.). Cette valuation doit se faire tape par
tape, en considrant chaque lment : lorganisme/cellule donneur, linsert, le vecteur
et lorganisme/cellule receveur.

3.1. Lorganisme donneur

Bien que ne faisant pas partie des lments
constitutifs de lOGM, lorganisme donneur
lorigine de linsert pourrait reprsenter un
danger au moment de sa manipulation.
En effet, le gne dintrt peut provenir dorganismes pluricellulaires (homme, souris),
dorganes, de tumeurs, dOGM, de microorganismes, de souches cellulaires achetes dans des banques spcialises (ATCC11,
DSMZ12, CRBIP13) ou changes entre
laboratoires.
Le micro-organisme donneur peut tre pathogne et class en fonction de son groupe
de danger 2 ou 314. Cependant, ce nest
pas parce quun micro-organisme nest pas
class quil ne prsente pas de danger. Une
tude bibliographique permettra destimer
le danger des micro-organismes non classs. Concernant les organes ou chantillons
biologiques prlevs in vivo, il est important
de disposer dun maximum dinformations
sur le statut du donneur. La qualification des
chantillons, selon les critres de lEFS15,
permettra au moins de sassurer de labsence de certains pathognes, comme les
agents responsables du Sida, des hpatites B
ou C, de la leucmie lymphode T de ladulte,

de la syphilis, de la maladie dEpstein-Barr,

dinfection Cytomgalovirus, de la toxoplasmose et du paludisme. Dautres agents
pathognes peuvent tre recherchs dans
lchantillon, en fonction de lorgane ou de
la zone gographique dont il provient (zones
endmiques pour la fivre Ebola, la fivre de
la valle du Rift, lhistoplasmose). dfaut
dinformation, il convient dans la mesure du
possible de conserver un chantillon permettant de faire des analyses ultrieures en cas
daccident.
Si lorganisme donneur provient de souches
cellulaires commercialises ou changes
entre laboratoire, le groupe de danger 1, 2 ou
3 sera communiqu par le fournisseur.
Les questions permettant danalyser les dangers des organismes donneurs sont reprises
dans larbre dcisionnel de lannexe 1.

3.2. La squence insre

Lors des tapes prcdant lintgration du
gne dintrt dans un vecteur, loprateur
peut entrer en contact accidentel avec lacide
nuclique. En thorie, pour sexprimer chez
lhomme, un fragment dADN nu devrait pntrer une cellule et intgrer le gnome. Sil
sagissait dun ARNm, il pourrait tre traduit
dans le cytoplasme grce la messagerie
cellulaire.
Tout ceci reste peu probable. Il na pas t
montr quun fragment dacide nuclique
puisse pntrer naturellement lintrieur
des cellules humaines. lheure actuelle, aucune pathologie lie de telles circonstances
na t signale.
Par contre, une fois insre dans un vecteur,
une squence dADN peut pntrer la cellule
et reprsenter un danger pour lhomme, si
cet ADN code pour une protine susceptible
dinterfrer dans le fonctionnement dune
cellule.

(11) ATCC : American Type Culture Collection.

(12) DSMZ : Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH.
(13) CRBIP : Centre de Ressources Biologiques de lInstitut Pasteur.
(14) Art. R.4421-3 du code du travail et liste des agents biologiques pathognes dfinie dans larrt du 18 juillet 1994 modifi.
(15) EFS : tablissement franais du sang.

