Hctor Rocha L.

Los Aminocidos y sus Caractersticas

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INICIO:

1) LOS AMINOACIDOS 51
2) EXISTENCIA DE LOS AMINOACIDOS 52
a) Primera Hiptesis 52
b) Segunda Hiptesis 53
c) Tercera Hiptesis 54
d) El RNA como molcula precursora de DNA y protenas 55
3) CARACTERISTICAS FISICO-QUIMICAS DE LOS AMINOACIDOS 56
a) Solo L - Aminocidos participan en la formacin de las
protenas 57
b) Clasificacin de los Aminocidos segn su
grupo R 59
c) Absorcin de luz ultravioleta 61
d) Ionizacin de los aminocidos 61
e) Influencia de los grupos vecinos sobre la Ionizacin de los
Aminocidos en las Protenas 63
4 ) SEPARACIPN DE AMINOCIDOS 63
a) Cromatografa de Intercambio inico 63
b) Electroforesis 66
c) HPLC 66

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1) LOS AMINOACIDOS.
En la estructura de los aminocidos se encuentran los principales componentes de la vida,
como son Carbono, Hidrgeno, Oxgeno, Azufre y Nitrgeno. Su estructura se caracteriza
por un Carbono- central con una estructura tetradrica de hibridacin sp3. A este carbono
central, se le unen un grupo Amino, un grupo Carboxilo, un tomo de Hidrgeno y un
residuo o grupo R, cuya naturaleza entrega la individualidad a cada aminocido. De los 20
aminocidos que se encuentran en las protenas, solo la Glicina no es quiral ya que posee
como grupo R, un hidrgeno similar a su otro Hidrgeno . Por otro lado el aminocido
Prolina, posee un grupo R formado por una cadena alqulica, cuyo Carbono- interacciona
con su grupo - Amino, formando un anillo y produciendo un aminocido extremadamente
rgido para la torsin. (Tabla. 1 - 3). En general los grupos R por Residuo, se encuentran

R-

: Residuo del aminocido que confiere la individualidad

Residuo

HN

- Amino

COOH
- Carboxilo

Los grupos funcionales y el tomo de H que se encuentran en el

rectngulo son iguales para los 20 aminocidos exceptuando a la Prolina.

Fig. 1 - 2. El carbono es asimtrico.

formados por grupos funcionales como Aminos, Carboxilos, Tioles, Hidroxilos e Imidazoles.
Por otro lado, aquellos aminocidos en que los grupos Amino y los residuos R estn en los
carbonos o , no forman parte de las protenas.
El Carbono central es asimtrico o quiral cuando presenta cuatro sustituyentes diferentes y
por lo tanto da origen a enantimeros o ismeros pticos (imgenes especulares no
superponibles).
El proceso por el cual los gases primitivos se combinaron para generar algunos
Aminocidos, Bases Nitrogenadas y precursores de los Hidratos de Carbono, es an un
tanto oscuro, sin embargo se puede seguir la pista de como pudo haber ocurrido la reaccin
que les dio origen (Ver Captulo de Bioenergtica). Para entender mejor este paso, podemos
analizar la siguiente analoga. Si disponemos de un juego con dados y una de las caras
pesa ms que las otras, al ser lanzados al aire darn en alta proporcin un valor
determinado. Es decir, el nmero que se encuentra opuesto a la cara ms pesada. Esta
ltima ser atrada hacia la superficie de la meza un mayor nmero de veces comparadas
con las otras caras. No importa la forma en que se lancen, siempre se obtendr un nmero
importante de aciertos. De similar manera, una reaccin qumica que cuenta con una
disposicin particular de los orbitales en cada uno de los tomos o molculas.
Siempre ser capaz de generar productos iguales o similares, a pesar de las distintas

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condiciones de presin, temperatura y proporcin en que se encuentren. En la

actualidad se dice que la vida parti de un conjunto de reacciones qumicas
termodinmicamente factibles y que a la vez tenan la capacidad de auto replicarse y
evolucionar. En otras palabras eran capaces de reproducirse, hacindose cada vez ms
eficientes en su medio (Ver captulo de Bioenergtica).
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2) EXISTENCIA DE LOS AMINOACIDOS

a) PRIMERA HIPOTESIS
Hace ya algn tiempo (1920) en un experimento en que se recre la atmsfera primitiva, se
combinaron entre s las molculas de NH4, CH4, H2, y H2O. A continuacin mediante una
descarga elctrica (Fig. 2 - 3) se produjo la reaccin en que se generaron algunos de los 20
aminocidos, una base nitrogenada y un precursor de los hidratos de carbono.

Electrodos

Sntesis de compuestos
orgnicos con actividad
biolgica a partir de

Gases
Matraz de Reaccin

gases presentes en la
CHISPA

atmsfera
primitiva
LLaves
para sacar
muestras

Condensador

Producto condensado de la reaccin

Fig. 2 - 2. El conocido experimento de Miller y Urey en el que se simula la

atmsfera primitiva capaz de producir molculas de importancia biolgica por
medio de una chispa.

