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Directora:
Elena E. Stashenko, Qumica, Ph.D
DEDICATORIA
Quiero dedicarles este triunfo a las tres mujeres que ms quiero en el mundo:
A mi madre Leticia Sarmiento, que con tanto sacrificio me cri y me sac adelante
junto con sus dems hijos. Porque me apoy y me dio toda su confianza de una
manera incondicional.
AGRADECIMIENTOS
Tambin quiero darle mis agradecimientos al Dr. Jairo Rene Martnez, por los
aportes hechos en pro de mejorar mis conocimientos.
Quiero adems agradecer a mi querido pueblo colombiano, porque con una muy
pequea parte de los impuestos tan injustos que pagan (conseguidos con el sudor
de sus frentes), pude llevar a cabo mis estudios universitarios.
ACRNIMOS
AE
Aceite(s) esencial(es)
FID
GC
GC/FID
GC/MS
Gas Chromatography/Mass
Spectrometry (Cromatografa de
HPLC
HP
HP-5
5%-Fenil-poli (metilsiloxano)
HRGC
HRGC/FID
HRGC/MS
HS-SPME
IK
Istd
m/z
Relacin masa/carga
MS
MSD
NMR
PDMS
Poly(dimethylsiloxane) [Poli(dimetilsiloxano)]
PAHs
PCBs
P&T
RDA
S-HS
SFE
SDE
SPME
TIC
tR
Tiempo de retencin
VOCs
TABLA DE CONTENIDO
INTRODUCCIN
19
1.
MARCO TERICO
23
1.1.
23
1.1.1.
25
25
26
1.1.2.
31
31
33
1.1.3.
35
35
37
1.2.
ANLISIS INSTRUMENTAL
42
1.2.1.
42
1.2.2.
43
1.2.3.
44
1.3.
Swinglea glutinosa
45
2.
PARTE EXPERIMENTAL
47
2.1.
48
2.2.
48
2.3.
49
2.4.
Obtencin de extractos
50
2.4.1.
50
2.4.2.
52
2.5.
53
2.5.1
HS-SPME
53
2.5.2
54
2.6.
Anlisis instrumental
55
2.6.1.
Tcnica GC/FID
55
2.6.2.
Tcnica GC/MS
57
2.6.3.
Espectros de masas
58
3.
ANLISIS DE RESULTADOS
59
3.1.
59
3.1.1.
59
3.2
68
3.2.1
fruto del Limn Africano, obtenidos por dif erentes mtodos de extraccin.
3.2.2.
68
72
3.3.
76
3.4.
Anlisis por MS
84
4.
CONCLUSIONES
98
5.
RECOMENDACIONES
101
6.
BIBLIOGRAFA
102
LISTA DE TABLAS
Tabla 2. Rendimiento del AE, obtenido por HD-MW, de la cscara del fruto de la
Swinglea glutinosa.
LISTA DE FIGURAS
Figura 12. Perfiles cromatogrficos tpicos de los extractos de la cscara del fruto
de la Swinglea glutinosa, obtenidos por SFE, SDE y HD-MW, respectivamente.
Columna HP-5 (60 m). Split 1:30. MSD. La identificacin de los componentes
aparece en la Tabla 3.
Figura 13. Perfiles cromatogrficos tpicos de los extractos de las hojas de la
Swinglea glutinosa, obtenidos por SDE y SFE, respectivamente. Columna HP-5
(60 m). Split 1:30. MSD.
Tabla 5.
Figura 14. Perfiles cromatogrficos tpicos, de los voltiles de la hoja de la
Swinglea glutinosa, obtenidos por diferentes mtodos headspace. Columna HP-5.
Split 1:30. Detectores FID y MSD, respectivamente. La identificacin de los
componentes aparece en la Tabla 7.
