Produção de Filme Biodegradável Dopado Com Potencial Indicador de Qualidade para Alimentos

CENTRO ESTADUAL DE EDUCAO TECNOLGICA PAULA SOUZA
ESCOLA TCNICA ESTADUAL IRM AGOSTINA

CURSO TCNICO INTEGRADO AO MDIO EM QUMICA
ANDERSON FERNANDES RIBEIRO

ANDERSON SILVRIO JUNIOR
FRANCIELE CUSTDIO GONALVES DAS NEVES
RENAN SANTINI BARBOSA
PRODUO DE FILME BIODEGRADVEL DOPADO COM

POTENCIAL INDICADOR DE QUALIDADE PARA ALIMENTOS
SO PAULO
2014


Trabalho de Concluso de Curso, apresentado

a Escola Tcnica Estadual Irm Agostina, como
parte das exigncias para a obteno do ttulo
de tcnico em qumica.
Orientador (a):
Prof. Me. Klauss Engelmann
SO PAULO
2014
Produo de filme biodegradvel dopado com potencial indicador

de qualidade para alimentos / Anderson Fernandes Ribeiro... [et al.] 2014.
79 f.: il. color. ; 30 cm
Orientador: Professor Mestre Klauss Engelmann
Trabalho de Concluso de Curso (Tcnico) Escola Tcnica de
So Paulo Irm Agostina, Curso Tcnico de Qumica, 2014.
1.
Embalagem inteligente. 2. PHB. 3. Antocianina. I.
Engelmann, Klauss. II. Escola Tcnica de So Paulo Irm Agostina. Curso
Tcnico em Qumica. III. Ttulo


Trabalho de Concluso de Curso apresentado ao Curso Tcnico Integrado ao Mdio

em Qumica, da Escola Tcnica Estadual Irm Agostina como requisito final para a
obteno do ttulo de Tcnico em Qumica, sob a orientao do Prof. Me. Klauss
Engelmann.
Aprovado ( ) Reprovado ( ) pela Banca Examinadora em ____/____/______
__________________________________________________
Prof. Me. Klauss Engelmann
Escola Tcnica Estadual Irm Agostina
__________________________________________________
Prof. Dr. Alexandre de Jesus Barros
__________________________________________________
Prof. Mrcia da Silva
Dedicamos este trabalho aos

nossos familiares e a todos os
professores que nos guiaram
nessa jornada.
IV
AGRADECIMENTOS
Agradecemos primeiramente ao nosso orientador Klauss Engelmann, que nos
presenteou com a ideia inicial desse trabalho e com sua ajuda constante.
s nossas professoras de TCC, Elizabel Osmundo de Souza e Beatriz Maria
Gianella, que nos ensinaram o que foi necessrio para elaborar este projeto.
Aos nossos demais professores por terem nos dado o conhecimento que era
preciso para chegar nesse estgio, por terem nos apoiado e cedido parte de suas
aulas e de seu tempo livre para o desenvolvimento desse trabalho. Agradecemos
em especial a Sara, Tas, Alexandre, Mrcia, Jaqueline, e principalmente Patrcia
Santos que nos ajudou muito de diversas maneiras.
Temos tambm de agradecer ao Klaus Axthelm e a Mrcia Viana da empresa
LANXESS que nos ajudaram com informaes valiosas para o desenvolvimento
deste trabalho.
Aos nossos amigos e colegas da ETECIA, por terem nos proporcionado a
alegria de um convvio agradvel e apoio em meio a tenso dessa fase de nossa
vida.
bibliotecria Adriana, por ter nos ajudado sempre que pde atravs de
sugestes de artigos ou livros e por sua amizade.
Aos nossos familiares, pela compreenso e pelo apoio, sempre presentes
quando precisamos.
Ao nosso Deus, por ter nos ajudado e nos sustentado at aqui.
A todos que de alguma maneira colaboraram para a concluso desse
trabalho, nosso sincero muito obrigado.
A mente que se abre a uma nova ideia jamais

voltar ao seu tamanho original.
(Albert Einstein)
VI
RESUMO
A cada dia que passa observa-se que a necessidade do ser humano de
produzir mercadorias com maiores rendimentos e que agridam cada vez menos o
meio ambiente tem aumentado. Visando atender esta demanda, este trabalho
props o uso do pigmento natural antocianina extrado das cascas do rabanete
vermelho (Raphanus sativus) no desenvolvimento de filmes biodegradveis para
potencial uso como embalagem inteligente, indicadora de pH e consequentemente
do frescor do alimento embalado. A extrao do pigmento envolveu a utilizao de
etanol acidificado como solvente extrator, havendo uma proporo de 1:3 entre a
massa de casca e o volume de solvente extrator. Os filmes foram elaborados pela
tcnica de casting tendo como formulao base o polmero biodegradvel poli(3hidroxibutirato) (PHB), poli(etilenoglicol) (PEG) de massas molares 90, 400 e 6000 e
etanol, e incorporados com duas concentraes de antocianinas: 0,005 g e 0,01 g/g
de filme formado. Os filmes foram avaliados quanto as suas propriedades
morfolgicas (difrao de raios-X e microscopia ptica), fsico-qumicas (razo de
intumescimento) e anlise de mudana de cor.
Aps a caracterizao, a atividade indicadora de pH foi testada com peixe cru
embalado em recipientes de vidro tampados com o filme. Os recipientes foram
acondicionados em temperatura ambiente. A avaliao da atividade indicadora de
pH foi realizada por meio da anlise de mudana de cor do filme relacionada com o
pH do peixe.
Os resultados obtidos foram promissores, uma vez que os filmes avaliados
mostraram-se bons indicadores de pH, mesmo com ndices visuais mnimos. No
entanto, necessrio o desenvolvimento de uma metodologia que vise a retirada ou
diminuio dos carboidratos provenientes das antocianinas, que potencialmente
aumentam a degradao do filme de maneira indesejada. Alm disso, importante a
realizao de testes futuros com uma concentrao de antocianinas muito maior, do
qual acentue os testes visuais, alm de aumentar a resistncia do filme
degradao fotoqumica.
Palavras-chave: embalagem inteligente, filme biodegradvel, indicador de pH,
antocianina
VII
ABSTRACT
With each passing day, it is observed that the human need to produce goods
with higher incomes and fewer damage in the environment has increased. Aiming at
answer this demand, this CBT proposed the use of natural pigment anthocyanin
extracted from the crust of radish (Raphanus sativus) in the development of
biodegradable films for potential use as smart packaging, and pH indicator and
therefore the freshness of packaged food. The extraction of the pigment involved the
use of acidified ethanol as extracting solvent, with a proportion of 1:3 between the
mass of the crust and the volume of extracting solvent. The films were prepared by
casting technique formulation based on biodegradable poly-3-hydroxybutyrate (PHB),
poly (ethylene glycol) (PEG) of molecular weight 90, 400 and 6000 and ethanol, and
embedded with two concentrations of anthocyanins: 0,005 and 0,01 g/g of film
formed. The films were evaluated for their morphological (X-ray diffraction and optical
microscopy), physicochemical properties and analysis of color change.
After the characterization, the indicator activity pH was tested with raw fish
packed in glass vials capped with the film. The containers were stored at room
temperature. The evaluation of the pH indicator activity was performed by analyzing
color change related to the pH of the fish film.
The results were promising, since the films was evaluated showed good
indicators of pH, even with minimum visual index. However, it is necessary to
develop a methodology that aims at the removal or reduction of carbohydrates
derived from anthocyanins, which potentially increases degradation of the film
undesired manner. Furthermore, it is important to conduct future tests with a much
higher concentration of anthocyanins, which accentuate the visual tests, and
increasing the time to occur photochemical degradation of the film.
Key words: intelligent packaging, biodegradable film, pH indicator, anthocyanin
VIII
LISTA DE ILUSTRAES
Figura 3.1. Tipos de cadeias polimricas (Adaptado de BANEGAS, 2008) .... 19
Figura 3.2. Fontes naturais dos polmeros biodegradveis usados em filmes
para embalagens e materiais compsitos (Adaptado de THARANATHAN, 2003) .... 23
Figura 3.3. Ciclo do carbono de polmeros biodegradveis (THARANATHAN,
2003) ......................................................................................................................... 24
Figura 3.4. Frmula geral dos Polihidroxialcanoatos (Adaptado de BUCCI,
2003) ......................................................................................................................... 24
Figura 3.5. Frmula estrutural do (a) cido 3-hidroxibutrico e (b) PHB
[Poli(cido 3-hidroxibutrico)] (Adaptado de BUCCI, 2003) ....................................... 25
Figura 3.6. Sistema de elaborao de filmes por meio de casting com controle
de temperatura (BIANCHI, 2002) .............................................................................. 29
Figura 3.7. Estrutura qumica das antocianinas (Adaptado de STRINGHETA;
BOBBIO, 2000) ......................................................................................................... 31
Figura 3.8. Possveis mudanas estruturais das antocianinas de acordo com o
pH (TERCI; ROSSI, 2002) ........................................................................................ 34
Figura 3.9. Aparncia comum dos rabanetes (MELO et al., s.d.) ................... 36
Figura 3.10. Lei de Berr-Lambert (Adaptado de HIEFTJE, 2013) ................... 38
Figura 4.1. Filtragem do extrato alcolico de rabanete ................................... 46
Figura 4.2. Purificao das antocianinas em coluna cromatogrfica Lewatit
S 6368 Sulfate ........................................................................................................... 47
Figura 4.3. Secagem do extrato antocinico em evaporador rotativo ............. 47
Figura 4.4. Aspecto do extrato seco de antocianinas ..................................... 48
Figura 4.5. Aspecto visual das solues de antocianinas em (a) pH 1,0 e (b)
pH 4,2 ........................................................................................................................ 49
Figura 4.6. Soluo 100 g L-1 de PHB em refluxo ........................................... 50
Figura 4.7. Casting das solues filmognicas de PHB (a) com graxa de
silicone e (b) sem graxa de silicone .......................................................................... 51
IX
Figura 4.8. Aspecto visual da soluo filmognica antocinica ...................... 52

Figura 4.9. Sistema de casting em dessecador a vcuo................................. 53
Figura 5.1. Molcula de glicose (SOUZA; NEVES, 2014)............................... 55
Figura 5.2. Reao de reduo dos ons Cu2+ Cu+ com formao de
precipitado (Adaptado de SOUZA; NEVES, 2014) .................................................... 56
Figura 5.3. Caractersticas espectrais de antocianinas de rabanete (Raphanus
sativus) em solues tampo pH 1,0 e pH 4,2 .......................................................... 57
Figura 5.4. Estrutura do ction flavilium - forma predominante de antocianina
em pH 1,0 .................................................................................................................. 58
Figura 5.5. Estrutura da pseudobase incolor ou carbinol forma predominante
de antocianina em pH 4,2 ......................................................................................... 58
Figura 5.6. Caractersticas espectrais de antocianinas de rabanete purificadas
(derivados acilados de pelargonidina-3-soforosdio-5-glicosdeo) em solues
tampo de pH 1,0 e 4,5 (LEIDENS, 2011) ................................................................ 59
Figura 5.7. Filme biodegradvel elaborado por casting base de PHB e
antocianinas .............................................................................................................. 60
Figura 5.8. Microestrutura visual do filme PHB/PEG em microscpio ptico
binocular Bioval modelo L 1000 T com aumento de 40 vezes (foto de William
Marinho Paulo de Alencar) ........................................................................................ 62
Figura 5.9. Microestrutura visual do filme PHB/PEG com antocianinas em
microscpio ptico binocular Bioval modelo L 1000 T com aumento de 40 vezes (foto
de William Marinho Paulo de Alencar) ...................................................................... 63
Figura 5.10. Razo de Intumescimento versus tempo para filmes de PHB/PEG
e PHB/PEG dopado com antocianinas ...................................................................... 64
Figura 5.11. Difratogramas dos filmes elaborados por casting, com e sem
dopamento ................................................................................................................ 65
Figura 5.12. Poro de peixe cru embalada com o filme inteligente ............... 66
Figura 5.13. Aspecto visual dos filmes em seu estado pr-deteriorao
(Estado inicial) e ps-deteriorao (Estado final) do peixe ....................................... 67
LISTA DE TABELAS
Tabela 3.1. Estruturas, nomes e fontes na natureza das principais
antocianinas (Adaptado de LOPES et al., 2007). ...................................................... 32
Tabela 3.2. Caractersticas de absoro de alguns cromforos orgnicos
comuns (Adaptado de HIEFTJE, 2013) ..................................................................... 40
Tabela 3.3. Absoro de compostos orgnicos contendo heterotomos
insaturados (Adaptado de HIEFTJE, 2013) ............................................................... 41
Tabela 4.1. Reagentes e solventes utilizados nos experimentos ................... 44
XI
LISTA DE ABREVIATURAS E SIGLAS

