COMENTARIOS ACERCA DE LA ADMINISTRACIN DE

MEDICAMENTOS AVANZADOS
1. INTRODUCCIN
Los Nanotransportadores ofrecen un nueva alternativa para dirigir la administracin
especfica de agentes teraputicos [1]. La dcada pasada ha sido testigo de un progreso
sin precedentes con el diseo de varios instrumentos de conduccin en base a
diferentes nanomateriales, tales como polmeros, dendrmeros, nanotubos y
nanovarillas. Las nanopartculas de oro (GNPs) han surgido recientemente como un
candidato altamente atractivo en la administracin de varias cargas tiles en la
conduccin de sus procedimientos [7,8]. Las cargas podran ser pequeas molculas de
medicamento o biomolculas, como las protenas ADN, ARN (ver ms adelante). La
liberacin eficiente de estos agentes teraputicos es un requisito previo para una terapia
eficaz. La liberacin podra ser desencadenada por estmulos internos, como el glutatin
[9], o pH [10] o externos, como la luz [11].
Los estmulos internos operan con gran relevancia y de forma biolgicamente
controlable, mientras que los estmulos proven un control de espacio temporal en la
liberacin.
Las nanopartculas de oro ofrecen sus nicas propiedades qumicas y fsicas para
transportar y descargar las farmacuticas. Primero, el ncleo de oro tiene efecto
plasmnico y junto a la no toxicidad es esencialmente inerte [12]
Adems se sintetiza con facilidad; las partculas monodispersas pueden formarse con
ncleos cuya dimensin va desde los 1 nm hasta los 150 nm (Cuadro 1, pag 1308). Ms
an, la versatilidad es impartida por su disponibilidad funcional, por lo general, a travs
de sus enlaces de tiol (ver ms adelante). Adems, sus propiedades fotofsicas podran
desencadenar la liberacin del medicamento en un lugar alejado [13].

Se ha publicado recientemente varias revisiones que detallan los biosensores [14] y la

administracin del medicamento [15] en el proceso de interaccin

entre la

nanopartculas y las biomacromolculas. Esta investigacin se enfocar en el

medicamento, gen y administracin de la protena usando GNPs (Fig. 1, pag 1308).
2. SNTESIS DE LAS NANOPARTCULAS DE ORO
Se ha puesto denodados esfuerzos en los ltimos cuarenta y cinco aos en la fabricacin
de GNPs con monodispersidad y tamao controlado. Los GNPs con tamao de ncleo
variado se preparan reduciendo las sales de oro en presencia de agentes de
estabilizacin adecuados que prevean la acumulacin de partculas. El cuadro 1 muestra
algunos mtodos comunes de sintetizacin de nanopartculas de oro.
Varios grupos han fabricado sistemas de administracin de GNPs que sostienen las
capas funcionales, sujetas con los enlaces de tiol, en sus monocapas.

Una amplia

variedad de grupos de monocapa protegida (MCPs) puede formarse rpidamente y de

una manera escalable empleando el procedimiento del recipiente individual
desarrollado por Schiffrin et al. en 1994 (Esquema 1, pag 1309) [17]. En esta preparacin,
las sales AuCL4 se reducen con NaBH en presencia de una(s) molcula(s) recubierta(s)
de tiol deseado. El tamao del ncleo de las partculas puede variar de 1.5 nm a ~ 6 nm
variando la esteiquiometra de oro del tiol.
La diversidad funcional de los MCPs puden extenderse a travs de la formacin de
grupos de monocapa protegida mixta (MMCPs) que pueden sintetizarse directamente o

mediante la post-funcionalizacin de los MMPCs. Un mtodo verstil para crear

MMPCs es la reaccin del lugar de intercambio desarrollada por Murray (Esquema 1)
[18]. En este procedimiento los protocolos se desplazan hacia los enlaces moleculares
nativos de MCPs en el proceso de equilibrio. Se puede emplear el control de la
estructura de una sola capa provista por la sntesis de nanopartculas conjuntamente
con el desplazamiento del lugar y otros mtodos de modificacin post- sinttica [22]

para mostrar un amplio rango de funcionalidad en la superficie de la partcula, que

