Bioconversin de la biomasa lignocelulsica a hidrgeno: Posibilidades y desafos

RESUMEN
No se ha presentado ninguna revisin exhaustiva sobre la bioconversin de la biomasa
lignocelulosa en hidrgeno. En este trabajo se proporciona una revisin puesta al da sobre el
desarrollo de las investigaciones recientes en materia de biotecnologa sobre la bioconversion de
biomasa lignocelulosa en -H2. Bioconversin de lignocelulsico prehidrolisado, hidrolizado de
celulosa o de hidrgeno era discuten en trminos de los microorganismos implicados y las tcticas
bioaumentacin. Para alcanzar plenamente la utilizacin de la biomasa, los enfoques integrados
compuestos por unida oscuro-photo fermentacin y la oscuridad fermentacin y
bioelectrohydrogenesis fueron esbozadas. Adems, esta revisin arroja luz sobre las perspectivas
en la conversin de biomasa lignocelulsica a hidrgeno, y en los retos cientficos y tcnicos que se
enfrentan para la lignocelulosas bioconversin.
INTRODUCCION
El hidrgeno es una alternativa prometedora a los combustibles fsiles convencionales ya que no
tiene el mismo impacto ambiental asociado con los combustibles fsiles. Una duda importante
sobre el hidrgeno como alternativa energtica limpia es cmo se produce. La Produccin de
hidrgeno por bioqumica por reacciones microbiana ha atrado la atencin mundial, debido a su
potencial como fuente inagotable de bajo costo y de energa limpia renovables. Estudios en la
produccin de biohidrgeno se han centrado en biophotolysis de agua con las algas y las
cianobacterias, foto-descomposicin de materia orgnica compuestos por bacterias fotosintticas
y fermentacin oscura de compuestos orgnicos con anaerobios. Entre estos procesos biolgicos,
la fermentacin anaerbica de hidrgeno parece ser favorable, ya que el hidrgeno puede ser
producido a tasas ms altas ya menores costos en la degradacin de desechos orgnicos
enriquecidos con diferentes carbohidratos (Kumar y Das, 2000; Chen et al, 2001;. Ginkel et al,
2001;. Fang et al, 2003;. Xing et al, 2006;. Wang et al, 2008a;. Lo et al, 2008a).
La biomasa lignocelulsica en la naturaleza es con mucho la materia prima ms abundante de la
madera dura, softwood, hierbas, y residuos agrcolas. En China, la produccin anual de desechos
de biomasa excede 0.7 mil millones de toneladas (el Abanico et al., 2006a, b; Zhang et al., 2007).
Las producciones anuales de residuos de biomasa lignocelulsicos por todo el mundo, como se
estimaba, excedan 220 mil millones de toneladas por todo el mundo, el equivalente con 60-80 mil
millones de toneladas de petrleo crudo. La biomasa lignocelulsica de ah presenta una accin de
comida atractiva, econmica para la produccin de hidrgeno.
La conversin directa de biomasa lignocelulsica en hidrgeno necesita pretratamiento para
hidrolizar el heterogneo incorporado y cristalino estructura (de Vrije et al, 2002;. Datar et al,
2007;. Ntaikou et al, 2008;. Li y Chen, 2007). En este trabajo se presenta una revisin crtica sobre
la bioconversin de la biomasa lignocelulsica en hidrgeno en trminos de hidrlisis previa y
tecnologa de hidrlisis, la tecnologa de bioconversin y la fermentacin tcticas para aumentar la

produccin de hidrgeno. Perspectivas futuras de bioconvertion de biomasa lignocelulsica en

hidrgeno se discuten.
2. Prehidrlisis y la hidrlisis de la biomasa lignocelulsica
La biomasa lignocelulsica se compone de polmeros de carbohidratos (celulosa y hemicelulosa) y
lignina (Tsao et al, 1982;. Lynd, 1996; Taherzadeh y Karimi, 2003). Los residuos agrcolas, es decir,
el trigo, paja, rastrojo de maz y arroz, comprenden celulosa 32-47%, 19-27%hemicelulosa, y 524% de lignina. La composicin en las diferentes maderas blandas vara ampliamente (Wyman,
1994). La celulosa y la hemicelulosa, que normalmente comprenden dos tercios de los materiales
lignocelulsicos en seco, son polisacridos. Tanto hemicelulosa y lignina proporcionan una
envoltura protectora alrededor de la celulosa, que debe ser hidrolizada antes de la utilizacin
eficiente de los polisacridos incrustados (Mosier et al, 2005;. Lasser et al, 2002;. Lynd, 1996;
Kuhad ySingh, 1993; Sun y Cheng, 2002).
La hidrlisis generalmente incluye la hidrlisis de celulosa y la prehidrlisis. La prehidrlisis de
materiales lignocelulocicos se utiliza para extraer la lignina y en parte hidrolizar la hemicelulosa,
mientras que la hidrlisis de la celulosa es utilizada para fermentables azcares reductores (Duff y
Murray, 1996; Hamelinck et al., 2005). La figura. La figura 1 muestra el esquema general para la
conversin de lignocelulosa a biohidrgeno.
2,1. prehidrlisis
La hidrlisis previa, a menudo referido como pretratamiento, se requiere para alterar la estructura
linocelulosica de la biomasa para hacer la celulosa ms accesibles a las enzimas que convierten los
polmeros de hidratos de carbono a azcares fermentables (Saddler et al, 1993;. Vallander y
Eriksson, 1990; Weil y Westgate, 1994; Wyman, 1994). El proceso de hidrlisis previa puede ser
realizada por (trituracin mecnica y hydrothermolysis) fsico, qumico (ozonolisis, hidrlisis cida,
hidrlisis alcalina, la deslignificacin oxidativa, y el proceso organosolv), combinado (catalizada por
cido de vapor explosin, explosin amonaco fibra y CO2 explosin) y biolgicos (hongos de
pudricin blanca) tcnicas (Ballesteroset al, 2002;. Fan et al, 1982;. Fang et al, 1999;. Kim y Lee,
2002;Mosier et al, 2005;. Pan et al, 2005;. Sun y Cheng, 2002; Yang y Wyman, 2004, 2008).
La seleccin de un mtodo de pretratamiento afecta al costo y rendimiento en la hidrlisis
subsiguiente y etapas de fermentacin. Proceso de hidrlisis previa ideal debe lograr altos
rendimientos de fermentacin, azcares reductores, evitar la degradacin o prdida de los
azcares y la dio formacin de inhibidores para la fermentacin subsecuencia, y mejorar la
celulosa posterior etapa de hidrlisis, en trminos de energa mnima, productos qumicos y el uso
de bienes de equipo (Hamelinck et al., 2005).

De todos los tratamientos previos, la combinacin y las tecnologas biolgicas son las ms
prometedoras. El mtodo combinado, es decir, el azufre, catalizada vapor-explosin, se prefiere
para aplicaciones industriales, aunque tiene algunas desventajas, como la destruccin de una

parte de la fraccin xilano, eliminacin / neutralizacin del cido antes de la fermentacin, y

generacin de compuestos inhibitorios que tal vez a las enzimas y microorganismos en el proceso
aguas abajo (Larsson et al, 1999.; Nguyen et al, 1998;. Palmqvist y Hahn-Hgerdal, 2000a, b).
Este pretratamiento conserva razonablemente altos rendimientos de azcar de la hemicelulosa y
aumenta significativamente la accesibilidad de las enzimas a la celulosa. Los mtodos biolgicos,
aunque incontrolable e insuficiente, ofrecen algunas ventajas nicas, como requerimientos de
baja energa, baja cantidad de inhibidores producido y operatividad a temperatura ambiente.
Hongos blancos, mediante la secrecin de enzimas de degradacin de lignina, incluyendo la lignina
peroxidasas, manganeso-peroxidasas dependientes, peroxidasas de lignina, y lacasa durante el
metabolismo secundario (Sun y Cheng, 2002), son ampliamente adoptado para la eliminacin de la
lignina y la degradacin de las lignocelulosas aunque parte de la celulosa se consumira (Yang y
Wyman, 2008).

A travs de pretratamiento, la lignina y la totalidad o parte de la hemicelulosa es disuelto en los

prehydrolysates. El polmero hemicelulosa es gratis hidrolizado a una mezcla de azcares
monmeros y oligmeros, includng xilosa, xilano, manosa, galactosa arabinosa y glucosa vino de la
hidrlisis de la celulosa. La celulosa y la lignina residual puede ser filtrado y lavado. Siguiendo este
camino, la celulosa podra ser recogidos en un proceso separado para la hidrlisis o fermentacinH2 directa H2-fermentacin (Hamelinck et al., 2005).
2.2 Hidrolisis de la celulosa
La etapa de hidrlisis de la celulosa se denomina como hidrlisis. La reaccin de hidrlisis se
realiza generalmente por enzimas y productos qumicos. Los hidrolizados de celulosa comprenden
de sacridos reducidos con principalmente glucosa (Hamelinck et al., 2005).
Aunque los procesos qumicos son tcnicamente ms maduros y progreso tcnico es significativo
para los procesos enzimticos, se hizo para ver que los costos comparativamente bajos en
trminos de inversiones y operaciones. La hidrlisis enzimtica tiene algunas ventajas importantes
tales como el alto rendimiento de azcares reducidos adquirido bajo condiciones de proceso
suaves y no rindi problema de corrosin (Duff y Murray, 1996;. Hamelinck et al, 2005).
La hidrlisis enzimtica de celulosa se lleva a cabo por celulasas que provienen de bacterias y
hongos. Estos microorganismos pueden ser aerbico o anaerobia, mesfilas o termfilas. Entre
ellos, el Trichoderma est estudiado intensamente para la produccin de celulasa (Beldman y
otros, 1988.; Duff y Murray, 1996; Ghose y Bisaria, 1979; Mononmani y Sreekantiah, 1987;
Sternberg, 1976).
Sacarificacin simultnea y fermentacin (SSF) se adopt debido a la inhibicin reducida de
productos finales a partir de glucosa y celobiosa.

