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2010-2011
Biologia Celular
Baseado nas aulas tericas, na sebenta j existente (principalmente), no The Cell, Biologia
Celular e Molecular, Molecular Cell Biology
Pedro Jogo
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Aula 1
1) Fundamentos da Biologia Celular
a) Panormica Geral das clulas
i) Dos procariotas aos eucariotas
Primeira clula surge h 3,8 bilies de anos, aproximadamente 750 milhes de
anos aps a formao da Terra;
Surgiu RNA com capacidade de auto-replicao, evoluindo posteriormente as
relaes entre os aminocidos e o RNA, sendo o RNA substitudo pelo DNA;
Contudo, a primeira clula propriamente dita dever ter consistido em RNA
isolado do meio exterior por uma membrana fosfolpidica;
Existiram evolues e mudanas externas clula e levou formao dos
procariotas e, posteriormente, dos eucariotas;
Os eucariotas devero ter surgido por uma endossimbiose entre clulas e
bactrias. Factos que apoiam: mitocndrias e cloroplastos tm DNA prprio,
tm um tamanho semelhante a bactrias, apresentam diviso por
cissiparidade sintonizada com a replicao do DNA mittico
Caracterstica
Ncleo
Dimetro
Citosqueleto
Organelos citoplasmticos
N. de pares de bases do DNA
Cromossomas
Procariotas
Ausente
1 m
Ausente
Ausente
6
6
1 X 10 a 5 X 10
Molcula de DNA circular
Eucariotas
Presente
10 100 m
Presente
Presente
7
9
1.5 X 10 a 5 X 10
Mltiplas molculas de DNA lineares
As clulas procariotas tm uma organizao interna muito simples; (A) Micrografia electrnica de uma seco fina
de E. Coli; (B) Micrografia electrnica de uma clula do plasma, um glbulo branco que segrega anticorpos;
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preciso achar a melhor relao superfcie volume de modo a, por um lado, no comprometer a sobrevivncia da
espcie, por outro, melhorar a competitividade entre outras espcies
Estrutura das clulas animal e vegetal. Ambas esto rodeadas por uma membrana
plasmtica que contm um ncleo, um citosqueleto, e muitos organelos
citoplasmticos em comum. As clulas vegetais so rodeadas por uma parede celular e
contm cloroplastos e largos vacolos
Representao
do
retculo
endoplasmtico rugoso e liso
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de decaimento na fluorescncia.
(10)PFM (Photonic Force Microscope):a luz dispersa e aquela que
alterada pela amostra so recebidas por uma lente e projectada
num QPD (Quadrant Photo-Diode. A interferncia entre a lente e o QPD emite
sinais que permitem localizar tridimensionalmente os vrios locais de
refraco da amostra e reconstruir a imagem a trs dimenses.
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Aula 2
2) Membranas biolgicas
a) Introduo
Uma clula viva e o seu mecanismo de auto-replicao esto delimitados pela
membrana celular uma fina camada de lpidos que no pode ser vista
directamente ao microscpio ptico. Todas as clulas do planeta usam a
membrana para separar e proteger os seus constituintes qumicos do ambiente
exterior. Sem membranas no existiram clulas e, com consequncia, no existiria
vida. Assim, de considerar que a primeira clula surgir simultaneamente com a
capacidade de separar uma srie de compostos qumicos do meio que o rodeia.
A membrana celular tem uma
forma simples: a sua estrutura
baseada numa dupla camada de
lpidos com cerca de 5 nm de
espessura. As suas propriedades
que so curiosas: serve de (e
principalmente)
barreira
(prevenindo o contedo de
escapar e misturando o meio
circulante) mas tambm (de
modo a permitir a sobrevivncia
e crescimento da clula) permite
a troca de nutrientes e produtos de excreo entre o meio intracelular e o meio
extracelular. Para permitir isto, a membrana perfurada por canais e bombas
altamente selectivos que permitem a entrada de certas substncias enquanto
outras saem. Alm disto, existem molculas proteicas que actuam como sensores,
permitindo dar resposta a alteraes do meio envolvente. Tambm as
propriedades mecnicas da membranas so de destacar: quando a clula cresce
ou altera a forma, tambm a membrana o faz (aumentando a rea por adio de
nova membrana sem perder a sua continuidade). Se a membrana for perfurada,
ela no rompe como um balo ou permanece dividida: ela veda rapidamente a
perfurao.
A bactria mais simples tem apenas uma nica
membrana (membrana plasmtica) enquanto as
clulas eucariticas incluem uma profuso de
membranas que delimitam os compartimentos
intracelulares. Estes
compartimentos so
construdos pelo mesmo princpio da membrana
plasmtica, servindo tambm de barreiras
selectivas. Estas membranas mantm as
diferentes caractersticas relativamente
composio e funo dos vrios organelos. Estas
membranas internas no servem apenas de barreiras mas tambm tm diferenas
subtis entre elas, especialmente a nvel das protenas constituintes de cada uma.
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ii) Protenas
Constituem 25% a 75% da massa de vrias membranas de uma clula
Desempenham numerosas funes como a formao de canais de passagem,
transporte activo de ies e pequenas molculas, expresso de receptores
envolvidos na actividade celular ou em fenmenos de endocitose, a
ancoragem da membrana a elementos do citosqueleto, etc.
Possuem movimento de rotao e difuso lateral mas no de flip-flop
(1) Integrais
(a) Transmembranares: grande dificuldade de separao
(b) Ligadas a lpidos: ligao covalente mais forte
(2) Perifricas
(a) Ligadas a protenas
o Ligao no covalente, logo, muito fraca
o Separam-se por mtodos simples
o A camada lpidica, embora removidas protenas, mantm-se intacta
f)
Propriedades da bicamada
i) Fluidez
Corresponde ao movimento lateral a que os fosfolpidos e protenas esto sujeitos
ao longo do plano de cada um dos dois folhetos da bicamada.
O arranjo geomtrico das extremidades hidrofbica dos fosfolpidos condiciona o
seu movimento de lateralidade no plano das membranas, bem como a sua fluidez,
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ii) Assimetria
Deve-se diferena de composio molecular entre as duas camadas da
membrana, pois os fosfolpidos e as protenas no se encontram distribudos de
forma equivalente nos dois folhetos da membrana, estando os glicolpidos
presentes apenas no folheto exoplasmtico da bicamada fosfolipdica.
Constituintes predominantes
Face exoplasmtica
Face protoplasmtica
Esfingomielina
Fosfatidilserina
Fosfatidilcolina
Fosfatidilinotisol
Glicolipidos
Fosfatidiletanolamina
Nota: o colesterol apresenta-se em propores idnticas em ambas as faces
iii) Impermeabilidade
A bicamada fosfolipidica tem uma permeabilidade selectiva
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g) Tcnica de criofractura
A criofractura d-se pelo congelamento rpido de uma clula ou tecido que ser
fracturado de seguida
A fractura tende a ocorrer nas regies com ligaes mais fracas: interaces
hidrofbicas
Rompe-se a bicamada em duas monocamada: P e E
Faz-se um molde das regies fracturadas com metal pesado (ex: platina) e destrise o material biolgico
Os moldes so examidados ao microscpio electrnico e mostram salincias
correspondendestes s protenas transmembranares, comprovando a sua
existncia
A maioria das protenas fica na face P
Protenas integrais:
o Atravessam o plano hidrofbico da membrana e so observadas nas
faces de fractura
o Segmentos membranares das protenas integrais organizam-se,
habitualmente, em hlices do tipo (ou cadeias polipptidicas que se
curvam sobre si prprias formando um poro -barril)
o Contm segmentos hidrofbicos na sua molcula e porinas (protenas
que formam canais na membrana externa de algumas bactrias)
o So de purificao mais difcil que as protenas perifricas.
o O seu isolamento requer uma ruptura da bicamada fosfolpidica
o Tratando com detergente Ligam-se s regies hidrofbicas destas
protenas Separando as extremidades no polares Forma micelas
Protenas perifricas:
o No atravessam o plano hidrofbico da membrana e so observadas
nas superfcies de membranas intactas
o A sua purificao mais fcil: basta preparar solues de salinidade
elevada, no sendo, portanto, requerida disrupo prvia da bicamada
fosfolpidica
o Temos as glicoprotenas e as protenas ligadas a lpidos (GPI) tm um
comportamento semelhante s protenas integrais.