ABRE
Associao Brasileira de Embalagens
ASTM
American Society for Testing of Materials
DMA
Dimetilamina
DNA
cido desoxirribonucleico
HPLC
High Performance Liquid Chromatography
IPEN
Instituto de Pesquisas Energticas e Nucleares
ISO
International Organization for Standardization
IV
Infravermelho
mmHg
Milmetros de Mercrio
PA
Poliamida
PE
Polietileno
PEG
Poli(etilenoglicol)
PET
Poli(etileno tereftalato)
pH
Potencial hidrogeninico
PHA
Polihidroxialcanoato
PHB
Poli(3-hidroxibutirato)
PLA
Poli(cido ltico)
PNRS
Poltica Nacional de Resduos Slidos
PP
Polipropileno
PS
Poliestireno
PVC
Policloreto de Vinila
RI
Razo de Intumescimento
RI
Razo intumescimento
RNA
cido ribonucleico
XII
t/ano
Toneladas por ano
TMA
Trimetilamina
TVB-N
Total Volatile Basic Nitrogen
USP
Universidade de So Paulo
UV
Ultravioleta
v/v
Volume/Volume
Vis
Visvel
nm
Nanmetro
SUMRIO
AGRADECIMENTOS ..................................................................................... IV
RESUMO ........................................................................................................ VI
ABSTRACT ................................................................................................... VII
LISTA DE ILUSTRAES ........................................................................... VIII
LISTA DE TABELAS....................................................................................... X
LISTA DE ABREVIATURAS E SIGLAS ........................................................ XI
1.
INTRODUO ...................................................................................... 15
2.
OBJETIVOS .......................................................................................... 18
2.1
OBJETIVO GERAL............................................................................. 18
2.2
OBJETIVOS ESPECFICOS .............................................................. 18
3.
REVISO BIBLIOGRFICA ................................................................. 19

3.1
EMBALAGENS PLSTICAS .............................................................. 19
3.2
EMBALAGENS BIODEGRADVEIS .................................................. 21

Poli(3-hidroxibutirato) ................................................................... 24
3.3
EMBALAGENS INTELIGENTES ........................................................ 25
3.4
ELABORAO DE FILMES ............................................................... 28
3.5
ANTOCIANINAS ................................................................................ 29
Influncia do pH ........................................................................... 32
Estabilidade da cor ....................................................................... 34
Extrao ....................................................................................... 35
3.6
RABANETE (Raphanus sativus) ........................................................ 36
3.7
ESPECTROFOTOMETRIA DE ABSORO MOLECULAR .............. 37

Absoro de Compostos Orgnicos ............................................. 38
Instrumentos para a Espectroscopia ptica ................................. 41
3.8
4.
DIFRAO DE RAIOS X ................................................................... 41

MATERIAIS E MTODOS .................................................................... 44
4.1
MATERIAIS ........................................................................................ 44
Reagentes .................................................................................... 44
4.2
MTODOS ......................................................................................... 44
Preparao da matria-prima para extrao de antocianinas ...... 44
Extrao de antocianinas do rabanete (Raphanus sativus) ......... 45
Purificao das antocianinas ........................................................ 46
Secagem e conservao do extrato antocinico .......................... 47
Anlise espectral de antocianinas ................................................ 48
Preparo das solues filmognicas de PHB................................. 49
Elaborao dos filmes .................................................................. 50
Incorporao de antocianinas nos filmes ..................................... 51
Caracterizao dos filmes ............................................................ 53
5.
RESULTADOS E DISCUSSO ............................................................ 55

5.1
PURIFICAO DAS ANTOCIANINAS ............................................... 55
5.2
ANLISE ESPECTRAL DE ANTOCIANINAS .................................... 56
5.3
ELABORAO DOS FILMES ............................................................ 59
5.4
CARACTERIZAO DOS FILMES .................................................... 60

Microscopia ptica ....................................................................... 61
Razo de Intumescimento ............................................................ 63
Difrao de raios X ....................................................................... 65
Avaliao da atividade do filme com a mudana de pH ............... 66
6.
CONSIDERAES FINAIS .................................................................. 68
BIBLIOGRAFIA .............................................................................................. 69
15
1. INTRODUO
Desde os primrdios da existncia humana, o homem tem retirado da
natureza os elementos essenciais sua existncia, bem como inmeros outros
produtos para seu conforto e melhoria de sua qualidade de vida. Do incio do sculo
passado aos dias atuais, o uso de polmeros tem se tornado cada vez mais
frequente na sociedade (ROSA et al., 2002). Atualmente, sua produo estimada
na ordem de 150.000.000 t/ano (SHANG et al., 2012), e possuem um papel
importantssimo na sociedade moderna, estando presente em praticamente todos os
setores da economia como: medicina, agricultura, construo civil, embalagens e
eletroeletrnicos (COELHO; ALMEIDA; VINHAS, 2008; PRADELLA, 2006). Em
particular destaca-se a indstria de embalagens que consome cerca de 30% dos
termoplsticos no mercado nacional (ABIPLAST, 2012; MALMONGE; BELEM, 2007;
SIRACUSA et al., 2008). Isso se d principalmente devido s vantagens desse tipo
de material em relao a outros materiais tradicionais, como vidro, papel e madeira,
por exemplo (KOLYBABA et al., 2003).
Mesmo que vantajosos, estes materiais dependem inteiramente do petrleo,
um recurso fssil no renovvel, alm de no serem biodegradveis, gerando assim
resduos slidos que levam a srios problemas ambientais (KOLYBABA et al., 2003;
SIRACUSA et al., 2008). Estes problemas acompanham a principal propriedade dos
polmeros: a durabilidade. Tais fatores acarretam a enorme quantidade de lixo
produzido nas comunidades sociais, principalmente nos grandes centros urbanos
(ROSA et al., 2002).
Neste contexto, o emergente conceito de desenvolvimento sustentvel tem
mostrado que os filmes biodegradveis so uma perspectiva interessante como
alternativa aos polmeros petroqumicos, uma vez que so gerados a partir de
recursos renovveis e podem aumentar a renda no setor agrcola (MOTTIN, 2011;
SOUZA; DITCHFIELD; TADINI, 2010). Para aplicaes especficas, como
embalagens de alimentos, a sua utilizao realmente promissora (BUCCI, 2003;
SIRACUSA et al., 2008; THARANATHAN, 2003).
Os polmeros biodegradveis de fonte microbiana, como o PHB [poli(3hidroxiburitato)], so bastante promissores, pois alm de seu carter biodegradvel
16
e renovvel (CALLISTER, 2002), tm baixo custo, cerca de 5 dlares um

quilograma, e so amplamente disponveis em nvel nacional (ROSA; FRANCO;
CALIL, 2001; VEIGA-SANTOS; DITCHFIELD; TADINI, 2011).
No entanto, filmes elaborados com este tipo de material apresentam-se
quebradios e pouco resistentes, sendo necessria a incorporao de aditivos s
matrizes polimricas. Aditivos naturais tais como o amido, a celulose, a lignina, entre
outros, so usados em formulaes de plsticos convencionais (DOANE;
SWANSON; FANTA, 1992; ROSA; FRANCO; CALIL, 2001; VOLOVA, 2004).
Porm, pensando nas necessidades da indstria para este segmento, na qual
considera economicamente invivel o uso de biopolmeros, surge a necessidade de
desenvolver misturas polimricas biodegradveis que consistam numa mistura fsica
de dois ou mais materiais polimricos ou copolmeros que no so ligados por
ligaes covalentes (CALLISTER, 2002; REUSCH, 2013; ROSA; FRANCO; CALIL,
2001).
Deste modo, visando melhorar as propriedades trmicas e mecnicas dos
filmes biodegradveis, a produo de blendas de PHB/PEG foi proposta neste
estudo, uma vez que preservar a caracterstica biodegradvel do filme final um dos
pilares deste projeto, e o PEG por ter uma natureza hidroflica, aumenta a
biodegradao do PHB (QUENTAL et al., 2010).
Visando atender s necessidades de um mercado consumidor cada vez mais
exigente e especificamente preocupado com a qualidade e inocuidade dos produtos
alimentcios, surgem as embalagens inteligentes (SOUZA; DITCHFIELD; TADINI,
2010; VASCONCELOS, 2013), que alm de proteger, indicam uma caracterstica
especfica do alimento embalado para o consumidor e/ou fabricante, trazendo
vantagens em relao s embalagens convencionais (SOUZA; DITCHFIELD;
TADINI, 2010; VEIGA-SANTOS; DITCHFIELD; TADINI, 2011).
O reconhecimento dos benefcios das tecnologias de embalagens inteligentes
e ativas pela indstria de alimentos, o desenvolvimento de embalagens
economicamente viveis e a aceitao do consumidor exigem incentivar a pesquisa
para sua implantao comercial (ARENAS, 2012). Porm, as embalagens
conhecidas so, em geral, produzidas com material proveniente do petrleo
(ARVANITOYANNIS; BILLIADERIS, 1999).
17
Entre os diferentes tipos de embalagens inteligentes, encontram-se as

indicadoras de pH, que indicam uma relao entre o produto embalado e seu pH,
atravs de sensores qumicos ou fisicamente associados embalagem (ARENAS,
2012).
Os estudos sobre estes tipos de embalagens esto em sua fase inicial e a
grande maioria esto patenteados (ARENAS, 2012; DITCHFIELD; TADINI, 2009;
PONCE, 2008). Entretanto, raras so as patentes que abordam o uso de sensores
qumicos nas embalagens inteligentes provenientes de fonte natural, como o
pigmento flavonico antocianina; desta forma, outra proposta neste estudo, o uso
deste pigmento.
Aliado a este fato, pesquisas na literatura indicam que poucos so os estudos
que abordam as antocianinas do legume rabanete (Raphanus sativus), e muito
menos o teor de pigmento e mtodos de quantificao. Com base nisso, uma das
abordagens deste trabalho ser a avaliao destas questes neste legume.
18
2. OBJETIVOS
2.1
OBJETIVO GERAL
Produo de um filme plstico biodegradvel para aplicao como uma
embalagem inteligente para produtos alimentcios, indicadora da qualidade de

consumo e sua validade, utilizando um biopolmero dopado com o pigmento natural
antocianina.
2.2
OBJETIVOS ESPECFICOS
Realizar a extrao de antocianinas e determinar o mtodo ideal de
conservao do extrato;
Determinar o melhor mtodo de quantificao do teor de antocianinas
extradas, considerando os fatores de infraestrutura e tempo disponvel, alm de

fatores econmicos, por exemplo;
Produzir um filme biopolimrico utilizando o mtodo de casting;
Analisar as formas de reforo plausveis para o biopolmero;
Analisar a interao da antocianina com o biopolmero, e avaliar a
influncia na ao como agente plastificante e/ou de melhoramento, alm do uso de

agentes plastificantes;
Avaliar a atividade sensorial de colorao no filme, comparando
diferentes concentraes de dopagem.
19
3. REVISO BIBLIOGRFICA
3.1
EMBALAGENS PLSTICAS
Os materiais polimricos so slidos, no-metlicos de alto peso molecular
compostos de repetidas macromolculas com diferentes caractersticas dependendo

de sua composio (CALLISTER, 2002; SHENOY, 1999). Cada macromolcula que
compe um material polimrico conhecida por uma unidade chamada monmero,
enquanto molculas gigantes que apresentam repetidas unidades, formando cadeias
longas, so conhecidas como polmeros, palavra derivada do grego (poli muitos e
meros partes) (ATKINS; JONES, 2006; CANEVAROLO, 2006; KOLYBABA et al.,
2003). Estas macromolculas esto presentes no cotidiano de cada ser vivo, como
as cadeias de DNA e RNA (BANEGAS, 2008).
Estas substncias podem ser classificadas como homopolmeros (formados
pela mesma unidade de repetio) e copolmeros (com duas ou mais unidades
diferentes). So descritas basicamente trs formas de organizao da estrutura
molecular: linear, ramificada ou em rede (formando ligaes cruzadas) conforme
possvel observar na Figura 3.1 (BANEGAS, 2008; WILLIAMS; WOOL, 2000).
Figura 3.1. Tipos de cadeias polimricas (Adaptado de BANEGAS, 2008)
Alm disso, estas molculas tambm podem ser classificadas de acordo com
sua origem, em naturais ou sintticas (PACHEKOSKI, 2010).
Uma variedade de materiais (renovveis e no-renovveis) so empregados
como fonte de matria-prima para materiais polimricos modernos. Os plsticos so
um exemplo claro disso, dos quais os que so formados a partir de matrias-primas
no-renovveis so geralmente de origem fssil, tendo formato de um compsito em
que a matriz polimrica apresenta uma fase dominante com uma base praticamente
20
impenetrvel, em torno de materiais de enchimento como fibras de vidro ou de

carbono (WILLIAMS; WOOL, 2000).
Cerca de 30% dos plsticos de fontes no-renovveis, como o petrleo, so
utilizados como embalagens (ABIPLAST, 2012; SIRACUSA et al., 2008), sendo os
mais utilizados o polietileno tereftalato (PET), policloreto de vinila (PVC), polietileno
(PE), polipropileno (PP), poliestireno (PS) e poliamida (PA). Isto, porque tais
materiais
apresentam
caractersticas
teis
como
maleabilidade,
leveza,
transparncia, facilidade de impresso, boa selagem trmica, resistncia a trao e