Usando ingeniera gentica los microorganismos albergan la secuencia de codificacin de celulasa,

se puede mejorar la actividad de la enzima y su produccin para obtener nuevas celulasas.
(Hamelinck et al., 2005; Sun and Cheng,2002).
3. Bioconversin de hidrolizado lignocelulsico a hidrgeno
3,1. microorganismos funcionales
Microorganismos funcionales hidroliza la biomasa lignocelulsica a fermentables azcares
reductores, compuestos principalmente de hexosa y pentosa (Sun y Cheng, 2002; Mosier et al,
2005;. Chen et al, 2008a, b.).
La Identificacin de microorganismos fermentativos que efectivamente puede degradar hexosa y /
o pentosa es esencial para el desarrollo prctico del proceso de produccin biohidrgeno a partir
de lignocelulosa.
3.1.1. Pentosa microorganismos de fermentacin
La fraccin pentosa en la hemicelulosa se compone principalmente de xilosa la tabla 1 enumera
los microorganismos funcionales y cultivos mixtos reportados para de la produccin de hidrgeno
a partir de xilosa. En comparacin con hexosa que fermentan microorganismos, slo unos pocos
en la fermentacin de pentosa-microorganismos se han identificado. Entre los conocidos de
fermentacin de pentosa-microorganismos, la mesfila Clostridium sp. N 2 (Taguchi et al., 1995)
revel el mayor rendimiento H2 (2,36 mol H2 mol-1 xilosa), incluso superior a los termfilos de
saccharolyticus Caldicellulosiruptor con un rendimiento de 2,24 mol H2 mol-1 xilosa (Kadar y col.,
2004) y el de T. thermosaccharolyticum W16 con un rendimiento de 2,19 mol H2 mol-1 xilosa (Ren
et al., 2008a, b, c). el Aislamiento adicional de la pentosa de fermentacin microorganismos se
necesita para explorar al utilizacin del hidrolizado lignocelulsico.
3.1.2. fermentacin simultneas con microorganismos C5/C6
Los prehidrolizdos lignocelulsicos contienen una mezcla de hexosa y pentosa. Microorganismos
tpicos de fermentacin de hidrgeno, es decir, Ethanoligenens harbinense B49 (Wang et al., 2007)
no podra metabolizar pentosas. van Niel et al. (2002) y Kadar y col. (2004) demostraron que su
termfilo extrema. C saccharolyticus puede producir H2 desde mono-y disacridos. Datar et al.
(2007) reportaron que los lodos de depuradora tras el pretratamiento de calor al mismo tiempo
puede utilizar los azcares mezclados para generar hidrgeno a partir de rastrojo de maz tratada
por un proceso de explosin de vapor.

. Los rendimientos molares H2 de 2,84 y 3,0 mol fueron obtenido a partir de los hidrolizados que
contienen azcares de mezcla. Ren et al. (2008a, b, c) informaron que una cepa termfila de T.
thermosaccharolyticum W16 simultneamente podra fermentar la mezcla de glucosa y xilosa con
un hidrgeno rendimiento de hasta 2,37 mol H2 mol-1 sustrato. adems, la cepa W16 tiene una
alta tolerancia a prehydrolysate comn inhibidores es decir, acetato y furfural. Los rendimientos
molares H2 de 2,84 y 3,0 mol se obtuvieron a partir de los hidrolizados que contienen azcares de
mezcla. s. Ren et al. (2008a, b, c) informaron que una cepa termfila de T. thermosaccharolyticum
W16 simultneamente podra fermentar la mezcla de glucosa y xilosa con un hidrgeno
rendimiento de hasta 2,37 mol H2-1 mol de sustrato. Adems, la cepa W16 tiene una alta
tolerancia a los inhibidores de prehidrolisados comnes es decir, acetato y furfural.
3.1.3. Los microorganismos involucrados en la fermentacin de celulosa hidolizda
Hexosa es el componente predominante en los hidrolizados de celulosa. La Tabla 2 resume los
microorganismos reportados que pueden producir hidrgeno a partir de hidrolizado de celulosa.
El mayor rendimiento de H2 de aproximadamente 83% del valor terico (4 mol mol-1 hexosa) ha
sido reportado usando bacterias anaerobias termfilas (van Niel et al., 2002). Anaerobios estrictos
harbinense E., es un nuevo gnero identificado por Xing et al. (2006), que tambin revel alto
rendimiento H2. La cepa modelo, E. harbinenseYUAN, mostr especial auto-agregacin durante
capacidad cultivo con agitacin.
Rendimiento de hidrgeno y la velocidad de produccin de hidrgeno de la cepa de E. harbinense
YUAN-3T eran 2,81 mol H2-1 mol de glucosa y 27,6 mmol H2 g de clulas secas -1 h -1,
respectivamente. La propiedad de auto-agregacin de la Straine. harbinense YUAN-3 hace que
esta cepa el potencial para formar grnulos de clulas para el desarrollo de biorreactores
compactos de hidrgeno para uso industrial. El estricto Clostridia anaerbico y anaerobios
facultativos producir hidrgeno con rendimientos comparables (aproximadamente 2 mol H2-1 mol
de glucosa) (Taguchi et al, 1994;. Heyndrickx et al, 1986;. Tanisho et al, 1987;. Kumar y Das, 2000).
El rendimiento H2 <mol H2 mol-1 de glucosa se reporto para cultivos mixtos (Lin y Chang, 1999;.
Chen et al, 2001). Wang et al. (2008a) sugiri que bioaumentacin con adicin de ciertos cepas
funcionales productoras de H2 podra ser prometedora para mejorar an ms el rendimiento de
H2 cultivo mixto.
3,2. Los principales factores que afectan a la bioconversin de prehidrolizados / hidrolizados a H2
3.2.1. Inhibidores
Adems de azcares monomricos, varios compuestos txicos se derivaron de prehidrolisasos
lignocelulsicos como inhibidores de fermentacin (Mussatto y Roberto, 2004; Palmqvist y Hahn
Hgerdal, 2000a, b). Los inhibidores de la fermentacin en los prehydrolysates lignocelulsicos
estn compuestos de los siguientes tres grupos. En primer lugar, las sustancias liberadas durante
la degradacin de la hemicelulosa, incluyendo cido actico y terpenos, alcoholes, y compuestos
aromticos, cuya toxicidad se interpret como la penetracin del cido no disociado en la clula y

la disociacin del cido a un pH superior intracelular (Pampulha y LoureroDias, 1989) . La

fermentabilidad de lignocelulsico hidrolizado por lo tanto, se puede mejorar aumentando el pH.
El segundo grupo incluye furfural, 5-hidroximetil furfural, cido levulnico, cido frmico, y
sustancias hmicas, que son los subproductos de degradacin de azcares. Inhibicin directa de
ambos glicolticas (Banerjee et al., 1981) y no glicoliticos ( Taherzadeh et al., 2000) enzimas se ha
sugerido como un mecanismo potencial para la toxicidad furfural.
El tercer grupo de inhibidores son los productos de degradacin de la lignina. Este grupo de
inhibidores incluye una amplia gama de compuestos aromticos y poliaromticos (Palmqvist y
Hahn-Hgerdal, 2000a, b).
3.2.2. pH y de la temperatura
pH y la temperatura son dos factores principales que afectan al rendimiento de procesos de
produccin de biohidrgeno. El rango reportado pH ptimo para la produccin de hidrgeno vari
desde 5.0 hasta 7.5 (Fang et al, 2002;. Khanal et al, 2004;. Chen et al, 2001;.. Calli et al, 2008). Ren
et al. (1997) declar que el pH ptimo para la produccin de hidrgeno puede ser menor que 5,0.
La produccin de hidrgeno fue probado bajo condiciones mesoflicas utilizando glucosa, sacarosa
y agua residual como sustratos (Fang et al, 2002;. Yu et al, 2002;. Lee et al, 2006;.. Xing et al,
2006).
La produccin mesofila de biohidrogeno es preferida para prevenir la necesidad de usar
calentamiento externo. Sin embargo, la fermentacin hidrgeno a alta temperatura tiene
rendimiento de hidrgeno alta, debido a la supresin de H2 que consumen las bacterias y la
capacidad para utilizar diferentes sustratos (Talabardon et al, 2000;.. Fang et al, 2003). Lin et al.
(2008) demostr un rendimiento de tiempo para la fermentacin termfila de hidrgeno a (50-55
C) en comparacin con mesfila (30-40 C), presentando un mayor rendimiento en la termfila.
Por otra parte, en trminos de aplicacin en el futuro, es posible acoplar la fermentacin H2 con la
produccin de bioetanol a partir de biomasa lignocelulsica en condiciones termfilas.
3.2.3. suplementacin de nutrientes
Los componentes del medio aadido al hidrolizado afectan el rendimiento de fermentacin. Los
componentes del medio deben cumplir con el carbono y el nitrgeno necesarios para los
microorganismos involucrados. Tambin, los metales traza, factores de crecimiento, y las
vitaminas son tambin esenciales para el crecimiento celular.
Los estudios sobre la fermentacin hexosa o hidrolizados lignocelulsicos principalmente
experimentos llevados a cabo utilizando los medios de laboratorio con extracto de levadura y
peptona. La cepa de T. elffi, que es capaz de producir altos rendimientos de hidrgeno a partir de
glucosa, crece en un medio enriquecido con extracto de levadura (van Niel et al., 2002).