19

Ainsi, le Haut Conseil des biotechnologies

distingue deux situations :
les inserts de type A, pour lesquels il ny a
pas a priori de danger d leur expression.
les inserts de type B, pour lesquels il existe
un risque prsomptif ou avr (par exemple,
gnes codant pour des rcepteurs hormonaux, des facteurs de croissance, gnes de
reprogrammation, dactivation ou dinhibition de la prolifration cellulaire, gne agissant sur lapoptose ou le dveloppement
embryonnaire).
Une liste indicative et non exhaustive de squences de catgories A et B16, disponibles
sur le site du HCB, peut aider le mdecin du
travail et les prventeurs valuer le danger.
Cette liste prend en compte les squences
virales, cellulaires et les toxines. Ces dernires sont considres comme appartenant
a priori la catgorie B. De mme, le Haut
Conseil des biotechnologies prcise que les
squences virales susceptibles de modifier le
tropisme17 dun virus (en modifiant les protines de surface de type glycoprotine par
exemple) sont considres comme des squences de catgorie B.
En labsence dinformation sur le danger de la
protine produite par linsert, il est conseill
de considrer linsert comme appartenant au
type B.
Les questions permettant danalyser les dangers des squences insres sont reprises
dans larbre dcisionnel de lannexe 2.

3.3. Les vecteurs

Les vecteurs vhiculent une squence clone ventuellement modifie. Certains vecteurs peuvent tre dangereux pour lhomme,
parce quils sont naturellement pathognes
ou parce quils peuvent sintgrer dans le gnome de la cellule hte.

20

Les plasmides et les phages

Les plasmides et les phages sauvages ne
pntrent pas naturellement dans les cellules
eucaryotes. Sils y pntraient artificiellement, ils ne pourraient pas sy multiplier.
Par contre, en cas de pntration accidentelle dans les cellules humaines, des plasmides auxquels a t ajoute une origine de
rplication de type eucaryote (voir 2.1 Les
plasmides) pourraient se multiplier.
Les Baculovirus
Les Baculovirus sont des virus dinsectes. Ils
sont utiliss pour intgrer des gnes dintrt
dans des cellules dinsectes, bien quils puissent galement pntrer dautres cellules de
mammifre (voir 2.3 Les Baculovirus).
En cas daccident, certains Baculovirus peuvent donc pntrer des cellules humaines,
mais il ny a alors :
ni intgration de linsert dans le gnome
cellulaire,
ni transcription du gnome viral,
ni production de particules virales.
Les Baculovirus sont donc naturellement
inoffensifs pour lhomme.
Les autres vecteurs viraux
Les voies de pntration des vecteurs viraux
sont thoriquement celles des virus sauvages : par exemple la voie respiratoire pour
les Adnovirus et les voies sanguine et muqueuse pour le VIH. Cependant, certaines recherches peuvent ncessiter le changement
de tropisme dun virus pour une espce, un
organe, un tissu ou un type cellulaire. Il est
donc important de connatre prcisment les
cellules cibles de chaque vecteur.
On utilise rgulirement des vecteurs issus
du Rtrovirus murin sauvage MLV, du Lentivirus humain VIH 1, de lAdnovirus Ad5 et
dautres virus tels que lAdeno-Associated
virus (AAV), ou encore le virus de la vaccine
ou de la rougeole (voir tableau 1).
Les vecteurs viraux sont utiliss sous forme
de particules virales dfectives. Privs de leurs

(16) www.enseignementsup-recherche.gouv.fr/cid54116/principes-de-classement-et-guides-officiels-de-la-commission-de-genie-genetiquefevrier-2001.html
(17) Tropisme : affinit dun agent infectieux pour un rgne, un genre, une famille, une espce, un organe, un tissu ou un type cellulaire.

gnes codant pour des protines indispensables au cycle de multiplication, ils ne pourront pas se reconstituer et donc se propager
hors de la cellule. Ainsi, ils peuvent sintroduire
dans une cellule eucaryote, mais ne peuvent
pas propager linfection, ce qui protge le manipulateur en cas daccident (voir tableau 2).
Cependant, les vecteurs privs de leurs gnes
gag, pol, env pour les Rtrovirus, ou E1, E2,
E3 pour les Adnovirus, pourraient se recombiner avec des virus dj prsents dans les
cellules htes. Il en va de mme pour tous les
virus dlts utiliss en laboratoire.
En effet, in vitro, les vecteurs viraux dfectifs
ne se reconstituent que parce quils ont trouv dans les cellules transcomplmentantes
les protines qui leur manquent. De mme,
en cas daccident, si le virus dlt pntre
dans un organisme ayant pralablement t
contamin par un virus sauvage de la mme
espce, le virus dfectif pourrait trouver des
gnes transcomplmentants. En effet, le virus
sauvage est capable de synthtiser toutes les
protines ncessaires la fabrication du virus entier. Dans ce cas, le virus dfectif pourrait se propager chez le manipulateur.

