Coloracin

HematoxilinaEosina

INTEGRANTES
CORONADO CUSI STEFANIA
FABIAN AMBROSIO YELSIN
DAVILA DAVILA JORDAN
EVANGELISTA REQUEJO CLAUDIA
FRANCIA REYES YOLANDA
GONZALES BARRON ROCIO

MATERIALES
LAMINA HISTOLOGICA EN BLANCO
BATERIA DE COLORACION H-E
BALSAMO DE CANADA
LAMINILLA CUBREOBJETOS
CAJA PORTALAMINA
LAPIZ CON BORRADOR
GUANTES QUIRURJICOS
PAPEL HIGIENICO
CRONOMETRO
CAMPO DE TRABAJO

En la batera de coloracin H-E se pudo

observar :
Se puede observar tres bateras la primera la
cual estaba conformada por

LA SEGUNDA BATERIA ESTA CONFORMADA

POR:
HEMATOXILINA

A. CARBONATADA

EOSINA E

A. ACIDO A

La tercera batera esta conformada

por:
ALCOHOL 96 %

A. ABSOLUTO 2

A. ABSOLUTO 3

XILOL 1

Introducir las lminas portaobjetos en el xilol 1 durante 10 minutos

Introducir las lminas portaobjetos en el xilol 2 durante 10 minutos

Realizar 10 inmersiones en alcohol absoluto 1

Realizar 10 inmersiones en alcohol absoluto 2

Realizar 10 inmersiones en alcohol absoluto 3

AGUA DE CAO
Lavar con agua corriente ( de cao)

COLORACIN
Procedimiento en prctica

En este primer paso, procedemos a colorear como

hematoxilina de Harris durante un tiempo de 15
minutos. Esta coloracin va actuar a nivel nuclear.

Procedemos al lavado en agua

corriente.

En la imagen observamos como

se torna de un color entre
morado y rosado aunque an no
muy notorio.

Como se visualiza en la imagen

procedemos a introducir las muestras en
agua carbonatada, nos aseguramos de
que estn totalmente sumergidas, luego
tomamos un tiempo de 3 minutos. Esta
tiene la propiedad de intensificar el color
( auxocroma).

Procedemos a lavar una sola vez, a

diferencia de la anterior ( 3 veces) , notamos
que la coloracin es ms notoria, gracias a la
propiedad ya mencionada.

Por
ltimo
procedemos a sumergirlo
completamente en eosina durante un tiempo de 3
minutos, la cual acta como colorante
citoplasmtico de contraste o de fondo.

Finalizando lavamos en agua

corriente tres veces hasta lograr
quitar el colorante sobrante.

Podemos observar ya
la muestra un poco
ms notoria, luego de
ser introducida en las
tres sustancias ya
mencionadas.

DESHIDRATACIN
Hacer 10 inmersiones con las laminas de porta objetos en el
alcohol al 96%

DESHIDRATACIN
Observamos que el colorante le falta intensificar la coloracin y exceso

DIAFANIZACIN
Introducir las laminas porta objeto en el XIOL 1 durante 5 minutos

DIAFANIZACIN
Observamos que las estructuras estn definidas y coloreas , el
exceso del colorante esta desaparecido.

DIAFANIZACIN
Dejar secar para eliminar el exceso de xilol

Montaje:
Montar con blsamo de Canad:

 Luego con un lpiz que tenga borrador,

presionamos sobre el cubreobjetos de
adentro hacia afuera .

Secar:
Dejar la lmina histolgica por 24 horas

La tincin hematoxilina y eosina es el mtodo mas popular de

tincin utilizado en histologa y medicina diagnostica.
El mtodo supone la aplicacin de la tincin de hematoxilina,
que por ser catinica o bsica, tie estructuras cidas (basfilas)
en tonos azul y prpura,como por ejemplo los ncleos
celulares; y el uso de eosina que tie componentes bsicos
(acidfilos) en tonos de color rosa, gracias a su naturaleza
aninica o cida, como el citoplasma.

La Eosina es un colorante cido (predomina densidad de carga negativa), por lo cual

se asocia y colorea a estructuras catinicas del citoplasma y matriz extracelular, tales
como: filamentos citoplasmticos (como los de clulas musculares); membranas
intracelulares; y fibras extracelulares (por sus aminocidos bsicos ionizados).
La Hematoxilina se asocia con mordientes para actuar como un colorante bsico, por
lo cual se asocia y colorea estructuras aninicas (que posean fosfatos, sulfatos y/o
carboxilos ionizados):
Heterocromatina y nuclolos

RNA ribosomal
Matriz extracelular (por los sulfato de los GAG)

RESULTADOS
Ncleo celular: Azul
Citoplasma: Rosa
Musculatura: Rojo , rosa o fucsia
Glbulos rojos: Rojo, anaranjado
Fibrina: Rosa

Sangre: clulas sanguneas

Especie: humano (Homo sapiens; mamferos)
Tcnica: Hematoxilina-eosina en frotis sanguneo.

La Hematoxilina, es un compuesto que se obtiene de la planta leguminosa

Haematoxylum campechianum L., conocida tambin con el nombre de
palo de Campeche. Es un producto natural que al ser oxidado constituye
una substancia de color morado oscuro denominada hematena.
Tal como se obtiene de la planta e incluso luego de sufrir el proceso de
oxidacin, su capacidad de tincin es muy limitada. Por lo tanto, debe
combinarse con iones metlicos, especialmente las sales de hierro (III) o
aluminio (II), que actan como mordientes.
Si bien la hematoxilina es una sal neutra, suele ser denominada como un
colorante bsico, ya que el componente cromgeno reside en el complejo
catinico (bsico) de la misma. Es de notar que la tincin histolgica por
hematoxilina no indica tanto la constitucin qumica de los componentes
celulares, sino la densidad de cargas elctricas negativas de los mismos.