La razn por la cul se formaron estas molculas precisas y no otras al azar se debe
fundamentalmente a la disposicin de los orbitales electrnicos de las molculas de
gas en la mezcla. Esta disposicin favorecera siempre un determinado tipo de reaccin
haciendo la barrera de energa menos costosa para la sntesis de precursores con
importancia biolgica y no as la de otros compuestos al azar que no seran parte de la
estructura viva.
En la actualidad solo se encuentran formando parte de la materia viva las molculas
"triunfadoras", sin descontar otras que durante la evolucin qumica, han sido
descartadas por ser incompatibles con lo que en la actualidad llamamos vida. Es interesante

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hacer notar que tambin, aquellos compuestos orgnicos sintetizados por el hombre
denominados xenobiticos, no se relacionan con la vida y generan grandes trastornos a los
seres vivientes al provocar en ellos cncer u otro tipo de enfermedades.
Por lo tanto aquellas reacciones primitivas entre los distintos gases, pudieron haber dado
origen a la evolucin qumica de las molculas y a su vez sentar las bases para una
posterior evolucin biolgica.
Bajo un simple anlisis desde el punto de vista termodinmico, podemos considerar que la
reaccin del compuesto A con el compuesto B debe remontar una barrera de energa para
formar un compuesto final A--B. Se debe uno preguntar si el compuesto A--B tiene ms o
bien menos energa que cada una de las molculas originales A y B por separado.
En el evento de que la unin de A con B sea posible, se necesitar aporte de energa desde
el medio o entorno para que A y B pasen la barrera. Una vez alcanzada la barrera A y B
pueden generar una molcula liberando energa hacia el medio y ganando estabilidad o
bien puede suceder que an necesiten de mayor cantidad de energa para unirse entre s.
Esta ltima, tambin puede ser tomada o cedida del medio o entorno.
Ahora, si la molcula A-B se ha formado, sucede que existen distintos caminos o posos de
energa que permitirn ganar mayor o menor estabilidad a la nueva molcula. Esto
depender de la forma en que se unan: A-B, B-A, A2B, AB2, A2B2, etc., pero aqu
intervendra la naturaleza de sus orbitales y la influencia del medio sobre estos. Por lo tanto
al combinarse entre s, favoreceran una acomodacin que permita dar origen a futuras
molculas, mucho ms complejas que las originales tomando o cediendo energa hacia el
medio.
Estas apreciaciones se encuentran de acuerdo con la segunda ley de la termodinmica que
"a priori" se puede considerar como:
ORDEN = DESORDEN + ENERGIA
Esta simple ecuacin, significa que las estructuras complejas pueden descomponerse en
sus componentes bsicos, liberando la energa almacenada en ellas. Al mismo tiempo la
energa liberada puede emplearse de manera acoplada, para construir otras estructuras an
ms complejas y evolucionadas que las anteriores. Por supuesto que esto, siempre ocurre
bajo la condicin de que se libere algo de energa extra al entorno o al medio.
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b) SEGUNDA HIPOTESIS
Este nuevo enfoque supone la llegada de meteoritos portadores de aminocidos a la Tierra.
La particularidad de estos aminocidos trados de forma tan peculiar, es que en vez de
Hidrgeno presentan en sus molculas el istopo Deuterio. Adems, al ser aislados y
cristalizados, se encontr que forman una mezcla racmica. Este hecho significa que su
sntesis ha sido mediante reacciones qumicas y que no provienen de algn ser vivo como
se ver ms adelante. Ms an, el Deuterio, presente en sus estructuras es un istopo del
Hidrgeno muy poco reactivo y no es compatible con la vida. Sin embargo, como muchos
meteoritos cayeron al mar, se produjo aqu un lento intercambio de Deuterio por Hidrgeno
que dur millones de aos, resultando en la existencia de aminocidos funcionales de
caractersticas biolgicas.
Esta hiptesis ha sido parcialmente comprobada por algunos astrnomos al descubrir en
los espectros de luz proveniente de las nubes estelares, algunas bandas de emisin que

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corresponden a la presencia de molculas orgnicas, entre las cuales se encontraran los

aminocidos deuterados.
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c) TERCERA HIPOTESIS
En este caso destacamos la importancia de las arcillas formadas por cristales de AlminoSilicato. Estos cristales tienen la capacidad de actuar como ordenadores y catalizadores de
su microambiente y se caracterizan por ser polimrficos. Entre sus caractersticas se ha
observado que ejercen una cierta influencia sobre su microambiente mediante interacciones
dbiles. De esta manera los cristales de Almino-Silicato seran capaces de catalizar,
ordenar y facilitar reacciones qumicas entre molculas primitivas (Fig. 3 - 3). Esta propiedad
les permitira a las molculas precursoras alcanzar un determinado grado de complejidad y
variedad. A la vez, este hecho contribuy a la formacin de algunos precursores de las
molculas biolgicas actuales.
La existencia de este proto-organismo con un gen inorgnico o cristal de Almino-Silicato,
sera a la vez transitoria ya que con el tiempo se generara un nuevo gen con los
productos del anterior y esta vez de factura orgnica. Este nuevo gen ordenadorcatalizador, sera capaz de almacenar una mayor cantidad de informacin y tendra una
mejor capacidad para influir en su microambiente, desplazando al cristal primitivo de su
nicho ecolgico por ser ms eficiente en preservar la informacin.