La cepa T. thermosaccharolyticum W16 simultneamente ingesta glucosa y xilosa para la

produccin de hidrgeno sin extracto o triptona. Sin embargo, con estos, la cepa W16 puede
crecer incluso mejor cuando el extracto de triptona y estn presentes (Ren et al., 2008a, b, c).
La cepa de Clostridium butyricum AS1.209 exhibi una relacin dependiente de C / N en las
caracterstica de crecimiento y una correcta relacin C / N- aumenta la produccin de
biohidrgeno en la sacarificacin y fermentacin simultneas de la paja de maz pretratado con
vapor (Li y Chen, 2007).
3,3. Tcticas de fermentacin para prehydrolysates lignocelulsica en hidrgeno
3.3.1. Desintoxicacin
Eliminacin de los inhibidores a partir de hidrolizados lignocelulsicos mejora las eficiencias de
fermentacin (Vrije et al., 2002). Efectos de la adicin de carbn activado, extrayendo con
disolventes orgnicos, de intercambio inico, exclusin inica, o tamices moleculares se han
investigado (Mussatto y Roberto, 2004; Palmqvist y Hahn-Hgerdal, 2000a, b). Diferentes mtodos
de desintoxicacin eliminado parcialmente en la toxicidad hidrolizado en diferente magnitud. La
eleccin del mtodo depender de la desintoxicacin del hidrolizado de origen y los
microorganismos de fermentacin involucradas.
3.3.2. Bioaumentacin para una mayor produccin de H2
Al aumentar la densidad de clulas se ha demostrado en varios casos a ser una forma adecuada de
aumentar la productividad volumtrica de biohidrgeno (Zhu et al, 1999;.. Jo et al, 2008). Adems,
la densidad celular elevada es beneficiosa para superar la toxicidad de lignocelulsico hidrolizado
(Sreenath y Jeffries, 1987). Reciclaje de la clula para reactor o inmovilizacin celular enriquecer la
densidad celular. Material de fijacin de barato se desarrolla (Kumar y Das, 2001). Las clulas
pueden ser inmovilizadas por adhesin a una superficie (electrosttica o covalente), atrapamiento
en matrices polimricas, o por la retencin de membranas para la produccin de hidrgeno. La
cepa de Enterobacter cloacae IIT-BT 08 fue inmovilizado en una matriz slida con el medio
ambiente a travs de la tcnica de adsorcin. La tasa de produccin de hidrgeno mxima fue de
75,6 mmol L-1 h -1 a una velocidad de dilucin de 0,93 h-1. La eficiencia de conversin del sustrato
se aument en 15% en condiciones inmovilizadas (Kumar y Das, 2001).
Cultivo individual puede no ser capaz de degradar una monosacridos pocos en los hidrolizados
lignocelulsicos. Creemos que los microorganismos cocultivadas debera ser una configuracin
mejor que la cultivo nica para la produccin de hidrgeno ms eficiente de los hidrolizados
lignocelulsicos.
4. La conversin directa microbiana de celulosa a hidrgeno
4,1. Los microorganismos implicados en la conversin de celulosa a hidrgeno
4.1.1. cultivo puro

A pocos cultivos puros directamente puede degradar la celulosa para producir hidrgeno. Wang et
al. (2008a) inform de que Clostridium acetobutylicum X9 generado la produccin de hidrgeno y
la mxima velocidad de hidrlisis de celulosa de 6,4 mmol H2
h -1 g -1 pila seca y 68,3%, respectivamente, utilizando celulosa microcristalina como el sustrato.
Estos autores tambin demostraron que X9 puede degradar pretratados actico streamexplored
tallos de maz al hidrgeno con una tasa especfica de produccin de hidrgeno de 3,4 mmol g-1
de vapor explot tallos de maz. Levin et al. (2006) demostraron que el rendimiento de hidrgeno
de la cepa de Clostridium thermocellum 27405 podra llegar a 1,6 mol H2-1 mol de glucosa usando
fibras deslignificadas madera (DLWs).
El sistema de cultivo puro es atractivo y es el preferido para la investigacin mecanicista y
reconstruccin gentica para mejorar la tasa de hidrlisis de celulosa y el rendimiento de
hidrgeno. Sin embargo, la tcnica de la cepa aislamiento es complicado y requiere mucho tiempo.
Adems, slo una pequea fraccin de microbios puede ser cultivada.
4.1.2. Los cultivos mixtos
Recientemente, la investigacin sobre la conversin biolgica de celulosa a hidrgeno se ha
centrado en el sistema de cultivos mixtos (Lay et al, 1999;. Ginkel et al, 2001;.. Fang et al, 2002)
por sus mayores tasas de conversin de celulosa y ms amplias fuentes de carbono . Adems, el
cultivo mixto, tales como la microflora natural, lodo anaerbico digerido o compost contienen
grandes cantidades de organismos que podran servir como los recursos de microorganismos
ideales para la hidrlisis de la celulosa. tabla 3 enumera los rendimientos de hidrgeno a partir de
materiales celulsicos con cultivos mixtos. Entre ellos, el ms alto rendimiento de hidrgeno
informado que 4,55 mmol H2 g de celulosa -1 por la microflora (Liu et al., 2003).
4,2. Bioaumentacin para la degradacin de celulosa a hidrgeno
Bioaumentacin va co-cultivo o sistema de la comunidad para mejorar an ms la produccin de
H2 se estudi durante unos aos. Rara vez bioaumentacin es aplicable a la degradacin de
celulosa prctico para proceso de hidrgeno. Complementariamente funciones entre las cepas
aumentada y las cepas autctonas encuentran problemas superar como la represin que menudo
se encuentra en proceso de hidrlisis de celulosa, tales como la inestabilidad caracterstica de la
estructura, y la va mecnica complicada.
Wang et al. (2008a) reportaron fermentacin oscura de celulosa microcristalina para producir
biohidrgeno mediante co-cultivo de CFE. acetobutylicum X9 y Ethanoigenens harbinenseB49. El
rendimiento mximo de hidrgeno en la bio-aumentada co-cultivadas sistema fue de 16,2 mg g -1
H2 celulosa. B49 puede quitar rpidamente reducido de azcar producido por X9, y por lo tanto
mejora la hidrlisis de celulosa y subsiguientes tasas de produccin de hidrgeno.

C. thermocellum JN4 y su homlogo bacteria, un hydrogenproducing T. thermosaccharolyticum

GD17 se investigaron en cuanto a los mecanismos de cooperacin interactiva en la degradacin de
celulosa y la produccin de hidrgeno. Los datos mostraron que cuando C. thermocellum JN4 se
co-cultivaron con T. thermosaccharolyticum GD17, la produccin de hidrgeno aument
aproximadamente 2 veces y el rendimiento de H2 aument a un alto nivel de 1,8 mol H2-1 mol de
glucosa (Liu et al., 2008a, b).
Lo et al. (2008a) estudiaron la actividad de hidrlisis de celulosa de dos consorcios mixtos
bacteriana (NS y QS). Utilizando el hidrolizado de celulosa que contiene 0,8 gl-1 de azcar
reductor, Clostridium pasteurianum CH7 obtenido la mejor produccin de H2 y rendimiento de
aproximadamente 23,8 ml l-1 y 1,21 mmol H2 g -1 azcar reductor, respectivamente.
La investigacin intensiva en comunidades microbianas para sistemas de degradacin de celulosa
se llev a cabo en trminos de su caracterstica estable funcional, la composicin de la comunidad
microbiana y la estructura, los caminos de reaccin, y el mecanismo de tolerancia a ambientes
agresivos. Haruta et al. (2002) desarrollaron una comunidad microbiana capaz de degradar N 60%
de paja de arroz dentro de 4 das a 50 C.
La estabilidad de la comunidad se demostr usando subcultivan mltiple para varias veces en
medio con / sin material celulsico, que se calienta a 95 C, y se congelaron a-80 C.Wang et al.
(2008b) propusieron una comunidad funcional (rumen celulosa degradacin consorcios de
bacterias) que a la vez podra degradar la celulosa y producir hidrgeno, y establecer la estrategia
de aislamiento.
4,3. Los principales factores que afectan a la degradacin de la celulosa y la produccin de
hidrgeno

Factores que influyen en el proceso de degradacin de celulosa radican principalmente en los

factores ambientales, tales como el pH inicial y final de fermento, la cantidad aadida y el tipo de
recurso de nitrgeno, la inhibicin de retroalimentacin de la hidrlisis de la celulosa productos
sacrido soluble, as como la inhibicin de los productos finales acumulacin, tal como acetato,
lactato, y butirato. Adems, el tipo de sustrato y la concentracin tambin tiene fuerte efecto
sobre la degradacin de la celulosa. Bacteriodes cellulosolvens eficientemente hidrolizada una
variedad de substratos celulsicos. Esta variedad puede crecer a la degradacin de celulosa 20 g L1. Adems hidrlisis de la celulosa y la acumulacin de azcar se llevaron a cabo por las enzimas
celulasas. Este cese de crecimiento no era debido a un pH bajo, agotamiento de los nutrientes o
con la acumulacin txica de cualquiera de los principales productos finales (CO2, etanol, cido
actico, cido lctico, celobiosa, glucosa o xilosa) (Murray, 1986)
PH inicial puede influir en la fase de retardo en lote de celulosa para pruebas de hidrgeno.
Algunos estudios informaron que el pH inicial bajo de 4.0-4.5 causas largo retraso perodos de
alrededor de 20 h (Liu y Shen, 2004;. Khanal et al, 2004). PH alcalino tiempo de retardo disminuye,