Cas particulier des Rtrovirus

Les Rtrovirus (par exemple HIV et MLV)
sintgrent dans le gnome cellulaire. Mme
les vecteurs dfectifs pour les gnes gag,
pol, env gardent leur promoteur de transcription U3 et donc leur capacit transcrire leur
provirus (voir 1.4 Cas particulier des
Rtrovirus).
Afin dviter toute multiplication dun vecteur
chez le manipulateur en cas daccident, on
utilise des vecteurs dlts en U3 (vecteur
DU3 ou SIN : self inactivating vector). Le provirus ne peut alors plus tre transcrit. Aucune
particule virale ne peut se reformer, mme
par transcomplmentation en cas de prsence dun virus sauvage dans la cellule (voir
tableaux 3 et 4, pages suivantes).
Afin de sassurer de lefficacit de ces techniques de dltion, il est possible deffectuer
diffrents types de tests, permettant de dtecter dventuels vecteurs recombinants
comptents pour la rplication.
Les questions permettant danalyser les dangers des vecteurs sont reprises dans larbre
dcisionnel de lannexe 3.

Tableau 3 - tapes de rplication possibles selon les dltions des Rtrovirus (daprs P. Bouill).
Rplication Rtrovirus

Rtrovirus dlt
gag/pol/env

Reconnaissance du rcepteur
Entre
Transcription inverse
Translocation nuclaire
Intgration dans le gnome
Transcription du provirus

Reconnaissance du rcepteur
Entre
Transcription inverse
Translocation nuclaire
Intgration dans le gnome
Transcription du provirus
(transcription de linsert)

Epissage
Traduction
Assemblage des virions

Epissage
Traduction
Pas dassemblage des virions,
en labsence de gag, pol, env

Rtrovirus dlt
gag/pol/env/U3
Reconnaissance du rcepteur
Entre
Transcription inverse
Translocation nuclaire
Intgration dans le gnome
Pas de transcription du provirus
(transcription de linsert grce
lajout dun promoteur
en amont de linsert)

Sortie du virus

21

Tableau 4 - Diffrents mcanismes dinfection selon la nature du virus et de la cellule hte.

Complet

Dfectif

Virus de laboratoire

Gnome ncessaire lempaquetage

Naturelle

Naturelle

Gnome
Cellule hte

Noyau

Reconnaissance
virus-cellule

Reconstitution
de nouveaux virus
dans la cellule

Oui

Non

Oui

Non

Invasion des cellules

voisines

22

Dfectif

Dfectif

Rtrovirus dlt U3

Transcomplmentante

Naturelle mais dj contamine par un virus

complet de la mme espce que le virus .
du laboratoire

Naturelle mais dj contamine .

par un Rtrovirus complet de la mme .
espce que le virus du laboratoire

Oui

Oui pour le virus complet et dfectif

Oui pour le Rtrovirus complet.

Non pour le Rtrovirus dlt U3.

Oui

Oui pour le virus complet et dfectif

Oui pour le Rtrovirus complet.

Non pour le Rtrovirus dlt U3.