barreira ao oxignio (ABIPLAST, 2012; SIRACUSA et al., 2008; SOUZA et al., 2010).
Porm, esses plsticos convencionais so resistentes biodegradao
(KOLYBABA et al., 2003; ROSA et al., 2002) gerando um srio problema de poluio
ambiental (ARVANITOYANNIS; BILIADERIS, 1999; KOLYBABA et al., 2008;
SIRACUSA et al., 2008; THARANATHAN, 2003), uma vez que a matria-prima
utilizada considerada inerte ao ataque imediato de micro-organismos (CASARIN,
2013; HEMJINDA, 2007). Alm disso, quando utilizados como embalagens, sua vida
til muito curta e, aps o seu descarte, podem demorar at 100 anos ou mais, para
a decomposio total (ROSA; FRANCO; CALIL, 2001; SIRACUSA et al., 2008;
SOUZA, DITCHFIELD; TADINI, 2010).
A cidade de So Paulo gera mais de 16 mil toneladas por dia de resduos
slidos, dos quais mais de 700 toneladas so constitudas por embalagens plsticas
(JACOBI; BESEN, 2011). Uma das formas utilizadas no Brasil para o descarte de
resduos a adoo generalizada de lixes, os quais consistem de lanamento de
resduos ao solo, a cu aberto (MALMONGE; BELEM, 2007), o que pode causar
danos ao meio ambiente e problemas de sade pblica (ROSA et al., 2003). A
Poltica Nacional de Resduos Slidos PNRS, criada pela Lei n 12.305, de 02 de
agosto de 2010, criou o Plano Nacional de Resduos Slidos, que regulamenta as
formas ideias de descarte de resduos slidos, procurando erradicar os problemas
decorrentes da adoo de lixes para descarte (MINISTRIO DO MEIO AMBIENTE,
2010).
A produo brasileira anual de polmeros sintticos de aproximadamente
2,2 milhes de toneladas, das quais 37,64 % destinam-se indstria de
embalagens, representando uma produo estimada de R$ 13,8 bilhes (ABRE,
2009). Dentre as embalagens, 50% se destinam ao setor alimentcio (BUCCI, 2003).
21
O processo de reciclagem de embalagens plsticas muitas vezes se torna

invivel economicamente, uma vez que o emprego de resinas e aditivos
plastificantes especficos, para diferentes aplicaes esperadas, torna o processo
caro, alm do fato de que o material no pode ser reciclado inmeras vezes
(SPINAC; PAOLI, 2005).
3.2
EMBALAGENS BIODEGRADVEIS
A American Society for Testing of Materials (ASTM, 2011) e a International
Organization for Standardization (ISO,2005) definem plsticos degradveis como

aqueles que sofrem uma mudana significativa na estrutura qumica sob condies
ambientais especficas. Estas alteraes resultam em uma perda das propriedades
fsicas e mecnicas, medidas por meio de mtodos padronizados.
Nos plsticos biodegradveis ocorre um processo intrnseco, pelo qual microorganismos e suas enzimas consomem este polmero como fonte de nutrientes, em
condies normais de umidade, temperatura e presso (KOLLER et al., 2012).
Entende-se por biodegradao como um processo natural onde compostos
orgnicos, pelo intermdio de mecanismos bioqumicos, so convertidos em
compostos mineralizados simples e, ento, redistribudos no meio ambiente, atravs
de ciclos elementares, tal como o do carbono, nitrognio e enxofre (BLAZEK, 2012;
BUCCI, 2003; MOTTIN, 2011; ROSA et al., 2003).
O processo de biodegradao depende de diversos fatores, como a atividade
microbiana no ambiente, temperatura, pH, peso molecular e cristalinidade do
polmero (KOLLER et al., 2012).
As embalagens feitas de materiais biodegradveis representam uma boa
alternativa para a diminuio da poluio ambiental causada pelas embalagens
plsticas convencionais derivadas do petrleo (ARVANITOYANNIS; BILIADERIS,
1999; SIRACUSA et al., 2008; THARANATHAN, 2003).
Essa problemtica ambiental dos polmeros sintticos tem incentivado
pesquisas no mundo inteiro (Itlia, Irlanda, Frana, Grcia, Brasil, E.U.A) e indstrias
do ramo no sentido de incrementar ou desenvolver materiais polimricos
biodegradveis, especialmente, aqueles baseados em produtos de origem biolgica,
22
visando desenvolver embalagens que sejam benficas tanto para o usurio quanto
para o meio-ambiente (SIRACUSA et al., 2008).
Entre as vantagens da utilizao de embalagens biodegradveis quando
comparadas s no-biodegradveis, destacam-se: o processo de fabricao
envolvendo somente a utilizao de substncias atxicas; a utilizao de matriasprimas proveniente de fontes renovveis; alta biodegradabilidade e, adicionalmente,
a biomassa resultante da biodegradao da embalagem que pode agir como
fertilizante (THARANATHAN, 2003).
Polmeros biodegradveis provenientes de fontes agrcolas tm a capacidade
de misturar-se e/ou processar-se com polmeros de outras fontes para resultar no
material desejado. A sua funcionalidade pode ser melhorada usando-o em
combinao com outras matrias-primas, tais como plastificantes e aditivos
(BLAZEK, 2012; ROSA; FRANCO; CALIL, 2001; THARANATHAN, 2003; VOLOVA,
2004).
O desempenho esperado dos materiais polimricos biodegradveis utilizados
na embalagem de alimentos que alm de cont-los, os proteja do ambiente e
mantenha a sua qualidade (ABRE, 2009; ARVANITOYANNIS; BILIADERIS 1999).
O polmero biodegradvel natural derivado de quatro fontes principais:
animal (colgeno/gelatina), frutos do mar (quitina/quitosana), microbiana (cido
poliltico ou PLA e polihidroxialcanoatos ou PHA) e origem agrcola (lipdios e
hidrocolides,
protenas
polissacardeos)
(KOLYBABA
THARANATHAN, 2003), como mostrado na Figura 3.2.
et
al.,
2008;
23
Figura 3.2. Fontes naturais dos polmeros biodegradveis usados em filmes para embalagens e
materiais compsitos (Adaptado de THARANATHAN, 2003)
No final do seu perodo til, materiais polimricos biodegradveis geralmente

so enviados para aterros sanitrios ou sistemas de compostagem (KOLYBABA et
al., 2008). O atributo de compostagem muito importante para esses materiais
porque, enquanto a reciclagem energicamente custosa, a compostagem permite a
eliminao das embalagens no solo, contrrio aos plsticos provenientes da
indstria petroqumica (ARENAS, 2012).
Micro-organismos so capazes de consumir esses materiais em sua
totalidade entre 6 e 12 meses gerando, por meio de hidrlise, apenas H2O, CO2 ou
CH4 e biomassa, sem resduos txicos (KOLLER et al., 2012; KOLYBABA et al.,
2008; SIRACUSA et al., 2008).
A velocidade de biodegradao depende da temperatura, umidade, nmero e
tipo de micro-organismo (aerbio e anaerbio). O objetivo dos polmeros
biodegradveis imitar o ciclo de vida da biomassa, que inclui a conservao dos
recursos fsseis, gua e produo de CO2 (THARANATHAN. 2003). O ciclo do
carbono com a degradao do polmero biodegradvel mostrado na Figura 3.3.
24
Figura 3.3. Ciclo do carbono de polmeros biodegradveis (THARANATHAN, 2003)
Poli(3-hidroxibutirato)
O Poli(3-hidroxibutirato), conhecido pela sigla PHB, um composto da classe
dos biopolmeros de origem microbiana, denominada polihidroxialcanoatos, que so
polisteres alifticos, tambm denominados bioplsticos (KOLLER et al., 2012;
PRADELLA, 2006). Por ser de origem microbiana, estes compostos servem a muitas
bactrias como uma reserva de energia (e carbono) intracelular, e pode ser
consumido por enzimas para obteno de energia quando necessrio (COUTINHO
et al., 2004), sendo uma das principais caractersticas de biodegradao.
Os membros desta famlia de termoplsticos, os biopolmeros, os quais tm
uma estrutura geral conforme a Figura 3.4, podem apresentar uma variao em suas
propriedades materiais, dependendo do grupo alquila R ligado cadeia, e da
composio do polmero (BUCCI, 2003).
H
O
OH
n
Figura 3.4. Frmula geral dos Polihidroxialcanoatos (Adaptado de BUCCI, 2003)
O polmero com o grupo CH3 na posio R o cido 3-hidroxibutrico,

comumente poli(hidroxibutirato), e possui peso molecular relativamente alto
25
(BLAZEK, 2012; VOLOVA, 2004). Foi descoberto inicialmente pelo microbiologista

francs Maurice Lemoigne, em 1925, ao observar gros insolveis inclusos no fludo
citoplasmtico de cultura de Bacillus megaterium, comuns em lipdios, e assim
constatou um polister tendo uma frmula emprica (C4H6O2)n (BUCCI, 2003;
MOTTIN, 2011), conforme a Figura 3.4.
As frmulas estruturais do monmero cido 3-hidroxibutrico e do polmero
PHB so ilustradas na Figura 3.5.
CH3
H3C
OH
HO
(a)
(b)
Figura 3.5. Frmula estrutural do (a) cido 3-hidroxibutrico e (b) PHB [Poli(cido 3-hidroxibutrico)]
(Adaptado de BUCCI, 2003)
Porm, sua rigidez e baixa resistncia ao impacto tem dificultado muito sua
utilizao. Entretanto, os copolmeros de PHB possuem melhores propriedades
mecnicas (BLAZEK, 2012; CASARIN et al., 2013; ROSA; FRANCO; CALIL, 2001).
3.3
EMBALAGENS INTELIGENTES
A funo primria de toda embalagem proteger o contedo de alimentos
contra danos fsicos, ganho ou perda de umidade, oxidao e deteriorao biolgica.

A funo secundria a de facilitar a distribuio do produto para o consumidor.
Alm disso, tambm favorece o marketing eficaz dos alimentos atravs de canais de
distribuio e venda (ABRE, 2009).
a embalagem que deve transmitir, em apenas 3 segundos, a qualidade do
produto, os seus diferenciais e cativar o consumidor para peg-lo em sua mo e
coloc-lo em seu carrinho de compras (ABRE, 2009).
Tendo em mente a ideia de expressar a qualidade do produto, surgem as
embalagens ativas e as inteligentes. Embalagens ativas interagem com o alimento
ou modificam a atmosfera interna a qual o produto est exposto ajudando na sua
preservao (DOBRUCKA; CIERPISZEWSKI, 2014; VASCONCELOS, 2013).
26
Embalagens inteligentes so aquelas que, alm de proteger, reagem de

alguma forma s mudanas em algumas das propriedades do alimento embalado,
ou do ambiente no qual est exposto (DOBRUCKA; CIERPISZEWSKI, 2014;
SUGIMOTO, 2008), em virtude da incorporao de indicadores ou sensores que
produzem um sinal como resposta a qualquer alterao das condies iniciais da
embalagem, dando informaes ao fabricante e ao consumidor sobre o estado
dessas propriedades e, portanto, de qualidade dos alimentos embalados
(VASCONCELOS, 2013).
Assim, embalagens inteligentes fazem mais do que apenas proteger o
produto, identificando e evidenciando em tempo real suas mudanas (AZEREDO;
FARIA; AZEREDO, 2000; ROBERTSON, 2006). Embora diferente do conceito de
embalagens ativas, caractersticas de embalagens inteligentes podem ser utilizadas
para verificar a eficcia e a integridade dos sistemas de embalagens ativas (SOUZA;
DITCHFIELD; TADINI, 2010).
Arenas (2012) afirma que
Fatores essenciais para a aplicao de embalagens inteligentes so:
o custo, a robustez e a compatibilidade com os diferentes materiais
de embalagem. Para estes sistemas de embalagem ser prticos, eles
devem ser fceis de usar, eficazes e ter bom custo-benefcio.
A data de validade dos alimentos estimada pelas indstrias considerando

condies de distribuio e armazenamento (especialmente temperatura) para a
qual o produto alimentar est previsto ser submetido (INSTITUTO BRASILEIRO DE
DEFESA DO CONSUMIDOR, 201?).
Os indicadores ou sensores nas embalagens permitem aos consumidores
terem confiana no produto a ser comprado. Alm disso, empresas podem verificar e
abordar os pontos negativos na cadeia de abastecimento de seus produtos, havendo
a possibilidade de reduo dos mesmos (DOBRUCKA; CIERPISZEWSKI, 2014).
Microporos e defeitos de vedao em sistemas de embalagem podem levar
produtos alimentares para uma inesperada exposio alta ao oxignio, o que pode
resultar em indesejveis mudanas, principalmente a multiplicao de microorganismos durante o armazenamento dos alimentos (ARENAS, 2012; DOBRUCKA;
CIERPISZEWSKI, 2014).
27
Os indicadores de frescor monitoram a qualidade dos alimentos embalados e

reagem a mudanas que ocorrem no produto devido ao crescimento microbiolgico
(ARENAS, 2012).
Conforme relatado por Smolander (2008) sobre os indicadores de frescor para
embalagens
de
alimentos,
um
pr-requisito
crucial
para
sucesso
no
desenvolvimento deste tipo de indicadores o conhecimento dos metablitos

indicadores de qualidade, que podem ser compostos volteis, por exemplo, produtos
volteis de origem microbiana, tais como dixido de carbono, compostos
nitrogenados, aminas biognicas, toxinas, bem como bactrias patognicas em si.
Os estudos que envolvem embalagens inteligentes, na sua grande maioria, j
esto patenteados. Muitas pesquisas tm sido empreendidas em uma ampla gama
de disciplinas, sendo que a grande maioria de embalagens inteligentes indicadoras
de frescor de alimentos utiliza corantes qumicos sintticos e est relacionada
aplicao em polmeros derivados do petrleo (SOUZA; DITCHFIELD; TADINI,
2010; VEIGA-SANTOS; DITCHFIELD; TADINI, 2011).
Arenas (2012) desenvolveu uma embalagem inteligente base da fcula da
mandioca, formando um filme compsito de amido/argila, e integrou o pigmento
antocianina em sua estrutura, e avaliou a aplicao deste para o mercado de peixes
e produtos crneos. Este um dos poucos trabalhos encontrados na literatura que
empregam o pigmento natural antocianina como sensor qumico para embalagens
inteligentes.
Entre os indicadores visuais, encontram-se os indicadores de pH, tambm
chamados indicadores cido-base, os quais so substncias orgnicas fracamente
cidas ou fracamente alcalinas que apresentam cores diferentes para suas formas
protonadas e desprotonadas. Quando adicionados a uma soluo, os indicadores de
pH ligam-se aos ons H3O+ ou OH-. A ligao a estes ons provoca uma alterao da
configurao eletrnica destes indicadores e, consequentemente, altera-lhes a cor.
Estes corantes so dotados de propriedades halocrmicas, que a capacidade de
mudar de colorao em funo do pH do meio (FAULKNER, 2006; VOGEL, 1979).
Devido deteriorao dos alimentos geralmente estar acompanhada por uma
mudana do pH e, a inviabilidade do consumidor detectar e conhecer qual o pH
adequado de um alimento, um sistema de embalagem que muda de cor com a
28
alterao do pH do alimento embalado poderia permitir ao consumidor avaliar seu

