Ao de la integracin nacional y el reconocimiento

DeNUESTRA DIVERSIDAD

Universidad Nacional de Piura

Facultad de Ingeniera Industrial
Escuela de Ingeniera Agroindustrial e Industrias Alimentarias

Curso

microbiologa agroindustrial.

Profesor

Roberto Salazar ros.

Alumno

Gino atarama orosco

Tema

determinacin de hongos y levaduras en

muestra de leche.

Piura Per

I.

INTRODUCCION:
Los hongos son organismos hetertrofos que como saprofitos se alimentan
de materia orgnica muerta y como parsitos se alimentan de husped
vivos.
No contienen clorofila. Sus cuerpos son usualmente alargados o
filamentosos los filamentos se laman hifas conjunto de hifas se llama
micelio. A los hongos filamentosos se les llama mohos y algunos hongos
como las levaduras son unicelulares.
Segn su morfologa los hongos pueden dividirse en dos grupos:
Mohos (hongos filamentosos) y levaduras. Las levaduras son unicelulares y
generalmente presentan produccin asexual por gemacin.
Los mohos presentan una estructura vegetativa denominada micelio el
cual esta formado por una serie de tubos rgidos ramificados dentro de los
cuales sea encuentra en el citoplasma multinucleado. Estos tubos reciben
el nombr de hifas.
Los hongos constituyen un grupo muy numerosos de organismos (se han
descrito aproximadamente 500000. Pero se estima que pueden existir entre
1 y 1.5 millones de especies que presentan una amplia distribucin en la
naturaleza contribuyendo a la descomposicin de la materia orgnica) y
participando en los ciclos biolgicos.
La mayora, los mas familiares y reconocibles, conforman el reino de los
hongos verdaderos (fung o eumycota). Otro se ubican en el mismo reino
de las amebas. El llamado protozoo, como en el caso de los hongos.
El crecimiento del hongo se prolonga
hasta que los nutrientes
desaparecen. Las hifas pueden ser de dos tipos: vegetativas que penetran
el sustrato con el fin de absorber nutrientes de hifas areas.
En el aislamiento de hongos hasta mediados del siglo xlx la presencia de
grmenes en el aire mantuvo entre los cientficos
gracias a los
experimentos de Luis Pasteur se demostr la presencia en el aire del medio
ambiente de grmenes que al caer ven los medios de cultivo ocasionaban
la descomposicin del medio.

PREPARACION DE SOLUCION SALINA:

La solucin salina peptonada se prepara, al 0.85% de cloruro de sodio y
peptona al 1% de agua destilada. Ajustar el pH a 7.0 +/- 0.2 envasar en
frascos de 90 ml y en tubos de dilucin de 9 ml, tapar los tubos y los frascos
hermticamente y esterilizar con calor hmedo en (autoclave) durante 15
minuto a 121c una vez hayan sido esterilizarlos refrigerarlos.
Para muestras solidas como pan, carnes, harinas, etc. en un recipiente
corte con cuchillo estril la muestra en trozos pequeos.
Las muestras liquidas y semilquidas se preparan directamente como
vienen. teniendo en cuenta de homogenizar la muestra en el mismo
recipiente en que asido llevada al laboratorio mediante agitacin.

Hongos en lcteos:

Como en la Leche, yogurt, queso etc.

Aspergillus terreus Penicillium roqueforti.
Penicillium citrinum Aspergillus versicolor.
Geotrichum candidum Fusarium poae.
Aspergillus niveus Scopulariopsis cndida.
Scopulariopsis brevicaudus.

Agar Sabouraud:
Es un medio utilizado para el cultivo de hongos y levaduras.
El Agar de Dextrosa Sabouraud es una modificacin a la frmula original
del Agar de Dextrosa Desarrollado por Raymand Sabouraud. Este medio es
utilizado para el cultivo de hongos patgenos, Particularmente de aquellos
asociados con infecciones de piel. La alta concentracin de dextrosa y la
Acidez del pH hacen a ste un medio selectivo para hongos. Con la
adicin de cicloheximida, Estreptomicina y penicilina, se obtiene un
excelente medio para el aislamiento primario de dermatofitos.
Este medio es tambin utilizado para la determinacin microbiolgica en
cosmticos y para evaluar la Presencia de hongos en alimentos. En este
medio las peptonas proveen la fuente de carbono y nitrgeno Para el
crecimiento de los microorganismos, la dextrosa acta como fuente de
energa y el agar es Agregado como agente solidificante.

Dextrosa 40.0
Peptona de Casena 5.0
Digerido Pancretico de Tejido Animal 5.0
Agar Bacteriolgico 15.0
PH 5.6 0.2
Mtodo:
Suspender 65 g del medio en un litro de agua purificada. Calentar con
agitacin suave hasta su completa disolucin y hervir durante un minuto.
Evitar el sobrecalentamiento.
Esterilizar en autoclave a 121C (15 Libras de presin) durante 15 minutos.
Dejar enfriar a una temperatura entre 45-50C y vaciar en placas de Petri
estriles.
Procedimiento:
Sembrar las muestras tan pronto lleguen al laboratorio siguiendo las
recomendaciones para su procesoy siembra.
Incubar las placas o tubos sembrados en una atmsfera hmeda a 2530C.
Examinar los cultivos semanalmente para reportar resultados de
crecimiento. Los cultivos deberndejarse en incubacin hasta por 6
semanas antes de reportarse como negativos.
En las muestras positivas se observa el crecimiento de hongos y levaduras
con su morfologa colonial tpica o confluencia de colonias.
Almacenamiento:2-30 C.
Caducidad:5 aos en frasco cerrado.
Presentacin:Frasco con 450 g
Caja con 20 sobres para un litro
Medio preparado en paquete con 10 placas
Medio preparado en caja con 10 Tubos.