sin embargo, puede causar un bajo rendimiento de hidrgeno (Zhang et al., 2003). Disminuciones
graduales en el pH durante la fermentacin inhiben la degradacin de la celulosa desde pH afecta
a la actividad de hierro que contiene la enzima cellulolase (Dabrock et al., 1992).
El pH tambin podra afectar a los mecanismos de la fermentacin, la tasa de produccin de
hidrgeno especfica y el contenido de hidrgeno en la fase gaseosa. El intervalo de pH ptimo
para el rendimiento mximo de hidrgeno o tasa especfica de produccin de hidrgeno es 5-6
(Fang et al, 2003;. Lay et al, 1999;. Lay, 2000; al Khanal et, 2004;.. Chen et al, 2001) , con algunos
otros 6.8-8 declarando (Collet et al, 2004;. Zhang et al, 2003;. Kanai et al, 2005;. Lay 2001,) o
alrededor de 4,5 para el cultivo termfilo (Shin et al, 2004.).
La mayora de los estudios revelaron que el pH final en la hidrlisis de la celulosa a los rangos de
4.0-4.8 hidrgeno independientemente del pH inicial (Liu et al, 2004;. Zhang et al, 2003;. Liu et al,
2003;. Lay, 2001; Evvyernie et al. , 2001).
La cada intensa en el nivel de pH se debe a la produccin de cidos orgnicos que debilitan la
capacidad tampn del medio (Khanal et al., 2004). El valor del pH debe estar debidamente
controlado en la produccin de biohidrgeno.
Los principales productos finales para el tratamiento previo anaerbico de aguas residuales de
duro-a-se descomponen los hidratos de carbono (celulosa) son el acetato propionato,, CO2, y
butirato (Karapinar y Fikret, 2006). Sin embargo, la produccin de propionato podra tener un
efecto adverso en la produccin de hidrgeno. El metano no se detect en la mayora de los
estudios de produccin de hidrgeno ya que el tratamiento trmico elimina productores de
metano en los lodos (Liu et al, 2004;. Lin y Lay, 2004;. Yu et al, 2002). Han y Shin (2004) probaron
metano por cultivos mesfilos en tiempos de retencin largos de reactores.
El nitrgeno es un nutriente esencial para la produccin de hidrgeno mediante fermentacin
anaerobia oscuro bajo conditions.Yokoi et al. (2002) informaron de que el ms alto nivel de
hidrgeno (2,4 mol H2-1 mol de glucosa) se puede obtener a partir de almidn en presencia de
0,1% polypepton. Pero no la produccin de hidrgeno se observ cuando las sales inorgnicas de
nitrgeno se utilizaron como fuente de nitrgeno. -Licor de maceracin de maz es un residuo del
proceso de fabricacin de almidn de maz que se puede utilizar como una fuente de nitrgeno
(Yokoi et al., 2002). Lin y Lay (2004) reportaron que la relacin C / N afecta la productividad de
hidrgeno es ms importante que la tasa de produccin de hidrgeno especfico.
La inhibicin inducida por sacridos acumulados pueden afectar al rendimiento del proceso
celulosa a hidrgeno. Ramos et al. (1986) observaron menores tasas de hidrlisis a
concentraciones ms altos de azcar. La eliminacin de los azcares solubles liberados durante la
hidrlisis deberan mejorar la eficiencia de la hidrlisis del sustrato residual.
Levin et al. (2006) llev a cabo pruebas de lotes con C. thermocellum 27405 para producir
biohidrgeno de callos hablar desechos. Los resultados mostraron que el tipo de sustrato inicial, la
concentracin de sustrato, el contenido de humedad del sustrato, la concentracin de nutriente

suplementario y la duracin del tiempo de cultivo pueden afectar considerablemente la calidad

del producto. Zhang et al. (2007) convertir celulosa en las aguas residuales a diferentes H2 por un
cultivo mixto en ensayos discontinuos a 55 C, pH 5.5-8.5, y la celulosa concentraciones de 10-40
gl-1. El rendimiento mximo acumulado de 149,69 ml H2 H2 g -1 TVS se obtuvo a pH 7,0 y
concentracin inicial de sustrato 15 gl-1.
5. Desde finales de fermentacin muertos a H2: sistema integrado
5,1. Sistemas de acoplamiento de oscuro-photo fermentacin
Lmite terico para la produccin de hidrgeno por fermentacin oscuro es 4 mol H2-1 mol de
glucosa (1/3 de los electrones transportados en la fermentacin), y slo 2-3 mol H2-1 mol de
glucosa puede ser extrada en las pruebas (Logan, 2004). Reexpresado, aproximadamente 2/3 de
la energa potencial se pierde en forma de acetato o otros productos de fermentacin (es decir,
alcoholes, butirato y propionato), que se denominan como "punto muerto" productos ms porque
la produccin de H2 est prohibido por la termodinmica.
La produccin de hidrgeno fototropismo en funcin de la luz solar como fuente de energa
externa se adopta para descomponer el final de la fermentacin muertos. (Yokoi et al, 1998;..
Khanal et al, 2004; Ike et al, 1999;. Fascetti et al, 1998.; Kawaguchi et al, 2001;. Fang et al, 2005)..
El proceso de acoplamiento de la produccin fermentativa oscuro y de la foto H2 se propuso que
comprende oscuro-photo fermentacin y fermentacin secuencial oscuro-foto. Slo unos pocos
estudios prestado atencin en este proceso de acoplamiento (Yokoi et al, 1998;. Ike et al, 1999;.
Kawaguchi et al, 2001;. Fang et al, 2006.).
Produccin Biohidrgeno mediante co-cultivo de bacterias anaerobias fotosintticas y se estudi
Para la etapa de fermentacin combinada oscuro-foto. Yokoi et al. (1998) alcanz un rendimiento
de produccin de hidrgeno de 4,5 mol H2-1 mol de glucosa por co-cultivo de C. butryricum y
Rhodobacter sp. De manera similar, mayores rendimientos de hidrgeno de diferentes sustratos
fueron reportados por co-cultivos de R. marinum y V. fluvialis en comparacin con los sistemas de
R. marinum solo (Ike et al., 1999).
Mejor rendimiento de hidrgeno (60%), pero menor tasa de produccin se observ en combinado
de fermentacin y produccin de gas de hidrgeno por amylovous Lactobacillus y marinum R.
partir de almidn en comparacin con secuencial oscuro foto fermentacin (45%) (Kawaguchi et
al., 2001) . Asada et al. (2006) co-cultivadas Lactobacillus delbrueckii y Rhodobacter RV
sphaeroides para la fermentacin de hidrgeno, alcanz un rendimiento muy alto (7,1 mol H2
mol-1 glucosa).
Fang et al. (2006) demostraron que el cociente de biomasa ptima para la combinacin oscura
foto fermentacin es 1:5.9 cuando co-cultivo de C. butyricum y sphaeroides R. fue adoptado. El pH
del sistema combinado de fermentacin oscuro foto mantuvo alrededor de 7,0 de pH que se
considera como una ventaja sobre el proceso de fermentacin secuencial oscuro foto. Sin
embargo, las diferencias en cidos orgnicos de produccin / consumo, las tasas de acumulacin

potencial de cidos orgnicos en la media, y la disminucin de la penetracin de luz debido a los

slidos en suspensin son los principales problemas en los procesos de fermentacin combinados
oscuro de fotos para el funcionamiento a largo plazo.
Para la etapa de fermentacin secuencial oscuro foto, tiene ciertas ventajas sobre la fermentacin
debido combinado oscuro foto a la reduccin del lmite de disponibilidad de cido orgnico en la
fottrofas hidrgeno productoras de paso. Por lo tanto, los altos rendimientos de produccin de
hidrgeno se puede obtener cuando se combinan dos sistemas (Yokoi et al., 1998, 2002). Kim et al.
(2006) reportaron un rendimiento muy alto de hidrgeno de 8,3 mol H2 mol-1 almidn, glucosa
biomasa algal equivalente orgnico a travs de cidos por la fermentacin anaerobia secuencial de
Chlamydomonas reinhardtii UTEX 90 y R. sphaeroides KD131. Chen et al. (2008a, b) adopt una
bien diseada secuencial oscuro (Rhodopseudomonas palustris WP3-5)-foto (C. pasteurianum
CH4) sistema de fermentacin y alcanz un rendimiento de hidrgeno an mayor de 14,2 mol H2
mol-1 de sacarosa, ms de cuatro veces mayor que el rendimiento de la fermentacin oscuro.
Mientras, el secuencial oscuro-photo sistema debe estar bien controlado al 1056 N. Ren et al. /
Biotechnology Advances 27 (2009) 1051-1060provide composicin ptimo del material y de las
condiciones ambientales para las dos poblaciones microbianas implicadas (Yokoi et al, 1998,
2002;.. Fascetti et al, 1998).
La concentracin de amonaco y de la relacin C / N en el efluente de la fermentacin oscuro no
debe ser inhibitoria para las bacterias fermentativas de fotos (Fascetti et al, 1998;.. Lee et al,
2002). La dilucin y la neutralizacin de los efluentes de fermentacin oscuros antes
photofermentation se requieren normalmente (Kawaguchi et al., 2001). Adems, la fotosecuencial oscuro fermentacin no es un sistema rentable en comparacin con el sistema
combinado debido a la utilizacin de ms reactores y espacio ocupados suplemento de los
mismos.
Tanto secuencial y combinada oscuro-photo fermentaciones parecer atractivo debido a la
produccin de hidrgeno a partir de hidratos de carbono de alto desechos ricos a pesar de que los
procesos requieren de organismos especiales, fuente de luz y un estricto control de las
condiciones ambientales. Sin embargo, las barreras tcnicas principales son las bajas tasas y
rendimientos de produccin de hidrgeno, por lo tanto, la adquisicin de grandes volmenes de
reactor. Los bajos rendimientos y las tasas de formacin de hidrgeno pueden ser superados
mediante la seleccin y el uso de organismos ms eficaces o cultivos mixtos, el desarrollo de un
proceso ms eficiente esquemas, la optimizacin de las condiciones ambientales, la mejora de la
eficiencia en la utilizacin de luz ms eficientes y el desarrollo de fotobiorreactores. Debido a la
inhibicin de la produccin de biohidrgeno por, oxgeno y amonio de crecimiento microbiano y
los pasos de formacin de hidrgeno que tenga que ser separado con el fin de mejorar la
productividad de hidrgeno.
5,2. Sistemas de acoplamiento de fermentacin oscura y bioelectrohydrogenesis

