EQB- 045 TECNOLOGIA DE PROCESSOS FERMENTATIVOS EXPERIMENTAL

Produo de Biomassa
Protena unicelular o termo aceito para definir material celular microbiano para utilizao
como alimento ou rao. Vrios microrganismos so considerados para este tipo de aplicao,
dentre eles, principalmente leveduras e microalgas.
Comparada com os mtodos tradicionais de produo de protenas para alimentao
humana e animal, a produo de protena unicelular para o mesmo fim apresenta algumas
vantagens:
- os microrganismos tm de forma geral, tempo de gerao extremamente curto
- alto contedo em protena
- podem ser utilizadas diversas fontes de carbono, inclusive resduos industriais
- os microrganismos podem ser facilmente modificados
- as instalaes para produo ocupam reas limitadas
- a produo independe de fatores climticos.
Hoje em dia h um grande interesse na produo de biomassa devido s condies de m
ou subnutrio a que est sujeita grande parte da populao de pases subdesenvolvidos, alm de
haver previses de falta de alimento no futuro que atenda ao aumento populacional. No caso dos
pases desenvolvidos h interesse para o preparo de alimentos compostos nas tcnicas modernas
para produo de ovos, frangos, etc.
Seleo do microrganismo:
Os microrganismos para uso como fonte de protena para alimentao humana ou animal
devem apresentar algumas caractersticas bsicas, tais como, no ser patognico, apresentar bom
valor nutritivo, aceitabilidade como alimento, no produzir compostos txicos, apresentar baixos
custos de produo (alta velocidade de crescimento, baixa exigncia nutricional, facilidade de
separao).
Microrganismos :
Saccharomyces cerevisiae
Kluyveromyces fragilis
Spirulina sp.
1. Meios de cultivo :
-Leveduras:

a) Saccharomyces cerevisiae
Acar cristal
(NH4)2SO4
KH2PO4
MgSO4.7H2O
Extrato de levedura

..............20 g/l
................5,0 g/l
................3,5 g/l
................1,0 g/l
................1,0 g/l

pH 5,0-6,0
Autoclavar a 0,5 atmosfera por 15 minutos.
b) Kluyveromyces fragilis
Soro de leite desengordurado e desproteinizado
Extrato de levedura
Esterilizao : 0,5 atm/ 15 minutos.

.............. 1 l
.............. 5 g/l

Preparo do soro:
2 litros de leite tipo B
Adicionar H3PO4 : pH 4,5 a 80C
Colocar na geladeira para precipitar
Decantar e usar o soro no preparo do meio.
-Algas:
Spirulina sp.
KNO3
....................... 2,5 g/l
K2SO4
....................... 1,9 g
NaHCO3
....................... 15,15 g/l
K2HPO4
....................... 0,5 g/l
Na2CO3
....................... 8,9 g/l
NaCl
....................... 0,92 g/l
MgSO4.7H2O ....................... 0,25 g/l
CaCl2.2H2O ....................... 0,05 g/l
gua destilada q.s.p. 1000 ml.
Preparar o meio e depois em separado preparar a soluo I.
Soluo I :
EDTA
................ 2,98 g
FeSO4.7H2O ................ 0,249 g
gua destilada q.s.p. ....... 100 ml

Ao meio com volume de 1 litro adicionar 1,0 ml da Soluo I e 1,0 ml da Soluo II (j pronta).
2. Preparo do mosto :
2.1. Matria-prima: acar cristal
O meio a ser utilizado na produo de biomassa deve apresentar a mesma composio do
meio de propagao do agente (tem 1).
2.2. Soro de leite
O soro deve ser primeiramente desengordurado, atravs da remoo da gordura superficial
aps agitao intensa.
Aps ajuste do pH com H3PO3 a 4,5, deve ser feito o aquecimento a 95C para
precipitao das protenas a serem removidas por filtrao. Posteriormente o pH do soro deve ser
ajustado a 6,0 e novamente aquecido a 95C para precipitao das protenas restantes.
A fortificao do soro deve ser feita de acordo com o meio de propagao (tem 1).
2.3. Meio sinttico para produo de algas
Deve ser usado meio de composio idntica ao empregado para propagao de algas.
3. Determinaes quantitativas :
Periodicamente devero ser feitas amostragens para determinao do consumo de acar e
da produo de populao microbiana.
Substratos:
sacarose : pelo mtodo de Somogyi.
lactose : pelo mtodo do cido pcrico
(Carvalho,IC- Revista do ILCT 196, 33:3-9, 1978)
Solues:
1) cido pcrico saturado (16 g de cido pcrico por litro). Aquecer para dissolver e resfriar para
cristalizar. O lquido sobrenadante o que ser utilizado.
2) carbonato de sdio (25 g de Na2CO3 por 100 ml)
Procedimento:
. Tomar 1 ml da amostra e diluir adequadamente em balo volumtrico com a soluo 1.
. Colocar 2 ml da amostra diluda em tubo de Folin-Wu e adicionar 1 ml do reagente 2.
. Agitar e colocar em banho-maria por 20 minutos.
. Resfriar e diluir at 25 ml com gua destilada. Misturar por inverso.
. Ler contra um branco, com 2 ml de cido pcrico e 1ml de Na2CO3, a 520 nm.
Padro:
10 mg de lactose em 10 ml de cido pcrico.
Tomar alquotas de 0.0, 0.2, 0.6, 1.0, 1.4 e 1.8 ml.

Diluir a 2 ml com cido pcrico, adicionar 1ml de Na2CO3, aquecer e prosseguir segundo a
tcnica acima.
4. Determinao da biomassa:
-contagem de clulas viveis e totais em cmara de Neubauer
-contagem de colnias por plaqueamento
- determinao de peso seco
- determinao da densidade ptica (absorbncia)