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ii) Domnios
As clulas tm modos particulares de confinar a protenas da membrana
plasmtica a uma localizao especfica, criando regies especializadas a que se
chamam domnios membranares, podendo existir na superfcie da clula ou na
superfcie de organelos
(1) Clulas epiteliais
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Aula 3
Transporte
Passivo
A favor do gradiente
Difuso Simples
Molculas pequenas e sem
carga
"carrier proteins"
Molculas grandes e polares,
ies
Difuso facilitada
Canais inicos
Molculas grandes e polares,
ies
Bombas inicas
Activo
Contra gradiente
Simporte e antiporte
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O transporte das molculas pequenas e sem carga feito por difuso simples (T.P)
o As molculas de maiores dimenses, polares e no carregadas (por
exemplo, a glicose), no podem passar. O mesmo acontece com os ies
(difuso facilitada de menor eficcia)
Apesar dos ies e a maior parte de molculas polares no conseguem atravessar a
biomembrana por difuso, o facto que vrias molculas como a glicose
aparecem dentro da clula. Ou seja, atravessaram a membrana. Este transporte
ocorre por aco de protenas transmembranares especficas, que funcionam
como transportadoras. Tais protenas transportadoras determinam a
permeabilidade selectiva da biomembrana e possuem um papel muito importante
no funcionamento da membrana.
Existem vrias regies de cruzamento na membrana que formam uma passagem
atravs da bicamada lipdica permitindo que as molculas polares ou carregadas
atravessem a membrana atravs de um poro proteico sem interagir com as
cadeias hidrofbicas dos cidos gordos dos fosfolpidos da membrana.
Essas protenas transportadoras podem ser de dois tipos que mais frente sero
abordadas: as protenas de canal (channel proteins) e as carrier proteins.
b) Transporte passivo
i)
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Transporte activo
Move solutos contra os seus gradientes
electroqumicos: necessita de energia
O transporte activo depende da energia do ATP
(Adenosina Tri-Fosfato), que ocorre em bombas
inicas, ou da energia que resulta do fluxo
electroqumico de ies que passam a favor do
gradiente, que ocorre por simporte e antiporte
Transporte activo
O receptor acetilcolina
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i)
f)
Hidrlie de ATP
Ex: Bombas inicas
Gradientes inicos
Ex: Simporte e antiporte
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Bombas inicas
Muitas vezes, a clula tem de transportar molculas contra o seu gradiente de
concentrao
De modo a contrariar a direco energeticamente favorvel, temos de usar
energia proveniente do ATP para contrariar o gradiente.
Um bom exemplo de uma bomba inica a de Na+/K+
(1) Bomba inica de Na+/K+
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(1) Simporte
Diferentes molculas so transportadas na mesma direco (por exemplo,
a glicose e o io sdio na membrana aplical do intestino)
As clulas epiteliais do domnio apical usam o transporte activo para
passagem de aucares dietticos e aminocidos
No caso da glucose, ocorre um transporte que coordena o transporte de
dois ies Na+ e uma molcula de glucose para o interior da clula
No h consumo de energia uma vez que a energia proveniente do
gradiente electroqumico do io Na+ a suficiente para mediar este
transporte
Posteriormente, a glucose libertada para baixo do tecido conjuntivo que,
por conter capilares sanguneos na superfcie basolateral do epitlio
intestinal, transportado por difuso facilitada, diminuindo o gradiente de
concentrao
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(2) Antiporte
H transio de duas substncias diferentes em direces opostas
Um exemplo disto o transporte de ies Ca2+ e Na+ nas clulas cardacas
O Ca2+ exportado das clulas no s pelas suas bombas inicas mas
tambm por Na+/Ca2+ antiporte, que transporta Na+ para o interior da
clula e Ca2+ para o exterior
iii) Transporte atravs dos epitlios
No epitlio intestinal e no epitlio estomacal ocorrem vrios tipos de
transporte, salientamos estes dois pois so aqueles que nos permitem a
obteno dos nutrientes para manter a homeostasia
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Aula 4
4) Citosqueleto microtbulos e filamentos intermdios
a) Introduo
Como j dito, os organelos das clulas eucariticas conferem-lhe um elevado nvel de
organizao. Mesmo assim, um nvel de organizao superior atingido graas ao
citosqueleto, que consiste numa rede de filamentos proteicos que se estendem pelo
citoplasma de todas as clulas eucariticas. Estes servem de mecanismo estrutural
para a clula, sendo um factor determinante no tamanho das clulas, na posio dos
organelos e da organizao do citoplasma em geral. Para alm disto, o citosqueleto
responsvel pelo movimento da clula (no s da clula em si mas tambm todo o
transporte interno de organelos e outras estruturas pelo citoplasma).
O citosqueleto composto por trs tipos de filamentos proteicos: filamentos de actina
(microfilamentos), filamentos intermdios e microtbulos, estando eles ligados aos
organelos e membrana plasmtica por uma variedade de protenas acessrias.
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Visitar: http://www.sinauer.com/cooper5e/animation1203.html
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Visitar: http://www.sinauer.com/cooper5e/animation1204.html
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c) Filamentos intermdios
Constituintes do citosqueleto com dimetro entre os microtbulos e os
microfilamentos: entre os 8 e os 11nm
Esto presentes na maioria das clulas eucariticas, sendo os elementos mais
estveis do citosqueleto e os menos solveis de toda a clula
Formam uma rede perinuclear que se estende desde o ncleo at membrana
plasmtica e podem ocorrer em pequenos feixes ou aglomerados de feixes
compactos (por exemplo, nas clulas epiteliais)
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Na formao de um filamento
o Um monmero emparelha com outro, dando origem a um dmero que
mantm as regies homlogas emparelhadas na forma helicoidal
o Os vrios dmeros alinham-se dois a dois de modo antiparalelo, formando
um tetrmero, composto por quatro cadeias polipptidicas
o Um tetrmero corresponde a um protofilamento e apresenta 2 a 3nm
o Quando quatro protofilamentos se enrolam entre si sob a forma helicoidal
do origem a protofibrilas que, por sua vez, originam filamentos
intermdios (10nm) quando se associam quatro a quatro
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Aula 5
5) Citosqueleto Filamentos de actina (microfilamentos)
O principal constituinte do citosqueleto , na maioria das clulas, a actina. Atravs
de finos e flexveis filamentos de actina (microfilamentos) de 7nm de dimetro e
vrios micrmetros de comprimento
So particularmente abundantes junto membrana plasmtica de modo a agir
enquanto suporte mecnico da clula e possibilitando a migrao de clulas
(movimento celular), a internalizao de partculas (endocitose/fagocitose) e a
diviso celular. So ainda importantes no trfego intracelular, na contraco
muscular, na sinalizao intracelular e comunicao entre clulas, nas
microvilosidades e na citocinese
Constitudos por protenas globulares com 375 aminocidos
Apresentam locais de ligao que permitem a formao de longas cadeias de
filamentos de actina, segundo um padro de hlice de dupla cadeia, levando
formao de uma cadeia polar (gerando um plo positivo e um plo negativo) que
confere propriedades fundamentais que permitem um arranjo especfico dos
filamentos de actina e um movimento da miosina numa nica direco
O ciclo dinmico de actina comporta vrias fases
o Polimerizao da actina: formao de agregados de 3 monmeros
o Crescimento da cadeia: ocorre de forma reversvel em ambas as
extremidades (treadmilling), sendo que a extremidade positiva cresce 5 a
10 vezes mais depressa que a extremidade negativa
o Ligao dos monmeros a ATP: pode ou no ocorrer mas, caso ocorra,
favorece a polimerizao; o ATP mais tarde hidrolisado, formando ADP,
que enfraquece a ligao qumica e leva a um novo arranjo do filamento
Visitar: http://www.sinauer.com/cooper5e/animation1201.html
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Mas as ligaes no se fazem s com a matriz extracelular: h ligaes clulaclula (junes de adeso). Nestes casos, a protena transmembranar a caderina
que, por sua vez, formam protenas citoplasmticas (cateninas) que se associam
aos filamentos de actina
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Visitar:
http://www.sinauer.com/cooper5e/animation1202.html
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Aula 6
6) Integrando clulas em tecidos
a) Introduo
Existem quatro tecidos bsicos: nervoso, muscular, conjuntivo (menos diferenciado e
preenche os espaos entre os restantes tecidos) e epitelial (cobre as superfcies
internas e externas do organismo estando sobre a lmina basal).