Figura 15. Perfiles cromatogrficos tpicos, de los voltiles de la cscara del fruto
de la Swinglea glutinosa, obtenidos por diferentes mtodos headspace. Columna
HP-5. Split 1:30. Detectores FID y MSD, respectivamente. La identificacin de los
componentes aparece en la Tabla 7.
Figura 16. Perfiles cromatogrficos tpicos, de los voltiles de la fase vapor del
aceite esencial de la cscara del fruto de la Swinglea glutinosa, obtenidos por
mtodos headspace. Columna HP-5. Split 1:30. Detectores FID y MSD,
respectivamente. La identificacin de los componentes aparece en la Tabla 7.
Figura 17. Distribucin de las principales familias de compuestos, en el
headspace del aceite esencial de la cscara del fruto de la Swinglea glutinosa,
aisladas por HS-SPME, en funcin del tiempo de exposicin de la fibra (PDMS,
100 m).
Figura 18. Espectro de masas del -pineno.
LISTA DE ESQUEMAS
TTULO
OBTENCIN POR DIFERENTES TCNICAS DE EXTRACCIN DE LOS METABOLITOS
SECUNDARIOS VOLTILES DE LA Swinglea glutinosa (Fam. Rutcea) Y SU ANLISIS POR
CROMATOGRAFA DE GASES*
AUTOR
Jos Domingo Medina Sarmiento**
PALABRAS CLAVES:
Swinglea, glutinosa, metabolitos secundarios.
RESUMEN
La Swinglea glutinosa es un arbusto nativo del Sur Oeste de Asia, introducido y cultivado en
Colombia para hacer cercas vivas. Aunque esta planta no es autctona, se ha adaptado
completamente a las condiciones geobotnicas del pas. Es un arbusto espinoso, de follaje
brillante, compacto y de flores blancas, parecidas a los azahares. La fruta presenta un tamao
promedio de 10-12 cm de largo, y adems no es comestible. En sus tallos se han encontrado
alcaloides acridnicos, que presentan actividad antiplasmodial sobre Plasmidium falciparum.
Esta investigacin se centr en la determinacin de la composicin qumica del aceite esencial
(AE) y extractos del fruto y hojas de la Swinglea glutinosa, utilizando cromatografa de gases con
detectores de ionizacin en llama y espectromtrico de masas. El presente trabajo forma parte de
la lnea de investigacin relacionada con la caracterizacin de extractos y aceites esenciales de
plantas tropicales.
Los extractos fueron obtenidos mediante diferentes tcnicas, a saber: destilacin con vapor /
extraccin con solvente simultnea, extraccin con fluido supercrtico e hidrodestilacin asistida por
la radiacin de microondas. Para el anlisis de la fraccin voltil se practic microextraccin en
fase slida en el modo headspace y headspace esttico.
Los principales componentes presentes en el AE, extractos y fracciones voltiles de la Swinglea
glutinosa fueron el -pineno, el sabineno, el -pineno, el biciclosesquifelandreno, el limoneno, el
nerolidol, el germacreno B y el -cariofileno. Las cantidades relativas de estos compuestos varan
de acuerdo con la tcnica de extraccin utilizada.
La determinacin de la composicin qumica de los metabolitos secundarios voltiles presentes en
este arbusto, se realiz con base en los ndices de Kovts determinados en columnas capilares
con fases estacionarias polar y apolar, espectros de masas de los componentes y, en algunos
casos, usando sustancias patrn disponibles.
*Tesis
**Facultad de ciencias, Escuela de qumica, Elena Stashenko
TITLE
OBTAINING FOR DIFFERENT TECHNIQUES OF EXTRACTION OF THE VOLATILE
SECONDARY METABOLITES OF THE Swinglea glutinosa (Fam. Rutaceae) AND THEIR
ANALYSIS FOR GAS CHROMATOGRAPHY *
AUTHOR
Jos Domingo Medina Sarmiento * *
KEY WORDS
Swinglea, glutinosa, secondary metabolites.