frescor e qualidade, sem a necessidade de abrir a embalagem, no prprio local de
compra (VEIGA-SANTOS; DITCHFIELD; TADINI, 2011).
Assim, a pesquisa de embalagens indicadoras de pH muito promissora,
porm est em seus estgios iniciais, especialmente no que se diz respeito aos
filmes polimricos biodegradveis (SOUZA; DITCHFIELD; TADINI, 2010; VEIGASANTOS; DITCHFIELD; TADINI, 2011).
3.4
ELABORAO DE FILMES
Dentre os processos plausveis de elaborao de filmes em laboratrio,
destaca-se o mtodo de casting. Neste mtodo, tambm nomeado como mtodo de

deposio por espalhamento de soluo (BIANCHI, 2002), a soluo contendo a
molcula fotoativa espalhada sobre substratos com o auxlio de uma pipeta e em
seguida, o solvente eliminado por evaporao (com o aumento ou no da
temperatura), resultando na formao de uma pelcula (filme) do material desejado
(ARENAS, 2012). Embora simples de ser realizada, a qualidade dos filmes depende,
fortemente, de parmetros como a temperatura, a taxa de aquecimento, a
concentrao da soluo e o solvente utilizado. A vantagem deste mtodo a
obteno de filmes uniformes de variadas espessuras (BIANCHI, 2002; HUERTA,
200-). A Figura 3.6 mostra um sistema de elaborao de filmes por meio de casting
com controle de temperatura.
29
Figura 3.6. Sistema de elaborao de filmes por meio de casting com controle de temperatura
(BIANCHI, 2002)
Neste sistema, os substratos so colocados sobre uma chapa aquecedora, ou

em uma estufa, onde tambm est acoplado um controlador de temperatura. A
soluo do polmero derramada sobre as lminas de vidro que, posteriormente,
so lentamente aquecidas at uma temperatura prxima temperatura de ebulio
do solvente, onde permanecem at ficarem totalmente secos (BIANCHI, 2002). Este
mtodo especialmente recomendado para laboratrios que no dispem de muitos
aparatos ou equipamentos mais desenvolvidos para elaborao de filmes devido ser
um mtodo rpido, fcil e eficaz quando bem controlado.
3.5
ANTOCIANINAS
As antocianinas so pigmentos derivados de sais flavlicos (flavonoides),
solveis em gua, responsveis pela ampla gama de cores azul, violeta, vermelho e
rosa da maioria de flores e frutos (BARRETO; FILHO; CRAVEIRO, 2005;
STRINGHETA; BOBBIO, 2000). Os mais de 450 tipos de antocianinas que foram
isoladas e caracterizadas, tambm esto presentes em algumas folhas, razes,
bulbos, tubrculos, sementes, caules, cereais e legumes (FREITAS, 2005; GOULD;
DAVIES; WINEFIELD, 2008).
O termo antocianina, derivado das palavras gregas anthos (flor) e kyanos
(azul), foi introduzido em 1835 por Ludwig Clamor Marquat, para designar
substncias azuis extradas de algumas flores (FAVARO, 2008; NOVELLO, 2011).
30
Atualmente, o termo empregado para indicar genericamente toda esta famlia de

pigmentos naturais, independentemente da colorao que possam apresentar
(FREITAS, 2005; GOULD; DAVIES; WINEFIELD, 2008; STRINGUETA; BOBBIO,
2000).
Aps a clorofila, as antocianinas so o mais importante grupo de pigmentos
de origem vegetal (LOPES et al., 2007). Compem o maior grupo de pigmentos
solveis em gua do reino vegetal e so encontradas em maior quantidade nas
angiospermas (BRIDLE; TIMBERLAKE, 1997), plantas que possuem sementes
protegidas pelo fruto (MONIZ, 2014; RAVEN; EVERT; EICHHORN, 1996; STEVENS,
2014).
Na natureza, as antocianinas encontram-se associadas a molculas de
acares, caracterizando um composto glicosdico, formado pela unio de molculas
de glcido glicdeos e gliconas e um composto no glucdico, chamado de
aglicona;
quando
livres
destes
acares
so
denominadas
antocianidinas
(agliconas) (FAVARO, 2008; STRINGHETA; BOBBIO, 2000).

Diferentemente das clorofilas e dos carotenoides, a absoro eletrnica das
antocianinas est distribuda por toda a regio visvel do espectro eletromagntico
(400 nm 700 nm) (BRIDLE; TIMBERLAKE, 1997; FREITAS, 2005).
A infinidade de cores observadas nas antocianinas e antocianidinas produto
de combinaes de vrios fatores, como o pH local do meio (SONDHEIMER;
KERTESZ, 1948), o nmero de substituintes, a presena ou no de outras
molculas capazes de estabilizar a cor (co-pigmentos), a associao com outros
flavonis, a complexao, a autoassociao e a natureza do microambiente em que
a antocianina se encontra (FREITAS, 2005).
As funes biolgicas das antocianinas nas plantas, flores e frutos so de
proteo ao da luz, antioxidantes e atuao de mecanismos de defesa
(BAKOWSKA-BARCZAK, 2005; NOVELLO, 2011). As cores vivas e intensas que
elas produzem tm um papel importante nos mecanismos reprodutores das plantas,
tais como a polinizao e a disperso de sementes (BAKOWSKA-BARCZAK, 2005;
FREITAS, 2005).
A estrutura qumica bsica das antocianinas apresentada na Figura 3.7.
31
R
OH
32-
HO
5-
6-
8
7
4-
2
3
OR
1
OR
Figura 3.7. Estrutura qumica das antocianinas (Adaptado de STRINGHETA; BOBBIO, 2000)
Devido a mudanas nos grupos ligados sua estrutura fenlica, existe uma
enorme diversidade de antocianinas encontradas na natureza, o que confere as
diferentes cores que ocorrem em vrias frutas, flores e folhas (TERCI; ROSSI,
2002).
As antocianinas podem estar associadas a glcidos constitudos por
diferentes acares nas posies 3, 5 e 7, mas sempre ocorre associao na
posio C-3 (R2) por glicose, arabinose, galactose e ramnose, os quais so os
acares mais comuns ligados as antocianinas. Dissacardeos e trissacardeos,
formados pela combinao destes quatro monossacardeos, podem tambm
associar-se a algumas antocianidinas (BRIDLE; TIMBERLAKE, 1997). Em muitos
casos, os acares so acilados pelos cidos p-cumrico, cefeico, ferlico e sinpico
(GOULD; DAVIES; WINEFIELD, 2008).
Na Tabela 3.1 so mostradas as estruturas qumicas das antocianinas e
algumas fontes das mesmas. Nas plantas que fazem parte da alimentao, as
antocianinas se encontram difundidas, no mnimo em 27 famlias, 73 gneros e em
uma grande variedade de espcies (BRIDLE; TIMBERLAKE, 1997).
32
Tabela 3.1. Estruturas, nomes e fontes na natureza das principais antocianinas (Adaptado de LOPES
et al., 2007)
Estrutura do ction
flavilium
Estrutura do
anel B
Nome
Encontrado em
Pelargonidina
Morango, amora
vermelha, bananeira,
rabanete.
Cianidina
Jabuticaba, figo, cereja,

uva, cacau, ameixa.
Delfinidina
Berinjela, rom e
maracuj.
Malvidina
Uva, feijo.
Peonidina
Uva, cereja.
Petunidina
Frutas diversas,
petnias.
Influncia do pH
bem conhecido que as propriedades das antocianinas, incluindo a
expresso da cor, so altamente influenciadas pela estrutura da antocianina e o pH
(LOPES et al., 2007).
Em meios cidos, quatro estruturas de antocianinas existem em equilbrio: o
ction flavilium, a base quinoidal, a pseudobase carbinol e a chalcona. O pH do meio
exerce um papel muito importante no equilbrio entre as diferentes formas de
antocianinas e, consequentemente, na modificao da cor (LOPES et al., 2007;
STRINGHETA; BOBBIO, 2000).
Em condies cidas (pH inferior a 3), a antocianina existe primariamente na
forma de ction flavilium de cor vermelha intensa. Com o aumento do pH ocorre a
33
rpida perda do prton para produzir as formas quinoidais, azuis ou violetas. Em

paralelo ocorre a hidratao do ction flavilium, gerando a pseudobase incolor ou
carbinol que atinge o equilbrio lentamente com a chalcona incolor ou amarelo tnue.
As quantidades relativas de ction, formas quinoidais, pseudobase e chalcona na
condio de equilbrio variam conforme o pH e a estrutura da antocinanina (GOULD;
DAVIES; WINEFIELD, 2008; LOPES et al., 2007; STRINGHETA; BOBBIO, 2000).
As reaes de equilbrio entre as estruturas antocinicas so todas
endotrmicas, portanto, qualquer aumento de temperatura favorece a forma
chalcona (FALCO et al., 2007; STRINGHETA; BOBBIO, 2000).
Como j esclarecido, devido sua grande instabilidade, a molcula de
antocianina, pode facilmente sofrer mudanas estruturais com a variao do pH,
interagindo com ons H3O+, OH- e a gua. Podem tambm sofrer alteraes de
acordo com o meio solvente se prtico ou aprtico, explicadas pelo esquema das
principais transformaes na Figura 3.8.
Assim, estudos sobre a estabilidade das antocianinas e a variao de cor com
o pH mostram que as alteraes na cor desses compostos so mais significativas na
regio alcalina devido sua instabilidade (NOVELLO, 2011).
A estabilizao qumica das antocianinas o principal foco de estudos
recentes, devido s suas aplicaes abundantes e potenciais, seus efeitos benficos
e sua utilizao como alternativa a corantes artificiais (VOLP et al., 2008)
Indicadores de pH sintticos como o verde de bromocresol, fenolftalena e
vermelho de metila, entre outros podem ser empregados para tais fins, porm, o
contato com alimentos e a migrao desses compostos no produto so questes
particularmente importantes para o uso de indicadores de pH sintticos e a sua
quantidade para utilizao sempre limitada. O emprego de pigmentos sintticos,
muito dos quais derivados de petrleo tm sido severamente restringidos pelos
pases desenvolvidos (SOUZA; DITCHFIELD; TADINI, 2010).
Deste modo, compostos naturais, tais como os carotenoides e antocianinas
apresentam potencial indicador de pH e devem ser estudados (TERCI; ROSSI,
2002).
34
Figura 3.8. Possveis mudanas estruturais das antocianinas de acordo com o pH (TERCI; ROSSI,
2002)
Estabilidade da cor
Os grupos metoxila e hidroxila, alm da presena do acar e do cido, tm
um efeito importante sobre a cor e a estabilidade das antocianinas (GOULD;
DAVIES; WINEFIELD, 2008).
A antocianina poder ter diferentes cores, dependendo do pH, da estrutura e
da concentrao dos pigmentos, da temperatura de armazenamento e da presena
de oxignio, luz e co-pigmentos (FALCO et al., 2007; GOULD; DAVIES;
WINEFIELD, 2008; TERCI; ROSSI, 2002).
Com o aumento do nmero de hidroxilas, a colorao das antocianinas muda
de rosa para azul; a presena do grupo metoxila no lugar da hidroxila reverte a
tendncia anterior (GOULD; DAVIES; WINEFIELD, 2008).
A presena de um ou mais grupos acila na molcula de antocianina inibe a
hidrlise do ction flavilium (vermelho) para formar a base carbinol (incolor),
permitindo a formao preferencial da base quinoidal (azul), resultando em
35
pigmentos menos sensveis s mudanas de pH (ou seja, eles mantm a colorao

em meio levemente acidificado a neutro) (BRIDLE; TIMBERLAKE, 1997)
As antocianinas isoladas so altamente instveis e muito suscetveis
degradao. A sua estabilidade maior sob condies cidas, mas pode ocorrer
degradao por vrios mecanismos, iniciando com perda da cor, seguida do
surgimento de colorao amarelada e formao de produtos insolveis (GOULD;
DAVIES; WINEFIELD, 2008; STRINGHETA; BOBBIO, 2000).
Extrao
O mtodo de extrao, bem como o solvente utilizado na extrao das
antocianinas, se tornam fatores importantes no teor desses compostos no extrato
(NOVELLO, 2011). Alm disso, importante que seja um mtodo simples, rpido, de
baixo custo e que utilize solventes extratores atxicos, uma vez que muitos dos
estudos so feitos visando a aplicao industrial (FAVARO, 2008).
As antocianinas so solveis em gua podendo ser facilmente ser extradas
por solvente polares. Dentre os solventes mais utilizados, destacam-se o metanol e
o etanol (FAVARO, 2008; HOHNOV; AVKOV; KARSEK, 2008). Muitos
trabalhos tm usado solventes extratores alcolicos acidificados (HOHNOV;
AVKOV; KARSEK, 2008; TERCI; ROSSI, 2002) para favorecer a extrao,
pois auxilia a penetrao do solvente no tecido das frutas e vegetais, alm de
aumentar a estabilidade do extrato (NOVELLO, 2011).
O grau de extrao depende de muitos fatores, como a relao estabelecida
entre volume do solvente e massa de matria-prima, o solvente empregado e do
agente acidulante (LOPES et al., 2007; NOVELLO, 2011). Os mtodos
convencionais de extrao usualmente empregam cido clordrico diludo em
metanol, em uma concentrao de 0,001% (v/v) de HCl. Porm, o HCl corrosivo e
o metanol txico para o ser humano, o que pode inviabilizar o processo (LOPES et
al., 2007).
Assim, recomendado o uso de cidos fracos, como actico e frmico, alm
da monitorao da acidez durante o processo (BRIDLE; TIMBERLAKE, 1997).
No entanto, o uso de solventes cidos deve ser cauteloso, uma vez que o
excesso de cido pode formar antocianidinas e outros flavonoides por hidrlise.
36
Outro fator para a cautela, que estudos indicaram que a quantidade de

antocianinas pode assumir valores equivocados, especialmente se o mtodo de
quantificao
empregado
for
espectrofotomtrico
(HOHNOV;
AVKOV;
KARSEK, 2008).
O aquecimento durante a extrao outro aspecto em que se deve ser
cauteloso, pois estudos indicaram que as antocianinas so termicamente instveis
em temperaturas superiores 60C (FAVARO, 2008).
3.6
RABANETE (Raphanus sativus)