No nosso prprio desenvolvimento, integrao de clulas nos tecidos assume enorme
relevncia pois aps a diferenciao de uma clula temos de a agarra a algum lado.
Essa adeso poder ocorrer entre clulas (ou seja, uma adeso clula-clula) ou com a
matriz extracelular (uma adeso clula-matriz extracelular).
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d) Junes celulares
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i)
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Os filamentos intermdios de
queratina das clulas ligam-se
desmoplaquina
(placa
mais
interna) que se liga parte
citoslica das caderinas desmocolina e desmoglena atravs da placofilina e da
placoglobina
(placa
mais
externa).
As
pores
extracelulares das caderinas
ligam-se
por
interaces
heteroflicas.
Aparecem mais frequentemente perto da zona basal da clula, sendo a
sua ligao depende da concentrao de Ca2+.
A disrupo destes desmossomas, na pele, pode ser causada por uma
doena auto-imune Pnfigo (Phemphigus vulgaris) em que o paciente
produz anticorpos contra a desmoglena, levando ao aparecimento de
bolhas.
(2) Junes apertadas
Funes principais:
Manter a polaridade da clula: ao
ocorrer a separao do domnio
apical e basal das membranas
impedida
a
difuso
de
constituintes membranares
Barreira entre compartimentos
fluidos: impedida a passagem
livre de molculas ou ies entre
as clulas, sendo o material
obrigado a passar por difuso ou
transporte activo
As protenas que participam nestas junes so as ocludinas, as claudinas e
vo-se ligar a protenas semelhantes nas clulas adjacentes. As nectinas
podem participar na formao destas junes
So as mais fortes e localizam-se abaixo da superfcie apical entre clulas
epiteliais adjacentes em ductos e cavidades corporais (ex: intestino), formando
selas em pontos intermitentes da membrana
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Placa que liga as clulas epiteliais lmina basal da matriz formando regies
de unio pontual
Possuem uma estrutura semelhante aos desmossomas mas so qumica e
funcionalmente distintos
Nas junes os filamentos de queratina ligam-se a integrinas, atravs da
plectina, que por sua vez se ligam laminina
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Resumindo:
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Aula 7
7) Matriz extracelular
A maioria dos tecidos dos animais est numa matriz extracelular
que preenche os espaos entre as clulas e mantm os tecidos
juntos. Existe alguns tipos de tecido conjuntivo, dependendo da
variedade das protenas e polissacardeos produzidos
a) Definio
Conjunto de protenas e polissacardeos secretados,
depositados e degradados pelas clulas que preenche os
espaos entre aquelas e entre os tecidos, mantendo-os unidos
b) Interaces clula-matriz (algumas j foram faladas)
Existe uma relao bidireccional entre as clulas e a matriz: o tipo de clulas
determina o tipo de matriz e o tipo de matriz influencia as funes inerentes a
cada tecido
Apesar do papel essencialmente estrutural da matriz celular, ela regula fenmenos
biolgicos tais como a adeso, migrao e proliferao celulares. Logo, funciona
como meio de comunicao entre as clulas, modificando o seu padro de
expresso gnica e influenciando a diferenciao.
c) Aspectos funcionais
Organizao das clulas em tecidos
Proteco de agentes patognicos
Coordenao de funes celulares por activao da sua sinalizao intracelular,
controlando o crescimento, proliferao e expresso gentica
d) Compartimentos
i) Intersticial
Apresenta sobretudo funo estrutural ao nvel do tecido conjuntivo denso
(caracterstico pela resistncia e elasticidade dada pelo colagnio e elastina) e ao
nvel do tecido conjuntivo laxo (caracterizado por agregados de proteoglicanos
que mantm um ambiente hidratado nos tecidos)
ii) Pericelular
Constitudo por fibronectinas, proteoglicanos e outras protenas multifuncionais
Responsvel pela modulao do comportamento celular
Responsvel por influenciar a expresso gentica das clulas
e) Constituio
i) Protenas estruturais
Constituem o sistema elstico, o qual concede resistncia e flexibilidade aos
tecidos
(1) Colagnio
Protena mais abundante nos tecidos dos animais
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Degradao da matriz
A degradao est a cargo de uma srie de enzimas: enzimas de serina (resduos de
serina no centro activo) e metaloenzimas (dependem de metais para terem actividade)
Fisiolgica: como exemplo o deslocamento dos neutrfilos durante a resposta
inflamatria
Patolgica: como exemplo os processos de metstases
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Aula 8
8) Mitocndrias e peroxissomas
a) Mitocndrias
i) Constituio, composio e a sua gentica
Duas membranas diferentes: externa
e interna
A regio limitada pela membrana
interna: por matriz mitocondrial
(existem protenas, ribossomas e
DNA, que tm uma funo
importante
no
processo
de
respirao celular e no processo de fosforilao oxidativa)
A membrana externa delimita o espao intermembranar, apresentando ainda
canais transmembranares formados por porinas, que tornam a membrana
bastante permevel maioria das molculas de dimenses reduzidas
A membrana interna bastante maior que a externa, formando uma srie de
invaginaes que se projectam para o espao interior cristas mitocondriais
(onde existem as partculas F1, que confere assimetria membrana, os
factores de acoplamento e grande actividade enzimtica)
Os principais fosfolpidos que constituem as membranas so: fosfatilcolina,
fosfatiletanolamina e a cardiolipina. So constitudas por protenas, lpidos,
cidos nucleicos e pequenas molculas como co-factores e subtractos
A membrana externa que constituda por 50% de lpidos e 50% de protenas,
a membrana interna, menos espessa, constituda maioritariamente por
protenas (76% contra 24% de lpidos)
Nos lpidos destaca-se a cardiolipina (molcula que reduz a permeabilidade da
membrana passagem de protes)
Quanto s protenas podemos destacar 3 tipos:
o as intervenientes na cadeia citocromica
o integradas na fosforilao oxidativa
o integradas na impermeabilidade a pequenos ies e permeabilidade a
metabolitos.
Possuem um genoma prprio e toda a maquinaria para a transcrio e
traduo, sendo capazes de se reproduzir autonomamente (confirmando a
teoria endossimbitica)
O genoma constitudo por uma molcula de DNA circular em cadeia dupla,
podendo localizar-se na matriz da mitocndria ou na membrana interna
Verifica-se que as mitocndrias do embrio foram herdadas exclusivamente da
me (uma vez que o espermatozide no contribui com praticamente nenhum
citoplasma para o zigoto) sendo o DNA mitocondrial muito utilizado nos
estudos forenses para determinao/confirmao da maternidade
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ii) Funes
A principal fonte energtica das clulas animais a glicose. Este composto tem de ser
processado numa srie de reaces respirao celular que tem como objectivo
transformar este composto noutros mais simples que so utilizados pela clula e ao
mesmo tempo produzir energia resultante da sua degradao. Assim, so necessrios
vrios passos diferentes:
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iii) Biognese
As protenas peroxissomicas contm sinais PTS (peroxisome targeting signal):
o PTS1 3 aminocidos (serina, lisina, leucina)
o PTS2 5 aminocidos (arginina, leucina, X5, histidina, glutamina)
Os peroxissomas formam-se a partir de outros j existentes, logo a clula
inicial j tem que conter peroxissomas
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Aula 9 e 10
9) Sistema endomembranar e trfego intracelular e modificaes ps-traduo no RE e Golgi
Retculo Endoplasmtico
Geralmente, nas clulas eucariticas, a maior mebrana a que envolve o retculo.