incluye fracciones variadas (glicol etileno) (PEG) e insuficientes (glicol etileno) [23-30].
Una evidente ventaja de de estas metodologas combinadas es que son bien dciles a la
sntesis divergente, aspecto importante en la creacin de vehculos de reparto.
3. ADMINISTRACIN DE MEDICAMENTO USANDO NANOPARTCULAS
DE ORO
Los sistemas de administracin de medicamento (DDs) proveen atributos positivos a un
medicamento libre si se mejora la solubilidad, estabilidad in vivo, y la biodistribucin.
Tambin pueden alterar la farmacocintica de algunos frmacos libres. Adems, las
enormes cargas de productos farmacuticos en DDs pueden generar depsitos de
drogas para la liberacin contenida y controlada que ayuda a mantener el nivel con la
ventana teraputica. Por ejemplo, una nanopartcula de oro con un ncleo de 2 nm de
dimetro, podra conjugarse con ~ 100 molculas a enlaces disponibles (n= ~ 108) en la
monocapa [31]. Zubarev et al han tenido xito recientemente en la unin de ~ 70
molculas de paclitaxel, un medicamento quimioteraputico para un GNP con un
ncleo de 2 nm de dimetro [32].
3.1. Liberacin del glutatin mediado de molculas pequeas
La liberacin de GHS mediado representa una estrategia no enzimtica para la
activacin intracelular selectiva de pro medicamentos. Esta metodologa se libera en el
diferencial dramtico en la concentracin intracelular GSH (1-10 mM) [33,34] versus los
niveles extracelulraes de tiol [35], donde los tioles predominantes en el plasma
sanguneo son glutatin (2M) y cistena (8M) [36]. Las metodologas simples se
basan en enlaces de disulfida entre los medicamentos y los transportadores [37-42]. Si
bien este enfoque puede ser efectivo, incluyendo un ejemplo actual en la clnica [37] es
difcil afinar la reactividad del enlace disulfida. Adicionalmente, el intercambio tioldisulfida puede ocurrir en la superficie de cistenas de protenas en el torrente

sanguneo a fin de crear la protena transportadora con perfiles farmacocinticos y de

biodisponibilidad alterada. Esperamos que las nanopartculas resistan el intercambio de
protenas debido al protector estrico de la interface t iol-oro.
Se ha demostrado en recientes estudios la diversidad celular y liberacin de GHS
mediada de un colorante hidrfobo (BODIPY), como modelo de drogas hidrfobas
empleando nanopartculas de oro funcionales (fGNPs) [9]. Las partculas (ncleo d= ~ 2
nm) destacaron una monocapa mixta compuesta de enlaces catinicos tetraylated
(TTMA) y enlaces fluorognicos (HSBDP) (Fig. 2a). La naturaleza catinica facilita el
transpaso de la barrera de la membrana celular, y el fluorforo prueba el posible
mecanismo de liberacin del medicamento. Los GNPs BIODIPY conjugados no son
fluorescentes como el ncleo de oro que emite una fluorescencia a travs de la energa
y/o proceso de transferencia del electrn [43, 44]. Las seales de fluorescencia emite
seales desencadenando GNPs con GSH in cuvette, o clulas tioles en clulas de hgado
humano (Hep G2) (Fig. 2b). Se verific la liberacin controlada de la tinta con clulas
fibroblastos embrinicas de ratn (MEF, que tienen ~50% niveles GSH intracelulares
menores que el Hep G2) con una concentracin variada de monoster glutatin (GSHOet: 0.5 y 20 mM)
3.2. Liberacin del xido ntrico y oxgeno singlete de las nanopartculas de
oro. El oxgeno singlete es la forma energticamente excitada del oxgeno molecular
(O2), con dos electrones apareados en los orbitales de energa ms alta. Los efectos
dainos de la luz solar sobre muchos materiales orgnicos (polmeros, etc) a menudo se
atribuyen a los efectos del oxgeno singlete).
Los GNPs podran emplearse en la administracin de agentes diatmicos teraputicos,
como el oxgeno singlete, o el xido ntrico. El oxgeno singlete (0 ), una especie
citotxica, que incluyen terapia de cncer fotodinmica [45]. Rusell y colegas decoraron
la superficie de MPCs con ftalociaminas (PCs), un fotosintetizador que genera oxgeno