O rabanete, cujo nome cientfico Raphanus sativus, pertencente famlia
das Brassicaceae, uma planta herbcea, anual, de pequeno porte, com folhas
verdes dispostas em roseta e flores de apenas quatro ptalas encontradas em tons
de branco, rosa e roxo. originria da regio mediterrnea (MELO et al., s.d.). Sua
raiz globular comestvel, de cor vermelha e sabor picante (RODRIGUES et al.,
2013). A substncia 4-metiltio-3-butenil isocianato o princpio para o gosto
caracterstico desta hortalia (LUENGO, 2001). A aparncia do legume mostrada
na Figura 3.9.
Figura 3.9. Aparncia comum dos rabanetes (MELO et al., s.d.)
Este legume conserva-se melhor em temperatura um pouco acima de seu

ponto de congelamento (-0,7C) ao redor de 0C sob elevada umidade relativa,
geralmente acima de 95% (LUENGO, 2001).
Apresenta propriedades medicinais interessantes, como expectorante natural
e estimulante do sistema nervoso, contendo vitaminas A, C, B1, B2, B6, cido flico,
37
potssio, clcio, fsforo e enxofre, elevada quantidade de fibras alimentares,

atividade antioxidante e baixa quantidade de calorias (MELO et al., s.d.).
A produo de rabanete no Brasil varia de 15 a 30 toneladas de razes
tuberosas por hectare ou 16.000 a 20.000 maos por hectare. Sua produo est
mais concentrada nos estados das regies Sul e Sudeste, por estar adaptada ao
clima da regio (APHORTESP, 2014).
3.7
ESPECTROFOTOMETRIA DE ABSORO MOLECULAR

A espectrofotometria de absoro molecular, assim como outras tcnicas
espectroscpicas, emprega as interaes da radiao com a matria para obter

informaes sobre uma amostra. Muitos elementos qumicos foram descobertos por
meio da espectroscopia (FILGUEIRAS, 1996; HIEFTJE, 2013; RESENDE; LIMA;
SANTOS, 2013). De alguma forma, a amostra geralmente estimulada aplicando-se
energia na forma de calor, energia eltrica, luz, partculas ou por uma reao
qumica. Antes de se aplicar o estmulo, o analito se encontra predominantemente
em seu estado de energia mais baixo ou estado fundamental. O estmulo ento faz
que algumas espcies do analito sofram uma transio para um estado de maior
energia ou estado excitado. Obtemos informaes sobre o analito medindo-se a
radiao eletromagntica emitida quando este retorna ao estado fundamental ou a
quantidade de radiao eletromagntica absorvida decorrente da excitao
(HIEFTJE, 2013; VOGEL, 1979).
A espectroscopia molecular baseada na radiao UV, visvel e IV
amplamente empregada para a identificao e determinao de muitas espcies
inorgnicas, orgnicas e bioqumicas. A espectroscopia de absoro UV/visvel
utilizada principalmente para anlises quantitativas e provavelmente aplicada nos
laboratrios qumicos e clnicos ao redor do mundo mais que qualquer outro mtodo
(HIEFTJE,2013). A espectroscopia de absoro de infravermelho uma ferramenta
poderosa para se determinar a estrutura de compostos inorgnicos e orgnicos.
Alm disso, desempenha atualmente um importante papel na anlise quantitativa,
particularmente na rea da poluio ambiental (HIEFTJE, 2013; SALDANHA;
ARAJO, 1999).
Cada espcie molecular capaz de absorver suas prprias frequncias
caractersticas da radiao eletromagntica. Esse processo transfere energia para a
38
molcula e resulta em um decrscimo da intensidade da radiao eletromagntica

incidente (FILGUEIRAS, 1996; HIEFTJE, 2013). Dessa forma, a absoro da
radiao atenua o feixe de acordo com a lei da absoro, a Lei de Beer-Lambert ou
somente Lei de Beer, como expressa na Figura 3.10. Esta lei nos diz
quantitativamente como a grandeza da atenuao depende da concentrao das
molculas absorventes e da extenso do caminho sobre o qual ocorre a absoro
(HIEFTJE, 2013; VOGEL, 1979).
Figura 3.10. Lei de Berr-Lambert (Adaptado de HIEFTJE, 2013)
medida que a luz atravessa um meio contendo um analito que absorve, um

decrscimo de intensidade ocorre na proporo que o analito excitado. Para uma
soluo do analito de determinada concentrao, quanto mais longo for o
comprimento do caminho do meio atravs do qual a luz passa (caminho ptico),
mais centros absorventes estaro no caminho, e maior ser a atenuao (VOGEL,
1979). Tambm, para um dado caminho ptico, quanto maior for a concentrao de
absorventes, mais forte ser a atenuao (HIEFTJE, 2013).
Absoro de Compostos Orgnicos
A absoro de radiao por molculas orgnicas na regio de comprimento
de onda entre 180 e 780 nm resulta das interaes entre ftons e eltrons que esto
participando diretamente da formao de uma ligao qumica (e so, assim,
associados a mais de um tomo) ou esto localizadas sobre os tomos como os de
O, S, N e halognios (FILGUEIRAS, 1996; HIEFTJE, 2013; VOGEL, 1979).
39
O comprimento de onda no qual uma molcula orgnica absorve depende de

quo fortemente seus eltrons esto ligados. Os eltrons compartilhados em
ligaes simples carbono-carbono ou carbono-hidrognio esto to fortemente
presos que suas excitaes requerem energias correspondentes ao comprimento de
onda da regio do UV de vcuo, abaixo de 180 nm. Os espectros de ligaes
simples no tm sido amplamente explorados para as finalidades analticas em
razo das dificuldades experimentais de se trabalhar nessa regio. Essas
dificuldades ocorrem porque tanto o quartzo como os componentes da atmosfera
absorvem nessa regio, o que requer o uso de espectrofotmetros mantidos sob
vcuo com ptica de fluoreto de ltio (HIEFTJE, 2013; VOGEL, 1979).
Os eltrons envolvidos em ligaes duplas e triplas das molculas orgnicas
no esto to fortemente presos sendo, portanto, mais fceis de serem excitados
pela radiao; assim, as espcies com ligaes insaturadas geralmente exibem
picos de absoro teis. Os grupos orgnicos insaturados que absorvem nas
regies do UV e visvel so conhecidos como cromforos. A Tabela 3.2 lista alguns
cromforos comuns e os comprimentos de onda aproximados nos quais eles
absorvem. Os dados para a posio e intensidade podem servir apenas como
orientao aproximada para a finalidade de identificao, uma vez que ambos so
influenciados pelo efeito do solvente, bem como por outros detalhes estruturais da
molcula. Alm disso, a conjugao entre dois ou mais cromforos tende a causar
deslocamentos no mximo do pico para comprimentos de onda mais longos.
Finalmente, os efeitos vibracionais alargam os picos de absoro nas regies do UV
e visvel, o que frequentemente torna muito difcil a determinao precisa de um
mximo de absoro (HIEFTJE, 2013; VOGEL, 1979).
40
Tabela 3.2. Caractersticas de absoro de alguns cromforos orgnicos comuns (Adaptado de

HIEFTJE, 2013)
Composto
Alceno
Alceno conjugado
Alcino
Carbonila
Solvente
mx, nm
mx
CHC6H13
n-Heptano
177
13.000
CHCH CH2
n-Heptano
217
21.000
n-Heptano
178
10.000
196
2.000
225
160
n-Hexano
186
280
1.000
16
Etanol
204
41
gua
214
60
Etanol
339
Exemplo
H2C
H2C
H11C6
C CH3
O
H3CCCH3
Carboxila
O
H3CCOH
Amido
O
H3CCNH2
Azo
H3CN
NCH3
Nitro
H3CNO2
Isocianato
280
22
Nitroso
H9C4 NO
ter etlico
300
665
100
20
Nitrato
H5C2 O NO2
Dioxano
270
12
Benzeno
n-Hexano
204
256
7.900
200
Aromtico
Os compostos orgnicos saturados contendo heterotomos, como O, N, S ou

halognios, apresentam eltrons no-ligantes que podem ser excitados por radiao
na faixa de 170 a 250 nm. A Tabela 3.3 lista alguns exemplos desses compostos.
Alguns deles, como lcoois e os teres, so solventes comuns, portanto sua
absoro nessa regio impede a medida de absoro de analito dissolvidos nesses
compostos em comprimentos de onda mais curtos que 180 e 200 nm.
Ocasionalmente, a absoro nessa regio empregada para a determinao de
compostos contendo halognios e S (HIEFTJE, 2013; VOGEL, 1979).
41
Tabela 3.3. Absoro de compostos orgnicos contendo heterotomos insaturados (Adaptado de

HIEFTJE, 2013)
Composto
mx, nm
mx
H3COH
167
1.480
(H3C)2 O
184
2.520
H3CCl
173
200
H3C I
258
365
(H3C)2 S
229
140
H3C NH2
215
600
(H3C)3 N
227
900
Instrumentos para a Espectroscopia ptica

Os componentes bsicos dos instrumentos analticos para a espectroscopia
de absoro, bem como para espectroscopia de emisso e fluorescncia, so
notavelmente semelhantes em sua funo e nos seus requisitos de desempenho,
quer sejam desenhados para radiao ultravioleta (UV), visvel ou infravermelha (IV).
Em razo dessas semelhanas, esses instrumentos so frequentemente designados
por instrumentos pticos, mesmo sabendo-se que o olho humano sensvel
somente na regio do visvel (HIEFTJE, 2013; VOGEL, 1979).
Muitos instrumentos espectroscpicos para uso nas regies do UV/visvel e IV
apresentam cinco componentes: (1) uma fonte estvel de energia radiante; (2) um
seletor de comprimento de onda que isola uma regio limitada do espectro para a
medida; (3) um ou mais recipientes para a amostra; (4) um detector de radiao, o
qual converte a energia radiante para um sinal eltrico mensurvel; e (5) uma
unidade de processamento e de leitura do sinal, geralmente constituda por um
circuito eletrnico e, nos instrumentos modernos, por um computador (HIEFTJE,
2013; VOGEL, 1979).
3.8
DIFRAO DE RAIOS X
A difratometria, ou difrao, de raios X (DrX) corresponde a uma das
principais tcnicas de caracterizao microestrutural de materiais cristalinos,

encontrando aplicaes em diversos campos do conhecimento, mais particularmente
42
na engenharia e cincias de materiais, engenharias metalrgica, qumica e de

minas, alm de geocincias, dentre outros (ALBERS et al., 2002).
Esta tcnica de alta tecnologia, no destrutiva, e serve para analisar uma
larga escala de materiais, incluindo lquidos, metais, minerais, polmeros, plsticos,
frmacos, revestimentos, cermica, clulas solares e semicondutores. A DrX
transformou-se em um mtodo indispensvel para investigao, caracterizao e
controle de materiais. As reas de aplicao incluem a anlise de fase qualitativa e
quantitativa, a cristalografia, a determinao da estrutura e do abrandamento,
investigaes da textura e de residual, o ambiente da amostra controlado, a microdifrao, nano-materiais, a automatizao do laboratrio e de processo, entre outros
(BRUKER, 2010; UFRGS, 2014).
Os raios X atingem o material e podem ser espalhados elasticamente, sem
perda de energia pelos eltrons de um tomo (disperso ou espalhamento
coerente). O fton de raio X aps a coliso com o eltron muda sua trajetria,
mantendo, porm, a mesma fase e energia do fton incidente. Pode-se dizer que a
onda eletromagntica instantaneamente absorvida pelo eltron e reemitida; cada
eltron atua, portanto, como centro de emisso de raios X (ALBERS et al., 2002;
ERDCIA, 2011).
Isto possvel porque na maior parte dos slidos, geralmente cristais, os
tomos se ordenam em planos cristalinos separados entre si por distncias da
mesma ordem de grandeza dos comprimentos de onda dos raios X (ALBERS et al.,
2002).
A tcnica de difrao empregada depende de fatores como o tipo de aparato
utilizado, tipo de amostra e dos objetivos do experimento, alm de quais informaes
se deseja obter sobre a estrutura do material. Existem vrios mtodos de difrao de
raios X. Pode-se destacar entre eles o mtodo de Laue (para monocristais) e o
mtodo do p para amostras policristalinas. O mtodo de Laue o mais antigo e
simples, no entanto possui uma grande importncia histrica. Utiliza um fino feixe
paralelo de radiao policromtica que incide num cristal estacionrio. Os planos
cristalinos selecionam os comprimentos de onda que obedecem lei de Bragg, que
est relacionada ao espalhamento de ondas quando incidentes em um cristal e
sugere uma explicao para os efeitos difrativos observados nesta interao, e os
43
difratam formando um conjunto de pontos que so detectados por um filme