Estende-se desde a membrana nuclear, prolongando-se pelo citosol. O retculo um
sistema contnuo e interconectado de tbulos e envolvidos por membranas e sacos
(tambm designadas por cisternas).
O retculo tem um grande nmero de funes, mas as mais importantes so a sntese de
lpidos e protenas e ainda a secreo de protenas. Podem-se distinguir o Retculo
endoplasmtico liso (tem este nome devido inexistncia de ribossomas) e o retculo
endoplasmtico rugoso.
Principais diferenas entre retculo endoplasmtico liso e rugoso:
Associado
ribossomas
Funes
Mais
desenvolvido
em
Liso
a No
Metabolismo
de
lpidos
(colesterol,
fosfolpidos,
triglicridos,
hormonas),
metabolizao de drogas e
substncias txicas
Clulas
com
hepatcitos,
adipcitos e adrenocorticais
Rugoso
Na superfcie externa
Processamento
protenas
de
Clulas
secretoras:
pancreticas, musoca
intestinal, linfcitos
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Protenas
sintetizadas
Nos
ribossomas
livres do citosol vo
Permanecer no citosol
Ncleo
Mitocndrias
Cloroplastos
Peroxissomas
Protenas da face interna da membrana citoslice
Nos
ribossomas
ligados membrana
do RE vo
Integrar a membrana do RE
Integrar o Golgi
Integrar lisossomas
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Ancoragem ao GPI
As protenas podem-se ligar s diferentes membranas das clulas. Uma forma de elas o
fazerem, atravs da ancoragem ao GPI (glicosilfosfatidilinositol, que um glicolpido
ancorador). O GPI constitudo por 2 cadeiras de cidos gordos e por uma de
oligossacardeo. As protenas, quando j se encontram totalmente sintetizadas, ligam-se
atravs do grupo carboxi terminal, ficando assim apenas ligada ao GPI. Isto leva a uma
fluidez da protena na membrana, sendo importante no estabelecimento de
microdomnios na face extracelular da membrana citoplasmtica.
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e NANA (cido silico) fosfatase cida. nesta fase tambm que se d a sada e secreo
dos produtos do Golgi para os locais onde cada protena vai actuar. As zonas trans do Golgi
onde se faz a secreo de vesculas so as chamadas trans golgi network.
O complexo de golgi desintegra-se na presena de brefeldina A.
Transporte antergrado de protenas ao longo do Golgi
O transporte de protenas ao longo do Golgi explicado por um modelo em que diz que o
contedo progride dentro da mesma cisterna, no sentido de cis para trans e que, o
contedo das cisternas modificado por enzimas trnasportadas em vesculas que se
deslocam retrogradamente, ou seja, deslocam-se de uma cisterna mais trans para uma
mais cis.
Quando uma protena possui uma sequncia KDEL, esta ir sofrer transportao
retrgrada, e ir do Golgi para o RE.
Glicosilao de protenas no Golgi
A glicosilao a adio de acares a protenas. Este processo vai ocorrer tanto no RE
como no Golgi.
No RE h modificao de oligossacardeos N-ligados que so adicionados s protenas, vai
haver adio de um oligossacardeo e ainda so removidos dos polipeptdeos trs resduos
de glicose e um de manose.
No Golgi, os oligossacardeos N-ligados das glicoprotenas que provm do RE vo sofrer
alteraes adicionais. Diferentes glicoprotenas sofrem diferentes transformaes
medida que atravessam o Golgi, dependendo da sua conformao e da quantidade de
enzimas presentes no Golgi das diferentes clulas.
A glicosilao pode ser:
Por ancoragem ao GPI
Com ligao N o oligossacardeo liga-se ao grupo amina da protena
Com ligao O o oligossacardeo liga-se ao grupo carboxilo da protena
N-glicosilao ocorre em protenas que se destinam membrana citoplasmtica ou a
serem secretadas e iro dar-se segundo uma sequncia ordenada de reaces, explicado
na fig.4.
O-glicosilao d-se quando as protenas so transformadas pela adio de hidratos de
carbono, atravs da serina e da trionina que se encontram normalmente ligadas a uma Nacetilgalactosamina, qual outros acares se podem ligar. Ao se ligarem diferentes
acares, vai-se estar a formar diferentes glicoprotenas, o que via estar envolvido nos
diferentes tipos sanguneos. Em protenas que se destinam a serem incorporadas em
lisossomas, vai haver fosforilao da manose. Para que isto ocorra, primeiro adicionam-se
fosfatos de N-acetilgucosaminas a manoses especficas. Quando se remove a Nacetilglucosamina, a manose torna-se manose-6-fosfato. Esta manose fosforilada
reconhecida pelo seu receptor na fase trans do Golgi que ir direccionar o transporte
destas protenas para lisossomas.
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Aula 11
11) Trfego intracelular: direccionalidade do transporte via vesculas
O primeiro passo no transporte de vesculas a sua formao a partir de invaginaes da
membrana citoplasmtica. A superfcie exterior da membrana da vescula revestida por
determinadas protenas que se pensam ser factores de conduo da vescula at ao local
de chegada pretendido.
Transporte antergrado transporte do RE (reculo endoplasmtico) para o complexo
de Golgi
Transporte retrgrado transporte do Golgi para o RE
Coat Proteins
Protenas que esto nas
membranas das vesculas
ou as envolvem
Transporte
memb. plasmticaendossoma
Golgiendossoma
Lisossomavacolo
Golgi (face trans)lisossomas
COP I
Transporte retrgrado
GolgiRE
COP II
Transporte antergrado
REGolgi
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Funes da clatrina:
Providenciam um eficiente processo para transportar macromolculas
especficas do meio extra para o meio intracelular
Identificar alguns receptores
Seleco macromolculas especficas para transportar para dentro da clula
Proporcionam um transporte extremamente selectivo.
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Formao de lisossomas
A partir da fuso de vesculas da face trans do golgi com endossomas que contm
molculas endocitadas para o interior da clula. Cruzamento entre a via de
secreo celular e a via endoctica.
Pormenorizando:
Formao de uma vescula endoctica revestida por clatrina
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Colesterol
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f)
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g) Caveolina e os caveolae
Caveolae: pequenas invaginaes da membrana plasmtica em forma de cesto, muitas
vezes repetidas, de dimetro 50 a 80 nm, ricos em rafts lipdicos com colesterol e
esfingolpidos. Possuem um revestimento distinto formado por protenas designadas
caveolinas. Os caveolae esto envolvidos em processos de sinalizao celular e
endocitose sem recorrer clatrina. So muito comuns nas clulas intestinais.
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Aula 12
12) Endocitose, fagocitose e autofagia
A endocitose divide-se em trs formas:
a) Endocitose (visitar: http://www.sinauer.com/cooper5e/animation1303.html)
i)
Pinocitose
Ingesto de fluidos
Induzida por protenas, aminocidos e ies
Apresenta semelhanas com a fagocitose
Ocorre uma invaginao da membrana
plasmtica, formando-se uma vescula pinoctica
Transporte a curta distncia
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Esquema
O modelo de maturao nos fagcitos designa-se por kiss and run e tem por
base a fuso de um endossoma precoce com o lisossoma precoce, aps a partcula
ter sido envolvida por emisso de pseudpodes. Posteriormente, a maturao
continua com a aco das GTPases e Rab.
