Norma 1FM1-EQ4-2014. Refrescos.

Especificaciones, informacin comercial

y mtodos de prueba.

Prefacio
En la elaboracin de la siguiente norma participaron:
1.-Hernndez Rojo Isaac
2.-Acevedo Gil Salvador Juan
3.-Hernndez Hernndez Elena Anglica
4.-Manzo Ortega Brando Alejandro
5.-Martinez Balmori Hctor Alejandro

ndice
Captulo:
0. Introduccin
1. Objetivo
2. Campo de aplicacin
3. Referencias
4. Definiciones
5. Terminologa
6. Smbolos y abreviaciones
7. Clasificacin y designacin
8. Especificaciones fisicoqumicas
9. Materiales
10. Muestreo
11. Mtodos de prueba
12. Marcado, etiquetado, envasado y embalaje
13. Bibliografa
14. Concordancia con normas internacionales.

0. Introduccin
La historia del refresco comenz con la fabricacin de bebidas carbonatadas en
Nueva York durante 1832, cuando John Matthews invent un aparato para mezclar
agua con dixido de carbono.
De la popularidad de la bebida nacieron negocios que mezclaron el agua
carbonatada con sabores a eleccin, llamadas fuentes de soda. Sabores como
naranja, limn y uva fueron los ms demandados.
Fue as como naci una nueva industria: la de las gaseosas o refrescos. Uno de
los primeros desafos fue la distribucin de esta bebida que hasta el momento
deba ser mezclada en el momento del consumo. La solucin fue embotellar la
bebida, sin embargo, surgieron problemas tcnicos al intentar lograr un sellado
hermtico que permitiera conservar el gas. Se hicieron muchos intentos de cierre
hasta que se invent la tapa tipo "corona", la cual permite cerrar hermticamente
una botella de vidrio. Con el tiempo, llegaron otras alternativas de envasado como
la lata y la botella de plstico.
Actualmente el consumo anual de refresco en Mxico es de 19,154,112,480 litros,
o de 160 litros por persona, tomando en cuenta que oficialmente la poblacin
mexicana es de 119,713,203 habitantes. (CONAPO, 2014)

1. Objetivo
Esta Norma establece las especificaciones que debe cumplir el producto
denominado refresco, as como los mtodos de prueba que deben aplicarse para
comprobar dichas especificaciones.

2. Campo de aplicacin
Esta norma es aplicable para todo el refresco que se comercializa dentro del
territorio de los Estados Unidos Mexicanos.

3. Referencias
http://www.informador.com.mx/mexico/2008/48554/6/el-mexicano-consume-al-ano160-litros-de-refresco.htm
http://es.wikipedia.org/wiki/Gaseosa
http://www.conapo.gob.mx/es/CONAPO/Aspectos_Generales_de_los_resultados_
de_las_Proyecciones_de_Poblacion

4. Definiciones
Para efectos de esta norma se entiende por:
4.1 Calora
Se define calora como la cantidad de energa calorfica necesaria para elevar la
temperatura de un gramo de agua pura en 1 C (desde 14,5 C a 15,5 C), a una
presin normal de una atmsfera.
Una calora (cal) equivale a 4,1868 julios (J), [] mientras que una kilocalora (kcal)
es 4,1868 kilojulios (kJ).
4.2 Azucares
Se denomina tcnicamente azcares a los glcidos que generalmente tienen
sabor dulce, como son los diferentes monosacridos, disacridos y oligosacridos.
Los azcares son compuestos primordiales, y estn compuestos solamente por
carbono, oxgeno e hidrgeno.
4.3 Carbohidratos
Los glcidos o carbohidratos son compuestos formados en su mayor parte por
tomos de carbono e hidrgeno y, en una menor cantidad, de oxgeno. Tienen
enlaces qumicos difciles de romper de tipo covalente, pero que almacenan gran
cantidad de energa, que es liberada cuando la molcula es oxidada. En la
naturaleza son un constituyente esencial de los seres vivos, formando parte de
biomolculas aisladas o asociadas a otras como las protenas y los lpidos, siendo
los compuestos orgnicos ms abundantes en la naturaleza.
Los glcidos cumplen dos papeles fundamentales en los seres vivos. Por un lado
son molculas energticas de uso inmediato para las clulas (glucosa) o que se
almacenan para su posterior consumo (almidn y glucgeno); 1g proporciona 4
kcal. Por otra parte, algunos polisacridos tienen una importante funcin
estructural ya que forman parte de la pared celular de los vegetales (celulosa) o de
la cutcula de los artrpodos.
4.4 Contaminante
Una sustancia que se encuentra en un medio al cual no pertenece o que lo hace a
niveles que pueden causar efectos (adversos) para la salud o el medio ambiente.
4.5 Patgeno
Se denomina patgeno a todo agente biolgico externo que se aloja en un ente
biolgico determinado, daando de alguna manera su anatoma, a partir de
enfermedades o daos visibles.