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Nuevos genes ms eficientes que

generan un fenotipo especfico

Aparicin de nuevo
tipo de genes

Genes desnudos o
primitivos.
Control del medio inmediato
por medio de los genes primitivos.

Los genes originales desaparecen

como habra sucedido con los
cristales de almino - silicato
Creacin de un fenotipo elaborado

Fig. 3 - 2. Transmutacin gnica. En la parte inferior, se observa como se crea bajo la

influencia de un gen primitivo, un nuevo gen que es ms eficaz y desplaza al antiguo
hacindolo desaparecer.

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d) EL RNA COMO MOLECULA PRECURSORA DE DNA Y PROTEINAS.

En la actualidad se reconoce al RNA, como a una de las molculas ms primitivas y se
le han observado, tanto caractersticas de almacenador de informacin como tambin
de catalizador de reacciones. Es decir acta de ambas maneras, tanto como DNA y a
la vez como una Enzima proteica. El RNA se encuentra involucrado en el proceso de
Transcripcin de la informacin contenida en los genes discontinuos de Eucariontes,
especficamente en la maduracin de los transcritos primarios o RNA heteronuclear
(RNAhn) de gran tamao que posee tanto exones (codificantes) como intrones (no
codificantes). Este RNA heteronuclear debe sufrir un procesamiento donde se descartan los
intrones y se forma el RNA mensajero con solo exones. Pues bien, los mismos intrones que
posee el transcrito primario (RNAhn) son capaces de catalizar su propio proceso de corte y
empalme de los exones formando el RNA mensajero. Adems, son capaces de catalizar
aisladamente la formacin de pequeos polmeros de su misma naturaleza en el tubo de
ensayo.
Por estas razones el RNA aparece en la actualidad como una molcula dual, que acta en
ciertos sectores de su secuencia estructural, como enzima y que a la vez guarda la

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informacin en otros sectores para la sntesis de una protena.

macromolcula intermedia entre el DNA y las Protenas.

El RNA sera una

El sistema basado en la molcula de RNA, se cre en sus comienzos desde una serie de
bases nitrogenadas que incluyen a la Adenina, Guanina Citosina, Uracilo y Timina. Todas
ellas, ms las que aparecen en las vitaminas Riboflavina y Niacina, demostraron que eran
capaces de combinarse fcilmente con azucares y fosfato formando mono y binucletidos. Desde aquel momento solo aquellas molculas con solo Adenina, Guanina,
Citosina y Uracilo se seleccionaron y amplificaron, siguiendo la evolucin qumica (azar y
competencia) lo que permiti la existencia del RNA y la posterior seleccin molecular actual.
La energa para las reacciones anteriores pudo en un principio haber sido obtenida por
compuestos denominados Tiosteres (R-CO-S-R). Estas molculas fueron ms comunes
antes de que apareciera el Oxgeno en el ambiente y se pasara a emplear energa desde
fosfosteres (R-OPO3R) como se hace en la actualidad.
El orden seguido para la aparicin de la vida se puede resumir en la siguiente
cronologa. La Tierra se solidific cerca de
4.1 x 10 12 aos, mientras que las
12
primeras evidencias de vida son de los 3.5 X 10 aos. En ese tiempo aparecieron las
primeras formaciones denominadas Estromalitos. Estas estructuras fueron dejadas
por las Cianobacterias, lo que se confirma con el hallazgo de los primeros fsiles
bacterianos (3.4 X 10 12 aos).
Durante los 0.6 x 1012 aos de diferencia entre la solidificacin de la Tierra y las
evidencias de Estromalitos, pudieron haber ocurrido una serie de hechos que se
plantean en la hiptesis de la Evolucin Qumica. Esta ltima acepta la generacin
abitica de pequeas molculas orgnicas, influenciadas por la temperatura ms la
atmsfera reductora (con H2 y sin O2) y en presencia de una elevada radiacin UV.
Bajo estas condiciones se formaran algunos monmeros como aminocidos,
azcares simples y precursores de bases nitrogenadas.
Parte de estos hechos se encuentran confirmados por los experimentos de Oparin y
Haldane en 1920 y posteriormente por los experimentos de Urey y Miller en 1953.
Al continuar con la evolucin de las molculas, se pas de la qumica inorgnica a la
qumica orgnica y posteriormente se generaron mediante estas reacciones
molculas precursoras de aquellas involucradas en la vida. De esta forma al
agregarse las molculas pertinentes, generaron Proteinoides. Estos ltimos se
encuentran constituidos por algunos aminocidos que pudieron reaccionar entre s,
lo que se corrobora por los experimentos de Sydney Fox. Este produjo polipptidos al
gotear soluciones de aminocidos sobre piedras calientes. Ms an durante la
evolucin qumica, ahora con molculas orgnicas agregadas, en especial aquellas
que participaran de la vida, produjeron a los Protobiontes o conjunto de molculas
de origen abitico capaces de mantener un ambiente interno y exhibir algunas
propiedades de la vida, tal como seleccin y evolucin qumica.
Entre los protobiontes podramos tener a las Microesferas, formadas por los
Proteinoides en contacto con el agua, a los Liposomas o bicapas cerradas de
fosfolpidos con agua por ambos lados y a los Coacervados, constituidos por gotas
coloidales de proteinoides, cidos nucleicos y polisacridos.
La unin entre ciertas propiedades ventajosas que detentaban algunas de estas
agrupaciones, necesitaba tambin de un mecanismo que preservara sus