ABSTRACT
The Swinglea glutinosa is a native shrub of the South West of Asia, introduced and cultivated in
Colombia to make living fences. Although this plant is not native, has adapted completely to the
geobotanycs conditions of the country. It is a thorny shrub, shining foliage, compact and of white
flowers, seemed to the orange blossoms. The fruit presents an average of 10-12 cm in length, and
in addition it is not eatable. In their stems have been acrydinics alkaloids, that they present
antiplasmodial activity on Plasmidium falciparum.
This investigation was centered in the determination of the chemical composition of the essential oil
(AE) and extracts of the fruit and leaves of the Swinglea glutinosa, using gas chromatography with
flame ionization detector and mass spectrometry. The present work forms part of the investigation
line related with the characterization of extracts and essential oils of tropical plants.
The extracts were obtained by means of different techniques, that is: simultaneous distillationextraction, supercritical fluid extraction and microwave-assisted hydro-distillation. For the analysis
of the volatile fraction it was practiced headspace-solid-phase-micro-extraction and static
headspace.
The main present components in the AE, extracts and volatile fractions were the -pinene, the
sabinene, the -pinene, the bicyclosesquiphellandrene, the limonene, the nerolidol, the germacrene
B and the -cariyophyllene. The relative amounts of these compounds vary of agreement with the
technique of used extraction.
The determination of the chemical composition of the secondary metabolites volatile present in this
shrub, was made with base in the indexs Kovts of certain in capillary columns with polar stationary
phases and apolar, spectra of mass of the components and, in some cases, using available
substances pattern.
*Tesis.
**Facultad de Ciencias, Escuela de Qumica, Elena Stashenko.
INTRODUCCIN
19
22
1. MARCO TERICO
Los
metabolitos
secundarios
voltiles
son
compuestos
orgnicos
que
23
CO 2
Fotosntesis
Hidratos de carbono
(aldosas, cetosas, etc.)
Piruvato
Compuestos fenlicos
AcetilCoA
Geraniol
Farnesol
Monoterpenos Sesquiterpenos
cido shiqumico
cidos tricarboxlicos
Geranil geraniol
Escualeno
Diterpenos
Triterpenos
Carotenoides
Aminocidos
alifticos
Productos secundarios,
que contienen nitrgeno
Los componentes (en este caso metabolitos secundarios voltiles), obtenidos por
tcnicas extractivas y de headspace, se les llaman extractos y fracciones
voltiles, respectivamente. Sin embargo, a la mezcla de sustancias obtenida por
hidrodestilacin, raspado y prensado en el caso de ctricos, se le da el nombre de
aceite esencial (AE). A continuacin, se describen algunas de las tcnicas
utilizadas en la obtencin de aceites esenciales, extractos y fracciones voltiles.
24
voltiles obtenidas de plantas por destilacin por arrastre con vapor de agua o
hidrodestilacin, que contienen las sustancias responsables de la fragancia (olor)
de las plantas.
25
composicin
aceites
de
los
esenciales
en
la
planta,
son:
condiciones
Las hojas, las flores y otras partes delgadas y no fibrosas de la planta se someten
al proceso de destilacin sin ningn tratamiento previo, mientras que las races,
los tallos y las plantas leosas se deben cortar en trozos pequeos, aumentando
26
a). Destilacin
con
vapor
seco:
el
vapor
de
agua
ligeramente
Esta tcnica es muy sencilla, pero debe trabajarse con mucha precaucin,
ya que durante los procesos de destilacin con vapor, el aceite se somete a
28
29
En este sistema, el material vegetal junto con una pequea cantidad de agua se
coloca en un baln (A), cuya capacidad vara entre 0.1 y 5 L, mientras que el
solvente (2-10 mL) se adiciona en otro baln (B) (ver Figura 5), ambos estn
conectados por vas diferentes al condensador por donde circula una mezcla
refrigerante (0-10C). Los balones se calientan separadamente (cada uno a
31
32
Los fluidos usados en SFE son: dixido de carbono (CO 2), agua (H2O), etano
(C2H6), eteno (C2 H4), propano (C3H8), xenn (Xe), xido nitroso (N2O). El CO 2 es
de uso ms frecuente e industrial.