4.6 Toxina
Producto venenoso elaborado por ciertos microorganismos, que daa o destruye
las clulas del hospedador no especficamente sensibilizadas por una previa
infeccin.
4.7 Coliformes
La denominacin genrica coliformes designa a un grupo de especies bacterianas
que tienen ciertas caractersticas bioqumicas en comn e importancia relevante
como indicadores de contaminacin del agua y los alimentos.
El grupo contempla a todas las bacterias entricas que se caracterizan por tener
las siguientes propiedades bioqumicas:
ser aerobias o anaerobias facultativas;
ser bacilos Gram negativos;
no ser esporgenas;
4.8 Muestreo
Se conoce como muestreo a la tcnica para la seleccin de una muestra a partir
de una poblacin.
Al elegir una muestra aleatoria se espera conseguir que sus propiedades sean
extrapolables a la poblacin. Este proceso permite ahorrar recursos, y a la vez
obtener resultados parecidos a los que se alcanzaran si se realizase un estudio
de toda la poblacin.

5. Terminologa
Para efectos de esta norma se entiende por:
5.1 Unidades formadoras de colonias (UFC)
Trmino que debe utilizarse para reportar la cuenta de colonias en placa, las
cuales pueden surgir de una clula o de un cmulo de clulas.
5.2 Grado Bix (Bx)
Los grados Brix sirven para determinar el cociente total de sacarosa o sal disuelta
en un lquido; es una medida de la concentracin de azcar en una disolucin.
Una solucin de 25 Bx contiene 25 g de azcar (sacarosa) por 100 g de lquido.

6. Smbolos y abreviaciones
NMP = nmero ms probable.
UFC = unidades formadoras de colonias.
UP = unidades propagadoras.
N = nmero de unidades.
M = nivel de aceptacin.
M = nivel de rechazo.
c = nmero de unidades permitidas entre m y M.
g = gramos
mg = miligramos
cm3 = centmetros cbicos
C = Grados Celsius
% = Porciento
L = litro
h = hora(s)

7. Clasificacin y designacin
7.1 Designacin.
7.1.1 El refresco es una bebida saborizada, efervescente (carbonatada) y sin
alcohol.
7.1.2 Cuando en la presente norma se utilice la designacin refresco se entender
como: gaseosa, soda, cola y/o soft drink.
7.2 Clasificacin.
7.2.1 El refresco debe clasificarse en base a su sabor y tamao.

8. Especificaciones
8.1 Especificaciones particulares.
8.1.1 Los refrescos deben tener un color uniforme, olor y sabor caractersticos a lo
declarado.
5

8.1.2 Especificaciones fsico-qumicas.

8.1.2.1 Los lmites de las especificaciones fsico-qumicas se encuentran en la
tabla 1.
TABLA 1
Limites
Solidos solubles, %*
7,0
pH
2,0
Acidez titulable, g/100cm3**
0,10
No se aplica a productos edulcorados por sustitucin total o parcial de azcar.
* En grados Brix a 20C
** Expresada como cido ctrico anhidro
8.1.3 Contaminantes.
8.1.3.1 Los lmites mximos de contaminantes en los refrescos son los
establecidos en la tabla 2.
TABLA 2
Lmite mximo, mg/L
0,01
0,01
0,00
1,0
0,3
1*
0,13*
0,3
5,0*

Arsnico, como As
Plomo, como Pb
Mercurio, como Hg
Cobre, como Cu
Hierro, como Fe
Estao, como Sn
Aluminio, como Al
* Para refrescos envasados en envases metlicos.

8.1.4 Requisitos microbiolgicos

8.1.4.1 El producto debe estar exento de microorganismos patgenos, toxinas y de
cualquier otro microorganismo causante de la descomposicin del producto.
8.1.4.2 El producto debe estar exento de toda sustancia originada por
microorganismos que representen un riesgo para la salud.
8.1.4.3 El producto debe cumplir con los requisitos microbiolgicos establecidos en
la tabla 3.