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Endocitose
Nota: Lisossomas: Organelos envolvidos por membranas que contm uma variedade
de enzimas capazes de hidrolisar todos os tipos de polmeros biolgicos protenas,
cidos nucleicos, carbohidratos e lpidos (funcionam como um sistema digestivo da
clula, degradando material captado no exterior da clula e digerindo componentes da
prpria clula). So formados pela fuso de vesculas de transporte, provenientes do
trans-Golgi, com os endossomas que contm molculas captadas por endocitose na
membrana plasmtica
o O material do exterior captado em vesculas endocticas cobertas por clatrina
e depois fundem-se com os endossomas precoces
o Os componentes da membrana so reciclados para a membrana plasmtica e
os endossomas precoces maturam, gradualmente, em endossomas tardios,
que so precursores dos lisossomas
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Autofagia
A autofagia induzida e, de seguida, surge uma dupla membrana, no citosol, que
cresce e envolve uma poro do citoplasma, incluindo mitocndrias, ribossomas e
protenas, componentes estes que vo ser posteriormente degradados. Ainda hoje no
se sabe ao certo a origem desta dupla membrana, mas foi convencionado que a
mesma tem origem na membrana do retculo endoplasmtico.
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Clulas fagocticas
As clulas fagocticas tm actividade como:
o Quimiotaxia: so atradas por microorganismos atravs de qumicos (ex:
microbianos)
o Adeso: aderem aos microorganismos
o Internalizao: estendem projeces que envolvem o organismo de modo a
interniz-lo
Existem organismos intracelulares que foram a fagocitose. Por exemplo, a Salmonela
e a Shigella injectam molculas que modificam o citoesqueleto de actina e as clulas
passam a emitir pseudpodes, eliminando estes patogenes.
Por outro lado, existem bactrias que sobrevivem por conseguirem evitar a fagocitose.
Uma delas a Yersina, que injecta componentes que neutralizam o citoesqueleto de
actina impedindo a produo de fagossomas (macrfagos).
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Tuberculose
o O bacilo da tuberculose sobrevive dentro do macrfago, uma vez que
consegue inibir a fuso da membrana que une o fagossoma macrfago,
como o lisossoma. Desta forma, em vez de ser destrudo, o organismo
envolvido sobrevive e multiplica-se com o macrfago.
o Este bacilo, alm de bloquear a actina, produz catalases e peroxidases que
resistem aos radicais livres emitidos pelos receptores da superfcie celular. Os
receptores FC fraco constante das imunoglobulinas, e C3R, induzem a
formao de radicais livres, os quais matam em segundos os bacilos
fagocitados. No entanto, a quantidade de radicais libertada aquando do
contgio no suficiente para matar 100% dos bacilos, a no ser que os
macrfagos estejam activados pelo IFN interfero .
Bloqueiam a
maturao
Ficam num
vacolo RE like
Microbactrias
Salmonella
Clamdia
Brucella
Escapam do
fagossomo para o
citosol
Shigella
Listeria
Leishmania
(promastigotas)
Legionella
Vaccinia
Resistem ao
lisossoma
Coxiella
Leishmania
(amastigostas)
Tocoplasma gondi
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Aula 13
13) Organizao funcional do ncleo e transporte ncleo-citoplasma
a) Ncleo
i) Estrutura e funo
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Condensao de cromossomas
A cromatina da interfase condensa-se para
formar os cromossomas compactos das
clulas mitticas. Esta condensao
necessria para permitir q os cromossomas
se movam ao longo do eixo mittico sem se
quebrarem durante a sua distribuio. O
DNA neste estado altamente condensado
no pode ser transcrito, sendo que a sntese
de RNA pra durante a mitose. Quando os cromossomas condensam e a
transcrio pra o nuclolo desaparece. As histonas atravs da sua fosforilao
contribuem para a condensao cromossmica nomeadamente as histonas H1 e
H3, sendo que a H3 mesmo imprescindvel para que haja condensao de
cromossomas. Existem tambm complexos proteicos condensinas que
funcionam pelo enrolamento de DA em volta de si mesmo, compactando os
cromossomas.
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Aula 14
14) Sinalizao celular por receptores
Visitar: http://www.sinauer.com/cooper5e/animation1501.html
a) Etapas da sinalizao celular
Recepo do sinal: sinal qumico extracelular liga-se ao receptor da clula alvo
Transduo do sinal: passagem do sinal extracelular para intracelular
Resposta celular: resposta da clula ao sinal
b) Formas de sinalizao celular
i) Directa: ocorre quando 2 clulas esto muito prximas e os receptores entram em
contacto directo
iii) Endcrina
(1) Autcrina: a clula que produz o sinal a que vai receber
(2) Parcrina: o modo mais frequente, as duas clulas esto prximas; os sinais
so libertados no fluido extracelular das vizinhanas, ligando-se depois clula
alvo
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c) Molculas sinalizadoras
Hormonas adrenalina, cortisol, tiroxina
Factores de crescimento (GF growth factor) EGF(epidermal gf), PDGF(plateletderived gf), NGF(nerve gf)
xido ntrico ou monxido de azoto (NO)
Neurotransmissores acetilcolina
Antignios
Uma clula tm um elevado nmero de sinais, no entanto tem um nmero restrito de
receptores, o que faz com que a clula responda a um nmero limitado de sinais.
Uma diferente combinao de sinais, numa mesma clula, gera uma diferente
resposta por parte da clula. Os sinais actuam em combinaes de modo a regular o
comportamento da clula.
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e) Cascatas de sinalizao
O receptor normalmente extracelular, mas nem sempre o
O receptor localizado na superfcie celular faz a transduo do sinal para um sinal
intracelular, iniciando uma cascata de sinalizao que transfere o sinal para o
interior da clula, amplificando-o e distribuindo-o ao longo da sua rota
Vrios passos da cascata de sinalizao podem ser modulados por outras
molculas ou eventos na clula. A cascata de sinalizao celular feita sobretudo
por protenas sinalizadoras que modulam o sinal
f)
Protenas sinalizadoras
Activadas por fosforilao
o O sinal entra e provoca a passagem do ATP para ADP atravs de uma
protena que se chama cinase e activa a resposta na clula
Activadas pelo GTP
o O sinal entra e faz com que o GDP passe a GTP o permite a activao da
resposta por parte da clula
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g) Receptores
i) Intracelulares
Pode ocorrer quando as molculas so pequenas e hidrofbicas
Hormonas esterides (ex: tiroxina ou estrognio): a hormona entre na
membrana e no citoplasma que se liga ao receptor mudando a sua
conformao. O complexo hormona/receptor ento transportado para o
ncleo atravs de poros nucleares
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(i) Adenililciclase
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As duas molculas receptoras atravessam a membrana uma vez e esto separadas. A molcula
sinalizadora de domnio extracelular de um receptor tirosina kinase causa a associao das
duas molculas sinalizadoras num dmero. A formao do dmero faz com que o domnio
cinase de cada receptor se junte, o que provoca a activao das kinases e possibilita que estes
fosforilem em vrias zonas da cadeia de tirosina. Cada tirosina fosforilada serve como uma
zona especfica de ligao para uma diferente protena sinalizadora intracelular o que ajuda a
propagao do sinal no interior da clula
Ex:Activao da MAP cinase via RTK-Ras
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protenas alvo. Estas protenas alvo podem ser outras protenas cinases ou protenas
reguladoras de genes que regulam a expresso dos genes. Mudanas na expresso dos genes e
na actividade das protenas da origem a uma complexa mudana no comportamento celular
nomeadamente na proliferao e diferenciao celular.