La eosina Y (C20H8Br4O5, tetrabromouorescena, CI 45380, CI 45386),

comnmente conocida como eosina amarilla.

La eosina B (C20H8Br2N2O9, dibromodinitrouorescena, CI 45400),

tambin conocida como eritrosina B azulada.

Estructura molecular del xilol

CARACTERSTICAS DE LA HEMATOXILINA
De acuerdo al procedimiento de tincin puede ser progresiva (intensifica la coloracin) y regresiva (eliminacin del exceso)

Se obtiene de forma natural (plantas)

Para ser un colorante maduro pasa por un proceso de oxidacin

Utilizacin para coloracin de muestras

Utilizacin para la industria textil

Presenta propiedades semejantes a las anilinas bsicas

Es un colorante directo

Los agentes oxidantes naturales: el aire (varios meses de exposicin)

Los agentes artificiales puede ser: oxido de mercurio, permanganato de potasio, bicromato de potasio, etc.

En las tinciones histolgicas tie los componentes cidos dando un color violeta

CARACTERISTICAS DE LA EOSINA

El nombre Eosina proviene de aurora (naranja).

Presenta auto fluorescencia espontnea

Se la emplea tanto en soluciones acuosas como alcohlicas.

Las eosinas son xantenos cidos colorantes de ftalena.

Las ms comunes son:

Eosina amarilla, es la ms usada.
Eosina B (azul).
Floxina.
Eritrocina (est halogenada con iodo en lugar de bromo).
Zafranina.
Rosa de Bengala.
Es un colorante artificial (se trata de derivados hidroxixantnicos
halogenados con tres grupos arilo).

CARACTERISTICAS DE LA EOSINA

Su punto de solubilidad es del 44 % en agua y del 7 % en alcohol.

Se puede usar un acentuador del color (por ejem. cido actico al
0.2 % cido tnico).
Da una buena coloracin citoplasmtica de fondo.

Para colorear se emplea generalmente una batera de coloracin.

CARACTERISTICAS DEL XILOL o XILENO

Qumicamente denominado dimetilbenceno, es un
anillo de benceno con dos grupos metilo unidos a l,
presentando tres isoformas, en las que la posicin de los
dos grupos metilo varia en el anillo de benceno.

El Xilol solo es soluble en alcohol al 100%

Se utiliza tambin como solvente y diluyente.
El alcohol y el xileno disuelven los lpidos de la clula y
por lo cual al extraerse tambin se extraen las grasas y
los lpidos de la clula.
El lquido diafanizador de uso ms frecuente es el xilol

CARACTERISTICAS DEL XILOL o XILENO

La diafanizacin de los tejidos deshidratados se debe a que
estas sustancias poseen un alto ndice de refraccin y al
interactuar con los tejidos los vuelven transparentes.
Es un excelente agente aclarante pero tiende a hacer que los
tejidos sean excesivamente duros y quebradizos y esto nunca
deben dejarse en este lquido ms de 3 horas.

Se llama aclaracin, ya que el tejido se torna transparente o

claro en el xileno, esto se debe a que cambia su ndice de
refraccin.
El xileno es inadecuado para el encfalo y los ganglios
linfticos, pues los hace demasiado quebradizos, para estos
rganos es mejor utilizar cloroformo.
Para el procesamiento de muestras, se sumergieron los tejidos
en soluciones de xilol I y II durante 15 minutos cada una.

CARACTERISTICAS DEL METANOL

El metanol (estructura qumica CH3OH), es un lquido incoloro,

voltil, inflamable, con olor leve a alcohol en estado puro.
Se le emplea con frecuencia para fijar frotis desecados:
SANGRE.
MEDULA OSEA.
GANGLIO.
BAZO.
LIQUIDOS DE PUNCION.

Altera morfolgicamente a los lpidos.

Como fijador de emergencia vale, pero tiene grandes

inconvenientes: no fija la cromatina, produce retraccin, no tiene
efecto mordiente y produce fenmenos de desplazamientos.
(sustitucin de hidratos de carbono).

CARACTERISTICA DE ETANOL
Lquido claro, transparente o incoloro, voltil, inflamable y de olor
agradable.
Como fijador nico utilizaremos alcohol a unas concentraciones
entre el 70 y 90% y se obtiene cogiendo de 7090 ml de alcohol puro
y se lleva hasta 100 con agua destilada.
La fijacin mas potente va a corresponder a las soluciones ms
concentradas pero a altas concentraciones la capa externa del tejido
se endurece en exceso, lo que impide la penetracin del fijador a la
parte interna de la pieza.
El tiempo de fijacin correspondiente a una pieza de 5mm de
espesor es dos a cuatro horas renovando unas 3 veces el lquido.
Es un fijador que preserva el glucgeno y la actividad de ciertas
enzimas titulares, fija los pigmentos y se emplea en las extensiones
citolgicas

CARACTERISTICAS DEL ETANOL

Como altera escasamente la estructura antignica de los tejidos es un

buen agente fijador para inmunohistoqumica. Entre las ventajas del
alcohol estn:
Fijan y deshidratan al mismo tiempo
Posee una gran velocidad de penetracin
Precipita muy rpidamente las protenas y el glucgeno lo que unido a
la anterior propiedad aporta extraordinariamente el tiempo de fijacin
es un notable agente bactericida y por tanto un buen conservante
No fija adecuadamente la cromatina porque disuelve los cidos
nuclecos y adems disuelve parcialmente los lpidos.
Endurece y contrae excesivamente los tejidos.
Prepara mas la tincin porque carece de efecto mordiente

A medida que realiza la fijacin se va diluyendo al incorporar el agua

que extrae de los tejidos por lo cual pierde actividad progresivamente