TABLA 3
Coliformes
NMP/cm3
Coliformes
fecales
NMP/cm3
Recuento
estndar en
placa REP
UFC/cm3
Recuento de
mohos y
levaduras
UP/cm3

n
3

m
<3

M
-

c
0

<3

1x100

1x1000

5x10

8.2 Requisitos complementarios.

8.2.1 El espacio libre tendr como valor mximo el 5% de la capacidad total del
envase.

9. Materiales
9.1 Para determinacin fsico-qumica
Potencimetro
Soluciones bfer [4] y [7]
Vaso de precipitados
Agua destilada
9.2. Para determinacin de contaminantes
9.2.1 Para determinacin de metales
Espectrofotmetro de Absorcin Atmica de llama directa.
Quemador de premezclado 5cm.
Gas combustible: Cilindro de gas de Acetileno (C2H2)99% de pureza.
Gases Oxidantes: Aire filtrado (compresor de aire). xido Nitroso 99% de pureza.
Placa Calefactora.
7

Lmparas de ctodo hueco de Cu, Fe, Mn, Pb, Cd, Cr para Espectrofotmetro de
Absorcin Atmica.
Dispensador de volumen de 10 mL, vaso Phillips o vaso de precipitado de 125 a
250 mL, micropipeta 100-1000 uL y pipetas aforadas clase A.
Material volumtrico: Matraz de 1000mL y/o 100mL de clase A. Tubos de plstico
resistente con tapa y graduado. Todo este material debe ser tratado previamente
a su uso, lavndolo con
HNO3 10% (o similar) para eliminar trazas, luego debe
ser enjuagado con agua desionizada.
Agua grado reactivo.
cido Ntrico concentrado 65% p.a o de calidad superior.
cido Clorhdrico 37% p.a. o de calidad superior.
Solucin de HNO3 1:1 con agua grado reactivo.
Solucin Estndar Multielementos de 100mg/L de Metales Pesados. Tomar
alcuotas de acuerdo a tabla 1.
Blanco curva de calibracin: Tomar 1 mL de solucin de HNO 1+1 en un matraz
aforado de 100 mL clase A y llevar a volumen con agua grado reactivo.
9.2.2 Para determinacin microbiolgica
Para la preparacin del medio de cultivo utilizado en la prueba presuntiva de
muestras de refresco, consultar el cuadro 1.
5 10 tubos de 22 x 175 mm con 10.0 mL de caldo lauril sulfato de sodio o caldo
lactosado con centracin doble o triple con campana de Durham (A).
5 10 tubos de 16 x 150 mm con 10.0 mL de caldo bilis verde brillante con
campana de Durham (B).
5 10 tubos de 16 x 150 mm con 10.0 mL de caldo EC y campana de Durham o
caldo EC MUG con campana de Durham (B).
2 cajas Petri con agar para mtodos estndar (D).
2 cajas Petri con agar Eosina azul de metileno (C).
6 tubos de 13 x 100 con 3.0 mL c/u de caldo RM-VP (E).
3 tubos de 13 x 100 con 3.0 mL c/u de caldo triptona o agar SIM (opcional) (E).
3 tubos de 13 x 100 con 3.5 mL c/u de caldo citrato de Koser o citrato de
Simmons (opcional) (E).
Soluciones, reactivos e indicadores:

Frascos gotero con reactivo de Ehrlich o Kovac (E).

Frascos gotero con indicador rojo de metilo (E).
Frascos gotero con reactivo alfa naftol VP1 (E).
Frascos gotero con solucin de hidrxido de potasio al 40 % VP2 (E).
Colorantes para tincin de gram (D).
Material y equipo:
Mechero, (A,B,C,D,E).
Propipeta (A).
Gradilla (A,B,C,E).
Lmpara de luz ultravioleta de longitud amplia 4 watts. (366 nm) (C)
Lentes de seguridad (C)
Pipetas de 10.0 mL estriles con tapn de algodn (A).
Pipetas de 1.0 mL estriles con tapn de algodn (A).
Pipetas Pasteur estriles (A, B, C, D)
Asa bacteriolgica (B,C,D,E)
Portaobjetos (D)
Microscopio ptico (D)
Termmetro calibrado (B)
Bao de agua a 44.5 0,1C.(B)
Incubadora a 35 2,0C (A).
Horno para esterilizar material de vidrio a 160-180C (A)
Autoclave (A)

Notas:
A= Material necesario al inicio de la prctica.
B= Material necesario a las 48 h. de iniciada la prctica.
C= Material necesario a las 96 h. de iniciada la prctica.
D= Material necesario a las 120 h. de iniciada la prctica.
9

E= Material necesario a las 144 h. de iniciada la prctica.

