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BIOTECNOLOGA
1. Qu es la Biotecnologa?
2. Microorganismos utilizados en Biotecnologa.
3. Principales tcnicas empleadas en Biotecnologa.
3.1 Tecnologa del ADN recombinante o clonacin gnica.
3.2 Reaccin en cadena de la polimerasa (PCR).
3.3 Mtodo de secuenciacin de Sanger.
1. QU ES LA BIOTECNOLOGA?
Aunque con el trmino Biotecnologa se designa un conjunto de tcnicas surgidas hace poco
ms de dos dcadas, no se trata en realidad de algo nuevo: desde hace siglos, los seres humanos
han utilizado, aun sin saberlo, procesos biotecnolgicos en la elaboracin del pan, el vino, el queso y
la cerveza.
En sentido amplio, la Biotecnologa consiste en la utilizacin de seres vivos
(microorganismos, clulas animales y vegetales) para obtener o modificar un producto, o mejorar
una variedad de planta o especie animal, todo ello con fines industriales.
Como se puede deducir de la definicin, la Biotecnologa depende de la Ingeniera Gentica,
ciencia que se ocupa del conjunto de tcnicas que permiten manipular el genoma de un ser vivo.
Esta manipulacin consiste en: introducir nuevos genes en un genoma, eliminar genes ya existentes
en un genoma o modificar la informacin contenida en un gen determinado.
En la actualidad, la palabra biotecnologa se identifica, frecuentemente, con la aplicacin
industrial de la ingeniera gentica, que utiliza microorganismos modificados genticamente para
producir compuestos de gran inters para el hombre, como la insulina humana, la hormona del
crecimiento humana, interfern, vacunas, enzimas, antibiticos, etc. As mismo, la manipulacin del
genoma de organismos superiores ha hecho posible la creacin de especies de animales y vegetales
transgnicos, para mejorar o aumentar la productividad agrcola o ganadera.
2. MICROORGANISMOS UTILIZADOS EN BIOTECNOLOGA.
Los procesos industriales que utilizan los microorganismos como base para la obtencin de
productos comerciales tiles para el hombre, constituyen la llamada Microbiologa Industrial o
Biotecnologa Microbiana.
La Microbiologa Industrial tradicional emplea los microorganismos, tal y como se
encuentran en la naturaleza, para transformar algunas molculas en otras que tienen ms utilidad,
como son los productos de la fermentacin que llevan a cabo algunos microorganismos; para la
obtencin de vacunas, ...
Los microorganismos que sintetizan productos tiles para nuestra especie son varios
centenares de especies de entre las ms de 100.000 que existen en la naturaleza.
Se pueden distinguir tres grupos de microorganismos de inters industrial: las bacterias, las
levaduras y los mohos. En la siguiente tabla aparecen algunos de estos microorganismos, junto con
los productos industriales obtenidos gracias a ellos.
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Biologa. Biotecnologa
MICROORGANISMOS
PRODUCTO
Pan , cerveza, vino, etanol, bebidas destiladas (ron, brandy, whisky, ...)
Yogur
Yogur
Penicilinas
Insecticidas
L= levadura,
B= bacteria,
M= moho
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Estas enzimas, que actan como autnticas "tijeras biolgicas", cortan el ADN de forma que
en cada extremo queda un trozo de hebra monocatenaria formado por las bases de la secuencia de
reconocimiento (no todas las enzimas cortan de esta manera). Estos extremos se denominan
cohesivos o "pegajosos", ya que es por ellos por donde se pueden unir otros fragmentos de ADN
cortados por la misma enzima de restriccin, al ser sus bases complementarias.
Por ltimo, los fragmentos obtenidos se pueden separar por tamaos (segn el nmero de
pares de nucletidos que llevan) mediante electroforesis sobre geles.
Con esta tcnica, la mezcla de fragmentos de ADN se mueven sobre un gel, en el que hay
un campo elctrico, de manera que los fragmentos ms grandes se mueven ms lentamente.
Posteriormente se cortan las bandas de gel y se ponen en distintas soluciones, consiguiendo
as la separacin de los distintos fragmentos.
Lgicamente antes de fragmentar el ADN habr que obtener ste de la clula. Esto se puede
hacer de dos maneras:
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Biologa. Biotecnologa
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antibiticos y que les capacita para crecer en un medio con dicho antibitico.