Entre las ventajas de la SFE, se encuentran las siguientes: los extractos obtenidos
tienen mayor frescura y aroma natural, se usan temperaturas moderadas y se
evita la degradacin trmica de componentes; el extracto est libre de solvente,
33
34
Figura 6. Extractor Soxhlet de alta presin (J&W Scientific, Folsom, CA, USA).
35
Algunos
El anlisis por headspace esttico (S-HS) ahorra tiempo y costos, debido a que el
muestreo de los voltiles se realiza directamente en el espacio de cabeza del
36
extraccin lquido-lquido,
extraccin en fase slida y extraccin con fluido supercrtico. Sin embargo, estos
mtodos presentan varios inconvenientes, entre los cuales se destacan sus
excesivos costos y tiempos de preparacin de la muestra prolongados [7].
37
como
hidrocarburos
aromticos,
compuestos
orgnicos
voltiles
38
39
40
Tabla 1. Anlisis comparativo de diferentes tcnicas de extraccin y de headspace, empleadas en el desarrollo del presente
trabajo.
Anlisis e
Tcnica
HD-MW
SDE
SFE
S-HS
HS-SPME
Ventajas
Desventajas
identificacin
GC/FID/MS;
ndices de
Kovts
GC/FID/MS;
ndices de
Kovts
GC/MS;
ndices de
Kovts
GC/MS;
(S-HS)GC/FID
GC/MS
ismericas
(monoterpenos,
sesquiterpenos,
etc.).
Las
fases
42
La espectrometra de masas es un
El MS es una grfica que relaciona las masas de los iones especficos (ms
exactamente, valores de la relacin masa/carga del ion, m/z) con sus respectivas
concentraciones en la corriente inica total (TIC) producida por la ionizacin y la
fragmentacin de las molculas del analito en la cmara de ionizacin.
44
1.3.
Swinglea glutinosa
Existe slo un (1) reporte sobre el estudio qumico de este arbusto, donde se
menciona la presencia de alcaloides de la acridnona en el tallo (Figura 9), que
poseen la actividad antiplasmodial. Los compuestos fueron caracterizados, por
resonancia magntica nuclear de protones (1 H NMR), como: (1) 1,3,5-trihidroxi2,8-bis(3-metilbut-2-enil)-10-metil-9-acridinona, (2) 5-hidroxinoracronicinona, (3)
1,3,5-trihidroxi-4-metoxi-2-(3-metil-2-eni l)-10-metil-9-acridinona, (4) 1,3,5-trihidroxi4-metoxi-10-metilacridinona [36].
45
CH 3
H 3C
O
O
OH
OH
CH3
CH 3
O
N
OH
N
OH
OH
CH3
CH3
CH 3
CH3
2
_
1
_
HO
CH3
OH
CH3
N
OH
OH
CH 3
OH
N
OH
O
CH 3
CH3
O
CH3
4
_
3_
46
2. PARTE EXPERIMENTAL
por
47
2.1.
2.2.
Reino: PLANTAE;
Divisin: MAGNOLIOPHYTA;
Clase: MAGNOLIOPSIDA;
Subclase: ROSIDAE;
Orden: SAPINDALES;
48
Familia: RUTACEAE;
Genero: Swinglea;
Especie: glutinosa Merr.;
Nombre comn: Swinglea glutinosa Merr.
2.3.
49
Tabla 2. Rendimiento del AE, obtenido por HD-MW, de la cscara del fruto de la Swinglea
glutinosa.