Aparte de la solucin biolgica de proceso de acoplamiento oscuro foto para la fermentacin sin
salida utilizacin, Liu et al. (2005) propusieron un reactor microbiano bioelectrochemically asistida
(BEAMR) basado en la modificacin de las clulas de combustible microbianas (MFC) mediante la
aplicacin de un pequeo voltaje (N200 mV en la prctica) entre el nodo y el ctodo y la
aplicacin de un ambiente anaerbico en la cmara de ctodo. En este proceso, el gas hidrgeno
se produce en el ctodo a travs de la reduccin de protones. BEAMR tambin se conoce como
clulas microbianas de electrlisis (MEC) o bioelectrohydrogenesis (Rozendal et al, 2008;. Cheng y
Logan, 2007).
En comparacin con MFC, poco se sabe acerca de las funciones de los microorganismos en l MEC.
Las bacterias que son capaces de oxidar la materia orgnica y transfieren electrones exocellularly
al nodo en un MFC mediador-MEC o menos se denominan exoelectrogens (Logan, 2007). Varios
grupos de bacterias han mostrado actividad exoelectrogenic en MFC, incluyendo -Proteobacteria
(Rhodopseudomonas, Ochrobactrum) (Xing et al, 2008;.. Zuo et al, 2008), -Proteobacteria
(Rhodoferax) (Chaudhuri y Lovley, 2003), - Proteobacteria (Shewanella y Pseudomonas) (Kim et
al, 2002;.. Rabaey et al, 2004)., -Proteobacteria (Aeromonas, Geobacter, Geopsychrobacter,
Desulfuromonas, andDesulfobulbus) (Bond et al, 2002; Bond y Lovley, 2003 ; Holmes, 2004; Pham
et al, 2003), Firmicutes (Clostridium) (Park et al, 2001), andAcidobacteria (Geothrix) (Bond y
Lovley, 2005)... Binario definido por el sistema de cultivo (es decir, formado por Clostridium
cellulolyticum y sulfurreducens Geobacter) inform Ren et al. (2007) genera electricidad a partir
de celulosa en un MFC. Sin embargo, los mecanismos moleculares y las bases para el transporte de
electrones exocelular, son poco conocidos. Se ha demostrado que clulas determinada citocromos
membrana externa y conductora de pili (o nanocables) puede jugar un papel clave en la
transferencia de electrones para algunas especies Geobacter y Shewanella (Gorby et al, 2006;..
Lovley et al, 2004; Reguera et al. , 2005). Alternativamente, algunos exoelectrogens, tales como
Pseudomonas aeruginosa (Rabaey et al., 2004) fermentans andGeothrix (Bond y Lovley, 2005)
mediadores excretan a los electrones de enlace hacia las superficies de bacterias (Rabaey et al.,
2005). Especies Shewanella Recientemente se han demostrado para utilizar flavinas como
mediadores (Canstein et al., 2008).
En cuanto a la caracterizacin de la comunidad microbiana en la biopelcula nodo de MECs, a los
autores de los mejores conocimientos, slo dos estudios realizados por Liu et al. (2008a, b) y
byWang et al. (2008b) descubrieron que Shewanella, Geobacter, Pseudomonas,
Rhodopseudomonas Desulfovibrio y estaban presentes en el nodo, de acuerdo con algunos
hallazgos de MFC (Logan y Regan, 2006). Wang et al. (2008b) revel que las especies de
Pseudomonas son los ms abundantes (43-57%) en los reactores MEC, lo que implica que debe
jugar algn papel en la operacin MEC. Sin embargo, estas cepas contribuyen mnimamente a la
recuperacin de hidrgeno en reactores MEC. Wang et al. (2008b) tambin se presume que la
operacin de MECs est bajo
completamente las condiciones anaerbicas, y por lo tanto promueve el crecimiento de bacterias
anaerobias obligadas como exoelectrogenic Geobacter y otras organizaciones no exoelectrogenic
bacterias fermentativas o metanognicas. As, la comunidad microbiana en MECs pueden ser

diferentes de los de MFC. Un trabajo reciente de Wang et al. (en prensa-b) se describe una Fe (III) reducir fermentativa bacteria Bacteroides sp. W7 que se aisl de la suspensin de nodo de un
MEC. Esto proporciona una pista sobre la posible contribucin de organismos suspendidos en la
eficiencia de MEC. Wang et al. (en prensa-c) present una nueva estrategia para la obtencin de
los consorcios nodo funcional (AFC), que tiene mayor actividad electroqumica en trminos de
densidad de potencia y Fe (III) reduccin de la eficiencia, pero ms simple composicin de la
comunidad bacteriana en comparacin con el inculo habituales (es decir lodo activado o aguas
residuales). Esta estrategia ofrece una posibilidad de simular y acelerar el inicio de MECs en 100 h,
a pesar de la fuente de inculo. El proceso de acoplamiento de la fermentacin oscura y
bioelectrohydrogenesis es una solucin de produccin de hidrgeno prometedora para
alcanzar el mximo rendimiento de H2 12 mol H2 mol-1 glucosa. Los reactores MEC se
inicia normalmente como clulas de combustible microbianas (MFC), que generalmente
contiene un nodo hecho de papel o tela de carbono, y un ctodo hecho del mismo
material con un catalizador (Liu y Logan, 2004). Para que un reactor de MFC para ser
utilizado como un MEC, el reactor debe ser modificado para excluir completamente el
oxgeno
de
la
cmara
de
ctodo
y
recoger
a
el gas H2 producido. Una membrana se utiliz para evitar la retrodifusin de
H2 producido en el ctodo a las bacterias en el nodo para alcanzar 2,9 mol
H2-1 mol de acetato de (Liu y Logan, 2004). Progreso sustancial se ha hecho
recientemente en la mejora del diseo del reactor MEC y las tasas de produccin de
hidrgeno (Cheng y Logan, 2007a;. Logan et al, 2007). Para aumentar la eficiencia de la
recogida de hidrgeno gas, un nuevo reactor MEC incluye un tubo de engarce parte
superior con un espacio de cabeza grande para la recogida de gas H2 producido en el
ctodo (Cheng y Logan, 2007a). Usando esta nueva forma de cubo MEC, los
rendimientos de hidrgeno de 2.0-3.95 mol H2 mol-1 (50 a 99% de la mxima terica) se
obtuvo utilizando cido actico, un tpico punto muerto producto de fermentacin de
glucosa
o
celulosa. Tambin
fue
mostr que el gas hidrgeno puede ser producido a partir de otros sustratos, incluyendo la
glucosa, los cidos butrico, lctico, propinico, valrico y, y la celulosa a los rendimientos
mximos estequiomtricas de 54 a 91%.
Cheng y Logan (2007b) obtenido 8,2 moles de H2 a partir de celulosa, un rendimiento de
conversin de 68% en base a un mximo terico de 12 mol H2
mol-1 sustrato. La eficiencia de energa fue de 268% respecto a la electricidad
energa necesaria, y en general, 63%. La produccin total de energa utilizando slo acetato fue del
82%. Por lo tanto, un MEC representa el nico enfoque viable y de alta eficiencia biolgica para
convertir completamente la materia orgnica a hidrgeno que no es dependiente de la luz solar
(Logan, 2007). Uno de los avances ms recientes es el desarrollo de la membrana de menos una
cmara del reactor MEC (Call y Logan, 2008), debido a que la membrana inhibe la transferencia de
protn y permite diferentes pH a desarrollar en las dos cmaras. La desventaja potencial de un
reactor de membrana que es menos

el hidrgeno puede ser usada por las bacterias, pero se encontr que las altas tasas de produccin
de hidrgeno hace hidrgeno prdidas insignificantes. Recuperaciones de hidrgeno del 78% ( 1)
a 96% ( 1) se obtuvieron utilizando una membrana menos MEC (Call y Logan, 2008). La tasa de
produccin de hidrgeno es ms de dos veces la obtenida en los estudios anteriores MEC (Cheng y
Logan, 2007a). Estos resultados sugieren que la recuperacin de hidrgeno de alta y las tasas de
produccin se pueden obtener con la nica cmara de MFC. Esta configuracin reduce el coste
experimental y permitir la formulacin de nuevo y ms sencillo de MECs.
6. Perspectivas

6,1. Potencial de la biomasa lignocelulsica a H2 bioconversin

La celulosa es el biopolmero ms abundante en el mundo (Perlack et al., 2005). Los 1,4 millones
de toneladas secas de biomasa producida ligocellulosic N. Ren et al. / Biotechnology Advances 27
(2009) 1051-1060 1057annually en China puede ser cedido hasta 100 millones de kg de H2 (70%
de la cantidad de total de celulosa y la hemicelulosa se emplea para el clculo). En este caso, la
produccin de 1,0 kg de H2 (aproximadamente equivalente al contenido energtico de un galn
de gasolina) tomara 10,3 kg de celulosa sobre la base de un 73% de H2 recuperacin reportado
por Cheng y Logan (2007b). Esta cantidad de H2 equivalente a 500 mil millones kg de carbn
estndar, que es de alrededor de 22,4% del consumo total de carbn (2,2 millones de toneladas)
Importe en 2006 en China. Por lo tanto, bioconversin de celulosa proporciona un enfoque viable
para producir hidrgeno renovable a partir de la materia orgnica, siempre un alto sistema
eficiente proceso combinatorio se adopta.
6,2. Desafos cientficos y tcnicos

El combinado de fermentacin oscuro acoplamiento con la foto de la fermentacin, o el

acoplamiento de fermentacin oscuro con bioelectrohydrogenesis es un proceso de produccin de
hidrgeno prometedor partir de biomasa lignocelulsica si las barreras tecnolgicas se pueden
superar. En primer lugar, el desarrollo de un sistema bien integrado equilibrada es la clave. Dado
que las tasas de produccin de hidrgeno eran mucho ms bajos de la celulosa (0,11 m3 m-3 d-1)
que a partir de la glucosa (1,23 m3 m-3 d-1), y las tasas de fermentacin foto-eran 100 veces ms
bajos que los procesos oscuros, las tasas de de hidrlisis y la fermentacin por
electrohydrogenesis en el sistema MEC o en la foto-fermentacin son diferentes. Las tasas de
fermentacin y electrohydrogenesis necesita ser regulada utilizando estrategias de alimentacin o
un proceso de dos etapas, utilizando reactores especialmente diseados para manejar substratos
particulados.