(ALBERS et al., 2002).
O mtodo de p o mais utilizado hoje em dia. Ele foi desenvolvido
inicialmente por Debye e Scherrer em 1916. Atravs de experimentos com o mtodo
de p, uma grande variedade de informaes sobre a estrutura do material podem
ser investigadas.
Basicamente o mtodo envolve a difrao e raios X
monocromticos por uma amostra policristalina. A radiao empregada ,

geralmente, a raia de emisso caracterstica K de um tubo de raios X, filtrada ou
monocromatizada por um cristal. A amostra deve estar fisicamente em forma de p,
que um slido policristalino (ALBERS et al., 2002).
Os difratmetros de raios X para o mtodo de p foram desenvolvidos nas
dcadas de 1950 e 1960, sendo automatizados na dcada de 1980. So
equipamentos rpidos e precisos na coleta de dados por um detector de raios X e
fceis na preparao e posicionamento das amostras. Um feixe de radiao
monocromtica incide em uma amostra na forma de p compactado, rotacionado em
um ngulo , enquanto os dados so coletados por um detector que se move em 2
(ALBERS et al., 2002).
44
4. MATERIAIS E MTODOS
4.1
MATERIAIS
O desenvolvimento do trabalho foi conduzido nos Laboratrios de Qumica e
Microbiologia, da Escola Tcnica Estadual Irm Agostina, So Paulo, Brasil. Quando

no, os testes foram feitos com colaborao externa. Foram utilizados os reagentes,
equipamentos e materiais descritos nos tpicos seguintes.
Reagentes
Os reagentes e solventes utilizado nos experimentos so descritos na Tabela
4.1.
Tabela 4.1. Reagentes e solventes utilizados nos experimentos
Composto
4.2
Frmula
Procedncia
lcool etlico hidratado 92,8INPM
C2H6O
Ciclofarma
Clorofrmio P.A.
CHCl3
Synth
Poli(3-hidroxibutirato) (PHB)
(C4H6O2)n
Usina da Pedra
Poli(etilenoglicol) 90
HO(C2H4O)nH
Polytechno
Poli(etilenoglicol) 400
HO(C2H4O)nH
Quimesp
Poli(etilenoglicol) 6000 P.A.
HO(C2H4O)nH
Synth
Resina Lewatit S 6368 Sulfate
LANXESS
MTODOS
Preparao da matria-prima para extrao de antocianinas
Um estudo prvio foi necessrio para a avaliao da obteno de
antocianinas a partir de um composto natural. Definiu-se que os rabanetes podem

ser uma fonte vivel de extrao de antocianinas (PEREIRA et al., 2007), alm da
observao de que dificilmente se encontra na literatura teor do pigmento no
legume, bem como mtodos de quantificao.
45
Os rabanetes foram obtidos em um mercado popular na regio sul da cidade

de So Paulo, e ento seguindo o que foi proposto por Luengo (2001), foram
lavados e ento armazenados adequadamente, com as folhas retiradas, guardados
em saco plstico fechado, para posterior anlise.
Extrao de antocianinas do rabanete (Raphanus sativus)
Seguindo o que foi proposto por Terci (2004), utilizou-se da proporo de 1:3
para massa da frao de fruta:volume de solvente.
Com o auxlio de um descascador, retirou-se as cascas dos legumes e
armazenaram-se em um bquer de 100 mL. Aps isso, pesou-se cerca de 30 g de
casca em um bquer de 250 mL, e adicionou-se, com o auxlio de uma proveta de
100 mL, 90 mL de etanol 92,8INPM em pH 2,8, na proporo correta.
Tendo tal sistema pronto, aqueceu-se sem agitao no banho termosttico
temperatura de 50C, por 2 horas. Aps o resfriamento do extrato, armazenou-se em
um frasco mbar.
Um outro sistema idntico ao anterior foi preparado, no entanto utilizou-se
60 g de casca de rabanete e 180 mL de etanol 92,8INPM em pH 2,3, alm de no
ter sido aquecido em banho termosttico, deixando apenas em temperatura
ambiente.
Simultaneamente, preparou-se um sistema de extrao frio, por pesar
aproximadamente 15 g de casca, e imergir em 45 mL de etanol 92,8 INPM em
pH 2,8, armazenando em frasco mbar, estando em geladeira aproximadamente
8C.
A cada trs dias trocaram-se as cascas dos frascos, como medida para
concentrao do extrato. Tal etapa foi executada em duplicata, sempre respeitando
a proporo de 1:3 da massa da frao de casca:volume de solvente, por medir o
volume de solvente a cada troca.
O extrato frio foi desconsiderado nas anlises posteriores, devido no ter
extrado to efetivamente quanto os outros dois sistemas, o que ficou perceptvel
visualmente.
Os extratos preparados foram testados em trs condies: quente,
temperatura ambiente e frio. Os trabalhados nas condies temperatura ambiente
46
e quente foram filtrados utilizando papel filtro quantitativo Quanty de 25 m, como

possvel observar na Figura 4.1, e posteriormente armazenados em frascos mbar
estando em geladeira 8C.
Figura 4.1. Filtragem do extrato alcolico de rabanete
Purificao das antocianinas

Preparou-se uma coluna cromatogrfica com a resina LANXESS Lewatit S
6368 Sulfate. Lavou-se adequadamente a coluna e posteriormente eluiu-se o extrato
na condio de temperatura ambiente, cerca de 180 mL, como possvel observar
na Figura 4.2. A fase de eluio despendeu um tempo de 4 horas.
Houve a necessidade de realizar o teste de Benedict para avaliar a presena
de aucares redutores no extrato e na soluo de lavagem eludos pela coluna, e
consequentemente avaliar o efeito deste resultado nas anlises posteriores.
47
Figura 4.2. Purificao das antocianinas em coluna cromatogrfica Lewatit S 6368 Sulfate
Secagem e conservao do extrato antocinico

Volumes conhecidos de extratos foram colocados em um balo de fundo
redondo de 1 L e levados ao evaporador rotativo com banho termosttico variando
de 30 55C por 2 horas. possvel observar o sistema de secagem em
evaporador rotativo na Figura 4.3.
Figura 4.3. Secagem do extrato antocinico em evaporador rotativo
Os extratos secos de antocianinas utilizados foram armazenados em placas

de Petri fechadas, e mantidos em dessecador para uso posterior nas anlises
48
espectrofotomtrica e de incorporao nas solues filmognicas. O aspecto do

extrato seco pode ser observado na Figura 4.4.
Figura 4.4. Aspecto do extrato seco de antocianinas
Anlise espectral de antocianinas

Aps a secagem e armazenamento serem consumados, procurou-se analisar
as regies de absoro das antocianinas do extrato, partindo-se da proposta da
literatura, denominada como mtodo do pH diferencial (FAVARO, 2008),
considerando as condies adaptveis do laboratrio em que foram realizados os
procedimentos.
O mtodo utilizado fundamentado nas transformaes sofridas pelas
antocianinas
com
variao
do
pH,
ou
seja,
as
diferentes
estruturas
correspondentes s diferentes coloraes das solues em diferentes pHs. Alm

disso, como alguns extratos podem apresentar material em suspenso, causando o
espalhamento de luz, o mtodo recomenda leitura da absorbncia em comprimento
de onda onde no h absoro referente s antocianinas (700 nm), alm daquele
onde ocorre absoro.
A amostra do extrato seco (aproximadamente 10 mg) foi dissolvida em gua
destilada e diluda em bales volumtricos de 25 mL com solues tampo pH 1,0 e
pH 4,2 e as leituras de absorbncia foram realizadas na faixa espectral de 260 nm
700 nm no espectrofotmetro de absoro molecular NOVA modelo 1600 UV. O
aspecto visual das solues preparadas pode ser observado na Figura 4.5.
49
Figura 4.5. Aspecto visual das solues de antocianinas em (a) pH 1,0 e (b) pH 4,2
Preparo das solues filmognicas de PHB

Fez-se necessrio o preparo de quatro solues de concentraes distintas,
porm lineares, de PHB, sendo elas 25 g L-1, 50 g L-1, 75 g L-1 e 100 g L-1.
Foram pesadas em balana analtica aproximadamente 5 g de PHB industrial
em um bquer de 100 mL, aos quais foram acrescentados 50 mL de clorofrmio. A
amostra foi ento transferida para um frasco reagente de 50 mL e deixada em
repouso por 1 dia. Aps o perodo, solubilizou-se o PHB residual por meio de um
sistema de refluxo pelo perodo de 3 horas, armazenando posteriormente no frasco
reagente.
O mesmo procedimento foi realizado para outras duas amostras, utilizando
10 g e 15 g de PHB. No entanto, diluiu-se as solues com 150 mL de clorofrmio
para corresponder respectivamente s concentraes 50 g L-1 e 75 g L-1. A partir da
soluo de 50 g L-1 preparou-se a soluo 25 g L-1, diluindo 50 mL de soluo com
50 mL de clorofrmio.
Todas as solues foram submetidas ao refluxo por um perodo mdio de 3
horas. A Figura 4.6 mostra um sistema de refluxo para a soluo 100 g L -1 de PHB.
Aps o perodo, as solues foram filtradas em papel filtro quantitativo Quanty de
25 m, a fim de eliminar resduos grosseiros de PHB que no foram solubilizados.
50
Posteriormente, armazenaram-se as solues em frascos reagentes de

200 mL devidamente identificados.
Figura 4.6. Soluo 100 g L-1 de PHB em refluxo
Elaborao dos filmes

Utilizou-se uma pipeta volumtrica de 5 mL para a uniformizao das
solues em placa de Petri, devidamente lavadas e secas em estufa, utilizando
quantidades suficientes para a quantidade de soluo gerada. Tal processo
caracteriza o mtodo de casting, onde se verte uma soluo filmognica sobre um
suporte, geralmente liso e reto, para posterior secagem.
As solues foram deixadas em capela de exausto por 2 horas, sendo tempo
suficiente para a evaporao de todo clorofrmio. Foram testadas duas condies
para todas as quatro solues, de diferentes concentraes, de PHB: a primeira
condio envolvia untar a placa de Petri com uma pequena camada de graxa de
silicone, e a segunda condio sem graxa de silicone. O teste com graxa de silicone
foi necessrio para verificar a facilidade de remoo do filme aps a evaporao do
solvente. No entanto, o procedimento no foi efetivo, pois o filme aderiu placa,
dificultando sua remoo; os filmes produzidos sem silicone apresentaram-se
51
melhores e mais fceis de remover. Desta forma, decidiu-se prosseguir com os

testes posteriores sem o auxlio da graxa de silicone. A Figura 4.7 mostra o mtodo
de casting com as solues de PHB em capela de exausto.
Figura 4.7. Casting das solues filmognicas de PHB (a) com graxa de silicone e (b) sem graxa de
silicone
Incorporao de antocianinas nos filmes

Nos testes de elaborao dos filmes percebeu-se que as concentraes de
25 g L-1 e 50 g L-1 se mostraram melhores para a formao de filmes com a
espessura ideal. Portanto, para os testes de incorporao de antocianinas decidiu-se
trabalhar apenas com essas duas concentraes.
Devido as antocianinas serem insolveis em clorofrmio e em PEG 400,
utilizou-se uma mistura de solventes que pudesse solubilizar as antocianinas e
manter certa resistncia no filme. Misturou-se PEG 90 e PEG 400 na proporo 1:1,
o que criou um bom sistema de solubilizao.
Testaram-se duas concentraes de antocianina: 2,5 g L -1 e 5 g L-1. Pesaramse 0,025 g e 0,05 g de extrato seco de antocianina e solubilizou-se em 10 mL da
mistura de solventes, respectivamente.
A soluo filmognica antocinica foi composta por 30 mL de soluo de
PHB, 4 mL da soluo de antocianina e 1% de soluo alcolica de PEG 6000 em
concentrao 5 g L-1. O aspecto visual da emulso formada pela soluo de PHB
50 g L-1 e antocianina 5 g L-1 pode ser visualizado na Figura 4.8. Uma soluo
52
filmognica sem antocianinas foi elaborada como medida de controle, para avaliar o
efeito provocado pelo pigmento nas propriedades do filme.
Figura 4.8. Aspecto visual da soluo filmognica antocinica
Devido a emulso formada no ficar estvel por muito tempo, houve a

necessidade de fazer o mtodo de casting de maneira mais rpida, evitando a
separao de fases, e consequentemente a no uniformidade do filme. Desta forma,
os filmes foram elaborados em placas de Petri dentro de dessecador a vcuo, a uma
presso variando de -300 -400 mmHg por 20 minutos. O volume de soluo
filmognica antocinica introduzido em placa foi de 2 mL. A Figura 4.9 mostra o
sistema de casting em dessecador a vcuo.
53
Figura 4.9. Sistema de casting em dessecador a vcuo
Caracterizao dos filmes