Peso del material
Rendimiento, %
vegetal, g
obtenido, g
(p/p)
200
0.345
0.173
225
0.392
0.174
250
0.440
0.176
0.176 0.004%*
Valor promedio
50
51
Los dos balones (A y B) se conectaron al cuerpo del equipo SDE, que estaba
conectado, a un dedo refrigerante y a un condensador. Para el enfriamiento se
utiliz un bao circulatorio Fisher Scientific (Isotemp, Refigerated Circulator
Model 901).
52
2.5.
2.5.1 HS-SPME
La extraccin HS-SPME se realiz tanto para cscara, hoja, como para aceite
esencial de la cscara, obtenido por HD-MW, de la siguiente manera:
53
2.5.2
Esta tcnica, al igual que HS-SPME, fue usada para anlisis de voltiles de
cscara, hojas y aceite esencial de la cscara. El procedimiento se realiz de la
siguiente manera:
54
Las siguientes fueron las condiciones del sistema: Temperatura del horno 70o C;
temperatura del loop 100oC; temperatura de lnea de transferencia 110oC y un
tiempo de equilibrio de 15 min. El automuestreador fue conectado a un
cromatgrafo de gases con detector de ionizacin en llama.
2.6.
Anlisis instrumental
55
Para la separacin de las sustancias se utiliz una columna capilar apolar, HP-5
(Hewlett-Packard) de 30 m x 0,25 mm, D.I. x 0.25 m, df , con fase estacionaria de
5%-fenil-poli(metilsiloxano).
La temperatura del horno se program de 40 C (10 min) hasta 250 C (30 min),
con velocidad de calentamiento de 5C min-1, as:
250 C (30 min)
Detector:
250
5 C min -1
Inyector:
250
40 C (10 min)
El gas de arrastre empleado fue helio (99,9995%, Aga-Fano S.A), con una presin
de entrada en la cabeza de la columna de 78 kPa y una velocidad lineal de 26
cm/s-1. El gas auxiliar fue nitrgeno (99,995%, Aga-Fano S.A), con una velocidad
de flujo de 30 mL min-1. Para el FID, los gases de combustin fueron aire (300
mL/min) e hidrgeno (30 mL/min).
Para cada anlisis se inyect 1 L de cada uno de los extractos obtenidos en las
extracciones antes mencionadas. Para la inyeccin de las muestras se utilizaron
jeringas de 10 L (Hamilton). La inyeccin se llev a cabo en el modo split (1:30).
56
57
Los espectros de masas fueron obtenidos por impacto de electrones con energa
de 70 eV. Los compuestos voltiles se identificaron tanto por comparacin
automtica de sus MS con los espectros de las bases de datos del equipo,
WILEY138 (138.000 compuestos) y NBS75K (75.000 espectros), como por medio
del anlisis manual de las respectivas rutas de fragmentacin. Adems, para los
extractos obtenidos por SDE, SFE y HD-MW se utilizaron los ndices de Kovts
(Ik ), que se determinaron con respecto a una mezcla patrn de hidrocarburos
lineales, C 9-C28, analizada bajo a las mismas condiciones operacionales, que se
usaron para los extractos.
58
3.
ANLISIS DE RESULTADOS
59
10
44
Split 1:30
15+16
17
29
37
19
7
30
13
11
21
15.00
9+10
25.00
21
15+16
48
39
36
20.00
35
30.00
29
35
36
35.00
t (min)
44
37
13
47
30+31
17
Splitless
19
39
22
12
48
45
51
1 2 3
23
25
32
26
15.00
20.00
9 10
25.00
30.00
35.00
15
t (min)
44
16+17
29
o n -C o l u m n
19
37
30+31
12
11
7
5
15.00
36
48
21
22
35
39
47
51
20.00
25.00
30.00
35.00
t (min)
60
61
Inyeccin splitless
62
Inyeccin on-column
-pineno (30.8%),
Este modo de inyeccin permiti obtener un perfil cromatogrfico con los picos
bien resueltos, que puede verse en la Figura 10. En este modo de inyeccin la
introduccin del extracto es directa sobre la columna, evitando as la prdida o
discriminacin de los analitos por su voltilidad.
