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Qu es la extraccin?
Proceso de separacin de una sustancia que se encuentra mezclada
dentro de un compuesto u organismo.
Extraccin de ADN
El ADN puede ser obtenido de virtualmente cualquier clula o material biolgico
que las contenga
Clulas eucarioticas
Clulas procariticas
Virus
Extraccin de ADN
ADN cromosmico
ADN plasmdico
Plsmidos
E. coli
Cromosoma
Plsmidos
Molculas de ADN separadas del ADN cromosmico
Auto-replicacin
Extraccin de ADN
Extraccin de ADN
Qumico
Lisis celular
Enzimticos
Proteinase K
Lysozyme
Mecnicos
Freezing
Sonication
Grinding
Solventes
Orgnicos
Remocin de
proteinas
Precipitacin
del ADN
SDS, sarcosyl
CTAB
Phenol
chloroform
Salt
Sodium chloride
Sodium acetate
Membrane
Beads
Alcoholes
Ethanol
Iso-propanol
Lisis Celular.
Preparacin del extracto celular
Estructura celular debe ser destruidas para liberar el ADN.
Mtodos Fsicos
Mtodos Qumicos
Lisis Celular
Ruptura de la pared celular
Sodium dodecyl sulphate (SDS): es un detergenteel cual remueve las molculas lipdicas
2. NaOH
Desnaturaliza el ADN
Debido a que los plsmidos estm
superenrollados ambas cadenas de ADN
se mantienen juntas despues de la
desnaturalizacin
Centrifugacin remueve
restos
celulares
insolubles
Extraccin de ADN
2.- Purificacin
ADN
Protenas
disueltas
Lpidos
2.- Purificacin
Extraccin de ADN
3.- Precipitacin:
Adicin de etanol o
de isopropanol
Separacin por
centrifugacin
ADN
3.- Precipitacin:
Extraccin de ADN
4.-
Conservacin:
ADN
+
T.E.
Tris
EDTA
Electroforesis
Materiales:
Balanza
Agarosa
Fiola
Probeta
TAE
1X
Pipeta
Microonda
Puntas de depsito
Electroforesis
Montaje
del molde:
Fondo del
molde
Localizacin y alineamiento
de las peinetas
Localizacin de las
paredes del molde
Electroforesis
Pesar la agarosa
Medir el TAE 1 X
Agarosa
Polisacrido
T.A.E
Tris
cido Actico
EDTA
Electroforesis
Guantes
Dejar enfriar
algunos
minutos
Aadir el
bromuro de
etidio
Electroforesis
6
Cubeta de
electroforesis
(Azul de
Bromofenol)
Muestra
8
Colocar con cuidado
Las muestras en los pozos
Electroforesis
Cerrar la cubeta de
electroforesis y encender el
generador
Electroforesis
Electroforesis
10
ADN genmico
ADN plasmidico