singlete con buena produccin cuntica (Fig. 3a) [46]. La produccin cuntica de PCs
libre aument en 50% (de 0.45 a 0.65) sobre la conjugacin de MPCs. Adems la
conjugacin promovi la solubilidad de PCs hidrfobo en solventes polares (desde el
tualeno hasta el etanol).
El xido Ntrico (ON) regula los mltiples procesos regulares que involucran la
angiognesis, vasodilatacin y la respuesta inmune [47]. La liberacin controlada de ON
podra ser una efectiva terapia para la falla respiratoria por hipoxia asociada con
hipertensin pulmonar. Schoenfisch et al. Demostraron que el ON puede almacenarse
eficientemente en enlaces covalenes conpoliamina estabilizada MPCs va la formacin
de cido inestable N-diazeniodiolato (Fig. 3b) [10]. Ellos mostraron liberacin efectiva
de ON de los nanocontenedores solubles al agua en condicin acdica (pH=3). Los
materiales de respuesta pH se pueden aplicar para la administracin del medicamento
en

presencia

de

un

ambiente

acdico

medio

de

tejidos

inflamatorios

tumorales(pH~6.8), o vesculas celulares como los endosomas (pH~5.5-6) y lisosomas

(pH~4.5-5.0) [48-50].
4. NANOPARTCULAS

DE

ORO

EN

LA

ADMINISTRACIN

DE

BIOMOLCULAS
Las nanopartculas de oro son capaces de administrar biomolculas sin restringirse
como transportadores de solo pequeas drogas moleculares. Su tamao adecuado y
funcionalidad las han convertido en un til instrumento para el reconocimiento eficaz y
la administracin de biomolculas. Su desempeo es evidente en la administracin de
pptidos, protenas o cido nuclico como ADN o ARN.
4.1. Las nanopartculas de oro para la administracin de cido nuclico va
conjugacin no covalente.

La terapia del gen propone una estrategia ideal para el tratamiento de enfermedades
genticas y adquiridas [51]. Los virus proveen un medio lgico para la terapia del gen, y
se ha demostrado que son altamente eficientes [52]. Los virus, sin embargo, han
generado muchas preocupaciones con respecto de la seguridad derivadas de la
citotoxicidad impredecible y de la respuesta inmune [53].

Los sistemas de

administracin de ADN sintticos han superado estas limitaciones. Sin embargo, los
sistemas de administracin de genes no virales actuales son menos eficientes. Los
vectores se encuentran con numerosas barreras entre el lugar de la administracin y la
ubicacin en el ncleo de la clula [54]. Los instrumentos de conduccin efectiva
necesitan proporcionar proteccin eficaz de cido nucleico de la degradacin por
nucleasas, entrada celular eficiente, y liberacin del cido nucleico de manera funcional
en el ncleo [55]. El GNPs ofrece candidatos atractivos para la administracin de los
genes. Pueden ser reducidos a un tamao bastante pequeo para proporcionar una
radio mximo de superficie a volumen, maximizar el radio de la carga til /
transportador. Quizs igualmente importante, la cobertura de la monocapa de MPCs y
y MMPCs permiten sintonizar la carga e hidrofobicidad para maximizar la eficiencia de
la transfeccin, mientras que se minimiza la toxicidad. Se ha demostrado en estudios
anteriores que, las nanopartculas de oro funcionales con grupos de amonio cuaternario
catinico (a) se enlazan al ADN plsmido a travs de las interacciones electrostticas
[56], (b) protegen al ADN de la digestin enzimtica [57] y (c) liberan el enlace ADN por
el tratamiento GSH en cubeta [58]. Estas nanopartculas de ADN conjugadas no
covalente proporcionan un medio eficaz de la administracin del gen en entrega en
clulas 293T de mamfero [59] (Fig. 4). Signifitivamente, las partculas anfiflicas
proporcionaron vectores de transfeccin superior, indicando que la hidrofobicidad de
las partculas contribuye con la captacin celular y / o la posterior liberacin del ADN
de la vescula endosomal. Esta nanopartcula optimizada fue ocho veces ms eficiente
que la polietilenimina (PEI).