(4) Receptores das citocinas, TFG, Hh, Wnt, Notch (apenas saber que existem e
que fazem parte dos receptores extracelulares)
h) Interaces entre as diferentes vias de sinalizao
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Respostas celulares
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Aula 15
15) Ciclo celular
a) Fases do ciclo celular
Visitar: http://www.sinauer.com/cooper5e/animation1601.html
O ciclo celular divide-se essencialmente em duas
partes: mitose e interfase. Mitose (diviso
nuclear) corresponde separao de
cromossomas filhos e normalmente termina
com a diviso celular (citocinese). No entanto, a
mitose e a citocinese duram apenas uma hora,
ento a clula est 95% do ciclo celular em
interfase perodo entre mitoses. Durante a
interfase os cromossomas so descondensados
e distribudos pelo ncleo, de modo que este
parea morfologicamente uniforme. No entanto,
a nvel molecular a interfase altura durante a
qual ocorre o crescimento da clula e replicao
celular, de modo a preparar-se a diviso celular.
A clula cresce at um estado de controlo na interfase;
O DNA sintetizado apenas numa parte da interfase;
A fase M do ciclo corresponde mitose qual normalmente se segue a
citocinese;
Fase G1 (gap 1) corresponde ao intervalo entre a mitose e a inibio da
replicao do DNA. Durante a G1 a celular activada metabolicamente e
cresce continuamente, mas no replica o seu DNA;
Fase S onde ocorre a replicao do DNA;
Fase G2 (gap2) fase durante a qual continua o crescimento celular e as
proteinas so sintetizadas na preparao para a mitose;
Para uma tpica clula humana o ciclo demora 24h (Fase G1 11h; Fase S
8h; Fase G2 4h e a mitose 1h);
Fase G0 (insere-se na fase G1, quando esta bloqueada) - em que as clulas
permanecem activas metabolicamente, mas no ocorre a proliferao da
clula, a no ser que sejam sinalizadas para tal, atravs de sinais
extracelulares apropriados.
b) Contedo em DNA
As clulas em diferentes estdios do ciclo celular podem ser
distinguidas atravs do seu contedo de DNA. Por exemplo, uma
clula animal em G1 diplide, o que significa que o seu contedo
de DNA de 2n. Durante a Fase S, a replicao do DNA aumenta a
quantidade de DNA para 4n, e assim se mantm pelas Fases G2 e M.
no entanto, diminui depois da citocinese, retomando o valor inicial
de 2n.
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A progresso das clulas durante o ciclo celular regulada tanto por sinais
extracelulares do ambiente circundante, como por sinais intracelulares;
Um exemplo de regulao por sinais extracelulares a recepo de um sinal
proveniente do efeito de crescimento celular de uma clula animal em
proliferao;
Diferentes processos celulares, como o crescimento das clulas, a replicao do
DNA, e a mitose, so coordenados durante a progresso do ciclo celular. Este facto
deve-se a vrios pontos de controlo que regulam a progresso das vrias fases do
ciclo celular;
O maior ponto de regulao ocorre em clulas que esto prestes a passar da Fase
G1 para a Fase S (este ponto ficou conhecido por START nas leveduras, chama-se
ponto de restrio nos animais)
Quando as clulas passam o START, elas esto prontas para entrarem na fase S e
consequentemente realizarem um ciclo de diviso celular.
Esta passagem bastante regulada por sinais externos, como a disponibilidade de
nutrientes e o tamanho da clula.
Quando as leveduras dispem de pouca quantidade de nutrientes, o seu ciclo
interrompido no START e entram numa fase de repouso em vez de prosseguirem
para a Fase S.
START representa um ponto de deciso onde a clula determina se existe a
quantidade de nutrientes suficiente para suportar a progresso do resto da diviso
celular.
Alm de ser um ponto de diviso, START um ponto onde a clula cresce
coordenadamente com a replicao do DNA e a diviso celular.
A importncia desta regulao do crescimento evitar a produo de clulas de
tamanhos diferentes: a clula me apresenta maiores dimenses que a clula
filha.
Esta regulao conseguida por um mecanismo de controlo que requer um
tamanho mnimo antes de ocorrer a passagem pelo START. Consequentemente, a
clula filha passa mais tempo em G1 e cresce mais do que a clula me.
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d) Pontos de controlo
Visitar: http://www.sinauer.com/cooper5e/animation1603.html
Os diferentes eventos que tomam lugar durante as fases do ciclo celular tm que ser
coordenadas umas com as outras para que ocorram numa ordem apropriada. Por
exemplo, importante que a clula no inicie a mitose sem antes tenha ocorrido a
replicao completa do genoma. Na maior parte das clulas, esta coordenao entre
as diferentes fases do ciclo celular dependente de uma srie de pontos de restrio
do ciclo celular que previnem a entrada na fase seguinte do ciclo celular at que os
eventos da fase actual estarem completos.
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f)
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i)
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complexos Fase do
inibida
G1
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ciclo
celular
G1
S
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iniciada
pelas
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Aula 16
16) Mitose
a) Fases da mitose
Visitar: http://www.sinauer.com/cooper5e/animation1605.html
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Aula 17
17) Meiose (visitar: http://www.sinauer.com/cooper5e/animation1607.html)
Resulta na diviso de uma clula me dando origem a clulas filhas haplides, cada uma
contendo apenas um membro do par dos cromossomas homlogos que estavam
presentes na clula me, que era diplide. Esta reduo do nmero de cromossomas
acompanhada por dois ciclos sequenciais de diviso nuclear e celular Meiose I e Meiose
II, com um nico ciclo de replicao do DNA
a) Comparao
meiose/mitose
(visitar:
http://www.sinauer.com/cooper5e/animation1608.html)
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b) Fases
i) Interfase pr-meitica
(1) Replicao do DNA
ii) Profase I (visitar: http://www.sinauer.com/cooper5e/animation1609.html)
(1) Leptteno
Nota: Complexo sinaptonmico estrutura proteica que permite o alinhamento correcto dos
cromossomas homlogos que constituem o bivalente, isto , cada gene colocado diante do
seu alelo do cromossoma homlogo, permitindo o emparelhamento das regies exactamente
correspondentes. Fornece o suporte necessrio recombinao (crossing-over), no estando
envolvido nesse processo
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(3) Paquiteno
(5) Diacinese
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iii) Metafase I
Nota: Quiasma
Na metfase, os cinetocoros das cromtides-irms podem ser fundidos
ou adjacentes. Os microtbulos do mesmo plo do fuso so ento
ligados aos cinetocoros das cromtides-irms, enquando os
microtbulos do plo oposto se ligam ao cinetocoro dos cromossomas
homlogos. Os quiasma terminam na anafase I, e os cromossomas
homlogos movem-se oara os plos do fuso
iv) Anafase I
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vi) Citocinese
Diviso do citoplasma
vii) Profase II
Chegada dos cromossomas aos plos (cada grupo envolvido pela membrana
nuclear)
A cromatina descondensa, os nuclolos reaparecem e o fuso desaparece
Aps a diviso do citoplasma obtemos 4 clulas haplides
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c) Regulao
A meiose dos ocitos regulada em dois pontos nicos do ciclo celular.
O primeiro ponto regulador no estgio de Diplteno da primeira diviso
meitica.
Os ocitos podem permanecer bloqueados nesse estado
por longos perodos de tempo. Durante este bloqueio
em Diplteno, os cromossomas dos ocitos
descondensam-se e so activamente transcritos. Esta
actividade de transcrio reflecte-se num tremendo
crescimento dos ocitos durante este perodo
Os ocitos retornam meiose em resposta
estimulao hormonal e completam a sua primeira
diviso, com uma citocinese assimtrica.
A diviso celular aps a meiose I assimtrica,
resultando na produo de um pequeno corpsculo
polar e um ocito que retm o seu maior tamanho.
O ocito prossegue para entrar na meiose II sem ter formado novamente um
ncleo ou descondensado os seus cromossomas.
A maioria dos ocitos dos vertebrados novamente bloqueada na metafase II,
onde permanecem at fertilizao.
A meiose dos ocitos controlada pelo MPF, tal como na fase M das clulas
somticas.