Uno de los inconvenientes, que se presenta con este modo de inyeccin, consiste
en la posible contaminacin y el deterioro de la columna anlitica, puesto que la
jeringa especial ingresa directamente en la columna cromatogrfica, y las
partculas no voltiles e interferencias puedan quedarse en ella. Para evitar sto,
se hace el uso de una precolumna. Adems, la inyeccin on-column se lleva a
63
64
H3C
H3C
OH
OH
CH 3
CH3
CH 3
CH 3
H3C
CH 3
H3C
CH 3
H 3C
5
H
CH2
CH3
CH3
CH2
CH 2
H3C
H3C
CH2
CH2
H 3C
H3 C
CH3
CH3
10
11
CH 3
H 3C
CH 3
CH3
CH3
H 3C
12
CH3
H3 C
13
CH3
16
H 3C
CH2
15
CH2
H3 C
CH3
H 3C
H3C
14
CH 3
CH 2
CH3
CH3
CH3
H3C
17
CH2
18
65
H 3C
CH3
19
CH3
CH3
HO
H3C
CH3
OH
H
O
CH2
CH2
H3 C
H3 C HO
22
21
20
CH3
H3C
CH3
H3C
CH 3
H 3C
H3C
H 3C
OH
CH3
23
CH3
OH
CH3
OH
H3C
CH3
CH2
CH3
H3C
24
CH3
H 3C
25
CH3
26
CH3
27
CH3
CH3
H3C
OH
H3C
H3 C
OH
OH
H3C
28
OH
CH3
H3C
29
H3 C
CH3
30
CH3
31
CH3
CH 3
H3 C
OH
OH
H3C
CH3
32
H2 C
CH3
H3 C
H 3C
CH3
H2 C
CH3
33
35
66
H3 C
H3C
H3C
CH3
CH3
H2 C
CH3
H3 C
CH2
H3 C
H2C
CH3
H2 C
H2 C
36
38
37
CH2
H3C
CH3
CH3
CH3
H3C
CH3
H
H
CH3
H3C
39
40
CH3
H 3C
CH2
41
CH 3
CH3
CH3
H
H 3C
H3C
H 2C
H3 C
H3 C
CH3
H3 C
CH3
H3 C
43
42
44
CH3
H2 C
H
H3 C
OH
CH3
CH3
CH2
CH3
H3 C
CH3
CH3
CH3
48
H3C
OH
CH3
H3C
47
51
67
3.2
68
44
10
SFE
Istd
9
37
6
11
15
17
15.00
48
35
20.00
25.00
38 39
45
30.00
47
35.00
51
t (min)
9 10
44
SDE
15
37
17
5
7
11
13
Istd
19
15.00
22
20.00
30
29
39
35
25.00
45
30.00
48
35.00
51
t (min)
9 10
H D -M W
44
15
17
29
13
11
5
15.00
Istd
30
19
20.00
39
35
21
25.00
37
30.00
45
48
35.00
51
t (min)
Figura 12. Perfiles cromatogrficos tpicos de los extractos de la cscara del fruto de la
Swinglea glutinosa, obtenidos por SFE , SDE y HD-MW, respectivamente. Columna HP-5
(60 m). Split 1:30. MSD. La identificacin de los componentes aparece en la Tabla 3.