Para avaliar as propriedades que os filmes obtiveram e o efeito da adio de
antocianinas, escolheram-se os seguintes testes: microscopia ptica, difrao de
raios X e razo de intumescimento, alm do teste sensorial para avaliar a atividade
do filme com a mudana de pH.
4.2.9.1 Microscopia ptica
Pequenas pores de filme foram recortadas e dispostas em lmina de
26 X 76 mm com lamnula cobrindo o analito. As amostras foram analisadas em
microscpio ptico binocular Bioval modelo L 1000 T, utilizando uma lente com
aumento de 40 vezes. As imagens foram obtidas pela captura no binculo com uma
cmera digital comum de celular.
4.2.9.2 Difrao de Raios X
Os difratogramas de raios X, gentilmente cedidos pelo Instituto de Pesquisas
Energticas e Nucleares da Universidade de So Paulo (IPEN USP), por
intermdio do Prof. Me. Klauss Engelmann, foram realizados em um equipamento
Difratomtro de Raios X Rigaku, modelo MiniFlex II onde utilizou-se fonte de
54
radiao CuK ( = 1,54 ) e filtro de Ni. A partir deles, foi possvel a caracterizao
da superfcie dos filmes.
Nestes testes empregaram-se os filmes de PHB em concentrao 50 g L -1, e
os filmes PHB/PEG em concentraes 50 g L-1 e 25 g L-1 com dopamento de
antocianinas em concentrao 5 g L-1.
4.2.9.3 Razo de Intumescimento
Para a determinao do ndice de intumescimento foram recortadas amostras
de filmes nas dimenses de 1 cm x 1 cm, e estas foram secas por aproximadamente
1 hora em estufa com temperatura de 50C. Aps pesagem os filmes foram imersos
em 20 mL de gua destilada e em tempos pr-determinados a massa foi novamente
verificada. A pesagem de filmes intumescidos foi realizada aps uma leve secagem
em papel toalha para absoro do excesso de gua. O procedimento foi realizado
em triplicata. A razo de intumescimento foi calculada atravs da Equao 1, onde
Wt a massa no tempo e W 0 a massa inicial.
4.2.9.4 Avaliao da atividade do filme com a mudana de pH

Utilizaram-se pores adequadas de uma espcie de sardinha, em estado cru
e fresco, dentro um tubo de ensaio tampado com o filme inteligente. Os tubos foram
acondicionados em ambiente fechado, evitando ao mximo exposio luz. A
temperatura do laboratrio era de 20C. Aguardou-se o perodo de trs dias para
avaliar a alterao visual provocada no filme.
55
5. RESULTADOS E DISCUSSO
5.1
PURIFICAO DAS ANTOCIANINAS

A metodologia de purificao de antocianinas extradas do rabanete envolveu
o uso de uma resina de troca inica LANXESS da linha Lewatit, a resina S 6368
Sulfate. Esta resina de troca aninica, macroporosa, monodispersa, fortemente
alcalina, com agrupamentos amino quartenrios, adaptada para o uso na indstria
de alimentos, baseada num copolmero de estireno e divinilbenzeno (LANXESS,
2014).
A forma utilizada particularmente adequada para a remoo de cidos com
uma descolorao de solues de substncias orgnicas, como acar, gelatina,
glicerina e concentrados de frutas (LANXESS, 2014).
Para confirmao de sua efetividade houve a necessidade de realizar o teste
de Benedict, que baseia-se no princpio de que os aucares que apresentam uma
hidroxila livre no C-1, nomeadamente classificado como carbono anomrico, como
por exemplo a glicose, so bons agentes redutores. O carbono anomrico
desempenha um papel fundamental neste teste, uma vez que este pode estar
envolvido em uma ligao glicosdica, como nas prprias antocianinas. A estrutura
qumica da glicose apresentada na Figura 5.1. Devido a este motivo a extremidade
que contm a hidroxila passa a ser chamada de extremidade redutora e o acar, de
acar redutor. A capacidade que esses compostos apresentam de reduzir ons
metlicos em solues alcalinas um bom mtodo de identificao desses
compostos (SOUZA; NEVES, 2014).
Figura 5.1. Molcula de glicose (SOUZA; NEVES, 2014)
56
A reao apresentada na Figura 5.2 esquematiza o princpio da prova de

Benedict, baseada na reduo de ons Cu2+ a Cu+, com formao de um precipitado
vermelho ou amarelo.
Figura 5.2. Reao de reduo dos ons Cu2+ Cu+ com formao de precipitado (Adaptado de
SOUZA; NEVES, 2014)
Segundo o teste, o extrato de rabanete eludo pela coluna cromatogrfica

apresentou acar em sua composio, dando teste positivo para a presena de
acar redutor. No entanto a soluo de lavagem da coluna cromatogrfica no
apresentou acar em sua composio, dando teste negativo para a presena de
acar redutor, ou seja, a coluna no reteve nem mesmo parte dos aucares
presentes no extrato de rabanete.
Com esta anlise, pode-se concluir que o uso da resina Lewatit S 6368
Sulfate no resultou na implicao esperada, uma vez que no reteve os aucares
presentes na amostra, embora possa ter concentrado o extrato e eliminado
incluses.
5.2
ANLISE ESPECTRAL DE ANTOCIANINAS

A propriedade das antocianinas de sofrer transformaes em sua estrutura
em funo do pH, e consequentemente na colorao do meio em que esto

inseridas, uma das mais admirveis, o que torna objeto de fascnio e muitos
estudos acerca do assunto. Tendo esta ideia em mente, esta anlise espectral das
antocianinas extradas do rabanete foi necessria para avaliar suas caractersticas e
o tipo de antocianina do qual se trabalhou ao comparar com dados em literatura.
Para a obteno dos espectros na regio do UV-Vis, as solues em pH 1,0 e
4,2 foram submetidas a uma varredura espectral de 280 nm 700 nm, usando o
espectrofotmetro de absoro molecular NOVA modelo 1600 UV. Desta forma,
obtiveram-se os picos mximos de absorbncia, como expresso na Figura 5.3.
57
3,000
pH 1,0
2,500
pH 4,2
Absorbncia
2,000
1,500
1,000
0,500
0,000
270
370
470
570
670
Comprimento de onda (nm)

Figura 5.3. Caractersticas espectrais de antocianinas de rabanete (Raphanus sativus) em solues
tampo pH 1,0 e pH 4,2
A regio de absoro indicada pela Figura 5.3 entra em harmonia com o

aspecto visual da soluo indicado na Figura 4.5, sob o tpico 4.2.5, onde
nitidamente percebe-se que a soluo em pH 1,0 absorve especialmente na regio
do visvel, enquanto a soluo em pH 4,2 absorve na regio do ultravioleta.
Em soluo pH 1,0 as antocianinas esto predominantemente na forma de
ction flavilium, de colorao fortemente vermelha ou alaranjada. Isto evidenciado
pelo fato dos cromforos de antocianinas neste meio absorverem na regio visvel
do espectro eletromagntico, tendo sua absoro mxima no comprimento de onda
de 506 nm. Nesta soluo ocorreu um deslocamento hipsocrmico, que o
deslocamento da banda de absoro para um comprimento de onda menor do que o
esperado (ALBUQUERQUE et al., 197?; WIETHAUS, 2010), de 510 nm (TERCI,
2004). Tal deslocamento pode ter ocorrido devido a fatores como o aumento da
polaridade do solvente, nomeadamente solvatocromismo negativo, ou ainda efeitos
de substituio ou de solvente utilizado (OLIVEIRA, 2009). A estrutura do ction
flavilium expressa na Figura 5.4.
58
R
OH
HO
O
R'
OAcar
OH
Figura 5.4. Estrutura do ction flavilium - forma predominante de antocianina em pH 1,0
No caso da soluo em pH 4,2 as antocianinas esto predominantemente na

forma de carbinol ou pseudobase incolor. Seu pico de absoro mximo est na
regio do ultravioleta, com um comprimento de onda de 311 nm. Sua estrutura
expressa na Figura 5.5.
R
OH
HO
OH
R'
OAcar
OH
Figura 5.5. Estrutura da pseudobase incolor ou carbinol forma predominante de antocianina em
pH 4,2
O espectro de absoro obtido neste procedimento, expresso na Figura 5.3,

muito semelhante aos dados encontrados em literatura referentes as antocianinas
de rabanete purificadas, como possvel verificar na Figura 5.6.
59
Figura 5.6. Caractersticas espectrais de antocianinas de rabanete purificadas (derivados acilados de

pelargonidina-3-soforosdio-5-glicosdeo) em solues tampo de pH 1,0 e 4,5
(LEIDENS, 2011)
A semelhana entre os espectros pode no ser maior devido as

concentraes utilizadas de soluo diferirem, o pH da segunda soluo no ter sido
necessariamente 4,5, alm do efeito hipsocrmico na soluo em pH 1,0, no qual
ocorre uma diminuio da intensidade de absoro.
Desta forma pode-se confirmar que as antocianinas presentes no rabanete
so predominantemente expressas como pelargonidina-3-soforosdio-5-glicosdeo.
Considerando que as antocianinas extradas no foram purificadas utilizando
Cromatografia Lquida de Alta Eficincia (HPLC, do ingls High Performance Liquid
Chromatography), como no trabalho referenciado por Leidens (2011), e sim com o
mtodo de cromatografia em coluna utilizando uma resina de troca inica, pode-se
concluir que o processo de extrao e purificao foi suficientemente eficaz para
obter um extrato com o mnimo de incluses possveis, ocasionando o mnimo
possvel de desvio no espectro de absoro.
5.3
ELABORAO DOS FILMES

Para a elaborao dos filmes dopados com antocianina foi necessrio avaliar
um solvente que solubilizasse as antocianinas e incorporasse na soluo

filmognica. Desta forma, foi necessrio elaborar uma mistura de solventes que
desempenha-se este papel.
O PEG-90 empregado como uma das fases do solvente conhecido
usualmente como polmero W-25, da empresa Polytechno. Normalmente utilizado
em formulaes de shampoo e condicionadores, pois serve como solvente, agente
60
umectante (retentor de gua) e agente de aumento da viscosidade em fase aquosa

(COSMETICS INFO, 2014). Estas caractersticas ficaram perceptveis na formulao
teste de filme. O uso desse solvente produziu filmes midos, porm extremamente
quebradios. Para eliminar este problema, utilizou-se PEG 400 na mistura de
solventes, o que produziu filmes mais resistentes.
Nem todas as formulaes utilizadas produziram um filme ideal. Aquelas que
utilizaram a soluo de PHB em concentrao de 50 g L-1 mostraram-se mais firmes,
resistentes e homogneas em relao as de concentrao 25 g L-1, como possvel
visualizar na Figura 5.7.
Aps a etapa de secagem, posterior evaporao do solvente clorofrmio, os
filmes foram facilmente retirados das placas. Os filmes que apresentaram bolhas ou
que aderiram placa no foram empregados nos testes. Atravs da anlise visual e
ttil dos filmes biodegradveis contendo antocianina, percebeu-se que estes
mostraram-se pegajosos e com maior higroscopicidade, como tambm indicado
pelos testes de intumescimento.
Figura 5.7. Filme biodegradvel elaborado por casting base de PHB e antocianinas
5.4
CARACTERIZAO DOS FILMES

As anlises para caracterizao dos filmes foram aplicadas nos resultados
das diferentes propriedades dos filmes biodegradveis produzidos com duas

quantidades de antocianina: 0,005 g e 0,01 g por grama de filme formado. Nestas
anlises, ambos os fatores (melhoramento proporcionado pelas antocianinas ao
61
filme e atividade em diferentes pHs) foram de igual interesse, assim como a

interao entre eles.
Microscopia ptica
Os testes que envolvem a microscopia ptica so, geralmente, um bom
parmetro para a anlise morfolgica dos filmes (ALVES, 2009; MOTTIN, 2011),
embora muitos estudos trabalhem com microscopia eletrnica de varredura (MEV)
devido sua maior eficincia e especificidade. Consequentemente, o efeito de
agentes externos matriz do polmero, neste caso as antocianinas, tambm
elucidado. As amostras analisadas utilizando o microscpio ptico binocular Bioval
modelo L 1000 T no receberam qualquer preparao anterior anlise, sendo
dispostas em lminas de vidro e tendo as imagens captadas utilizando uma cmera
digital de celular.
A realizao deste teste utilizou unicamente os filmes elaborados com PHB
em concentrao 50 g L-1. Tal medida foi necessria devido a inviabilidade da
utilizao dos filmes elaborados com PHB em concentrao 25 g L -1, uma vez que
formaram filmes extremamente finos, no uniformes e com muitos orifcios em sua
totalidade.
Os filmes em que no houve a incorporao de antocianinas apresentaram-se
uniformes em quase sua totalidade, com espaos uniformemente preenchidos com
PHB e PEG, como possvel visualizar na Figura 5.8. A interao existente entre
PHB e PEG ocasiona em uma diminuio na resistncia trao dos filmes, em
relao ao PHB puro, provavelmente devido reduo das ligaes secundrias
intermoleculares entre as cadeias de PHB (QUENTAL et al., 2010). No entanto, a
natureza biodegradvel mantida, o que cumpre um quesito proposto neste
trabalho. Desta forma, a adio de antocianinas pode favorecer a velocidade de
degradao, o que pode ser perceptvel no estudo morfolgico.
62
Figura 5.8. Microestrutura visual do filme PHB/PEG em microscpio ptico binocular Bioval modelo
L 1000 T com aumento de 40 vezes (foto de William Marinho Paulo de Alencar)
Nos filmes em que houve a incorporao de antocianinas possvel perceber