10. Muestreo

11. Mtodos de prueba

11.1 Para determinacin fsico-qumica
Con ayuda de las soluciones bfer calibrar el densmetro (primero con la solucin
de pH4 y despus con la de pH7), una vez el potencimetro se encuentre
calibrado correctamente proceder con las mediciones establecidas en el punto
8.1.2.1.
11.2.1 Para determinacin de metales pesados
11.2.1.1 Preparacin de curva de calibracin:
Preparar los estndares del metal a analizar para su respectiva curva de
calibracin. Tomar los volmenes de las soluciones, correspondientes indicados
en la tabla 1.
Tabla1 Curva de calibracin
Matraz

Estndar

Blanco

Volumen
de
solucin
estndar
intermedia
0uL

Volumen
de
solucin
de HNO
1:1
1mL

100uL

1mL

200uL

1mL

300uL

1mL

400uL

1mL

Volumen
de agua
grado
reactivo
c.s.p.
100mL
c.s.p.
100mL
c.s.p.
100mL
c.s.p.
100mL
c.s.p.
100mL

Concentraciones obtenidas de metales para curva de

calibracin en mg/L
Cu

Fe

Mn

Zn

Pb

Cd

Cr

0,00

0,00

0,00

0,00

0,00

0,00

0,00

0,100

0,100

0,100

0,100

0,100

0,100

0,100

0,200

0,200

0,200

0,200

0,200

0,200

0,200

0,300

0,300

0,300

0,300

0,300

0,300

0,300

0,400

0,400

0,400

0,400

0,400

0,400

0,400

Condiciones del Espectrofotmetro de Absorcin Atmica (Ver tabla 2)

Tabla 2 Condiciones del Espectrofotmetro de Absorcin Atmica
Smbolo

(nm)

Cu
Fe
Mn
Zn
Pb
Cd
Cr

324.8
248.3
279.5
213.9
217.0
228.8
537.9

% corriente
lmpara
75
75
75
75
75
75
100
10

Gases llama

Tipo de seal

Aire-C2H2
Aire-C2H2
Aire-C2H2
Aire-C2H2
Aire-C2H2
Aire-C2H2

Continuo
Continuo
Continuo
Continuo
Continuo
Continuo
Continuo

N2O-C2H2

Para realizar la calibracin se deben usar a lo menos 2 estndares en orden

creciente y un blanco.
Preparacin de la muestra de refresco:
Las muestras que contienen material particulado y/o materia orgnica, con una
turbiedad >1 NTU requieren pretratamiento de digestin hmeda antes del anlisis
espectrofotomtrico. Para muestras de refresco transparentes, incoloras e
inodoras con turbiedad <1.0 NTU puede obviarse el pretratamiento de digestin
para analizar por EAA con lectura directa
Para condicin sin digestin:
Homogenizar la muestra de refresco a travs de agitacin.
Llevar a temperatura ambiente.
Tomar 40 mL de muestra y llevar a tubo graduado con tapa y agregar 1mL de
solucin HNO3 1:1.
Cuantificar en E.A.A el metal correspondiente.
Los resultados son obtenidos por interpolacin desde la curva de calibracin en
ppm.
Los resultados obtenidos se expresan en mg/L del metal correspondiente
Para condicin con digestin en placa calefactora:
Transferir a un vaso de precipitado o similar de tamao adecuado 100 mL de
muestra, agregar perlas de ebullicin.
Adicionar 3 mL de HNO concentrado, cubrir con vidrio reloj, calentar en placa
calefactora y cautelosamente evaporar hasta obtener un volumen menor a 5 mL
de muestra, evitando la ebullicin y la sequedad de esta.
Enfriar, lavar las paredes del vaso contenedor con el mnimo de volumen de agua
desionizada, agregar 5 mL de HNO concentrado, cubrir con vidrio reloj y llevar a
la placa calefactora nuevamente.
Aumentar la temperatura agregando el mismo cido hasta completar la digestin
(generalmente se evidencia con la ausencia de color en la muestra y/o no hay
cambio en la apariencia del reflujo, enfriar.
Agregar 10 mL de HCL 1+1 y 15 mL de agua desionizada y calentar por 15
minutos para disolver algn precipitado o residuo, enfriar.
Lavar las paredes del vaso y vidrio reloj con agua desionizada y filtrar con filtro de
celulosa o ester de tamao de poro 0.4-0.45 m para remover material insoluble
que podra tapar el nebulizador. Transferir el filtrado a un matrz volumtrico de
100 mL y lavar el filtro hasta completar el volumen.
11