Posteriormente, Klibanov et al. hicieron que las nanopartculas de oro sean ms

funcionales con la polietilenimina ramificada (PEI, 2 kDa) para proveer un vector de
transfeccin AuNP - polmero hbrido (Fig. 5a) [60]. Determinaron que la transfeccin,
esencialmente en las clulas renales de los monos (COS-7) variaban con el PEI: la
proporcin molar de oro en los conjugados . En la proporcin optimizada, los
conjugados fueron doce veces ms potentes que en el mismo polmero en s (Fig. 5b). Al
igual que en los estudios anteriores, la investigacin indic que el aumento de la
hidrofibicidad del agente de transfeccin potencia la internalizacin celular y por lo
tanto la eficacia de la transfeccin. Recientemente, Liu et al. fabricaron aglutinantes
efectivos de AND sujeto a la - ciclodextrina en la periferia de las Nanopartculas de oro
oligo modificadas (OEA-CD- NP) (Fig. 5c) [61]. Ellos han demonstrado la capacidad de
OEA- CD- NP para administrar el ADN plsmido en las clulas mamarias cancerosas
(MCF- 7).
Rotello et al. informaron recientemente una

uncaging fotoqumica del ADN cargado

en la superficie de las nanopartculas (Fig. 6a) [11]. Se dise una nanopartcula foto
lbil para cambiar la naturaleza de la superficie de catinico a aninicos tras la
irradiacin. Esta partcula fue adaptada con un ster de enlace o-nitrobencilo
fotoescindible y una sal de amonio cuaternaria como grupo terminal (Fig. 6b). Despus
de la formacin de la partcula con ADN, la irradiacin UV se adhiere al enlace
nitrobencilo creando un grupo carboxilato aninico y liberando el ADN.
En estudios in vitro utilizando un ensayo de la polimerasa de ARN T7 se demostr que
la transcripcin de ADN se restableci tras la irradiacin UV. Estudios de cultivo celular
indicaron que los complejos de la partcula de ADN fueron efectivamente tomadas por
clulas. Mediante la observacin de fluorescencia brillante en el interior de las clulas se
estableci la liberacin de ADN identificado como FITC (Fig. 6c). Por otra parte, se
observ un alto grado de localizacin nuclear para el ADN liberado (Fig. 6d).

4.2. Nanopartculas de oro para la administracin de cido nucleico por enlace

covalente
Las cadenas de cido nucleico se pueden modificar fcilmente con los tioles (-SH)
para injerto en nanopartculas. Nagasaki y colegas conjugaron el (SH-siARN) con las
nanopartculas de oro para la administracin celular [62]. Las partculas de ARN
modificado se recubrieron con poli (glicol etileno) poli - bloque (2 - (N,N-dimetilamino)
etil metacrilato) copolmero para mejorar internalizacin celular . Estos sistemas de
administracin inteligentes fueron efectivos para el silenciamiento de los genes en
clulas Huh- 7. La actividad ARNi ha revolucionado la estrategia de terapia gnica en el
siglo XXI. En general, los materiales policatinicos se emplean para condensar el ADN y
transportarlo al interior de la clula. Sin embargo, en el ao 2006, surgi un gran avance,
cuando Mirkin et al. elaboraron un informe sobre la internalizacin celular de las
nanopartculas de oligonucletidas - modificadas (ADN - NPs), que lleva un gran
potencial de superficie negativa (Fig.7) [63]. Estas partculas eran estables contra la
digestin enzymtica. La incubacin de las clulas con nanopartculas conjugadas
identificadas como fluoroforos de ADN revel una captacin eficiente de las partculas.
En este sistema, el ADN antisentido hibrid con la partcula controlado los expresin de
la protena. Esto se demostr utilizando la expresin de EGFP - C166 con nanopartculas
funcionales de ADN antisentido, proporcionando una reduccin de la intensidad de
fluorescencia en las clulas. Hace poco, se ha descubierto el mecanismo de captacin
celular de ADN - NP el proceso de endocitosis es iniciado por adsorcin de numerosas
protenas serum sobre la superficie de las partculas [64].
4.3. Nanopartculas de oro funcionales en la administracin de protenas
Las nanopartculas de oro pueden ser igualmente nanoconductores de pptidos y
protenas de inters. Rotello et al. han informado que el amonio alquilo-tetra catinico
de GNP funcional reconoce la superficie de una protena aninica a travs de la