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caractersticas ptimas, para as tener xito en aquel ambiente. Adems esto les
permitira repetir y optimizar sus tareas de sobrevivencia. Por lo tanto, esta ltima
capacidad
recay en
el RNA, molcula capaz de preservar informacin,
autoreplicarse y catalizar reacciones. Posteriormente a esto, las diversas funciones
del RNA, se delegaron en macromolculas especficas como son DNA y Protenas.
Aparte de las anteriores, otra de las hiptesis acerca del origen de la vida la
constituye la Panespermia. Esta considera la importacin de los organismos
primigenios por meteoritos y cometas. Recientemente se ha observado que la vida
pudo haber comenzado en las profundidades del mar, precisamente en los
respiraderos marinos o sistemas hidrotermales, donde existe un ecosistema que
prospera en la actualidad a 370C.
Por ltimo, se ha encontrado en 1998 discutidos restos de microfsiles bacterianos
en un meteorito proveniente de Marte, denominado ALH 84001. Sobre la base de este
hecho es an posible teorizar, que la vida surgi de ese planeta y fue capaz de
colonizar accidentalmente la Tierra.
En general, an restan muchas incgnitas en las hiptesis anteriores y estas tienen uno que
otro punto dbil.

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57

3) CARACTERISTICAS FISICO-QUIMICAS DE LOS AMINOACIDOS.

a) SOLO L - AMINOACIDOS PARTICIPAN EN LA FORMACION DE LAS PROTEINAS.
Como se seal anteriormente a excepcin de la Glicina, todos los aminocidos presentan
al menos un carbn asimtrico o quiral Alfa, con Hibridizacin sp3 y que posee 4

C H O

O H C

HO

C H2 OH

D - G lic e ra ld e h id o

L - G lic e ra ld e h id o

C O O H

H O O C

C
2H N

R
L - A m in o c id o

OH
H O 2H C

C
H

NH2

R
D - A m in o c id o

Fig. 4 - 2. C asimtrico o quiral significa que sus 4 sustituyentes son distintos, solo el
aminocido Glicina no es quiral.

sustituyentes diferentes. Esto hace que cada aminocido pueda tener una imagen especular
no superponible y por convencin son comparados a una molcula de Gliceraldehdo que
posee un carbono 2 asimtrico o carbono central tambin asimtrico (Fig. 4 - 2). El
Gliceraldehdo, ser la molcula patrn para designar a los aminocidos L o D. As
tenemos, que es posible alinear el grupo OH del Gliceraldehdo con el grupo NH2 del
aminocido, a su vez el grupo CHO del gliceraldehdo se alinea con el Carboxilo del
aminocido y el grupo CH2OH del Gliceraldehdo con el grupo correspondiente al Residuo R
del aminocido. De esta manera el Hidrgeno ocupa la cuarta posicin coincidente en
ambos. Ahora, al respetar esta configuracin podemos decir que un aminocido L tiene el
grupo Amino al lado izquierdo y un aminocido D al lado derecho. En la actualidad es bien
conocido que las estructuras biolgicas ocupan tan solo L-aminocido, basado en la
configuracin del L-Gliceraldehdo.
Por otro lado, con el fin de observar la pureza de una preparacin de aminocidos se
emplea la Rotacin Especfica, que consiste en la rotacin del plano de la luz polarizada.
Esta medicin hace incidir sobre una solucin del aminocido luz polarizada, cuya
caracterstica principal es que vibra solo en un plano, ya que la luz normal vibra en mltiples
planos (Fig. 5b - 2). Al aplicar luz polarizada sobre la solucin del aminocido, la luz
emergente tiene el plano de vibracin o polarizacin desplazado. Si sigue las manecillas del
reloj se denomina + (dextrorotatorio). En el sentido contrario al reloj es - (levorotatorio).
Los prefijos + por dextrorotatorio) y por levorotatorio o d y l minsculas, no se
relacionan con D y L en maysculas. Dextrgiro (+) o levgiro (-) se determinan por el
plano de rotacin de la luz polarizada y la denominacin L o D, se hace mediante la

