Explique detalladamente cuales son los buffers utilizados en el corrido

electrofortico y sus componentes (TAE, TBE).

El Buffer TAE es ideal para correr geles de agarosa en electroforesis de DNA.

Una solucin 1X se obtiene agragando 1 parte de TAE buffer y 49 partes de
agua desionizada.
Concentracin final (1X): 40mM Tris acetato, 1mM EDTA
- Tris (Tris-(hidroximetil)-aminometano): Molcula responsable del tamponamiento.
Regulacin del pH.
- cido Brico/cido Actico : contribuye a ajustar el pH deseado e igual que el
anterior, a mantenerlo.
- EDTA (cido Etilendiaminotetraactico): quelante de cationes divalentes, cuya
funcin es secuestrar Mg2+, con lo que se evita que las posibles nucleasas presentes
degraden el ADN de la muestra, ya que la mayora de las nucleasas requieren de Mg2+
como cofactor.

El buffer TBE es para correr geles de agarosa y poliacrilamida. Es ideal para

separacion
de DNA y RNA en geles de corridas largas o alto voltaje.
Concentracin final (1x): 89mM Tris base, 89mM acido borico, 2mM EDTA.

Cules son sus propiedades y cuando se utilizan?

los dos buffers son similares

, y se pueden utilizar de forma indistinta con cualquier tipo de agarosa, pero
tienen diferentes propiedades que los hacen apropiados para diferentes
aplicaciones
TAE buffer tiene baja fuerza inica y baja capacidad tamponante lo que
hace necesario la recirculacin del buffer cuando los tiempos de
electroforesis son largos. TBE buffer tiene alta fuerza inica
y alta capa cidad tamponante lo que permite trabajar sin recirculacin en
electroforesis largas. Se recomienda para separacin de fragmentos
pequeos y con pequeas diferencias de tamaos entre ellos

Cules son los mtodos ms utilizados para visualizar y cuantificar el ADN

en un corrido electrofortico?
El ADN teido con bromuro de etidio, es detectado con radiacin ultravioleta; a
una longitud de onda de 245 nm la luz UV es absorbida directamente por el
ADN y transmitida al colorante; a 302 y 306 nm la luz UV es absorbida
directamente por el colorante. En ambos casos la energa es re-emitida a una
longitud de onda de 590nm, en la regin rojo naranja del espectro visible.
Para visualizar las bandas de ADN separadas en el gel, pselo directamente
al transiluminador con luz UV. Cuando el gel no tiene incluido el EtBr, es
decir cuando no se incluy durante el proceso de gelificacin, se debe teir
durante aproximadamente 20 min. En una solucin de 0.5 g /ml de EtBr en
agua desionizada.

Para cuantificar y visualizar el DNA se usan agentes colorantes fluorescentes, los

cuales aumentan notablemente su emisin cuando se unen a la doble hlice

Qu es el buffer de carga y que propsitos cumple en la electroforesis?

Este buffer le da peso a la muestra para que el ADN se precipite al fondo de los
pozos asi como indicar el corrimiento de cada muestra debido al colorante
sacarosa: se usa en el buffer de carga para conferir peso a la muestra y esta no
se disoerse en el buffer de corrimiento.
Azul de Bromofenol: El azul de bromofenol es un colorante que permite ver la
corrida (corre como si fuera tuviera 500 pb de peso, es decir, est en el frente de la
corrida), durante la electroforesis, controlando que la muestra no se caiga del gel o
no se dirija a otro pocillo

Cules son los buffer de electroforesis en agarosa ms comunes?