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Biocintica y Bioreactores

Qu hace a un reactor biolgico distinto a un reactor convencional? Cmo trasladamos lo que


ya sabemos sobre reactores qumicos para ahora entender, analizar, disear y optimizar reactores
biolgicos? Bien, comencemos por decir que, desde el punto de vista de tratamiento formal, no
hay diferencias apreciables. Al igual que para el caso de los reactores convencionales en el
anlisis de los reactores biolgicos nos valemos de ecuaciones de diseo (derivadas del balance
de masa correspondiente) y en ellas introducimos un trmino de produccin (o consumo) que
derivamos de leyes cinticas. Si, el proceso matemtico es anlogo, y el propsito el mismo
(maximizar conversin del producto deseado, si hay ms de un producto favorecer la
selectividad hacia el producto deseado, optimizar la temperatura de operacin, etc.

Dnde estn entonces las diferencias? Pues en las expresiones cinticas. Los modelos cinticos
que hemos visto hasta el momento no necesariamente reproducen aceptablemente el
comportamiento de reacciones biolgicas. Estriba en esto la sutil gran diferencia. Claro que,
detrs de esta diferencia en el tratamiento matemtico hay una distincin mas fundamental. En
un bioreactor trabajamos con organismos vivos o con partes de organismos vivos (enzimas) que
poseen caractersticas muy particulares.
Comencemos por el modelo cintico ms caracterstico de una reaccin bioqumica, el modelo
de Michaelis-Menten para cintica enzimtica. Por qu es este el modelo ms caracterstico?
Todas las reacciones bioqumicas, as sean llevadas a cabo en un bioreactor industrial, dentro de
una clula o fuera de ella, dentro de tu cuerpo o en un tejido animal o vegetal, son mediadas por
enzimas. Las enzimas son protenas que actan como catalizadores. Facilitan el acontecimiento
de reacciones que de otra forma, en su ausencia, estaran muy impedidas energticamente (seran
muy lentas o termodinmicamente imposibles a condiciones normales de P y T). Por citar un
ejemplo trivial, la combustin de un carbohidrato (azcar) requiere de altas temperaturas para

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ocurrir. Sin embargo, el proceso de respiracin celular (que no es ms que una combustin) se
lleva a cabo de forma muy eficiente y a T = 37C cuando es mediado por enzimas presentes en
nuestras mitocondrias. Las enzimas son molculas tridimensionales muy complejas y flexibles,
que por diversos mecanismos reducen la energa de activacin necesaria para una reaccin. En
verdad son catalizadores, pues posibilitan las reacciones pero no se involucran en ellas como
reactivos. Es momento de que introduzcamos aqu un poco de nomenclatura.
Sustrato: Es el reactivo o reactivos que la enzima procesar.
Producto: No hay mayor problema, es el producto de la reaccin.
Complejo Enzima-Sustrato: Es el complejo activado de una reaccin enzimtica. En este
estado transitorio, la enzima y el sustrato se encuentran unidos, ya sea por atracciones
electrostticas, o inclusive en algunos casos covalentemente. Este complejo activado es
reversible y transitorio.
Sitio activo: Localidad de la enzima donde fsicamente se lleva a cabo la reaccin. Normalmente
al sitio activo se une el sustrato (de una forma altamente especfica) y es ah donde se
llevan a cabo las transformaciones qumicas.
La figura 1, esquematiza en forma muy simplista, como acta una enzima. Este modelo o
mecanismo fue propuesto a principios del siglo XX. Est compuesto por tres etapas (aunque
luego introduciremos una simplificacin). En la primera etapa la enzima y el sustrato se
encuentran, uno a uno, y se realiza un acoplamiento. Ntese que esta etapa del mecanismo es
reversible, y est mediada entonces por una constante de velocidad en cada direccin (a las que
llamaremos k1 y k2). La segunda etapa es aquella en donde se realiza la transformacin qumica.
El sustrato pasa a producto en el seno de la enzima, en el sitio activo. En la tercera etapa, la
enzima libera al producto, quedando disponible para un posterior encuentro con otra molcula de
sustrato.

Hagamos algunas simplificaciones y algunas suposiciones. Supongamos que la segunda y tercera


etapa pueden ser sintetizadas en una sola. Formulemos entonces que todo el proceso puede ser
descrito por los dos pasos ilustrados en la figura 2. Ya con esta simplificacin, derivaremos un
modelo matemtico consistente con ciertas observaciones experimentales. Como primer paso en
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la derivacin, supondremos que la primera etapa del mecanismo ocurre rpidamente, y


rpidamente llega al equilibrio. Es decir:
k1[E][S] = k2 [ES]

(1)

En consecuencia, la segunda etapa del mecanismo es la etapa lenta, y por tanto la limitante.
Luego, la velocidad del proceso global (rs) deber estar correctamente descrito por:
rs = k3 [ES]

(2)