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comparacin con la estructura del Gliceraldehdo (fig.4 - 2). Adems, puede suceder el
caso de que una misma configuracin L tenga valores de signo + o -.
En aquellos casos donde el plano de luz polarizada emergente que proviene desde el
aminocido no se desplaza a ningn lado, se dice que se tiene una mezcla racmica o el
mismo nmero de enantimeros o ismeros pticos + y - del aminocido en particular. En
este caso coinciden las designaciones L, D con levgiro y dextrgiro, pero no siempre lo que
se presta para una confusin. Aquellos aminocidos sintetizados qumicamente producen
este tipo de mezcla.
En el caso de que un aminocido presenta ms de un carbono asimtrico se emplea el
prefijo Alo (Fig. 5a - 2).
Todos los aminocidos que provienen de estructuras biolgicas son del tipo L en base a la
molcula patrn Gliceraldehdo. No se encuentran aminocidos D en las protenas. Por otro
lado los monosacridos de importancia biolgica son del tipo D.
La causa por la que se ha favorecido esta determinada configuracin L en los aminocidos y
la configuracin D en los monosacridos, puede ser parcialmente explicada de la siguiente
manera:
En fsica cuntica se describen cuatro tipos de fuerzas, la gravitacional, la electrosttica,
la fuerza nuclear fuerte entre protones y neutrones y la fuerza nuclear dbil que
aparece entre los electrones. Esta ltima es la que entrega el carcter de quiral, en este
caso a los electrones. De esta manera se puede decir que existen electrones dextrgiros y
electrones levgiros. Ambos poseeran cargas de tipo opuesto en que los dextro son
atrados al ncleo y los levo repelidos por la fuerza nuclear dbil. As, cuando un electrn
5a )
COOH

COOH

Luz que vibra en todos los planos

Luz polarizada que vibra en un solo

5b )

plano

HN
2
H

OH

H
HO

COOH

HO

C
CH

3
D - Treonina

3
L - Treonina

H
H

3
L - Alo -Treonina

(+)

COOH
H

H
CH

CH

HN
2

NH
C

NH
2

OH

H
CH

D - Alo - Treonina

(-)

Desviacin del plano de la luz

polarizada despus de pasar por el

aminocido

Fig. 5a - 2. La luz polarizada cambia el plano de rotacin con los aminocidos.

Fig. 5b - 2. Con ms de un carbono asimtrico se denomina Alo.

esta cerca del ncleo, su direccin de movimiento esta parcialmente alineada con su
eje vector de espn, siendo por lo tanto D y cuando esta lejos, se encuentra

59

Hctor Rocha L. Los Aminocidos y sus Caractersticas

desalineado con el eje vector de espn y es del tipo L. En base a ello, una molcula
tendr diversa quiralidad electrnica, segn la proporcin de electrones que se
encuentren cerca o lejos del ncleo. En otras palabras la quiralidad depender de la
distribucin de la nube electrnica y se necesitar mayor o menor energa de formacin
para uno u otro de los enantimeros. El enantimero que necesite menos energa de
formacin, ser el ms favorecido y en este caso corresponde al tipo L para los
aminocidos.
Se puede concluir finalmente que a causa de la fuerza dbil, se
infringe el principio de la paridad y se rompe la simetra ya que favorece la existencia de
Levoaminocidos y Dextrosacridos como molculas que constituyen a los seres vivos,
por ser menos costosa su sntesis.
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b) CLASIFICACION DE LOS AMINOACIDOS SEGUN SU GRUPO R.

Existen cuatro grupos de aminocidos segn la identidad de su grupo R. As tenemos que
en primer lugar encontramos a los:
HIDROFOBICOS que se caracterizan por tener grupos R de cadenas alifticas y
aromticas.
En segundo lugar se encuentran los POLARES SIN CARGA con grupos hidroxilos (OH),
tioles (SH) y amidas (-CONH2) que son capaces de formar un nmero limitado de enlaces
hidrgenos con el agua.
En tercer lugar se encuentran los POLARES DE CARGA ( - ) que se caracterizan por
poseer un grupo carboxilo R (-COO-) y se disuelven fcilmente en agua.
De similar manera tenemos a los POLARES DE CARGA (+) que constituyen el cuarto
grupo. Estos ltimos poseen un grupo R representado por un amino (-NH3+), un guanidino (NH-CNH2+-NH2) o un grupo imidazol. En la Tabla 1 - 2, se pueden observar las estructuras
de los distintos residuos R de los aminocidos.
Los aminocidos pueden an ser sometidos a otras clasificaciones, si tomamos en cuenta
algunas otras propiedades. Entre los aminocidos hidrofbicos de cadena aliftica tenemos
a la Alanina, Leucina, Valina e Isoleucina y a los aromticos a Fenilalanina, Triptfano y uno
polar sin carga, como la Tirosina. Por otro lado existen aminocidos con Azufre,
probablemente evolucionaron antes de que apareciera el Oxgeno en la Tierra y son
Metionina y Cistena. El primero de ellos es considerado como hidrofbico y el segundo de
ellos es considerado como polar sin carga.

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Tabla 1 - 3.

Hidrofbicos

R e s i d u o s de a m i n o c i d o s .