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molcula de ADN. Este ADN puede proceder de una muestra de un tejido de un hospital, de un
cabello humano, de una gota de sangre o de semen en la escena del delito, de tejido de cerebro
momificado o de un mamut muerto hace 40.000 aos y conservado enterrado en el hielo.
La tcnica de la PCR es la siguiente. En primer lugar, se disean dos oligonucletidos
sintticos (de 18 a 30 nucletidos). Sus secuencias han de ser complementarias a los dos extremos
3' de la regin de ADN que se quiere amplificar. Estos oligonucletidos se utilizarn como cebadores
para la replicacin de cada hebra de ADN.
Por esta razn no se puede amplificar una regin de ADN si no se conoce la secuencias de
sus dos extremos.
La PCR se lleva a cabo en 3 etapas:
1. Desnaturalizacin. El fragmento de ADN que se desea replicar se desnaturaliza para
separar las dos hebras de la doble hlice. Esto se consigue calentando el ADN a
temperaturas elevadas, entre 68 y 95 C.
2. Templado o hibridacin. A continuacin se lleva a cabo un enfriamiento rpido (entre
37 y 65C) que permite la hibridacin de cada hebra con un oligonucletido (cebador).
3. Elongacin o replicacin. Etapa en la que la ADN polimerasa elonga los cebadores,
empleando como molde ambas hebras originales. La replicacin transcurre en sentido
5'3' a partir del extremo 3' de cada cebador, empleando como sustrato los 4 dNTPs,
hasta terminar la lectura del molde o hasta que comience una nueva etapa de
desnaturalizacin (siguiente ciclo).
Las tres etapas que se acaban de describir constituyen un ciclo de sntesis y dura unos 5
minutos.
Para conseguir una amplificacin til se requiere una sucesin de ciclos de
desnaturalizacin, hibridacin y replicacin (entre 20 y 40). Con 20 ciclos se consiguen un milln de
copias. Hoy en da se realiza de forma automtica mediante instrumentos especializados
(termocicladores).
Cuando la PCR se emple por primera vez, la ADN polimerasa utilizada en el proceso se
obtena de E. coli. Pero debido a la elevada temperatura para lograr la desnaturalizacin del ADN
bicatenario, la enzima se desnaturalizaba tambin y era preciso aadirla de nuevo en cada ciclo, lo
que encareca el proceso. El problema se resolvi utilizando la ADN polimerasa de Thermus
aquaticus, una bacteria termfila que vive en aguas termales, por lo que todas sus enzimas,
incluidas las ADN polimerasas, son funcionales a temperaturas muy elevadas.
La ADN polimerasa de esta bacteria, conocida como Taq polimerasa, es estable hasta 95
C.
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tambin
secuenciacin
didesoxi,
por
ser
necesarios
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Biologa. Biotecnologa
Esta mezcla se coloca en 4 tubos de ensayo, a cada uno de ellos se le aaden los 4 tipos de
nucletidos (dNTPs) necesarios para la sntesis de la nueva hebra de ADN. Adems a cada tubo se
aade uno solo de los didesoxirribonucletidos (ddNTP) terminadores de cadena, en una proporcin *
bien definida entre ste y el desoxirribonucletido correspondiente.
Al aadir a los tubos la ADN polimerasa, comienza la polimerizacin a partir del cebador,
pero cesa al incorporarse un ddNTP. Por ejemplo en el tubo 1, existe ddATP que se incorporar a las
cadenas que se estn sintetizando, y las bloquear. En consecuencia, todas las cadenas nuevas
contenidas en este tubo, comenzarn con el cebador en 5' y terminarn en 3' con el mismo
nucletido, en este caso el ddATP. De igual manera, en el tubo 2 (ddTTP) las cadenas terminarn
aleatoriamente en G, el tubo 3 lo harn en C y en el 4, en G.
* Se usa una cantidad baja de ddNTP, de esta manera se consigue que la interrupcin de la sntesis por la
incorporacin del didesoxirribonucletido tenga lugar no inmediatamente sino a una cierta distancia, variable
aleatoriamente, del cebador.
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ACTIVIDADES
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Biologa. Biotecnologa
8.- Las reacciones de secuenciacin de un fragmento de ADN segn el mtodo de Sanger son las
que se indican en el dibujo
Realiza la secuenciacin
del fragmento en cuestin
ACTIVIDADES P.A.U.
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