23

3.4. Lorganisme receveur

Lorganisme ou les cultures cellulaires recevant le vecteur et son insert peuvent prsenter
un danger pour lhomme et lenvironnement.
Lvaluation des risques du receveur est similaire celle effectue pour les organismes/
cellules donneurs (annexe 1).
Les cellules procaryotes
Parmi les bactries utilises comme organisme receveur, les plus couramment employes sont les souches dEcherichia Coli
issues de la souche E. coli K12 non pathogne pour lhomme.
Les cellules eucaryotes naturelles
Il peut sagir de cellules de moisissures, de
levures, dinsectes, de plantes ou provenant
de tissus despces et dorganes divers. Les
lignes cellulaires peuvent tre pathognes
et seront alors classes dans les groupes de
danger 2 ou 318.
Pour les lignes commercialises, il est indispensable de demander au fournisseur le
groupe de danger du matriel biologique et
le niveau de confinement ncessaire sa
manipulation.
Lors des changes entre laboratoires, la rglementation prvoit que le laboratoire fournisseur doit communiquer en mme temps
que le matriel biologique, la rfrence du
dossier correspondant dpos auprs du
Haut Conseil des biotechnologies.
Pour les cultures primaires tablies en laboratoire, la nature du risque est identique
celle des chantillons biologiques dont elles
sont issues. Il est alors important de qualifier
lchantillon (voir 3.1 Lorganisme donneur) et de conserver un chantillon permettant de faire des srologies ultrieures en
cas daccident.

24

Les cellules transcomplmentantes

En laboratoire, les cellules transcomplmentantes ont, dans leur gnome ou dans
des plasmides, les gnes manquant au vecteur dlt. Ainsi, le vecteur dlt peut se
rpliquer dans la cellule transcomplmentante (par exemple: HEK 293/MLV, HEK 911/
Ad5, voir tableau 2 ).
Afin de connatre la dangerosit de ces cellules, il convient de se rfrer au classement
fourni par la banque de cellules.

3.5. LOGM
La classe de lOGM final est value en
fonction de chacun des lments qui le
composent : vecteur, insert et organisme
receveur. Le danger prsent par llment le
plus dangereux sera prdominant.
De plus, il faut prendre en compte les interactions entre chaque lment de lOGM. Ainsi
une cellule transcomplmentant un vecteur
dlt peut modifier le niveau du vecteur.
Lorganisme rsultant de lassemblage de
ces lments peut parfois prsenter un danger suprieur ou infrieur celui du plus
dangereux des composants du trinme.
Les questions permettant danalyser les
dangers des OGM sont reprises dans larbre
dcisionnel de lannexe 4.
Lvaluation des risques sera retranscrite
dans la Dclaration dutilisation ou demande dagrment adresser au Haut
Conseil des biotechnologies (HCB), qui donnera son avis final sur le classement et les
niveaux de confinement. Ces derniers peuvent varier selon ltape de construction
dun OGM, en fonction des risques identifis.
Ainsi, certaines tapes peuvent ncessiter
un confinement de niveau 3, tandis que pour
dautres le confinement de niveau 2 suffira.

(18) Art. R. 4421-3 du code du travail et liste des agents biologiques pathognes dfinie dans larrt du 18 juillet 1994 modifi.

Exemple de classement
LAdnovirus humain de type 5 (Ad5),
initialement de groupe de danger 2,
est utilis comme vecteur dfectif
pour la rplication. En tant que vecteur adnoviral, il est considr par
le Haut Conseil des biotechnologies
comme tant de groupe de danger 2.
Le couple vecteur Ad5-insert porteur de
squences de catgorie A, ne prsentant

pas de danger objectif ou potentiel, est

de classe 2. Par contre, le couple vecteur Ad5-insert porteur de squences
de catgorie B, prsentant un danger
potentiel estim plus lev que le danger prsent par le vecteur Ad5 ou linsert, considrs sparment, est de
classe 3 (guide du Haut Conseil des
biotechnologies).

