TOMA DE MUESTRA

OBJETIVO:
Obtener de forma precisa suero sanguneo para su uso en pruebas inmunolgicas
INTRODUCCION:
La toma de muestra es el conjunto de procedimientos destinados a obtener una parte
representativa cualicuantitativamente a partir de un todo, en nuestro caso, el paciente.
La muestra obtenida debe tener las siguientes caractersticas:

Ser cualitativamente ptima para su estudio

Alcanzar cualitativamente un volumen razonable

Ser de emisin reciente en la mayora de los casos

Obtenida siguiendo criterios anatmicos y funcionales, con material esterilizado y en

condiciones de asepsia.

Comnmente las muestras obtenidas para su anlisis en inmunologa son muestras sanguneas y
lquidos corporales como suero, plasma, lquido pleural, sinovial, cefalorraqudeo, etc. En serologa
la determinacin de pruebas inmunolgicas es mayormente en suero.
Obtencin de Muestra de Sangre. Para efectuar anlisis serolgicos, las muestras de sangre
pueden ser de sangre capilar o perifrica y de sangre venosa.

Sangre capilar o perifrica. Es la que fluye despus de aplicar una puncin superficial
cutnea. Se puede obtener de la yema del dedo. Algunas pruebas pueden realizarse con
sangre capilar o perifrica y se aconseja cuando no es posible obtener una muestra de
sangre venosa o no se desea puncionar la vena.

Sangre venosa. Esta muestra se obtiene por puncin de una de las tres venas del pliegue
del codo: la baslica, la ceflica o la mediana cubital.. Previamente se realiza la limpieza del
rea elegida con torunda y alcohol. Antes de puncionar se coloca el torniquete
aproximadamente a 8 cm de distancia arriba del pliegue del codo. No debe olvidar soltarlo
tan pronto empiece a obtenerse la muestra. La cantidad mxima de sangre a extraer ser
estrictamente la necesaria para las pruebas.

Anticoagulantes. Los anticoagulantes ms usados son el citrato de sodio, oxalato de sodio y EDTA.
El citrato de sodio se emplea al 3.8% y el oxalato de sodio al 1.4%. Se usan en relacin de una parte
de anticoagulante por cada nueve partes de sangre, habitualmente se usan 0.25ml de la solucin
para completar a 2.5ml de volumen total con la muestra de sangre. El EDTA (cido etilen-diaminotetra-actico) se utiliza al 10% y es uno de los anticoagulantes de eleccin para el trabajo de rutina.
Manejo y conservacin de la muestra. La muestra debe rotularse correctamente y separase segn
el caso en plasma o suero, y dependiendo del tipo de anlisis debe analizarse inmediatamente o
puede conservarse adecuadamente refrigerada entre 4 y 8C para el anlisis posterior.
MATERIALES Y REACTIVOS:

Jeringas de 3, 5 o 10 ml

Torniquete

Alcohol etilico

Algodn

Tubos de hemolisis

Bao Maria

Centrifugadora

PROCEDIMIENTO:
- Para obtener la muestra sangunea:

Realizar la asepsia de la regin elegida (red venosa de la flexura del codo, en nios a nivel
yugular)

Obtener la cantidad minima y necesaria, extraida por puncion venosa

Realizar la toma de muestra con extremas condiciones de asepsia

- El tubo que contiene sangre sin anticoagulante, al que fue transferida la muestra de sangre
completa, debe dejarse 10 minutos en reposo en bao Mara a temperatura ambiente, para que
coagule
- Luego centrifugar a 3000 r.p.m. durante 5 minutos para separar las clulas del suero.
- Luego con una pipeta Pasteur se debe separar el suero o sobrenadante y transferir a un tubo de
almacenamiento para la realizacin de las diferentes pruebas.
CONCLUSIONES:

El suero sanguneo es principalmente agua, de un color amarillento puesto que se disuelve con
protenas, hormonas, minerales y dixido de carbono, as como tambin es una fuente muy
importante de electrolitos.
El plasma contiene suero y factores de coagulacin, una vez se eliminan los coagulantes como la
fibrina este lquido se convierte en suero.
Muchas de las pruebas serolgicas se realizan en suero sanguneo, por lo tanto la obtencin de
este debe ser de importante conocimiento.

SOLUCIONES, DILUCIONES Y MICRODILUCIONES

OBJETIVO:
Elaborar clculos de diluciones y microdiluciones para su posterior uso en pruebas inmunolgicas
INTRODUCCION:
Una solucin es una mezcla homognea de dos o mas sustancias, en la que la sustancia disuelta se
denomina soluto y esta presente generalmente en pequea cantidad en comparacin con la
sustancia donde se disuelve denominada solvente. El primer requisito de las soluciones consiste en
poder especificar sus composiciones, es decir, las cantidades relativas de los diversos
componentes.
La concentracin de una solucin expresa la relacin de la cantidad de soluto a la cantidad de
solvente. El proceso por el cual se disminuye la concentracin de una solucin se denomina
dilucin. Una dilucin se puede definir como una solucin con concentracin menor obtenida al
agregar volmenes conocidos de diluyente a una solucin de concentracin conocida.
Una microdilucion es un dilucin que se realiza en pequeas cantidades, dichas cantidades son
inferiores a 0,9 y 0,5 ml. Las diluciones se expresan en forma de una proporcin, por ejemplo 1/10
(1:10) donde la primera cifra o numerador (1) corresponde al volumen de lo que se est diluyendo
y la segunda cifra o denominador (10) al volumen total en que se encuentra. As, una dilucin 1/10
indica que se tiene un volumen de la solucin original contenido o diluido en 10 volmenes totales,
de los cuales 9 corresponden al diluyente.
En la prctica las diluciones se pueden efectuar de dos maneras diferentes:

Dilucin directa: tienen el inconveniente de que cuando es necesario hacer una dilucin
alta por ejemplo 1/ 10 000, se desperdicia mucho reactivo o se incurre en un error de
medicin.