En segundo lugar, el aumento de la eficiencia de la produccin de H2 por los microorganismos

funcionales es otro elemento esencial. Con el objetivo de esto, la modificacin metablica a nivel
molecular y fisio-ecolgicos es necesario. En el nivel molecular, como se indica en EE.UU. DOE
Genmica: GTL Roadmap - Biologa de Sistemas de Energa y el Medio Ambiente, se necesitan
estudios en la modificacin de las enzimas clave y las vas funcionales, controlando el transporte
de la materia orgnica, e incluso la regulacin o la reconstruccin de toda la red metablica en
para aumentar el rendimiento de hidrgeno y la degradacin lignocelulosas. Al microbiana nivel
de la comunidad, estableciendo la relacin entre la funcin de proceso del sistema y de la
diversidad microbiana es an ms difcil. Este problema se debe en parte a la falta de informacin
experimental sobre toda la comunidad dinmica espacial y temporal de la comunidad microbiana
estructura, la funcin y la actividad de examen riguroso. En general, el desarrollo de una
tecnologa de produccin de hidrgeno madura, rendimiento bioconversin de biomasa
lignocelulsica tendr que seguir mejorando en las tasas de produccin, la rentabilidad y el
sistema de expansin. Los rpidos avances en el desarrollo de multiprocesses, junto con fondos
adicionales y la investigacin mecanicista de los procesos microbianos debe hacer una rpida
comercializacin de esta nueva tecnologa biohidrgeno posible.
6,3. Los futuros sistemas combinados para lignocelulosas bioconversin

6.3.1. Proceso de acoplamiento de la fermentacin de hidrgeno-metano

Proceso biolgico de produccin de hidrgeno no reduce significativamente el contenido orgnico

en trminos de la demanda qumica de oxgeno (COD) de la materia prima. Por lo general,
remocin de DQO es inferior al 20% en la produccin de hidrgeno (Antonopoulou et al., 2008).
Los residuales de cidos grasos voltiles (VFA) tales como cido actico existe en el licor residual
de la fermentacin, que se puede utilizar si una etapa de fermentacin de metano se sigue. La
fermentacin hidrgeno combinado y sistema de fermentacin de metano beneficiar a la
recuperacin de energa a partir de biomasa mxima de alimentacin (Han y Shin, 2004; Liu et al,
2006;. Ueno et al, 2007;. Ting y Lee, 2007;. Cooney et al, 2007 , Zhu et al, 2008;. Antonopoulou et
al, 2008).. Por ejemplo, Zhu et al. (2008) inform de que, a travs del acoplamiento de hidrgeno y
fermentacin de metano de residuos de patata, la DQO total en el material de alimentacin se
elimin por 64% y los rendimientos de hidrgeno y metano eran totalmente L 30 kg TS-1 (con un
mximo de 68 kg L-1) o L 183 kg TS-1 (con un mximo de 225 kg L-1). Cooney et al. (2007) inform
de que la produccin de metano en el proceso de digestin de dos fases anaerbica es ms
estable y eficaz que el proceso de la fase uno. La necesidad de una produccin limpia de energa
renovable a partir de biomasa lignocelulsica as acelerar el desarrollo de la combinacin de
hidrgeno y la produccin de metano.
6.3.2. Sistema de proceso integrado para soluciones de impresin multi-

Basndose en la revisin anterior, es claro que la bioconversin de lignocelulosas-a-H2 muestra

una solucin muy factible para producir hidrgeno a travs de la biotecnologa. Mientras, la
preocupacin sigue siendo en la forma de establecer un aplicables y asequible lignocellulos a H2
proceso. Una va importante es el desarrollo de un proceso integrado para multioutputs a partir de
residuos lignocelulsicos primas como el H2-CH4, etanol lignocelulsico y de alta y baja de valor
aadido productos biolgicos (es decir, bio-butanol, bioflocculants). A travs de este enfoque, un
esquema de multi-eleccin podra ser realizado de acuerdo con las necesidades de la bioenerga
futuro mercado y los productos biolgicos. Aparte de la evaluacin cientfica, una programacin
econmica cuidadoso y detallado que se necesita con el fin de impulsar este modelo todo en
prctica.

INGENIERIA ENZIMATICA PARA LA PRODUCCIN QUIMICA

A fin de que las rutas de fabricacin competitivos, la mayora de los biocatalizadores debe ser
hecha a la medida para sus procesos.
Las enzimas de la naturaleza rara vez tienen las propiedades combinadas necesarias para la
produccin qumica industrial, tales como una elevada actividad y selectividad en sustratos no
naturales y la tolerancia de altas concentraciones de medios orgnicos sobre la amplia gama de
condiciones (disminuyendo sustrato, aumentando concentraciones de los productos, disolventes,
etc,) que estar presente en el transcurso de un proceso de fabricacin.
Con los avances en tecnologas de ingeniera de protenas, una variedad de propiedades de la
enzima se puede modificar al mismo tiempo, si los parmetros de deteccin adecuados se
emplean. Aqu discutimos el proceso de evolucin dirigida para la generacin de biocatalizadores
comercialmente viables para la produccin de productos qumicos finos, y cmo los enfoques
nuevos han ayudado a superar algunos de los desafos.
Aunque el uso de la biocatlisis es una gran promesa para la qumica de proceso verde y
econmica, hay pocos ejemplos desproporcionadamente de aplicaciones a escala comercial de
biocatalizadores en la fabricacin de productos de qumica fina. Esto es debido al hecho (como se
ha sealado por Bommarius) que la mayora de las enzimas "tienen sub-ptimas propiedades para
las condiciones de procesamiento" (Bommarius y Bommarius Riebel-, 2005).
Una comparacin reciente de enfoques chemocatalytic biocatalticas y tradicional para la
fabricacin de un intermedio clave quiral lleg a la conclusin de que las rutas biocatalticas
carecen de los rendimientos espacio-tiempo, la intensidad de masas (proceso de salida kg / kg
entradas) y la eficiencia cataltica necesarios para la fabricacin econmica (Blaser et al., 2004).
Adems, "verdor" de la biocatlisis se encontr que se carece aqu debido a la concentracin de
productos de bajo y necesidad de aislamiento extensa disolvente de producto diluido en agua.

Cmo, entonces, puede biocatalizadores cumplir su promesa? Algunos mejora de la eficiencia del
proceso puede hacerse modificando el proceso de fabricacin de productos qumicos para
adaptarse a las sensibilidades del biocatalizador (por ejemplo, en trminos del pH, la temperatura,
y los disolventes). Esto ha llevado a la paradigma en los ltimos aos, que ha de preparar el
proceso para el biocatalizador disponible. La otra alternativa, que vamos a describir aqu, es el uso
de metodologas dirigidas evolucin para generar nuevos biocatalizadores para funcionar en
condiciones ms ideales del proceso y por lo tanto permitir que los procesos ms robustos.
Recientemente, con los avances en las tcnicas de ingeniera de protenas, numerosos ejemplos de
la optimizacin de los rasgos de cierta enzima (por ejemplo, la termoestabilidad, la tolerancia
hacia los disolventes orgnicos, enantioselectividad) se han dado. Esto se ha logrado por ambas
tecnologas en desarrollo nuevos para la diversificacin gnica, as como nuevos sistemas de
deteccin. As que con los mtodos para desarrollar nuevos rasgos de las enzimas disponibles, ya
no es una cuestin de cmo evolucionan pero lo que evolucionar para.
Qu es lo que diferencia a una enzima de tipo salvaje de un biocatalizador industrial til? Cul es
la funcin objetivo que debemos detectar, para permitir un proceso qumico? Lo que hace a estas
preguntas tan difcil de responder es la diferencia entre las propiedades de las enzimas que ofrece
la naturaleza y tienen las demandas de los diferentes procesos de fabricacin de productos
qumicos.
Tpicas diferencias se resumen en la Tabla I. Por otra parte, mientras que las clulas podran, desde
un punto de vista biolgico, sufren cambios bastante drsticos en su metabolismo, las condiciones
citoslicas general no cambia tanto como la de un medio de reaccin en el transcurso de un
industrial biotransformacin, donde el medio ambiente podra cambiar drsticamente durante la
conversin, por ejemplo, a partir de un sustrato 1 M hidrfobo a un producto 1 M inico. Estos
grandes cambios en trminos de hidrofobicidad o la osmolaridad de la solucin tienen que ser
tomadas en cuenta En la mayora de los casos, por lo tanto, un esfuerzo de ingeniera de protenas
no es unidimensional, sino multidimensional, y es generalmente una combinacin de aumento de
la frecuencia (incl. ms dbil sustrato y la inhibicin del producto), el alcance de sustrato
(aceptacin y selectividad) y la estabilidad (por ejemplo, , hacia disolventes, reactivos y la
temperatura) (Fig. 1). Una tolerancia de pH ms amplio, o pH ptimo diferente tambin podra ser
deseable suprimir las reacciones secundarias, tales como la hidrlisis de los reactivos. Dada la
capacidad de evolucionar caractersticas mltiples enzimas simultneamente, el nuevo paradigma
es imaginar primero el proceso qumico deseado y determinar todos los criterios que el
biocatalizador tiene que cumplir, y luego evolucionar hasta una enzima que cumple o supera estos
objetivos. Un conjunto tpico de tales objetivos para un proceso qumico se dan en la Tabla II. Este
enfoque permiten a muchos procesos qumicos ms nuevos y ms verdes en el futuro que el
enfoque clsico de colecciones de cepas de tamizaje para la de tipo salvaje enzimas o clulas
enteras biocatalizadores Qu es una "buena" biocatalizadores para la fabricacin de productos
qumicos? Contribucin gastos del biocatalizador para el proceso final fue considerado con
frecuencia prohibitivo en el pasado. Por lo tanto, adems de los parmetros tcnicos como la
actividad, la estabilidad