69
Cantidad relativa, %
Ik
HP-5
Compuesto
931
931
-Tujeno
SDE
0.8
939
940
-Pineno
10.4
5.0
12.0
953
954
Canfeno
0.30
0.3
976
977
Sabineno
11.5
9.3
11.0
10
980
980
-Pineno
51.9
30.4
49.6
11
991
990
-Mirceno
0.4
0.7
13
1018
1020
0.1
14
1026
1026
-Terpineno
p-Ocimeno
0.3
15
1031
1031
Limoneno
3.4
2.9
4.4
16
1031
1032
0.9
0.9
1.2
17
1033
1033
-Felandreno
1.8-Cineol
1.2
1.6
3.0
19
1062
1060
0.2
1.4
20
1068
1068
-Terpineno
trans-Tujenol
0.1
21
1088
1086
-Terpinoleno
0.1
22
1098
1099
Linalol
0.2
28
1165
1167
Borneol
0.1
29
1177
1177
Terpinen-4-ol
0.6
2.7
30
1189
1190
-Terpineol
1.0
1.2
35
1340
1340
-Elemeno
0.2
1.2
0.5
37
1418
1419
-Cariofileno
2.9
8.1
1.5
38
1434
1437
-Sesquifencheno
0.1
0.3
39
1437
1439
-Gurjuneno
0.3
0.4
0.2
44
1487
1487
Biciclosesquifelandreno
8.4
32.8
8.1
45
1525
N.I., C15H24
0.4
47
1534
1534
Nerolidol
0.3
48
1556
1554
Germacreno B
0.5
2.7
0.4
51
1576
1576
Espatulenol
1.3
52
1643
N.I., C15H24
0.7
N.I. No identificado;
* ndices de Kovts, determinados experimentalmente.
70
SFE
-
HD-MW
0.1
0.4
Para el caso del extracto, obtenido por SFE, el biciclosesquifelandreno (32.8%) fue
el componente mayoritario, seguido del -pineno (30.4%), el sabineno (9.3%), el cariofileno (8.1%), el -pineno (5.0%) y el limoneno (2.9%).
Los extractos, obtenidos por HD-MW y SDE, tuvieron una composicin similar,
destacndose la recuperacin de la fraccin altamente voltil por estas dos
tcnicas; por SFE, se extrajo una mayor cantidad de compuestos menos voltiles,
i.e. sesquiterpenos y sus anlogos oxigenados, tal como se puede apreciar en la
Tabla 4.
Cantidad relativa, %
SDE
HD-MW
SFE
Monoterpenos
hidrocarbonados
80.2
80.8
48.4
Monoterpenos
oxigenados
3.1
3.9
1.6
Sesquiterpenos
11.8
10.2
43.2
Sesquiterpenos
oxigenados
1.2
0.4
4.3
71
72
47
44
SDE
Istd
37
11
46 48
15
19
15.00
35
20.00
41
25.00
51
30.00
44
t (min)
47
SFE
Istd
51
48
37
46
35
15.00
20.00
25.00
49
41
53
54
30.00
t (min)
Figura 13. Perfiles cromatogrficos tpicos de los extractos de las hojas de la Swinglea
glutinosa, obtenidos por SDE y SFE, respectivamente. Columna HP-5 (60 m). Split 1:30.
MSD. La identificacin de los componentes aparece en la Tabla 5.
73
Pico N
(Figura12)
6
Ik
terico
Ik
HP-5
939
940
-Pineno
25.8
2.55
976
977
Sabineno
0.2
10
980
980
-Pineno
0.5
0.1
11
991
990
-Mirceno
0.8
0.1
15
1031
1031
Limoneno
2.3
0.2
16
1031
1032
-Felandreno
0.9
0.3
19
1060
1060
-Terpineno
0.8
0.2
35
1340
1340
-Elemeno
1.2
0.6
37
1418
1419
-Cariofileno
3.7
3.6
38
1434
1437
-Sesquifencheno
0.2
0.3
39
1434
1439
Gurjuneno
0.1
0.1
40
1443
1443
-Farneseno
0.2
0.2
41
1440
1454
-Humuleno
0.8
0.6
43
1479
1479
-Amorfeno
0.6
0.2
44
1487
1487
Biciclosesquifelandreno
17.9
26.1
45
1525
N.I., C15H24
0.6
46
1530
N.I., C15H24
3.1
3.2
47
1534
1534
Nerolidol
35.5
42.9
48
1556
1554
Germacreno B
2.8
4.6
49
1560
N.I., C15H24
1.3
1.6
50
1567
N.I., C15H24
0.5
0.7
51
1576
1576
Espatulenol
1.4
6.7
52
1643
N.I., C15H24
1.1
2.6
53
1703
N.I., C15H24O
tr
1.4
54
1732
N.I., C15H24O
tr
0.7
Compuesto
N.I. No identificado;
* ndices de Kovts determinados experimentalmente.