II.

OBJETIVOS:
Observar determinar algunas colonias de hongos en muestra de leche.

MATERIALES:

III.

IV.

Pipetas
Leche de Chulucanas
Mechero
Fsforos
Placas
Agar saboraud
Tubos de ensayo
Contador de colonias

METODOS Y PROCEDIMIENTOS:
Primero hacemos la cuantificacin de microorganismos a partir de la
muestra de la leche para las respectivas diluciones.

 Se tomaron 4 tubos de ensayo se les coloco 9ml de SSP cada tubo con
sus respectiva pipeta.
1ml

1ml

1ml

1ml

10-4
10-1

10-2

10-3

Leche
1ml

15ml

Agar saboroud

1ml

15ml

1ml

15ml

1ml

15ml

 El tubo de 10-1 se le agrego 10 ml de la muestra de leche luego se

homogenizo por un tiempo de 5 minutos.

Al tubo se 10-2 se le agrego 1 ml del tubo de 10-1 luego se homogenizo

por 5 minutos.

 Al tubo de 10-3 se le agrego 1ml del tubo de 10-2 luego se homogenizo

por 5 minutos.

Y por ltimo el tubo de 10-4 se le agrego 1ml del tubo de 10-3 luego se
homogenizo por 5 minutos.

 Luego a las cuatro placas le agregamos 15 ml de agar VRB.

Del tubo de 10-4 le agregamos 1 ml de la solucin a la placa que
contiene dicho agar con la misma pipeta de 10-4, luego giramos a
ambos lados despacio para que la solucin ocupe la mayor rea
posible en la placa.

 Del tubo de 10-3 le agregamos 1ml de la solucin a la placa con la misma

pipeta de 10-3 luego la placa la giramos despacio para que se disuelva
dicha solucin.

Del tubo de 10-2 le agregamos 1 ml de la solucin a la placa que

contiene dicho agar con la misma pipeta de 10-2, luego giramos a
ambos lados despacio para que la solucin ocupe la mayor rea
posible en la placa.

 Del tubo de 10-1 le agregamos 1ml de la solucin a la placa con la misma

pipeta de 10-1 luego la placa la giramos despacio para que se disuelva
dicha solucin.

Luego agregamos el agar saboraud. 15 cm3 a las cuatro placas.

 luego se deja 5 minutos para luego incubarse a 37c por tiempo de 24 a

48 horas.

V.

RESULTADOS:

 primero calculamos el rea total de la placa.

ATotal = 3.1416 (5)2 = 79 cm2
Para la placa de 10-4
9 + 7 + 8 + 9

= 33/4 = 8.25 =8colonias

79 cm2 * 8 colonias = 632colonias/cm2

para el tubo de 10-3.

11 + 10 + 9 + 12= 42/4 = 10.5 = 11 colonias
79 cm2 * 11 colonias = 869colonias/cm2

 para el tubo de 10-2.

14 + 15 + 14 + 12 = 55/4 = 13.75 = 14 colonias
79 cm2 * 14colonias = 1106 colonias/cm2

para el tubo de 10-1.

15 + 12 + 16 + 17 = 60/4 = 15 colonias
79 cm2 * 15colonias = 1185 colonias/cm2

luego la suma de las cantidades de colonias:

10-1

11850
+

10-2

110600

10-3

869000

10-4

6320000

UFCtotal = 6.1x10-4 UFC/CM2

122450/2 =61225

VI.

DISCUCIONES:
el tubo de 10-4 tiene mayor concentracin con el tubo de 10-3 ,lo cual
indica mayor presencia de colonias.
Los tubo de 10-1 y 10-2 tienen menor concentracin lo cual indicar menor
nmero de colonias.
La cantidad de unidades formadoras de colonias obtenidas por el
aislamiento de colonias por diluciones sucesivas, depende del grado de
dilucin; ya que a mayor dilucin menor ser el nmero de colonias
obtenidas.

VII.

CONCLUSION:

Los hongos son organismos hetertrofos que como saprofitos se alimentan

de materia orgnica muerta y como parsitos se alimentan de husped
vivos.
Para realizar la contabilidad de la cantidad de microorganismos presentes
en la muestra se efecta siempre una aislacin.
Los microorganismos estn ampliamente distribuidos en la naturaleza, por
lo que Siempre se encuentran presentes en diversos productos,
especialmente en aquellos que favorecen de algn modo su
sobrevivencia o desarrollo.
La solucin salina peptonada se prepara, al 0.85% de cloruro de sodio y
peptona al 1% de agua destilada. Ajustar el pH a 7.0 +/- 0.2 envasar en
frascos de 90 ml y en tubos de dilucin de 9 ml, tapar los tubos y los frascos
hermticamente y esterilizar con calor hmedo en (autoclave) durante 15
minuto a 121c una vez hayan sido esterilizarlos refrigerarlos.
es utilizado para el cultivo de hongos patgenos, Particularmente de
aquellos asociados con infecciones de piel. La alta concentracin de
dextrosa y la Acidez del pH hacen a ste un medio selectivo para hongos.

VIII.

Bibliografa:
Koheman Elmer w., et.al. 1999. Diagnstico Microbiolgico, Panamericana,
quinta edicin, Mxico.
Prescott L.M., Harley J.P Y Klein D.A. 1999. Microbiologa. 4 Ed. McGraw-Hill
Interamericana. Mxico.
Zinsser, JoklikWillett Amos, 1999. Microbiologa, Editorial mdica
panamericana, 18 edicin, Mxico.
Pelczar, Michael, et.al, Elementos de Microbiologa, McGraw-Hill, Mxico.