132
Actividade do MPF
o A estimulao hormonal dos ocitos no Diplteno activa o MPF,
resultando no curso para a metafase I.
o A actividade do MPF diminui durante a transcrio da metafase I para a
anafase I.
o Aps a finalizao da meiose I, a actividade d MPF volta a surgir e
permanece alta durante o bloqueio da metafase II.
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Regulao do MPF
o A regulao do MPF durante a meiose dos ocitos responsvel pelo
bloqueio em metafase II.
o A estimulao hormonal dos ocitos bloqueados em Diplteno, bloqueia
inicialmente o recomeo da meiose por activao do MPF.
o Tal como na mitose, o MPF induz a condensao cromossmica, a ruptura
do invlucro nuclear e a formao do fuso.
o Um mecanismo regulador nico para os ocitos actua para permitir a
manuteno da actividade do MPF durante o bloqueio na metafase I,
prevenindo a transcrio de metfase para anafase da meiose II e
inactivao do MPF, que pode resultar na protelise da ciclina B durante
uma fase M normal.
o Uma serino/treonina quinase
conhecida por Mos sintetizada
especificamente em ocitos
durante a poca de concluso da
meiose I, sendo necessria para
o aumento da actividade do MPF
durante a meiose II e para a
manuteno da actividade do
MPF durante o bloqueio da
metafase II.
o A aco de Mos resulta na
activao da ERK MAP quinase
(papel central nas rotas de
sinalizao celular).
o Em ocitos, a ERK activa outra
protena Rsk que inibe a
aco do complexo de promoo
da anafase e bloqueia a meiose
em metafase II.
o Os ocitos podem permanecer neste ponto do ciclo celular meitico,
durante muitos dias, espera da fertilizao.
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Aula 18
18) Replicao do DNA
a) Estrutura do DNA
Antes das experincias de Watson e Crick, Rosalind Franklin e Maurice Wilkins
previram a estrutura helicoidal da molcula de DNA
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Watson e Crick construram um modelo que consistia numa dupla cadeia (dupla
hlice), onde a pentose e o cido fosfrico estavam situados no exterior da cadeia,
enquanto as bases estavam orientadas para o interior da molcula. As ligaes
entre os nucletidos numa cadeia simples do-se a partir do cido fosfrico, que
est ligado ao carbono 5 da pentose e ao carbono 3 da pentose pertencente ao
nucletido que lhe antecede. A ligao entre as duas cadeias simples de DNA
feita atravs das bases azotadas complementares por meio de pontes de
hidrognio (duas ligaes de hidrognio no caso da T A, 3 ligaes, no caso C
G). Esta complementaridade importante foi importante para Erwin Chargaff, que
analisou a variedade de bases que se encontram no DNA. Descobriu,
experimentalmente, que a quantidade de Adenina igual quantidade de Timina
e, por sua vez, a quantidade de Guanina igual quantidade de Citosina (Regra de
Chargaff).
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A habilidade do DNA de servir como modelo na sua prpria replicao mais tarde
confirmada, com a demonstrao de que uma enzima purificada da E. coli (DNA
polimerase) podia catalisar a replicao do DNA in vitro. A DNA polimerase
permitiu a incorporao directa dos nucletidos na molcula complementar de
DNA.
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Este enigma foi resolvido por experiencias que demonstraram que apenas uma
cadeia simples sintetizada de uma forma contnua devido concordncia de
direces da cadeia e da DNA polimerase; a outra cadeia formada por pequenos
(1-3kb), descontnuos pedaos de DNA que foram sintetizados ao contrrio em
relao direco do movimento da forquilha de replicao. Estes pequenos
pedaos de DNA sintetizados (fragmentos de Okazaki) esto unidos pela aco da
DNA ligase, formando uma nova cadeia de DNA intacta. Assim, a cadeia que foi
sintetizada de uma forma contnua denominada por cadeia avanada, uma vez
que a sua elongao na direco do movimento da forquilha de replicao. A
cadeia que no pode ser sintetizada de forma continua, isto no polimerizada no
sentido 5 3, denominada por cadeia atrasada.
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e) A fidelidade da replicao
A capacidade da replicao do DNA importante para a reproduo da clula, e as
taxas de mutaes de vrios genes revelam que a frequncia de erros durante a
replicao corresponde apenas a uma bases incorrecta por 108 a 109 nucletidos
incorporados. Esta frequncia mais pequena do que se esperava tendo em conta
apenas a complementaridade das bases emparelhadas. Particularmente, as
diferenas energticas que resultam das alteraes nas pontes de hidrognio
entre bases que se encontram correctamente colocadas e as que se encontram
trocadas, so suficientemente elevadas para favorecer a incorporao correta de
nucletidos. Consequentemente, a seleco de bases determinada
simplesmente pelas ligaes de hidrognio entre as bases complementares, onde
a frequncia de ocorrncia de um erro corresponderia a uma incorporao
incorrecta de uma base em 100-1000 nucletidos de uma nova cadeia de DNA.
Mas o mais elevado nvel de fidelidade de replicao atingido pela actividade das
DNA polimerases.
Um mecanismo que a DNA polimerase utiliza e que aumenta a fidelidade da
replicao a ajuda na seleco das bases correctas que devem ser incorporadas
na nova cadeia. A polimerase no catalisa simplesmente a incorporao de
qualquer nucletido que tenha uma ligao de hidrognio igual do molde. Em
vez disso, a sua actividade exclu bases que no apresentam uma conformao
correcta em relao ao molde. Esta habilidade da DNA polimerase em seleccionar
nucletidos complementares aumenta a capacidade de replicao, de tal forma
que reduz a frequncia de ocorrncia de um erro de 10-3 para 10-5 10-6.
O outro mecanismo responsvel pela capacidade de replicao do DNA a leitura
correcta da molcula de DNA efectuada pelas polimerases. As DNA polimerases
envolvidas na replicao tem uma actividade de exonuclease que pode hidrolisar o
DNA na direco 3 - 5. Estas exonucleases 3 5 operam no sentido inverso
sntese de DNA, e participam na leitura da nova cadeia. Esta leitura eficaz porque
a DNA polimerase necessita de um primer e no capaz de iniciar a sntese de
novo. Os primers que esto ligados cadeia molde so preferencialmente usados,
assim quando uma base incorrecta incorporada, a exonuclease 3 5 activada
e remove-a.
f)
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Aula 19
19) Cancro
a) Introduo
A primeira descrio de cancro remonta aos 3000 anos AC, registado num papiro
egpcio. A origem da palavra vem de carcinos, dada por Hipcrates. Actualmente,
uma importante causa de morte
i) Cancros mais frequentes nos EUA
b) Tipos
Carcinomas (90%): tumor maligno desenvolvido a partir de clulas epiteliais ou
glandulares, que tende a invadir tecidos circulares originando metsteses
Sarcomas (raros): tumor maligno do osso, cartilagem, gordura, msculo, vasos
sanguneos ou tecidos moles
Leucemias e linfomas (7%)
c) Factores
Genticos e epigenticos
Ambientais e estilo de vida
d) Causas
Exgenas (carcinogneos)
o Qumicos: benzopireno, aflatoxinas, ROS (Reactive Oxygen Species)
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e) Alteraes celulares
i)
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f)
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Doena gentica
O cancro uma doena do DNA que resulta de uma massa tumoral constituda por
fibras, vasos e estroma no qual esto clulas neoplsicas
As mutaes podem levar a que importantes genes sejam perdidos ou
silenciados. As mutaes afectam dois tipos de genes:
Supressores
Proto-oncogenes
i)
Proto-oncogenes
Genes de clulas normais dos quais os
oncogenes derivam
Genes com sequencias muito similares
aos oncogenes
Regulam a proliferao celular normal e
a diferenciao celular
ii) Oncogenes
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Exemplo:
Linfoma de Burkitt
Praticamente todos os linfomas de Burkitt tm
translocaes de um fragmento do cromossoma 8
para um dos loci do gene da imunoglobulina que
se localiza nos cromossomas 2, 14 e 22. As
translocaes activam um proto-oncogene do
cromossoma 8 inserindo-o nos loci da
imunoglobulina. O proto-oncogene c-myc o
ponto de quebra na translocao do cromossoma
8 em linfomas de Burkitt. Essas translocaes
inseriram c-myc num locus de imunoglobulina
onde foi expresso de uma maneira irregular. Tal
expresso descontrolada deste gene, que codifica um factor de transcrio normalmente
induzido em resposta estimulao de factor de crescimento, suficiente para levar
proliferao celular e contribuir para o desenvolvimento do tumor.