25

> Conclusion
Il existe pratiquement autant de constructions dorganismes gntiquement modifis
(OGM) que dquipes de recherche. Lvaluation des dangers doit donc se faire au cas
par cas, en tenant compte des diffrents lments intervenant dans la construction
de lOGM : insert, vecteur, organisme donneur et receveur. Les arbres dcisionnels
clairent le prventeur sur les ncessaires questions permettant dvaluer les dangers
de chaque lment pris sparment.
Une fois les dangers estims, lobservation des postes de travail permettra de mettre
en vidence les expositions possibles ces dangers : par piqres/coupures avec du
matriel contamin, par inhalation de particules virales naturellement pathognes
par voie respiratoire, par contact main-bouche aprs avoir manipul des bactries
pathognes par voie digestive, etc.
Suite cette valuation de risques, les mesures de prvention techniques habituelles en
laboratoires de biologie seront appliques. Les travaux se drouleront dans une salle
technique confine respectant les dispositions de larrt du 16 juillet 2007 dfinissant
les niveaux de confinement (contraintes techniques concernant les locaux, le matriel
et les pratiques de travail). Ces dispositions pourront ventuellement tre compltes
par des mesures spcifiques prconises par le Haut Conseil des biotechnologies (HCB).
Les niveaux de confinement peuvent varier en fonction des tapes de la construction
de lOGM. Le confinement peut ainsi passer dun niveau 1 (prparation de plasmide)
un niveau 3 (prparation de vecteur), puis revenir un niveau 2 (utilisation de vecteur
dfectif) De plus, il conviendra de respecter les rgles de prvention en laboratoire
(ne pas pipeter la bouche, porter les vtements et les quipements de protection
spcifiques, travailler sous poste de scurit microbiologique en cas de production de
bioarosols) et les mesures dhygine (se laver les mains, ne pas boire ou manger sur
le lieu de travail).
Parce que les constructions dOGM sont disparates, le suivi mdical devra se faire au
cas par cas, en fonction des manipulations et des individus. Les arbres dcisionnels
aideront le mdecin du travail dans son questionnement avec le manipulateur,
afin dtablir avec lui un suivi mdical personnalis et des conduites tenir en cas
daccident.

26

Annexes

1. Manipulation dorganismes/cellules donneurs ou receveurs

2. Manipulation dinserts
3. Manipulation de vecteurs
4. Manipulation dOGM en milieu confin

27

28

Appliquer les mesures

de confinement
correspondant au groupe
de danger.

Non

Oui

Demander le groupe de danger

au fournisseur. Appliquer
les mesures de confinement
correspondant au danger.

Non

Le fournisseur
a-t-il indiqu le groupe
de danger ?

Oui

A-t-il t achet
dans le commerce ?
Non

Danger rsiduel dautres

germes non recherchs.
Etablir des procdures
spcifiques en cas daccident.

Oui

Oui

A-t-il t fourni
par un autre laboratoire ?

Non
ou en cours de qualification

Est-ce que lchantillon

est qualifi* ?

Oui

Danger potentiel. Se garder la

possibilit de tester lchantillon en cas
daccident (accord du patient source
ncessaire). Etablir des procdures
spcifiques en cas daccident.

Non

Sagit-il/est-il issu
dorganes, dchantillons
frachement prlevs ?

*Qualifi : chantillon dans lequel on a vrifi labsence des pathognes suivants : agents responsables du Sida, des hpatites B ou C, de la leucmie lymphode T de ladulte, de la syphilis, de la maladie.
dEpstein-Barr, dinfection Cytomgalovirus, de la toxoplasmose et du paludisme (liste EFS sujette actualisation).

Oui

Connaissez-vous
le groupe de danger
de lorganisme/cellule ?

Manipulation dorganismes/cellules donneurs ou receveurs

Annexe 1

29

Oui

Oui

Insert de catgorie A ou B.
Appliquer les mesures
de confinement correspondant au danger

Non

Connaissez-vous
le classement de linsert ?

Linsert est-il rpertori

dans la liste du HCB ?

Manipulation dinserts

Non

Annexe 2

Quelle est la catgorie

de linsert ?