que o PHB, PEG e as antocianinas preencheram quase que em sua totalidade toda
estrutura do filme. No entanto, no houve a mesma uniformidade existente na
soluo sem antocianinas, como pode ser observado na Figura 5.9. Um fator que
pode ter favorecido isto a instabilidade da emulso formada na soluo filmognica
antocinica. Mesmo que o mtodo de elaborao dos filmes por casting tenha
ocorrido em atmosfera sob vcuo, a separao de fases ainda pode ter ocorrido, o
que contribui para a no uniformidade do filme produzido.
63
Figura 5.9. Microestrutura visual do filme PHB/PEG com antocianinas em microscpio ptico
binocular Bioval modelo L 1000 T com aumento de 40 vezes (foto de William Marinho
Paulo de Alencar)
No que diz respeito biodegradabilidade nos filmes com a adio das

antocianinas, pode ocorrer um aumento em sua velocidade. Isto pode se dar devido
a presena de carboidratos como glicosdeos das antocianinas. Esta classe de
substncias pode ser metabolizada e utilizada diretamente pela maioria dos microorganismos, incluindo bactrias, seja por via oxidativa ou fermentativa (GAVA;
SILVA; FRIAS, 2009), dos quais podem causar alteraes ao filme ainda quando
aplicado como embalagem, como alterao da cor e propriamente a degradao
enzimtica por parte dos micro-organismos (COUTINHO et al., 2004; GAVA; SILVA;
FRIAS, 2009; KOLLER et al., 2012), o que inviabiliza sua aplicao at o
desenvolvimento de uma metodologia que vise eliminar esta problemtica.
Razo de Intumescimento
Em geral, o fato de no haver ligaes cruzadas facilita a penetrao de
molculas de solvente, como a gua, nas cadeias polimricas. Isto evidenciado
nos testes de intumescimento dos filmes, tanto nos quais houve incorporao de
antocianinas como os em que no houve. No entanto, percebe-se que os filmes que
receberam o dopamento obtiveram uma razo de intumescimento (RI) maior dos
64
que no receberam, ou seja, absorveram maior quantidade de gua. Esta relao

pode ser observada na Figura 5.10.
A anlise mostrou-se eficiente, sendo possvel calcular a razo de
intumescimento dos filmes atravs da Equao 1.
1,35
PHB/PEG
PHB/PEG dopados
1,25
RI
1,15
1,05
0,95
0,85
0,75
0
50
100
150
Tempo (minutos)
Figura 5.10. Razo de Intumescimento versus tempo para filmes de PHB/PEG e PHB/PEG dopado
com antocianinas
A instabilidade dos resultados obtidos a respeito dos filmes em que no

ocorreu dopamento, no possuindo uma linha de tendncia invarivel, se deu por
conta dos filmes mostrarem-se cada vez mais frgeis com o decorrer das
observaes, tornando-se quebradios e consequentemente, por perder massa,
inviveis de continuar com a anlise.
Entretanto, os filmes em que ocorreu dopamento, embora tenham se
mostrado relativamente frgeis, conseguiram manter uma linha de tendncia
invarivel por pelo menos 50 minutos da anlise, absorvendo uma quantidade maior
de gua. Muito provavelmente isto se deu devido forte interao que as
antocianinas presentes no filme possuem com solventes polares (HOHNOV;
AVKOV; KARSEK, 2008), como neste caso a gua, e consequentemente
aumentando a penetrao das molculas de solvente na matriz do polmero.
65
Difrao de raios X
Os difratogramas de raios X para os filmes formados com dopamento tendo
PHB em concentrao 25 g L-1 e 50 g L-1 e sem dopamento com PHB em
concentrao 50 g L-1 so apresentados na Figura 5.11.
Figura 5.11. Difratogramas dos filmes elaborados por casting, com e sem dopamento
Para todas as amostras, os picos mdios observados em 2 foram 13,41 e

16,91 representados por dois picos intensos, e 21,45 e 27,10 representados pelos
picos de intensidade mdia, como possvel observar na Figura 5.11.
Comportamentos similares foram relatados em literatura (MENDES, 2009;
THIR; RIBEIRO; ANDRADE, 2006). Segundo Thir e colaboradores (2006), o perfil
da amostra de PHB analisada exibe picos bem definidos em 2 iguais a 13,6, 17,1,
21,7, 22,7 e 25,6.
Mendes (2009) encontrou valores para 2 iguais a 13,2 e 16,7
representados por dois picos intensos e os picos em 2 iguais a 19,8, 21,2, 22,3,
25,3 e 26,9 representados pelos picos de intensidade mdia.
Com base nesta anlise, percebeu-se que tais resultados encontrados nas
experimentaes correspondem predominantemente ao PHB. Observou-se que o
66
PHB um polmero semicristalino e extremamente quebradio. No entanto, com a

adio da mistura de solventes para as antocianinas, a saber PEG 90 e PEG 400,
suas caractersticas melhoram significativamente, como observado na intensidade
dos picos de difrao em 13,41 e 16,91 no filme sem dopamento.
Com a adio das antocianinas aos filmes, percebe-se que os picos de
difrao mximos apresentaram-se com menor intensidade, tanto para a
concentrao de PHB em 25 g L-1 como para 50 g L-1, sendo mais acentuada no de
menor concentrao. Desta forma, percebe-se que a adio de antocianinas diminui
consideravelmente a cristalinidade do filme, resultando em um filme amorfo, pelo
menos em respectivas regies. Isto pde ser identificado na anlise de microscopia
ptica, no qual percebeu-se que a disperso das antocianinas no foi integral no
filme, como observado na Figura 5.9.
Avaliao da atividade do filme com a mudana de pH
Nesta fase do estudo, como o intuito era avaliar o comportamento do filme em
funo do pH, foram utilizadas unicamente as formulaes de maior concentrao
de PHB e antocianina, sendo 50 g L-1 e 5 g L-1, respectivamente. Para isto, pores
de peixe cru foram embaladas em tubos de ensaio tampados com o filme, como
possvel observar na Figura 5.12. Os tubos foram acondicionados temperatura
ambiente, variando de aproximadamente 20C 25C. Aps trs dias foi realizada a
anlise de cor do mesmo filme.
Figura 5.12. Poro de peixe cru embalada com o filme inteligente
67
Observou-se que a cor dos filmes alterou levemente, como se era almejado,
comeando com um branco-roseado e terminando com um amarelo-esverdeado. A
Figura 5.13
indica as cores inicial e final dos filmes, respectivamente. Desta forma,
houve a indicao da correlao entre as alteraes de colorao do filme e a

deteriorao do produto.
Estado inicial
Estado final
Figura 5.13. Aspecto visual dos filmes em seu estado pr-deteriorao (Estado inicial) e psdeteriorao (Estado final) do peixe
Este comportamento era esperado, pois conforme o peixe deteriora ocorre a

liberao de uma variedade de aminas volteis bsicas como trimetilamina (TMA),
amnia (NH3) e dimetilamina (DMA) conhecidas como nitrognio bsico voltil total
(TVB-N, do ingls Total Volatile Basic Nitrogen) e so substncias liberadas em
peixes depois de ter passado sua fase inicial de frescura (GIROTO; MASSON;
HARACEMIV, 2010).
Esta anlise indicou que a mudana pretendida na colorao do filme,
caracterstica de uma embalagem inteligente, foi atingida. No entanto, devido a
concentrao de antocianinas utilizada ter sido relativamente baixa, a percepo na
alterao colorimtrica foi dificultosa. Aliado a este fato, percebeu-se que com o
decorrer do tempo os filmes vo perdendo sua colorao original, muito
provavelmente devido fotodegradao das antocianinas (LOPES et al., 2007;
STRINGHETA; BOBBIO, 2000) presentes no filme. Por isso, foi muito importante
durante esta anlise a manuteno dos tubos em ambiente com o mnimo possvel
de exposio luz.
68
6. CONSIDERAES FINAIS
A metodologia de extrao e purificao das antocianinas mostrou-se eficaz,
uma vez que o espectro gerado apresentou semelhana com dados obtidos em
literatura.
A morfologia e as caractersticas mecnicas dos filmes elaborados foram
diretamente influenciadas pela composio da soluo filmognica.
Visualmente, os filmes apresentaram-se opacos e levemente rosados quando
secos, mas relativamente translcidos e ainda rosados quando solvatados. Tal
condio se d muito provavelmente pela adio de PEG 90, um bom agente
retentor de gua. Alm disso, os filmes mostraram-se pegajosos e com grande
higroscopicidade, o que foi confirmado pelos testes de intumescimento.
Os filmes incorporados com antocianina na matriz polimrica representam
uma boa alternativa ecologicamente correta para indicar variaes de pH no meio.
Quando o filme foi exposto ao pH prximo neutralidade e alcalinidade, ocorreu
gradativa alterao da cor roseada para amarelo/esverdeada. No caso da avaliao
com peixe cru, os filmes mostram-se muito promissores, uma vez que houve
mudana de cor do filme quando o pH do peixe atingiu um nvel considerado invivel
para o consumo humano. Desta forma, os filmes indicaram a deteriorao do
produto pela liberao de TVB-N.
As informadas mostradas neste estudo indicam que existe um grande
potencial de utilizao destes materiais biodegradveis base de PHB como
embalagens de alimentos. Entretanto, esta aplicao depende da produo de
materiais mais estveis, com maior flexibilidade, alm da implicao de
concentraes de antocianina muito maiores, na ordem de 50 g L -1, o que aumenta a
resistncia degradao fotoqumica dos filmes.
69
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Produção de Filme Biodegradável Dopado Com Potencial Indicador de Qualidade para Alimentos

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CENTRO ESTADUAL DE EDUCAO TECNOLGICA PAULA SOUZA

ESCOLA TCNICA ESTADUAL IRM AGOSTINA

ANDERSON FERNANDES RIBEIRO

PRODUO DE FILME BIODEGRADVEL DOPADO COM

ANDERSON FERNANDES RIBEIRO

PRODUO DE FILME BIODEGRADVEL DOPADO COM

Trabalho de Concluso de Curso, apresentado

Produo de filme biodegradvel dopado com potencial indicador

ANDERSON FERNANDES RIBEIRO

PRODUO DE FILME BIODEGRADVEL DOPADO COM

Trabalho de Concluso de Curso apresentado ao Curso Tcnico Integrado ao Mdio

Aprovado ( ) Reprovado ( ) pela Banca Examinadora em ____/____/______

Dedicamos este trabalho aos

A mente que se abre a uma nova ideia jamais

Figura 4.8. Aspecto visual da soluo filmognica antocinica ...................... 52

LISTA DE ABREVIATURAS E SIGLAS

Associao Brasileira de Embalagens

American Society for Testing of Materials

High Performance Liquid Chromatography

Instituto de Pesquisas Energticas e Nucleares

International Organization for Standardization

Poltica Nacional de Resduos Slidos

Toneladas por ano

Total Volatile Basic Nitrogen

OBJETIVOS ESPECFICOS .............................................................. 18

REVISO BIBLIOGRFICA ................................................................. 19

EMBALAGENS PLSTICAS .............................................................. 19

EMBALAGENS BIODEGRADVEIS .................................................. 21

EMBALAGENS INTELIGENTES ........................................................ 25

ELABORAO DE FILMES ............................................................... 28

RABANETE (Raphanus sativus) ........................................................ 36

ESPECTROFOTOMETRIA DE ABSORO MOLECULAR .............. 37

DIFRAO DE RAIOS X ................................................................... 41

RESULTADOS E DISCUSSO ............................................................ 55

PURIFICAO DAS ANTOCIANINAS ............................................... 55

ANLISE ESPECTRAL DE ANTOCIANINAS .................................... 56

ELABORAO DOS FILMES ............................................................ 59

CARACTERIZAO DOS FILMES .................................................... 60

CONSIDERAES FINAIS .................................................................. 68

e renovvel (CALLISTER, 2002), tm baixo custo, cerca de 5 dlares um

Entre os diferentes tipos de embalagens inteligentes, encontram-se as

embalagem inteligente para produtos alimentcios, indicadora da qualidade de

Realizar a extrao de antocianinas e determinar o mtodo ideal de

Determinar o melhor mtodo de quantificao do teor de antocianinas

extradas, considerando os fatores de infraestrutura e tempo disponvel, alm de

Produzir um filme biopolimrico utilizando o mtodo de casting;

Analisar as formas de reforo plausveis para o biopolmero;

Analisar a interao da antocianina com o biopolmero, e avaliar a

influncia na ao como agente plastificante e/ou de melhoramento, alm do uso de

Avaliar a atividade sensorial de colorao no filme, comparando

diferentes concentraes de dopagem.

compostos de repetidas macromolculas com diferentes caractersticas dependendo

Figura 3.1. Tipos de cadeias polimricas (Adaptado de BANEGAS, 2008)

impenetrvel, em torno de materiais de enchimento como fibras de vidro ou de

transparncia, facilidade de impresso, boa selagem trmica, resistncia a trao e

O processo de reciclagem de embalagens plsticas muitas vezes se torna

Organization for Standardization (ISO,2005) definem plsticos degradveis como

THARANATHAN, 2003), como mostrado na Figura 3.2.

No final do seu perodo til, materiais polimricos biodegradveis geralmente

Figura 3.3. Ciclo do carbono de polmeros biodegradveis (THARANATHAN, 2003)

Figura 3.4. Frmula geral dos Polihidroxialcanoatos (Adaptado de BUCCI, 2003)

O polmero com o grupo CH3 na posio R o cido 3-hidroxibutrico,

(BLAZEK, 2012; VOLOVA, 2004). Foi descoberto inicialmente pelo microbiologista

Aprovado ( ) Reprovado ( ) pela Banca Examinadora em //__