Llevar junto a las muestras un blanco reactivo por cada set de anlisis para
someterlo al mismo proceso de digestin.
Cuantificar en E.A.A las muestras y el blanco reactivo como muestra.
Los resultados son obtenidos por interpolacin desde la curva de calibracin en
ppm.
Para este caso el clculo de los mg/L del metal = (L-bco.) Donde: L= lectura de la
muestra en mg/L bco.= lectura del blanco reactivo sometido al mismo proceso de
las muestras
Control de calidad interno:
Realizar mediciones de control con soluciones patrones de metales o material de
ensayos de interlaboratorios, o estndares certificados ICP Multielementos en
cada lectura

11.2.2 Para determinacin microbiolgica

11.2.2.1.1 Prueba presuntiva
Agitar la muestra y transferir volmenes de acuerdo con el cuadro 1, a cada uno
de los tubos con caldo lauril sulfato de sodio que se hayan seleccionado. Agitar los
tubos para homogeneizar la muestra.
CUADRO 1. Preparacin de inculo con caldo lauril sulfato de sodio
INOCULO
(mL)

1
10
10
20
100
100
100

CANTIDAD
DE MEDIO
POR TUBO
(mL)
10 o ms
10
20
10
50
35
20

VOLUMEN
DE MEDIO
MAS
INOCULO
(mL)
11 o ms
20
30
30
150
135
120

CALDO
LAURIL
TRIPTOSA
REQUERIDO
g/L
35.6
71.2
53.4
106.8
106.8
124.6
142.4

CONCENTRACI
N

1X
2X
1.5X
3X
3X
3.5X
4X

Incubar los tubos a 35 0,5C. Examinar los tubos a las 24 h., observar si hay
formacin de gas (desplazamiento del medio en la campana de Durham); si no se
observa produccin de gas, incubar 24 h. ms.
11.2.2.1.2 Prueba confirmativa de microorganismos coliformes :
12

Transferir de 2 a 3 asadas de cada tubo positivo obtenido durante la prueba

presuntiva, a tubos que contiene caldo de bilis verde brillante (brila), con campana
de Durham.
Agitar suavemente los tubos para su homogeneizacin.
Incubar a 35 2C durante 24 a 48 h.
Registrar como positivos aquellos tubos en donde se observe turbidez
(crecimiento) y produccin de gas despus de un perodo de incubacin de 24 a
48 h.
Consultar la tabla 1 2 de NMP para conocer el nmero ms probable de
organismos coliformes totales/100 mL.
11.2.2.1.3 Prueba confirmativa de microorganismos coliformes fecales.
Transferir de 2 a 3 asadas de cada tubo positivo obtenido durante la prueba
presuntiva a tubos con caldo EC.
Agitar suavemente los tubos para su homogeneizacin.
Incubar a 44.5 0.1C en incubadora o un bao de agua con circulacin durante
24 a 48 h.
Registrar como positivos todos los tubos en donde se observe crecimiento y
produccin de gas despus de un perodo de incubacin de 24 a 48 h.
Consultar la tabla 1 2 de NMP para conocer el nmero ms probable de
organismos coliformes fecales/ 100 mL.
Control de calidad para coliformes fecales
1. Inocular en tubos de caldo EC una cepa de E. coli como control positivo y una
de Enterobacter aerogenes como control negativo e incubar junto con las
muestras.
11.2.2.1.4 Prueba confirmativa para Escherichia coli:
Tomar una asada de cada uno de los tubos positivos de caldo EC y sembrar por
estra cruzada en agar eosina azul de metileno para su aislamiento.
Incubar las placas invertidas a 35C por 18-24 h.
Seleccionar dos colonias de cada placa con la siguiente morfologa colonial:
Colonias con centro negro, planas con o sin brillo metlico. Si no hay colonias con
morfologa tpica, probar una o ms colonias lo ms parecido E. coli de cada placa
y sembrarlas en agar cuenta estndar para realizar las pruebas de morfologa
microscpica y pruebas bioqumicas.
Incubar las placas a 35C por 18-24 h.
13