y la selectividad, los objetivos comerciales tienen que ser tenidos en cuenta. La contribucin de
todos estos parmetros-la tcnica, as como el comercial-en conjunto definen la barrera de
comercializacin (Fig. 2), que tiene que ser superado para representar un proceso qumico de
fabricacin factible. Aunque los parmetros comerciales son generalmente considerada cientfica y
por lo tanto puede dejarse de lado, en el caso de un proceso biocataltico estas consideraciones
econmicas se traducen en cuestiones cientficas, as Los costes de fabricacin del biocatalizador y
el biocatalizador de carga-que est determinado por la actividad intrnseca bajo condiciones de
proceso-tienen que ser tratados. A primera vista, un sustrato de relacin de catalizador (S / C) de
20 (100 gL 'de sustrato a 5 gL ~ de biocatalizador) o mejor no podra parecer difcil de obtener. Al
pensar en las enzimas como catalizadores a nivel molecular, a menudo parecen muy superiores a
los catalizadores qumicos en trminos de sus frecuencias de rotacin (TOF) y los nmeros totales
de volumen de negocios (TTN). Sin embargo, estos valores a menudo reflejan mediciones en
condiciones de velocidad inicial que descuidan fenmenos de inhibicin a concentraciones
molares de los reactivos y productos. Puesto que las enzimas son macromolculas, en
comparacin a una base de peso a peso, las enzimas a menudo comparan tambin a sus
equivalentes qumicos con respecto a la eficiencia molar. Algunas de las caractersticas que desee
para un biocatalizador buena, aunque ms bien cualitativa y discutible, se resumen en la Tabla III.

Para permitir una produccin rentable y robusta del biocatalizador, la enzima de eleccin es
preferiblemente sobreexpresa en E. coli o en otro organismo GRAS fcilmente manipulado. La
mayora de las enzimas de inters vendr de otros organismos, y mientras que en algunos casos
una enzima deseada puede tener los niveles de expresin suficientemente altas en su husped
natural clonacin, y Para permitir una produccin rentable y robusta del biocatalizador, la enzima
de eleccin es preferiblemente sobreexpresa en E. coli o en otro organismo GRAS fcilmente
manipulado. La mayora de las enzimas de inters vendr de otros organismos, y mientras que en
algunos casos una enzima deseada puede tener los niveles de expresin suficientemente altas en
su husped natural, la clonacin y sobreexpresin en E. coli hace que sea fcilmente susceptible a
las tecnologas de ingeniera de protenas. Optimizar el gen y sistema de vectores para la expresin
elevada y robusto en E. coli a menudo se requiere para permitir que tanto cribado de alto
rendimiento as como la fabricacin enzima.
Adems, el ideal rentable proceso de fabricacin biocatalizador no requiere purificacin de la
enzima. Mientras que una enzima altamente purificada permitira una carga biocatalizador bajo en
el proceso, la purificacin hasta la homogeneidad a menudo es muy laborioso y costoso.
Idealmente, las clulas de E. coli que producen la enzima de inters son lisadas, las protenas estn
opcionalmente enriquecido en el sobrenadante (por ejemplo, por tratamiento de PEI y
ultrafiltracin) y despus se prepar como formulacin lquida o liofilizada. Puesto que tal
preparacin tambin contiene otras protenas y sales aparte de la ingeniera de protenas, una alta
actividad intrnseca de la protena de inters es deseable. Si esta preparacin biocatalizador se
puede almacenar durante largos perodos de tiempo, la produccin y el uso de biocatalizador se
puede desacoplar tanto en trminos de los programas de produccin y lugares, procesos

biocatalticos as ya no necesita ser llevado a cabo en estrecha conexin con instalaciones de

fermentacin.
Un biocatalizador bajo carga en el proceso es beneficioso en mltiples formas. Mientras se
mantiene la aportacin pequeo costo un biocatalizador bajo carga tambin con frecuencia evita
los problemas del proceso de desarrollo, como la formacin de espuma o de formacin de
emulsiones durante el proceso posterior.

Por lo tanto, no slo desde una perspectiva de utilizar el biocatalizador en la reaccin, sino
tambin en trminos de produccin y almacenamiento de ella, una enzima multi-rasgo optimizado
a menudo es necesario para permitir que nuevos procesos.

Otra forma de aumentar la relacin S / C de relacin es, por supuesto, para aumentar la carga de
sustrato. Los sustratos previstos para una fabricacin de productos qumicos son generalmente
hidrfobo, por lo que una carga de sustrato diana de 100 gL "ms a menudo que no excede el
lmite de solubilidad mxima de los compuestos en medios acuosos. Anteriormente, el proceso fue
adaptado al catalizador mediante el uso de bajas concentraciones de sustrato, disolventes
orgnicos que eran compatibles con el biocatalizador, la alimentacin de sustrato o la absorcin
de resina de sustrato y de producto.
Recientemente desarrollados mtodos de evolucin de protenas permiten la creacin de las
enzimas que son estables y activas en altos niveles de sustratos orgnicos y disolventes.
Alternativamente, el biocatalizador puede ser diseado para ser activo en una emulsin o sistema
de dos fases (que puede consistir en el substrato puro o con un disolvente orgnico).
Cmo crear una "buena" biocatalizador-Avances
en Ingeniera de Protenas

Ingeniera de protenas hoy en da normalmente comprender una mezcla de enfoques dirigidos al

sitio y al azar, dependiendo del conocimiento estructural disponible para la enzima de partida. En
la mayora de los enfoques, un ciclo iterativo de la creacin de un conjunto diverso de nuevas
variantes y cribado de esta diversidad para identificar variantes mejoradas estarn involucrados.
Aqu analizaremos primero la qumica impacto del proceso de desarrollo puede tener en la
proyeccin, ya que un sistema de ensayo slidas es un requisito previo para cualquier programa
de evolucin dirigida.
Cmo para la deteccin de una "buena" Biocatalizador

Al iniciar un programa de evolucin dirigida, es muy importante tener una buena comprensin de
lo que las propiedades del biocatalizador final debe poseer. Condiciones especficas para el
proceso final (tal como se representa en la Tabla II) se debe determinar en primer lugar, por ser de
las condiciones que deberan ser imitadas en el proceso de seleccin. Pocos de los rasgos
especficos que la enzima final debe poseer (actividad, selectividad, la falta de inhibicin de
sustrato / producto, etc) se fija o vinculado, y por lo tanto algunos pueden desplazarse, mientras
que otros se estn evolucionado. Por ejemplo, si el objetivo del proyecto es mejorar la actividad
de una enzima que ya tiene la enantiospecificity deseado altamente especfica, las variantes con
actividad mejorada deben ser controlados para asegurar no han perdido la enantiospecificity
deseado. Cribado para una enzima altamente activo tendr como resultado la identificacin de
enzimas activas, sino en las "visitas" no necesariamente poseen el otro caractersticas deseadas.
Aunque no todos los resultados criterios deben reflejarse en las primarias de alto rendimiento
pantalla, es importante vigilar todos los rasgos deseados en cada uno ronda de evolucin para
asegurar que la enzima final se ajuste a la objetivos finales.
Por consiguiente, podra ser beneficioso usar un sistema de seleccin secuencial (Fox et al., 2007)
que comprende una primera proyeccin pragmtico (vivo / muerto, alta / baja actividad) y una
comprobacin de segundo nivel, por ejemplo, la enantioselectividad de la biocatalizador. Escalar
hacia abajo el proceso qumico biocataltica en formato de placa de pocillos veces es ms difcil de
lo que parece a primera vista y por lo que el uso de un sistema de cribado permite niveles ms
complejo (y probablemente ms costoso y consume tiempo) ensayos a realizar en menos enzima
variantes. El impacto del desarrollo de procesos qumicos en el desarrollo del ensayo (vase el
prrafo anterior) no puede ser subestimada y es una clave para el xito a menudo pasado por alto
en el desarrollo de biocatalizadores comercialmente viable para la produccin de productos
qumicos.

Cmo crear Diversidad inteligente para un

"Bueno" Biocatalizador

Habiendo identificado las propiedades requeridas de la enzima deseada y establecido mtodos

analticos para la deteccin, la ingeniera de protenas para generar esta enzima puede empezar
ahora. Durante la dcada, varias nuevas tecnologas han tenido un gran impacto en la forma en
que la ingeniera de protenas se puede llevar a
Salida (Fig. 3) Aqu consideramos algunos avances recientes que pueden llegar a hacer que el
proceso de evolucin dirigida ms eficiente.