Quelle est la fonction de linsert ?

production de toxines, oncogne,
rcepteur hormonal, facteur de croissance,
protines virales

30

Appliquer
les mesures
de confinement
correspondant
la classe de danger

Non

En cas daccident,
ces vecteurs ne peuvent
pas se multiplier chez
le manipulateur.

Non

Non

En cas daccident, ces vecteurs

peuvent se multiplier
chez le manipulateur.
Etablir des procdures
spcifiques en cas daccident.

Oui

Ces vecteurs ont-ils t

modifis afin de pouvoir
se multiplier chez lhomme ?

Oui

Le vecteur est-il un virus

non humain (MLV, Baculovirus),
un phage, un cosmide, BAC, YAC,
YRP, YIP ?

Manipulation de vecteurs

Non

Non

Oui

En cas daccident
ces vecteurs
ne se multiplient
pas chez le
manipulateur *.

Oui

Est-il dlt en U3 ?

Oui

Sagit-il dun Rtrovirus ?

En cas daccident, ces vecteurs

pourraient se multiplier chez
un manipulateur porteur
du virus sauvage.
Etablir des procdures
spcifiques en cas daccident.

Non

Le virus humain utilis

comme vecteur est-il dfectif
pour la rplication ?

* Le HCB prcise que la manipulation de Lentivecteur DU3 contenant un insert de type A peut se faire dans une salle technique de niveau de confinement 2. .
Par contre si le volume de Lentivecteur prpar excde 200 mL de surnageant brut non purifi et non concentr, les manipulations se feront en laboratoire de niveau de confinement 3.

Oui

Connaissez-vous le
classement du vecteur ?

Annexe 3

31

Appliquer les mesures

de confinement
correspondantes
la classe de danger.

Oui

Connaissez-vous le
classement de lOGM ?
Non

La classe la plus leve est considre

comme prdominante. Cependant, la coexistence
de ces lments dans lOGM peut majorer
ou minorer le danger.
Appliquer les mesures de confinement
correspondantes la classe de danger de lOGM.

Quelle est la classe de danger

de chaque lment : insert,
vecteur et cellule ?

Manipulation dOGM en milieu confin

Annexe 4

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90 Territoire de Belfort)

(08 Ardennes, 10 Aube, 51 Marne,

52 Haute-Marne, 54 Meurthe-et-Moselle,
55 Meuse, 88 Vosges)

documentation.prevention@carsat-nordest.fr
www.carsat-nordest.fr

48-50 boulevard Lafayette

63058 Clermont-Ferrand cedex 1
tl. 04 73 42 70 76
fax 04 73 42 70 15
preven.carsat@orange.fr
www.carsat-auvergne.fr

Carsat NORD-EST

(11 Aude, 30 Gard, 34 Hrault,

48 Lozre, 66 Pyrnes-Orientales)

29 cours Gambetta
34068 Montpellier cedex 2
tl. 04 67 12 95 55
fax 04 67 12 95 56

(14 Calvados, 27 Eure, 50 Manche,

61 Orne, 76 Seine-Maritime)

Avenue du Grand-Cours, 2022 X

76028 Rouen cedex
tl. 02 35 03 58 22
fax 02 35 03 60 76

Carsat PAYS DE LA LOIRE

(44 Loire-Atlantique, 49 Maine-et-Loire,

53 Mayenne, 72 Sarthe, 85 Vende)

2 place de Bretagne
44932 Nantes cedex 9
tl. 02 51 72 84 08
fax 02 51 82 31 62

documentation.rp@carsat-pl.fr
www.carsat-pl.fr

Carsat RHNE-ALPES

(01 Ain, 07 Ardche, 26 Drme, 38 Isre,

42 Loire, 69 Rhne, 73 Savoie,
74 Haute-Savoie)

26 rue dAubigny
69436 Lyon cedex 3
tl. 04 72 91 96 96
fax 04 72 91 97 09

preventionrp@carsat-ra.fr
www.carsat-ra.fr

Carsat SUD-EST

Carsat MIDI-PYRNES

(09 Arige, 12 Aveyron, 31 Haute-Garonne,

32 Gers, 46 Lot, 65 Hautes-Pyrnes,
81 Tarn, 82 Tarn-et-Garonne)

(04 Alpes-de-Haute-Provence,
05 Hautes-Alpes, 06 Alpes-Maritimes,
13 Bouches-du-Rhne, 2A Corse-du-Sud,
2B Haute-Corse, 83 Var, 84 Vaucluse)