Hacer un frotis y teirlo por Gram. Observar al microscopio la presencia de bacilos

cortos o cocobacilos Gram-negativos.
11.2.2.1.4.1 Identificacin bioqumica de Escherichia coli mediante pruebas
(IMViC).
A partir de las cajas de agar cuenta estndar, selecionar una colonia,
resuspenderla en 2 ml de solucin salina isotonica para realizar las siguientes
pruebas bioqumicas.
a. Produccin de indol (I)
Tomar una asada de la suspensin bacteriana e inocular un tubo con caldo
triptona, incubarlo a 35C por 24 2 h.
Finalizada la incubacin, adicionar entre 0.2 y 0.3 mL de reactivo de Kovacs o
Ehrlich.
La presencia de una coloracin roja en la superficie del tubo se considera como
prueba positiva para la presencia de indol.
b. Produccin de cidos mixtos (o prueba de rojo de metilo, RM)
Tomar una asada de la suspensin bacteriana e inocular un tubo que contenga
caldo RM-VP, incubar a 35C por 48 2 h.
Finalizada la incubacin, adicionar 5 gotas de solucin de rojo de metilo.
Se considera una prueba positiva cuando se desarrolla un color rojo. Un color
amarillo es una prueba negativa.
c. Produccin de metabolitos neutros (Voges-Proskauer VP)
Tomar una asada de la suspensin bacteriana e inocular un tubo que contenga
caldo RM-VP, incubar a 35C por 48 2 h.
Finalizada la incubacin, adicionar 0.6 mL de solucin KOH 40% (VP1), agitar y
0.2 mL de solucin alfa- naftol (VP2) y agitar.
Dejar reposar el tubo destapado durante 10 minutos; se considera una prueba
positiva cuando se desarrolla un color rosa en la superficie.
d. Utilizacin del citrato (C)
Tomar una asada de la suspensin bacteriana e inocular un tubo que contenga
caldo citrato de Koser o agar citrato de Simmons (opcional) Incubar a 35C por 96
h.
El desarrollo del cultivo que se observa con la turbiedad en el caldo citrato de
Koser, se considera una prueba positiva.

14

Notas:
Para determinar la produccin de indol, en lugar del caldo triptona puede utilizarse
al medio SIM. Este medio se inocula por picadura con el asa bacteriolgica de
forma recta. Se incuba a 35C por 24 2 h. Finalizado el periodo de incubacin se
adiciona el reactivo de Kovac o Erlich cuyo fundamento es el mismo.
Para determinar la utilizacin del citrato de sodio como nica fuente de carbono,
tambin se puede utilizar el agar citrato de Simmons en forma inclinada, el cual se
inocula en la superficie (pico de flauta). Se incuba a 35C de 24 a 48 h. La
presencia de una coloracin azul debida al vire del indicador que contiene el
medio, indica prueba positiva Para evitar resultados falsos positivos, el inoculo
no debe ser muy abundante, tanto en el caldo citrato como en el agar citrato de
Simmons
11.2.2.1.4.2 Prueba confirmativa opcional para Escherichia coli utilizando caldo
EC-MUG (4 metil-umbeliferil--D-glucuronido)
Fundamento:
Alrededor del 94% de las cepas de Escherichia coli incluso las cepas no
productoras de gas producen la enzima beta-glucuronidasa (GUD), la cual rompe
el sustrato especfico 4-metilumbeliferil-beta-D-glucurnido (MUG) en 4metilumbeliferona (MU); el cual al ser expuesto a una fuente de luz ultravioleta
(UV) de onda larga (365 nm) produce una fluorescencia azul fcil de observar.
Cuando el MUG es incorporado al caldo EC se puede identificar Escherichia coli.
a. Prueba confirmativa
A partir de la fase presuntiva (inciso 1.1.) tomar una asada de cada tubo que
muestre formacin de gas y sembrar en un nmero igual de tubos con medio ECMUG.
Incubar a 44,5 0,2C en bao de agua durante 24 h., observar si hay formacin
de gas; si no se observa la formacin de gas continuar la incubacin 24 h. ms.
Finalizado el periodo de incubacin, irradiar los tubos con una fuente de luz UV,
observar cuantos tubos presentan fluorescencia
Utilizar estos resultados para calcular el nmero ms probable (NMP) de E. coli.