interaccin complementaria electrosttica e inhibe su actividad (fig. 8) [65]. La actividad

se recuper gracias a la protena libre tratando la partcula copmpleja de protena con
GSH, mostrando al GNPs como potenciales transportadores de protenas. En un estudio
reciente, Pokharkar, Sastry y colaboradores demostraron nanopartculas de oro
funcionales como portadores de la insulina [66]. Las partculas fueron estabilizadas por
quitosano, un biopolmero no txico. Las partculas recubiertas con quitosano adsorben
fuertemente la insulina en su superficie, y son eficaces en la administracin transmucosa
de la insulina.
5. EFECTO FOTOTRMICO DE LAS NANOPARTCULAS DE ORO EN LA
TERAPIA
Adems de la qumica de la superficie de los GNPs, sus propiedades fsicas podran ser
explotadas para aplicaciones de suministro [67]. Los GNPs causan calentamiento local
cuando se irradian con luz en la ventana de agua (800 nm a 1200 nm). El-Sayed et al.
han informado recientemente sobre el uso potencial de los GNPs en la destruccin
fototrmica de tumores [68]. Los GNPs de Citrato-estabilizados (ncleo d= 30 nm)
fueron recubiertos con anti-EGFR (receptor del factor de crecimiento epidrmico) para
dirigir las clulas HSC3 (Carcinoma escamocelular humano), responsables del cncer. El
uso de GNPs mejor la eficacia de la terapia fototrmica por 20 times.
En otro enfoque, los sistemas de suministro pticamente sensibles han sido diseados
por la incorporacin de Au nanoesferas en las cscaras de las cpsulas. Caruso et al.
prepararon las microcpsulas a travs de un procedimiento capa por capa (LBL) tcnica
para encapsular macromolculas como dextranos marcados con fluorescena (Fig. 9)
[69]. Las cubiertas de las cpsulas fueron dopados con GNPs, con respuesta contra el
rojo infrarrojo de luz cercana (NIR). FITC-dextrano fue puesto en libertad tras el
tratamiento con lser (1064 nm) debido a la ruptura de la cscara. Skirtach, Parak y

colegas han extendido esta estrategia para ofrecer materiales encapsulados de cpsulas
polielectrolitos de multicapas dentro de la vida de las clulas cancerosas [13].
6. FOCALIZACIN DE LAS NANOPARTCULAS DE ORO IN VIVO
Para aplicaciones in vivo, la meta de los nanovehculos es llegar a los tejidos enfermos
despus de la administracin en el sistema circulatorio.

Se ha desarrollado dos

enfoques para la focalizacin a saber pasiva y active (Fig. 10) [70,71] La focalizacin
pasiva depende de la ubicacin de los vectores en los tejidos no saludables debido a
extravasacin de los vasos sanguneos con fugas (brecha de ~ 600 nm). Un aspecto
importante de los sistemas de transporte en la escala de 5 a 10 nm es su capacidad para
sacar ventaja de los enlaces de permeacin y retencin mejorada (EPR) (Fig. 1) [72]. Por
otro lado, la focalizacin activa presenta ligandos sobre la superficie del vehculo para el
reconocimiento especfico por los receptores de la superficie celular. Los ligandos
podran ser molculas pequeas, pptidos o protenas. La combinacin de ambos tipos
de focalizacin har que un vehculo sea ideal para la entrega in vivo. Los nanovehculos
sufren de consumo no especfico y la degradacin potential en los macrfagos. Por lo
tanto, la orientacin es fundamental para maximizer la eficacia del medicamento
mientras se minimiza los efectos secundarios. Pun et al. han informado recientemente
cmo las diferentes propiedades fsico-qumicas, como el tamao, la PEGilacin, o los
ligandos, regulan el objetivo de la absorcin especfica versus la no especfica [73].
Emplearon nanopartculas de oro con o sin PEGilacin (PEG

5000)

llamado PEG - NP o

simplemente NP no modificado , respectivamente, de diferentes tamaos (50, 80, 100, o