Un primer desafo en el inicio de un programa de evolucin dirigida es identificar una enzima de

partida. Idealmente, esta enzima ya tendr algunos de los rasgos de la enzima deseada final.
Mientras que la creciente actividad enzimtica puede ser fcilmente hecho a travs de la
evolucin dirigida, de la generacin de novo actividad es ms difcil. Por lo tanto, si una enzima de
partida se identifica que tiene al menos una actividad detectable sobre el sustrato deseado, es un
buen candidato de partida enzima.
Otros criterios para una enzima de partida son las preocupaciones de fabricacin (sobreexpresin
en un husped adecuado) y consideraciones de propiedad intelectual. Con la reciente expansin
de secuencias disponibles y la facilidad relativa de ahora-sntesis de genes, algunos de los mejores
lugares para comenzar la bsqueda de una enzima de partida son bases de datos. Si bien el
objetivo del diseo enzima sera generar de novo una enzima con todas las propiedades deseadas,
nuestra falta de entendimiento de todas las complejidades de la estructura y funcin de protenas
hace que esta meta inalcanzable. Sin embargo, la combinacin de diseo y evolucin dirigida
puede tener xito. Varios trabajos publicados recientemente se han centrado en el diseo de una
nueva enzima o andamio, que se someti a continuacin a la evolucin dirigida para mejoras
dramticas en las propiedades deseadas (Dwyer et al, 2004;. Korkegian et al, 2005;.. Park et al,
2006). Sin embargo, la reciente retirada de la obra Hellinga pone de relieve la dificultad de este
enfoque (Dwyer et al., 2008).
Los primeros mtodos para la evolucin dirigida utiliz mutagnesis aleatoria para hacer grandes
bibliotecas de enzimas. Aunque el tamao de la biblioteca potencial de bibliotecas de mutagnesis
aleatoria es enorme, las mutaciones al azar son ms perjudiciales y por lo tanto el nmero medio
de mutaciones aleatorias / gen debe ser limitada cuando se genera una biblioteca de mutagnesis
al azar con el fin de encontrar un nmero razonable de variantes de la enzima en vivo en la
biblioteca . Familia shuffling proporciona un mtodo para hacer bibliotecas muy grandes con
frecuencias mucho ms altas de enzimas activas. Por recombinacin homlogos mutaciones
presentes en la enzima, en lugar de realizar mutaciones al azar, las regiones ms diversas del
espacio activo secuencia enzima podra ser explorado. Con ambos de estos enfoques, los tamaos
de las bibliotecas son a menudo muy grande, y alto rendimiento de cribado es necesario para
identificar variantes mejoradas.
El desarrollo de mtodos ms recientes se han centrado generalmente en la fabricacin de
pequeas bibliotecas. El diseo de estas bibliotecas utiliza ms informacin (sobre la base de
estructura de la enzima, las actividades de los mutantes, etc) de la mutagnesis aleatoria o familia
barajan bibliotecas. A menudo, estas bibliotecas de destino residuos o regiones especficas de la
protena. Por ejemplo, mediante la identificacin de residuos especficos para la aleatorizacin, a
continuacin, la optimizacin de estos residuos de forma secuencial, Reetz y Carballeira (2007)
demostraron aumentos significativos en la termoestabilidad enzima. En un trabajo reciente de una
biblioteca pequea con una tasa de xito mayor se obtuvo mediante el cambio de la degeneracin
del codn de NNK a NDT (Reetz et al., 2008).

Hacer ms pequeos, bibliotecas ms centradas reduce la cantidad de cribado y puede permitir

pruebas ms complejas que reflejan ms estrechamente las condiciones finales de aplicacin. En
otro ejemplo reciente, Yoshikuni et al. (2006) sistemticamente recombinados "residuos
plasticidad" para producir variantes funcionalmente diversas. Con su enfoque sistemtico, se
podra explorar una secuencia espacio muy grande para la deteccin slo 2.500 mutantes, y
fueron capaces de identificar las variantes interesantes sin una pantalla de alto rendimiento.
Una suposicin subyacente en la toma de las bibliotecas ms pequeas es que las mutaciones
beneficiosas identificadas posteriormente pueden ser recombinados en bibliotecas combinatorias,
o tendr efecto aditivo con mutaciones identificadas en bibliotecas posteriores.
En efecto, Yoshikuni et al. encontrado que la mayora de las mutaciones se introducen en su
sintasa eran efectivamente aditivo. Esta aditividad general de mutaciones beneficiosas es lo que
hace que el enfoque desarrollado en PROSAR Codexis (Fox et al., 2003) tan potente. Modelos
PROSAR anlisis el efecto de las mutaciones individuales en la funcin de la enzima deseada (s), y
puede identificar las mutaciones beneficiosas, incluso cuando slo se han visto en el contexto de
otras mutaciones deletreas. Esto permite que las mutaciones beneficiosas o potencialmente
beneficioso que se identificaron a partir de bibliotecas combinatorias sin cribado completo de la
biblioteca. Uso este enfoque, los investigadores de Codexis (Fox et al., 2007) fueron recientemente
capaces de aumentar la productividad volumectric de una halohidrin deshalogenasa ms de 4000
veces.
Cmo utilizar un "buen" catalizador en un
Proceso de Produccin Qumico-Con
Las enzimas de ingeniera

Aunque varios enzimas de ingeniera se han utilizado en la sntesis orgnica en una escala
preparativa (Turner, 2003), muy pocos ejemplos han sido descritos de la creacin de una enzima
diseados especficamente para un proceso qumico a gran escala de fabricacin. Davis et al.
(2006) describen una ruta a una combinacin de un ster de hidroxinitrilo reduccin de cetona
asimtrica con una etapa de cianacin. En el primer paso, etil-4-cloroacetoacetato se reduce por
una reductasa cetona (Kred, o alcohol deshidrogenasa, ADH (Goldberg et al., 2007)). La
regeneracin del cofactor se consigue con la adicin de glucosa deshidrogenasa y glucosa (GDH).
El proceso se hizo econmicamente viable mediante la evolucin de ambas enzimas para la
actividad y la estabilidad en la presencia de 20% (w / v) de sustrato y acetato de butilo como
disolvente. Sustrato (160 g) se convirtieron en 10 h con una carga de Kred y GDH combinado de
menos de 1% (w / w). El producto se obtiene en pureza estereoqumica excelente (ee> 99,9%) y
ms de 95% de rendimiento aislado. Las mejoras de los procesos se resumen en la Figura 4.
Aqu, las implicaciones de la evolucin de la enzima en la ingeniera de procesos son
especialmente evidentes en el proceso facilitado aguas abajo. Debido al aumento de la actividad

de la enzima bajo las condiciones de proceso de la S / C-ratio puede ser aumentado

significativamente desde ca. 11 a ca. 160. El biocatalizador carga inferior se evita la formacin de
emulsiones, condujo a una separacin de fases ms rpido y un aumento global de rendimiento
aislado de 80% a> 95%. El segundo paso consiste en un enzimtica deshalogenacin / cianacin
paso, que procede a travs de la formacin de epxido como compuesto intermedio. La enzima
halohidrin deshalogenasa se optimiz utilizando una amplia gama de tcnicas que incluyen el
documento EP-PCR, mutagnesis dirigida al sitio, y PROSAR shuffling semi-sinttico, que condujo a
una mejora de ms de 4.000 veces de la productividad volumtrica del proceso, de nuevo superior
a la objetivos de comercializacin. El proceso de ster hidroxinitrilo ha sido ampliada a la escala
tonelada utilizando este enfoque de tres enzimas.
Conclusin y perspectivas

En el mbito de la ingeniera de protenas es una tarea en curso para disear bibliotecas de

calidad, (que contienen una alta proporcin de variantes de enzimas activas con las mejoras en las
propiedades de inters). Es evidente que hay una tendencia hacia ms pequeos, bibliotecas ms
inteligentes para reducir el esfuerzo de seleccin y
obtener ms informacin por variante. Esto se puede mejorar an ms con herramientas
bioinformticas como PROSAR (Fox et al., 2007).
Aunque el foco de la investigacin anterior ha sido a menudo en la evolucin de un rasgo
especfico de una enzima para la biocatlisis, para la fabricacin de procesos qumicos de las
funciones objetivo para la evolucin dirigida son multidimensionales. Parmetros de mbito
sustrato, actividad, estabilidades (pH trmica, contra los aditivos hidrofbicos) y el otro tiene que
ser mejorado en un esfuerzo concertado para alcanzar los objetivos del proceso. Si bien esto es
evidente para los procesos a gran escala a menudo no se tienen en cuenta al evolucionar una
enzima a escala preparativa para la sntesis orgnica. El impacto de las consideraciones del
proceso y desarrollo de procesos en el ciclo de evolucin dirigida se resume en la Figura 5. Hoy en
da el desarrollo del proceso qumico no es simplemente la ampliacin, una vez que el programa
de evolucin ha terminado.
Para desarrollar con xito el desarrollo de procesos qumicos biocataltica tiene que estar
perfectamente integrado en el programa de desarrollo biocatalizador.

Durante muchos aos, el potencial de la biocatlisis para la sntesis de compuestos quirales no se

poda explotar plenamente debido a las limitaciones de estos catalizadores en trminos de
aceptacin y la actividad hacia sustratos no naturales y ensitivity a condiciones tpicas de
procesamiento en una planta qumica.

A pesar de estas dificultades, un gran nmero de procesos biocatalticos ya se ejecuta en la

industria qumica hoy en da usando enzimas de tipo salvaje. Con las mejoras en la ingeniera de
protenas y el cambio en el paradigma de la otencial biocatlisis para fabricacin de productos
qumicos puede ser explorado en el futuro.