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Leucemia
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(1) RB
(a) Regulao do ciclo celular pelo Rb
A Rb tem um papel importante
na ligao da maquinaria do
ciclo celular para a expresso de
genes necessrios durante o
ciclo celular e a sntese de DNA.
A Rb fosforilada e liga-se a
membros da famlia E2F,
reprimindo a transcrio do
gene de regulao de E2F. A fosforilao de Rb pelos complexos
Cdk4,6/ciclina D resulta na dissociao de Rb de E2F no final de G1. Assim,
E2F vai estimular a expresso dos seus genes alvo, que vo codificar
protenas necessrias ao ciclo celular.
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(b) Deleco do Rb
O desenvolvimento do retinoblastoma est associado a duas mutaes:
Perda de ambas as cpias funcionais do gene supressor de tumor Rb,
que estariam presentes em cromossomas homlogos de uma clula
diploide normal;
Segunda mutao somtica que leva perda do alelo Rb normal
restante.
A importncia do gene supressor de
tumor Rb estende-se alm do
Retinoblastoma, contribuindo para o
desenvolvimento de outros cancros.
A protena Rb um alvo-chave para
as protenas oncogenes de vrios
virus DNA de tumores, incluindo
SV40, adenovrus e papiloma vrus
humano, que se ligam a Rb e inibem
a sua actividade. Assim, a
transformao por esses vrus
resulta, em parte, de inactivao de
Rb no nvel da protena em vez da
inactivao por mutao do gene Rb.
No retinoblastoma hereditrio, uma cpia defeituosa do Rb (rb-) herdada de
um dos pais afectados. Uma segunda mutao somtica, que inactiva a nica
cpia normal (Rb+) em clulas da retina, leva ao desenvolvimento de
retinoblastoma. Em casos no hereditrios, dois genes Rb+ normais, so
herdados e o retinoblastoma desenvolve-se somente se duas mutaes
somticas inactivam ambas as cpias de Rb na mesma clula.
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(2) P53
O produto do gene p53 regula tanto a
progresso do ciclo celular como a apoptose.
O dano no DNA leva induo rpida do p53
que activa a transcrio do inibidor do p21 de
Cdk. Este inibidor bloqueia a progresso do
ciclo celular, tanto actuando como um inibidor
geral de complexos Cdk/ciclina como inibindo
a replicao de DNA pela ligao PCNA
(antignio nuclear da proliferao celular). O
ciclo celular interrompido resultante concede tempo para que o DNA seja
reparado antes de ocorrer sua replicao. A perda de p53 impede esta
interrupo no ciclo celular induzida por dano, levando a frequncias
aumentadas de nutao e a uma instabilidade geral do genoma celular. Tal
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(2) Remoo das bases alteradas seguida de substituio com DNA recmsintetizado
(a) Exciso de base
Apenas uma base reconhecida e a
DNA glicosilase elimina a ligao entre a
base azotada e a desoxirribose. No
existindo base azotada, a AP
endonuclease corta a cadeia de DNA. A
desoxirribose removida por uma
enzima e o intervalo existente
preenchido pela DNA polimerase e
posteriormente celado pela ligase.
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j)
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k) Cancro colorectal
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Aula 20
20) Morte celular
a) Tipos de morte celular
i) Apoptose: tipo de auto-destruio celular que ocorre de forma ordenada e
necessita de energia para a sua execuo, est relacionada com a manuteno da
homeostase e regulao fisiolgica do tamanho dos tecidos
ii) Necrose: processo patolgico e desordenado causado por factores que levam
leso celular irreversvel e consequente morte celular
iii) Autofagia
Degradao lisossomal de protenas e organelos
Condensao parcial da cromatina
Vacuolizao massiva do citoplasma
Doenas associadas:
o Neurodegenerativas
o Neuromusculares
o Cancro
b) Apoptose
Foi descrita em 1972. Visitar: http://www.sinauer.com/cooper5e/animation1701.html
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Papis
Desenvolvimento embrionrio
O ser humano, no incio do seu desenvolvimento embrionrio tem os dedos
das mos juntos. necessrio ocorrer a apoptose nesses locais para ocorrer
um correcto desenvolvimento.
normalmente
fragmentado em resultado do corte
da ligao entre nucleossomas. A
cromatina condensa e o ncleo
divide-se em pequenas pores.
Finalmente, a clula encolhe e acaba
estilhaada
em
fragmentos
rodeados de membrana, chamados de
corpos apoptticos.
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iv) Bioqumica
As clulas e os fragmentos apoptticos so eficientemente reconhecidos e
fagocitados tanto pelos macrfagos como pelas clulas vizinhas, sendo as clulas
que morreram por apoptose rapidamente removidas dos tecidos. Contudo, as
clulas que morrem por leso incham e sofrem lise, libertando o contedo no
espao extracelular, causando inflamao.
A remoo das clulas apoptticas medida por sinais eat me na superfcie da
clula. Estes sinais incluem a fosfatidilserina (normalmente na parte interior da
membrana), sendo esta expressa durante a apoptose na superfcie da clula,
sendo reconhecida por receptores expressos pelas clulas fagocticas
v) Famlias
(1) Caspases
Caspases: cistena, cido asprtico, protases
So, por excelncia, as protenas iniciadoras (caspases 2, 8, 9 e 10) e
executoras (caspases 3, 6 e 7) da morte celular programada, mediando os
eventos apoptticos de cerca de 100 protenas diferentes. Uma delas um
inibidor, a DNase, que quando activado responsvel pela fragmentao do
DNA. Alm disso, as caspases quebram a
lmina nuclear (fragmentao do ncleo) e
as protenas do citosqueleto, levando
disrupo do citosqueleto, formao de
bolhas de membrana e fragmentao da
clula.
Todas as caspases so sintetizadas como
inactivas, podendo apenas ser activas por
clivagem protelitica, catalizada por outras
caspases. Da, a activao de uma caspases
iniciadora leva a reaces em cadeia,
culminando nas caspases executoras e na
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(2) Bcl-2
Bcl-2: Clulas B, Linfoma
Primeiramente, o gene bcl-2 foi identificado como um oncogene que
contribua para o desenvolvimento de linfomas das clulas B.
Nos mamferos, so codificadas
cerca
de
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protenas
relacionadas com a Bcl-2
(protena), sendo divididas em
trs grupos. Alguns membros
da famlia Bcl-2 funcionam
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vii) Regulao
Um importante papel da apoptose a eliminao de clulas danificadas. Devido ao
facto de poder gerar cancro, o dano no DNA um dos principais interruptores para
a morte celular programada.
(1) P53
Nos mamferos, a via maioritria que leva
prolongao do ciclo celular em resposta a danos
no DNA mediada pela factor de transcrio p53.
As quinases ATM e CHK so activadas por erros
no DNA, fosforilando e activando a p53. Quando
h aumento de p53, so transcritos genes-alvo da
p53, tal como o inibidor de Cdk (p21) que inibe
complexos Cdk1/ciclina e Cdk2/ciclina, parando a
progresso no ciclo. Contudo, a activao da p53
pode tambm levar apoptose. A induo da
apoptose por p53 resulta, pelo menos em parte,
na activao da transcrio de genes que
codificam BH3-only proapoptotic Bcl-2 family
members, tal como a PUMA e a Noxa.
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