150 nm) (Fig. 11a). Los tioles de Galactosa PEG se injertan en PEG-NP para
proporcionar Gal-PEG-NP para la orientacin activa del hgado, ms especficamente en
los hepatocitos. Se recogieron muestras de sangre y el hgado despus de 2 h de la
inyeccin. Adems, se analizaron los hepatocitos y las clulas no parenquimatosas
(CPNs) del hgado. Se puede resumir los resultados de la siguiente manera: (a) La

PEGilacin aumenta la circulacin de sangre de por vida (b) El ligando de galactosa

facilita la filtracin de Gal-PEG-NP en el hgado y (c) el ligando orienta la clula
especfica de los hepatocitos, en particular, por 50 nm partculas (Fig. 11c)
Curiosamente, Chan et al. elaboraron un informe sobre las nanoesferas de oro de 50 nm
de dimetro que se internalizaron en clulas de mamfero a una tasa ms rpida y ms
alta en comparacin con otras nanopartculas (ncleo d = 14, 30, 74, o 100 nm) [74].
Tambin han puesto de manifiesto que las partculas recubiertas de transferrina entran
en las clulas, posiblemente a travs de endocitosis mediada por va clatrina [75].
Dos molculas de direccionamiento, la de cido flico (AF) y la de metotrexato (MTX),
son reconocidos especficamente por los receptores de folato que son ms expresadas en
las superficies de muchas clulas tumorales. Andrs y compaeros de trabajo han
demostrado recientemente la entrega selectiva de nanopartculas-AF de receptors de
folato de clulas positivas KB [76]. Se conjug el cido flico con las nanopartculas de
oro (d = 10 nm) con PEG espaciador durante el studio. Las partculas se incorporaron
ptimamente mediante las clulas KB, pero se detect poca captacin celular en las
clulas WI que no sobreexpresan receptor de folato. Adems de un grupo de
direccionamiento, el metotrexato pudo funcionar como medicamento contra el cncer.
Wu, Shiau y colaboradores han demostrado que el MTX-GNP conjugado inhibe el
crecimiento tumoral en un lquido asctico de carcinoma pulmonar de Lewis en un
ratn de prueba (LL2) [77]. Las nanopartculas de oro no son tiles para la orientacin
de las clulas especficas, sino tambin para la ubicacin de orgnulos deseados.
Fuented et al. decoraron los pptidos TAT con nanopartculas de oro, una seal de
localizacin nuclear, para transportarlas al ncleo [78].
Paciotti et al. Paciotti et al. condujeron el estudio in vivo para investigar el efecto
teraputico de los coloides de oro PEGilados (cAU-PEG-TNF) con protena adsorbida
(factor de necrosis tumoral, TNF) [7]. Al inyectar cAU-PEG-TNF por va intravenosa en

los ratones, se acumularon en gran parte en los tumores de carcinoma MC-38 del colon
en comparacin con el hgado, el bazo, u otros rganos sanos.
TNF proporcion tanto la orientacin como la accin teraputica cuyo objetivo de fondo
estriba en eliminar las clulas diana.
ms

eficaces

en

la

disminucin

Es importante destacar que las partculas eran

de

la

masa

tumoral

de

TNF

libre.

Estudios recientes realizados por este grupo han demostrado una mejora en la terapia
de tumores mediante el injerto de paclitaxel, un eficaz medicamento contra el cncer, en
cAU-PEG-TNF (Fig. 12) [8].

7. CONCLUSIONES
Las nanopartculas de oro se han convertido en la piedra angular para la administracin
de frmacos y genes ya que proporcionan un complemento de suma importancia para
los instrumentos de conduccin ms tradicionales. Su combinacin de baja toxicidad
inherente, alta rea superficial y estabilidad apropiada les confiere caractersticas nicas
que permiten nuevas estrategias de suministro. El punto clave que hay que tener en
cuenta es la ingeniera de la superficie de las partculas para optimizar las propiedades
tales como la biodisponibilidad y no inmunogenicidad.
8. RECONOCIMIENTOS
Esta investigacin estuvo respaldad por el NIH (GMO77173) y el Centro de
Manufactura Jerrquica de la Universidad de Massachussets (NESC, DMI- 0531171).