Este es un modelo que correctamente describira a una reaccin enzimtica tpica bajo las
suposiciones que hemos hecho. Hay solo un problema. Como recordars, es recomendable
expresar ecuaciones cinticas en trminos de constantes y concentraciones (o presiones
parciales) que podemos calcular o medir. Desgraciadamente, en este modelo sencillo de primer
orden en [ES] no se cumple este requisito, pues ES es un complejo transitorio difcilmente
medible. Esto nos lleva a la necesidad de buscar substituir la concentracin de ES por otras
variables que si podamos monitorear. Para lograr esto, recurriremos al siguiente argumento:
El intermediario ES, precisamente por su naturaleza intermediaria, no se acumula con respecto al
tiempo y por tanto, en estado estacionario podemos escribir este balance:

d[ES]
= k 1 [E][S] k 2 [ES] k 3 [ES] = 0
dt

(3)

Reagrupando este balance diferencial se puede llegar a la expresin:

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Esta expresin por si sola no es muy til, pues contiene el trmino de enzima libre [E] que
difcilmente puede ser medido durante la reaccin. Afortunadamente podemos recurrir a una
argucia matemtica. Consideremos un balance global de enzima. La enzima inicialmente
dispuesta para la reaccin ser en todo momento igual a la suma entre la enzima libre y la
enzima acomplejada con el sustrato. Entonces:
[Eo] = [E]+[ES]

(4)

Substituyendo la ecuacin (4) en la ecuacin (3) podemos deshacernos de [E]:


k1{[Eo] [ES]}[S] = [ES](k2 + k3)

(5)

An ms, en la ecuacin 5, convenientemente, podemos despejar [ES] dejndola en funcin de


constantes cinticas y valores de concentraciones que si podemos medir: [Eo], [S].
k1[Eo][S] k1[ES][S] = [ES] (k2+k1)
k1[Eo][S] = [ES]{(k2+k1)+(k1[S]}
[ES] =

k 1 [Eo][S]
k 2 + k 3 + k 1 [S]

(6)

Y substituyendo (6) en (2)


rs =

k 3 k 1 [Eo][S]
k 2 + k 3 + k 1 [S]

Dividiendo ahora arriba y abajo entre k1 llegamos a la expresin (7)


rs =

k 3 [Eo][S]
(k 2 + k 3 ) / k 1 + [S]

(7)

Y si a k3[Eo] le llamamos velocidad mxima (rmax), y a (k2+k3)/k1 le llamamos Km, entonces


habremos derivado la famosa ecuacin tpica para cintica enzimtica, la ecuacin de MichaelisMenten:
rs =

rmax [S]
K m + [S]

(8)

Ya tenemos entonces una expresin que refleja el mecanismo propuesto en la Figura 2. Son esta
expresin y su mecanismo vlidos. Bueno, la experiencia ha demostrado que bien reproducen
resultados experimentales como el que presentado en la Figura 3. En tal figura, se te presentan
datos de concentracin de velocidad de la enzima con respecto al tiempo. Ntese que en tal

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grfica se refiere al punto de concentracin donde la velocidad alcanza la mitad de rmax como Km.
Puedes corroborar matemticamente que esto es cierto?

Pues si ya tenemos nuestra expresin cintica, estamos listos para comenzar a disear reactores.
Veamos por ejemplo el caso de un reactor enzimtico operado en forma batch, donde el sustrato
glucosa se convierte en fructosa (como probablemente sabes, los jarabes fructosados son mas
dulces y tienen mayor valor comercial que los jarabes de glucosa). La ecuacin de diseo para
un reactor batch sigue siendo la misma, pues proviene del balance de materia sobre el sustrato en
el reactor. Al no entrar ni salir sustrato, el balance, como en un reactor batch convencional, solo
incluye los trminos de acumulacin y produccin.

r [S]
d[S]
= rs = max
K m + [S]
dt

Como siguiente paso en nuestra discusin, mencionaremos como evaluar los parmetros
cinticos de la ecuacin (8), rmax y Km. La ecuacin de velocidad se puede re-arreglar de varias
formas para expresarla como una lnea recta.
Tres formas de linearizacin de la ecuacin de Michaelis-Menten (M-M) son comunes:
[S] K m [S]
=
+
rs
rmax rmax
K 1
1
1
(b)
=
+ m
rs rmax rmax [S]
r
(c) rs = rmax K m s
[S]

(9)

(a)

(10)
(11)

Por cualquiera de estas tres formas (cada una presenta sus ventajas y desventajas), es posible
encontrar los parmetros cinticos a travs de los valores de la pendiente y la interseccin con la
abscisa.
Por ejemplo, tomemos la segunda ecuacin. Segn esta, una grfica de la variable independiente
1/[S] contra la variable dependiente (1/rs) nos dara una lnea recta al graficar datos
experimentales si en verdad el proceso correspondiera a una cintica M-M. La interseccin de
esta lnea recta con la abcisa sera el inverso del valor de rmax. Ya teniendo este podemos calcular
tambin el valor de Km, puesto que el valor de pendiente de la recta es precisamente Km/rmax.