C H Alanina
3
CH
3
HC Valina

Polares sin carga

H

CH
3

H O CH Serina
2

CH
Leucina
3
HC CH CH
C H3 2 C H
3

CH CH
Treonina
3
OH

C H C H CH
2
3
C H3 Isoleucina
H2
C

CH Fenilalanina
2

Triptfano

CH S CH CH
3
2 2

CH
2

O
O

HN CH CH CH CH
2
2 2
2
3

Asprtico
C CH
2

Asparregina
HN
2
C CH
2
O
HN
2

CH
2
N

H S C H Cistena
2

HO
Tirosina

HC
COO
2
C
HC
Prolina
2 N H
H

Polares
de
carga
negativa

Glicina

Polares de carga
positiva
Lisina
+

C CH CH
2 2
Glutmico

HN C NH CH CH CH
2
2 2
2
NH
Arginina
+ 2

HC C C H
2
HN NH
+ C
H Histidina

Glutamina
C CH

CH
2

Metionina

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61

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c) ABSORCION DE LUZ ULTRAVIOLETA.

Existen tres aminocidos que absorben luz Ultravioleta a 280 nm y son Triptfano,
Fenilalanina y Tirosina (Fig. 6a - 3). Si la ley de Lambert-Beer establece que A = k c, es decir
que la absorcin de luz incidente por una solucin es proporcional a la concentracin de
esta. Significa que mientras ms concentrada est una solucin menor ser la luz que pase
por ella. Una protena que tenga estos tres aminocidos podr absorber luz UV y podr
tener distintas absorciones cuando este a distintas concentraciones. Sin embargo, a una
concentracin constante la mayor o menor absorbancia que experimente, ser una medida
del despliegue o empaquetamiento que experimente la protena al mostrar o esconder estos
aminocidos frente a los cambios de conformacin que experimente ya sea por efecto de la
temperatura o el pH del medio (fig. 6b - 2).

a)

b)

Trp

40
Abs.

o C

Abs.

Tyr
20 o C

Phe
240

260

280

Absorcin de luz por los tres

aminocidos

( nm )

220

240

260

280

( nm )

La misma protena a mayor temperatura

se encuentra desplegada parcialmente
y presenta mayor absorcin al exhibir en
mejor forma los residuos de los aminocidos
Phe , Tyr y Trp.

Fig. 6a - 2. Los tres aminocidos presentan distinta absorcin a igual concentracin.

Fig. 6b - 2. La misma protena se despliega con la temperatura.

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d) IONIZACION DE LOS AMINOACIDOS

Los aminocidos son capaces de ionizarse en solucin, es decir pueden actuar como cidos
dbiles donando hidrgenos al medio o como bases dbiles tomando hidrgenos del medio.

62

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Mientras mayor sea la capacidad para donar protones, un residuo carboxilo ser ms cido
y tendr un pK menor, en cambio un residuo amino mientras menor sea su capacidad para
donar un protn, ser ms bsico y su pK mayor (Tabla 2 - 2). De esta manera tenemos que
entre los aminocidos hay grupos que difieren en su capacidad para donar o aceptar
protones y entre estos grupos se encuentran los -Carboxilos, -Aminos y los residuos -R,
que caracterizan a cada aminocido.

Tabla 2 2

Grupos
Glicina
Alanina
Leucina
Serina
Treonina
Glutamina
Asprtico
Glutmico
Histidina
Cistena
Tirosina
Lisina
Arginina

pK1
pK2
- COO - NH3 +
2,34
9,60
2,34
9,69
2,36
9,60
2,21
9,15
2,63
10,43
2,17
9,13
2,09
9,82
2,19
9,67
1,82
9,17
1,71
10,78
2,20
9,11
2,18
8,95
2,17
9,04

pK3
-R
------------------------------3,86
4,25
6,0
8,33
10,07
10,53
12,48

Al analizar la Tabla 2-2 se observa que la carga de los aminocidos cambia cuando ceden o
toman protones del medio. De esta manera todos los aminocidos son positivos bajo pH 2,
ya que todos los -Carboxilos y aquellos otros Carboxilos del residuo R, con un pK entre 2.0
y 4.2 se encuentran protonadados a este pH y sin carga. Por lo tanto, a bajo pH, los
aminocidos presentarn solo grupos aminos protonados con carga positiva ( NH3+), ya
que tienen un pK igual o por sobre 9.
Por otro lado a un pH por sobre 12,5 todos los aminocidos son negativos ya que los grupos
-Aminos y los residuos R bsicos, pierden su protn desde pH 9.0 a 12.5 quedando sin
carga positiva. En este caso los grupos -Carboxilos, permanecen con carga negativa por
haber perdido su protn entre los pHs 2.3 y 4.2.
Entre ambos extremos de pH todos los aminocidos presentan una especie qumica, con
carga neta 0 y se denominan en este punto como: neutros, isoinicos o isoelctricos. En
esta regin de pH, el nmero de cargas positivas es igual al nmero de cargas negativas. El
punto isoelctrico se calcula aqu sumando los pKs a ambos lados de la especie
isoinica y dividindolos por dos (Fig. 9-2).

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Hctor Rocha L. Los Aminocidos y sus Caractersticas

e) INFLUENCIA DE LOS GRUPOS VECINOS SOBRE LA IONIZACION DE LOS AMINOACIDOS.