doc.prev@carsat-mp.fr
www.carsat-mp.fr

documentation.prevention@carsat-sudest.fr
www.carsat-sudest.fr

2 rue Georges-Vivent
31065 Toulouse cedex 9
tl. 0820 904 231 (0,118 /min)
fax 05 62 14 88 24

35 rue George
13386 Marseille cedex 5
tl. 04 91 85 85 36
fax 04 91 85 75 66

Services Prvention des CGSS

CGSS GUADELOUPE

CGSS LA RUNION

lina.palmont@cgss-guadeloupe.fr

prevention@cgss-reunion.fr

Immeuble CGRR, Rue Paul-Lacav, 97110 Pointe--Pitre

tl. 05 90 21 46 00 fax 05 90 21 46 13

CGSS GUYANE

4 boulevard Doret, 97704 Saint-Denis Messag cedex 9

tl. 02 62 90 47 00 fax 02 62 90 47 01

CGSS MARTINIQUE

Espace Turenne Radamonthe, route de Raban,

BP 7015, 97307 Cayenne cedex
tl. 05 94 29 83 04 fax 05 94 29 83 01

Quartier Place-dArmes, 97210 Le Lamentin cedex 2

tl. 05 96 66 51 31 et 05 96 66 51 32 fax 05 96 51 81 54
prevention972@cgss-martinique.fr
www.cgss-martinique.fr

Achev dimprimer par Jouve - 53100 Mayenne

N dImprimeur: xxxxxx - Dpt lgal: juillet 2012 - Imprim en France

Le Haut Conseil des biotechnologies (HCB) dsigne

par OGM, tout organisme dont le matriel gntique a t
modifi autrement que par multiplication ou recombinaison
naturelle. Quel que soit lOGM, sa cration ncessite
les mmes lments : un gne dintrt, un vecteur
introduisant ce gne vers sa nouvelle cellule cible.
La manipulation de cultures cellulaires de toutes origines,
lusage de vecteurs viraux comme outil, lapparition
de nouveaux vecteurs, la complexification des techniques,
rendent lvaluation et la prvention des risques
professionnels particulirement dlicates dans
les laboratoires construisant et manipulant les OGM.
Ce guide a pour objectif daider les personnes en charge
de la surveillance mdicale et de la prvention mieux
comprendre et valuer les risques biologiques lis la
construction et la manipulation des OGM en laboratoire.
La premire partie rappelle les mcanismes molculaires
de base. La seconde prsente les diffrents lments
ncessaires la production dun OGM : insert, vecteur,
organismes donneur et receveur (les manipulations sur
animaux et vgtaux ne sont pas abordes ici). La troisime
partie, qui peut se lire indpendamment des prcdentes,
expose les dangers potentiels de chacun de ces lments.
Des arbres dcisionnels reprennent les principales questions
que peuvent se poser les mdecins ou les prventeurs,
afin dvaluer les dangers de chaque lment participant
la construction de lorganisme gntiquement modifi.

Institut national de recherche et de scurit

pour la prvention des accidents du travail et des maladies professionnelles
30, rue Olivier-Noyer 75680 Paris cedex 14 Tl. 01 40 44 30 00
Fax 01 40 44 30 99 Internet: www.inrs.fr e-mail: info@inrs.fr

dition INRS ED 6131

1re dition juillet 2012 5000 ex. ISBN 978-2-7389-2019-5