Control de calidad
Inocular en dos tubos con caldo EC-MUG una cepa de E. coli como control
positivo y K. pneumoniae como control negativo.

15

Clculos y expresin de resultados

Calcular la densidad microbiana con base en el nmero ms probable conforme al
procedimiento sealado en la tabla 1, para estimar la poblacin de bacterias
coliformes totales, bacterias coliformes fecales y Escherichia coli en muestras de
refresco.
TABLA 1. ndice del NMP con 95% de lmite de confianza para varias
combinaciones de resultados positivos y negativos cuando se usan 5 tubos con 20
mL de muestra de refresco.
No. de Tubos
positivos

NMP/100 mL

0
1
2
3
4
5

<1.1
1.1
2.6
4.6
8.0
>8.0

95% de Lmite de
Confianza
(aproximado)
Inferior
0
0.05
0.3
0.8
1.7
4.0

95% de Lmite de
Confianza
(aproximado)
Superior
3.0
6.3
9.6
14.7
26.4
Infinito

TABLA 2. ndice del NMP con 95% de lmite de confianza para varias
combinaciones de resultados positivos y negativos cuando se usan 10 tubos con
10 mL de muestra de refresco.
No. de Tubos
positivos

NMP/100 mL

0
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10

<1.1
1.1
2.2
3.6
5.1
6.9
9.2
12.0
16.1
23.0
>23.0

95% de Lmite de
Confianza
(aproximado)
Inferior
0.0
0.03
0.26
0.69
1.3
2.1
3.1
4.3
5.9
8.1
13.5

Todos los cultivos que:

16

95% de Lmite de
Confianza
(aproximado)
Superior
3.0
5.9
8.1
10.6
13.4
16.8
21.1
27.1
36.8
59.5
Infinito

Sean bacilos o cocobacilos Gram-negativos, no esporulados, fermenten la lactosa

con produccin de gas dentro de las 48 h. a 35C. y se obtenga las siguientes
combinaciones para las pruebas IMVIC: Biotipo 1(++--), Biotipo 2 (-+--) son
consideradas como Escherichia coli.
Para calcular el NMP de E. coli utilizar a proporcin de los tubos positivos de la
prueba confirmatoria en caldo EC.

12. Marcado, etiquetado, envasado y embalaje.

12.1 El material del envase debe ser resistente a cualquier reaccin del producto
y no alterar las caractersticas del mismo.
12.2 Los refrescos se deben envasar en recipientes que aseguren su higiene
durante el almacenamiento, transporte y expendio.
12.3 La etiqueta o envase no debe tener leyendas de significado ambiguo, ni
descripcin de caractersticas del producto que no puedan ser comprobadas.
12.4 Cuando se utilicen representaciones grficas, figuras o ilustraciones en
productos cuyo sabor sea conferido por un saborizante artificial, en la etiqueta del
producto junto al nombre del mismo en el panel principal y claramente legible,
debe aparecer, la expresin sabor artificial.

13. Bibliografa
CCAYAC-M-004 (2006) Estimacin de la densidad microbiana por la tcnica del
nmero ms probable, deteccin de coliformes totales, cliformes fecales y
Escherichia coli por el nmero ms probable
Food and Drug Administration (2003) Bacteriological Analytical Manual. 9th ed.
Arlington, VA: AOAC.
Madigan, M T y Martinko, J M., Brock, Biology of Microorganisms, 11a ed. 2006,
pp 935-936
Brooks, Geo F., Batel, Janet S. y Morse, Stephen A., Microbiologa Mdica de
Jawetz. Manual Moderno 17a Edicin 2002, pp 274-275
Kornacki J.L. & Johnson J.L. (2001) Enterobacteriaceae, Coliforms, and
Escherichia coli as Quality and Safety Indicators. In: Compendium of Methods for
the Microbiological Examination of Foods. 4th ed. Downs F.P. & Ito K. (Eds.) APHA.
Washington. 69-82.
International Commission on Microbiological. Specifications of Foods (2005)
Microorganisms in Foods 6 Chapman & Hall. 2nd ed.
17

Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater. APHA.

AWWA.WEF. 21 st Edition, (2005), Part. .3111-B.

14. Concordancia con normas internacionales

La presente norma no concuerda con ninguna norma internacional.

18