Dilucin en serie: soluciona los inconvenientes que presenta las diluciones altas. Permite el
clculo de la muestra de estudio, de la cual se toma una alcuota que se diluye en varios
tubos. La diferencia entre la dilucin de dos tubos consecutivo se conoce como factor de
dilucin, siendo 2, 4 y 10 los ms usados. Solo el primer tubo lleva la alcuota de la muestra
sin diluir, los dems tubos toman la alcuota ya diluida del tubo previo. El nmero de tubos

y las diluciones intermedias se plantean considerando el volumen de los tubos as como el

volumen mnimo.
PROCEDIMIENTO:
1.

Preparar 50 ml de una solucin al 3%

3 ml

100 ml

50 ml
x = 1,5 ml

R. Medir 1,5 ml de solucin inicial y enrasar a 50 ml con agua

Preparar 30 ml de una solucin al 10%

10 ml

100 ml

30 ml
x = 3 ml

R. Medir 3 ml de solucin inicial y enrasar a 30 ml con agua

Preparar 80 ml de una solucin al 5%

5 ml

100 ml

80 ml
x = 4 ml

R. Medir 4 ml de solucin inicial y enrasar a 80 ml con agua

Preparar 40 ml de una solucin al 15%

15 ml

100 ml

40 ml
x = 6 ml

R. Medir 6 ml de solucin inicial y enrasar a 40 ml con agua

2.

Preparar 10 ml de una solucin al 3% a partir de una solucin al 30%

Datos
C1 = 30%
V1 =
C2 = 3%
V2 = 10 ml

C1 * V1 = C2 * V2
V1 =
V1 =
V1 = 1 ml
R. Medir 1 ml de solucin inicial y enrasar a 10 ml con agua

Preparar 20 ml de una solucin al 15% a partir de una solucin al 80%

Datos
C1 = 80%
V1 =
C2 = 15%
V2 = 20 ml
C1 * V1 = C2 * V2
V1 =
V1 =
V1 = 3,75 ml
R. Medir 3,75 ml de solucin inicial y enrasar a 20 ml con agua

Preparar 50 ml de una solucin al 25% a partir de una solucin al 50%

Datos
C1 = 50%
V1 =
C2 = 25%
V2 = 50 ml
C1 * V1 = C2 * V2
V1 =
V1 =
V1 = 12.5 ml

R. Medir 12,5 ml de solucin inicial y enrasar a 50 ml con agua

Preparar 30 ml de una solucin al 15% a partir de una solucin al 60%

Datos
C1 = 60%
V1 =
C2 = 15%
V2 = 30 ml
C1 * V1 = C2 * V2
V1 =
V1 =
V1 = 7,5 ml
R. Medir 7,5 ml de solucin inicial y enrasar a 30 ml con agua

3.

Preparar 3 ml de una solucin al 1/50

1 ml

50 ml

3 ml
x = 0,06 ml

R. Medir 0,06 ml de solucin inicial y enrasar a 3 ml con solucin fisiolgica

Preparar 5 ml de una solucin al 1/20

1 ml

20 ml

5 ml
x = 0,25 ml

R. Medir 0,25 ml de solucin inicial y enrasar a 5 ml con solucin fisiolgica

Preparar 10 ml de una solucin al 1/80

1 ml

80 ml

10 ml
x = 1,25 ml

R. Medir 0,125 ml de solucin inicial y enrasar a 10 ml con solucin fisiolgica

Preparar 50 ml de una solucin al 1/1000

1 ml

1000 ml

50 ml
x = 0,05 ml

R. Medir 0,05 ml de solucin inicial y enrasar a 50 ml con solucin fisiolgica

4.

Preparar 20 ml de una dilucin al 1/2000 a partir de una dilucin al 1/1000

Datos
VF = 20 ml
DF = 1/2000
DI = 1/1000
FD =
FD =
1 ml

=2
2 ml

20 ml
x = 10 ml

R. Medir 10 ml de dilucin inicial y enrasar a 20 ml con solucin fisiolgica

Preparar 50 ml de una dilucin al 1/30 a partir de una dilucin al 1/2

Datos
VF = 50 ml
DF = 1/30
DI = 1/2
FD =
FD =

= 15

1 ml

15 ml

50 ml
x = 3,33 ml

R. Medir 3,33 ml de dilucin inicial y enrasar a 50 ml con solucin fisiolgica}

Preparar 100 ml de una dilucin al 1/80 a partir de una dilucin al 1/50

Datos
VF = 100 ml
DF = 1/80
DI = 1/50
FD =
FD =

= 1,6

1 ml

1,6 ml

100 ml
x = 62,5 ml

R. Medir 62,5 ml de dilucin inicial y enrasar a 100 ml con solucin fisiolgica

Preparar 30 ml de una dilucin al 1/200 a partir de una dilucin al 1/10

Datos
VF = 30 ml
DF = 1/200
DI = 1/10
FD =
FD =

= 20

1 ml

20 ml

30 ml
x = 1,5 ml

R. Medir 1,5 ml de dilucin inicial y enrasar a 30 ml con solucin fisiolgica

CONCLUSIONES:
Una dilucin es el proceso por el cual se disminuye la concentracin de una solucin agregando un
diluyente. Las microdiluciones son procesos similares en pequeas cantidades de solucin y
diluyentes. Las diluciones y microdiluciones son procesos muy utilizados en los ensayos de
inmunologa, por lo que su conocimiento y elaboracin en la prctica deben ser tomados muy en
cuenta y de forma precisa. Se deben realizar cumpliendo las expectativas que lo requieran.