En la figura 7 2, se observa una protena en que los grupos vecinos al grupo carboxilo
afectan su pK. El grupo carboxilo se encuentra encuadrado para distinguirlo mejor. Cuando
el carboxilo se encuentra junto a un grupo vecino del tipo -NH3+ , aumenta su pK. El grupo
vecino atrae electrones y lo hace menos cido. En cambio el carboxilo enmarcado junto a
los grupos que donan electrones, como -OH, -SH y -NH2, disminuye su pK y se convierte en
ms cido.
A bajo pH el pK del

A pH alto el protn se desprende

facilmente.

carboxilo sube y le cuesta

desprenederse al protn

El pK se hace menor

+
-+ HN
3
C OH

-+
C OH

PROTEINA

PROTEINA

C
+
C
OH
O

..
H N

C
O

El pK del carboxilo
disminuye frente a las cargas

y el protn sale ms fcil

+ +
OH HO

Si el medio es cido , el pK
del carboxilo se hace mayor

Fig. 7 - 2. El pK de los residuos cambia segn el microambiente que los rodea.

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SEPARACION DE AMINOACIDOS.
Entre las tcnicas clsicas para separar aminocidos se encuentran la Cromatografa de
Intercambio Inico y la Electroforesis de alto voltaje, por otro lado entre las tcnicas
modernas se destaca la Cromatografa Lquida de Alta Presin (HPLC).
a) Cromatografa de intercambio inico
La Cromatografa de intercambio inico emplea una fase estacionaria formada por
una resina o polmero de cargas negativas o positivas en una columna de elucin. Sobre
este polmero se hace pasar una mezcla de aminocidos en un solvente orgnico que se
mezcla con un tampn. De esta manera los aminocidos de la fase mvil se separarn por
la atraccin o repulsin que experimenten entre la fase estacionaria y la fase mvil .

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Hctor Rocha L. Los Aminocidos y sus Caractersticas

La carga de los aminocidos podr variar segn el pH del medio o fase mvil y se tendr
una poblacin de aminocidos positivos, otros negativos y algunos tendrn carga neta 0
(Fig. 8 - 2). Los negativos del mismo signo que la fase estacionaria, eluirn ms rpido que
el resto. Mientras que otros con carga positiva sern mayormente retenidos en la columna
debido a las cargas opuestas. Aquellos aminocidos que se encuentren en su punto
isoelctrico debido al gradiente de pH, sern eludos entre los retenidos y repelidos. En
algunos casos es til emplear un gradiente de pH para mejorar la resolucin o separacin de
los aminocidos en la columna.
En la figura 8 - 2, se aprecian las distintas especies qumicas que se forman entre los
aminocidos Glutmico y Lisina al enfrentar distintos pHs. Cada una de las especies
qumicas tiene una carga determinada segn el pH. Se emplea aqu una columna llena de
resina con carga negativa, donde a pHs inferiores a 2,7 ambos aminocidos son positivos y
se unen a la resina. Por otro lado, al emplear una resina de carga + los aminocidos sern
repelidos al mismo pH anterior y solo se unirn a ella a pHs superiores a 10.
Los pKs del Glutmico son 2,3 para el -Carboxilo y 4,25 para el residuo -Carboxilo,
Glutmico con Carga
desde pH 4,25 a 9,67

Abs.
Resina de
Intercambio
catinico

Gradiente
de pH

Lisina con Carga

desde pH 9,67 hacia
arriba

11 p H

1
Vol. de elucin

Glutmico
_

_
_

p H<2,3

2,3<pH<4,25

C O OH

(p I = 3,30)

Carga neta =

CH
2
CH
C 2
+
HN
C O OH
3
H

+
p H<2,18

(p I = 9,74 )

Carga neta =

COOH
CH
2
CH
_
+
C 2
HN
COO
3
H

0
Lisina
2,18<pH<8,95

4,25<pH<9,67
COO

CH
2
CH
2
_
C
+
HN
COO
3
H

pH>9,67
_
COO
CH
2
CH
C 2

HN
COO
2
H

--

8,95<pH<10,53

pH>10,53

NH
3
[CH ]
2 4
+
C
HN
COO H
3
H

NH
3
[CH ]
2 4
+
C
_
HN
COO
3
H

NH
3
[CH ]
2 4
_
C
HN
COO
2
H

NH
2
[CH ]
2 4
_
C
HN
COO
2
H

++

Fig. 8 - 2. Especies qumicas existentes y sus cargas entre distintos rangos de pH. La columna
cargada negativamente con la resina separa los aminocidos, segn la carga que estos adquieren
en el gradiente de pH. pI indica el punto isoelctrico de cada uno.

mientras que el valor de 9,67 ser para el Amino, mientras que los de la Lisina son de
2,18 para el Carboxilo, 8,95 para el -Amino y 10,53 para el Amino respectivamente.