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Consideremos los siguientes datos experimentales. De una serie de corridas en reactores batch a
distintas concentraciones de glucosa (sustrato) se han calculado los siguientes datos de velocidad
inicial de conversin de glucosa a fructosa:
Experimento
(R. Batch)
1
2
3
4
5
6
7
8

[So]
(mmol/L)
1
2
3
5
7
10
15
20

rso
mmol/(L min)
0.20
0.22
0.30
0.45
0.41
0.50
0.40
0.33

Data_Biorxn_clase
5.5
y = 2. 2249 + 3 .0387 x R = 0.884 67
5

4.5

1/v

3.5

2.5

1.5
0

0.2

0.4

0.6

0.8

1.2

1/ [S]o

As, 1/rmax = 2.2249. Entonces rmax = 0.4494 mmol/(L min). La pendiente de la recta descrita por
los datos experimentales es 3.0387. Este valor es igual a Km/rmax, de donde Km = 3.03870.4494
= 1.3657 mmol/L
El mtodo de clculo de valores cinticos basado en experimentos en reactores batch es el ms
prctico. Aunque hay forma de calcular rmax y Km con experimentos en reactores continuos, el
mtodo de velocidades iniciales en batch es el mas simple de operar.

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Una vez obtenidos los parmetros cinticos, podemos dimensionar bioreactores. Por ejemplo,
supongamos que queremos calcular el tiempo que deberemos procesar una solucin de glucosa
de 10 mmol/lt hasta un 90% de conversin en un reactor batch. El balance de materia sera:

r [S]
d[S]
= max
dt
K m + [S]

(12)

Separando variables e integrando:


[ S]

K m + [S]

d[S] =
[
S
]
[ S ]o

La solucin de esta integral es:

K m ln

rmax dt

[S]0
+ [S]0 [S] = rmax t
[S]

(13)

Que es la ecuacin que podremos utilizar para calcular el tiempo de residencia de nuestro
bioreactor enzimtico.
Y para un reactor continuo tipo tanque? La ecuacin de balance sobre sustrato (suponiendo
densidad constante, v0 = v) es:
v 0 [S]0 v 0 [S] rs V = V

d[S]
dt

(14)

Considerando estado estacionario, el trmino de acumulacin se elimina:


v0
r [S]
([S]0 [S]) = rs = max
V
K m + [S]

(15)

El factor (v0/V) es el inverso del tiempo espacial (), tambin conocido como velocidad espacial
(s), entonces:
r [S]
1
([S]0 [S])
= max
K m + [S]

(16)

que sera la ecuacin de diseo para un reactor enzimtico continuo.


Ahora bien, en muchas situaciones prcticas no utilizamos directamente a una enzima aislada,
sino a todo un microorganismo vivo para realizar una reaccin biolgica. Si este es el caso,
entonces nuestro problema de diseo resulta an ms interesante. Ahora el biocatalizador no es
una enzima sino toda una clula. Las clulas se reproducen una vez provistas condiciones de T,
pH, concentracin de nutrientes adecuadas, lo que significa que la concentracin del
biocatalizador tambin puede varar con respecto al tiempo. Para un bioreactor batch donde
estamos creciendo clulas, por ejemplo clulas de levadura, el balance sobre la biomasa (X) se
vera as:

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d[X ]
= [X]
dt

(17)

Este balance es consistente con el hecho de que la velocidad de incremento de biomasa (masa
celular) es dependiente de la biomasa celular misma existente en un cierto momento. Ntese que
si [X] tiene unidades de g clulas/mL, y t unidades de s, entonces tiene unidades de 1/s ( es la
tasa de crecimiento especfico para esa clula). Ahora bien, esa tasa de crecimiento no es
constante, sino que depende de la concentracin de alimento de que dependa la clula y de
parmetros cinticos propios. Si suponemos que todo el funcionamiento de la clula depende de
enzimas, y que es la ms lenta de estas la que determina la tasa de crecimiento, entonces
podemos pensar en que tenga la forma de una ecuacin M-M. De hecho, esa suposicin es
ampliamente utilizada. La ecuacin (18) es llamada ecuacin de Monod, y es anloga a la
ecuacin de Michaelis-Menten:
[S]
(18)
= max
K m + [S]
Y sustituyendo en (17) llegamos a:
d[X] max [S][X]
=
dt
K m + [S]

(19)

Desde luego este es solo uno de los balances pertinentes al anlisis de un reactor celular.
Podramos, y en muchas instancias debemos, formular ecuaciones de cambio para el sustrato (o
sustratos), el producto (o productos), etc.
Esta fue solamente una breve introduccin al rea de Ingeniera de reactores biolgicos, un rea
ms de accin para el ingeniero de procesos. Checar http://216.47.139.198/pensim/ donde se
presenta un simulador de procesos biolgicos de este tipo.

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