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Hctor Rocha L. Los Aminocidos y sus Caractersticas

En la figura 9 - 2, se puede apreciar en los grficos de Concentracin de especies qumicas

versus pH, como aumenta y disminuye la concentracin de cada una de las formas
ionizadas o especies qumicas de los aminocidos junto a su carga. En cada punto de cruce
correspondiente a los pKs de los aminocidos, las especies qumicas igualan su
concentracin y el pH es igual al pK. Estos grficos permiten escoger el pH para separar
mejor las mezclas de aminocidos. Por lo tanto el Glutmico se encuentra 100% con carga
negativa entre pHs 4,25 y 9,67, es decir a pH 6,96= (4,65+9,67)/2. A este pH no interacciona
con la fase estacionaria y es eluido (sale de la columna). Por otro lado, Lisina a pH 5,6 =
(2,18+8,95)/2 tiene 100% de carga positiva y ser retenida. Solo alcanzar un 100% de
carga negativa por sobre el pH 10,53 donde solo es 50% negativa.
A pH 3,8 segn la ecuacin de HendersonHasselbalch para Lisina tenemos que:
3,8 = 2,18 + log [especie +] / [especie + +]

Especies qumicas vs pH
2,3

[Glu ]

4,25

_
9,67 _

Especies
qumicas
del
Ac. Glutmi co

[ Lys

3 3,8 4

+ 2,18
+

7,0

8,95

11 p H

10

10,53

Con formato: Fuente: Negrita

Especies
qumicas
de
Lisina

10

Con formato: Fuente: Negrita

11 p H

Fig. 9 2. Ambos aminocidos presentan distintas especies qumicas y cargas a medida que
liberan protones debido al aumento de pH. La zona empleada para la separacin es aquella donde
a un mismo pH ambos aminocidos presentan cargas distintas.

[ especie +] + [ especie + +] = 100%

El Glutmico a pH 7,0 = (4,25 + 9,67)/2, presenta casi 100% de la especie qumica con una
carga negativa y ya no es retenido en el ctodo y migra hacia el nodo. Al mismo tiempo a

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pH 7,0 la Lisina presenta un 98,9% de la forma positiva (especie +) y 0,1% con carga 0
(especie 0) y permanece an atrada al ctodo. Por lo tanto la separacin se puede llevar a
cabo a pH 7,0.
Ecuacin Henderson-Hasselbach para Lisina a pH 7,0:
7,0 = 8,95 + log [ (especie 0) ]/ [ (especie +)]
[ especie 0 ] + [ especie +] = 100%
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b) Electroforsis
Otra tcnica de separacin es la Electroforesis. En ella se emplea un campo elctrico para
discriminar entre los aminocidos cargados (Fig. 10 - 2). El ctodo es negativo y el nodo
positivo, ambos polos se encuentran en los extremos de una matriz slida fibrilar como es la
Celulosa empapada con un tampn a un determinado pH. En ella los aminocidos se
pueden desplazar bajo la influencia del campo elctrico debido a la carga que presentan a
distintos pHs separndose unos de otros (Fig. 10 2 ).
A pH 2, el aminocido Glutmico (Glu) tiene una carga Positiva y Lisina dos cargas positivas
por lo que este ltimo migra ms rpido hacia el ctodo (-) y a su vez es rechazado por el
nodo (+). A pH 7 el aminocido Lisina tiene una carga Positiva y Glutmico una negativa
que lo retrasa, separndose ambos.

Migracin

pH 2

pH 7
+

Glu
Lys

+
++
-

Glu
Lys

Fig. 10 -2. Durante la Electroforesis a pH 2 el aminocido Glutmico presenta una carga

positiva y Lisina dos cargas positivas, mientras que a pH 7 Glutmico presenta una carga
negativa y Lisina una positiva.

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c) HPLC
Continuando con las tcnicas de separacin encontramos a la Cromatografa Lquida de
Alta Presin o tcnica de HPLC. Se puede emplear para separar una mezcla de
aminocidos segn el grado de hidrofobicidad de cada uno de ellos.
La fase estacionaria en este caso se encuentra formada por partculas de Silicio enlazadas
covalentemente a cadenas alifticas o aromticas que pueden tener algn grado de
hidroxilacin. Como fase mvil se usa un gradiente de una sustancia polar como el buffer
Fosfato y una molcula orgnica soluble como el Acetonitrilo. A medida que se van
mezclando gradualmente la fase mvil pasa de 100% polar en Fosfato a 100% hidrofbico
en Acetonitrilo puro y se arrastra a los aminocidos que inicialmente se unieron a la fase
estacionaria. De esta forma los polares salen primero en el amortiguador o tampn fosfato,
luego en la mitad aparecen los polares sin carga y finalmente los aminocidos hidrofbicos
que eluyen (salen) en Acetonitrilo puro.

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REFERENCIAS
La evolucin qumica y el origen de la vida, R.E. Dickerson, Investigacin y Ciencia,
Noviembre, 27,34-53, 1978
Los primeros organismos, AG Cairns-Smith, Investigacin y Ciencia, Agosto, 107, 54-63,
1985.
Les premire molcules organiques, F. Robert, La Recherche, Vol. 21, 416-425, 1990.
La quiralidad del universo, R.G.Hegstrom y D.K. Kondepudi, Investigacin y Ciencia, 162,
58-66, 1990.
The Chemistry of life at the Margins, F. Flam, Science, vol. 265, 471-472, 1994.
The Beginnings of Life on Earth by Christian de Duve. American Scientist. Sept.- Oct. 1995,
page 1 to 14. American Scientist: Articles
http://www.sigmaxi.org/amsci/articles/95articles/CdeDuve.html

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