74
Cantidad relativa, %
SDE
SFE
Tabla 6.
Cantidad relativa, %
Familias de compuestos
SDE
SFE
Monoterpenos hidrocarbonados
31.3
3.4
Sesquiterpenos
33.5
44.8
Sesquiterpenos oxigenados
37.0
51.8
75
76
Tabla 7.
Composicin qumica de los metabolitos secundarios voltiles de la Swinglea glutinosa, aislados por mto dos
headspace.
Pico N
(Figuras14-16)
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
*
16
*
17
18
19
20
21
22
23
24
Ik
terico
851
859
867
880
931
939
953
961
976
980
991
1005
1018
1026
1031
1031
1033
1050
1062
1068
1088
1098
1098
1117
Compuestos
(Z)-3-Hexen-1-ol
(Z)-2-Hexen-1-ol
1-Hexanol
Acetato de isoamilo
-Tujeno
-Pineno
Canfeno
Benzaldehdo
Sabineno
-Pineno
-Mirceno
-Felandreno
-Terpineno
p-Ocimeno
Limoneno
-Felandreno
1,8-Cineol
trans--Ocimeno
-Terpineno
trans-Tujanol
-Terpinoleno
Linalol
Oxido de linalol
Alcohol fenchlicol
Hoja
S-HS
HS-SPME
0.2
92.7
14.1
0.8
0.1
1.6
0.3
0.4
1.0
0.4
1.1
0.3
-
Cantidad relativa, %
Cscara
S-HS
HS-SPME
0.3
0.3
18.3
19.1
0.55
0.4
23.3
18.5
51.2
40.8
0.33
0.9
0.1
<0.01
<0.01
4.2
5.1
0.1
1.5
0.5
<0.01
0.2
0.1
<0.01
0.1
<0.01
<0.01
-
AE de la cscara
S-HS
HS-SPME
<0.01
<0.01
0.1
<0.01
0.2
0.3
19.1
13.5
0.57
0.6
<0.01
30.0
20.7
38.6
26.7
0.9
<0.01
0.7
0.4
2.1
0.2
7.3
9.0
0.9*
7.1*
0.2
-
0.1
3.3
<0.01
1.0
0.4
0.1
<0.01
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
39
40
41
42
43
44
45
46
47
48
49
50
51
52
1121
1140
1140
1165
1177
1189
1193
1205
1255
1340
1391
1418
1434
1437
1443
1440
1477
1479
1487
1534
1556
1576
-
cis-p-2-Meten-1-ol
trans-p-2-Meten-1-ol
Sabinol
Borneol
Terpinen-4-ol
-Terpineol
cis-Piperitol
trans-Piperitol
Geraniol
N.I., C15H24
-Elemeno
-Elemeno
-Cariofileno
-Sesquifencheno
-Gurjuneno
-Farneseno
-Humuleno
-Muuroleno
-Amorfeno
Biciclosesquifelandreno
N.I., C15H24
N.I., C15H24
Nerolidol
Germacreno B
N.I., C15H24
N.I., C15H24
Espatulenol
N.I., C15H24
0.4
0.7
0.4
1.8
-
5.1
14.2
1.1
0.5
0.6
1.5
0.8
0.7
52.7
0.6
3.8
2.6
-
0.2
0.4
0.1
0.8
-
<0.01
<0.01
0.6
0.1
3.1
0.1
0.2
6.9
0.3
0.2
-
0.6
0.1
0.1
0.1
0.3
-
0.1
0.1
<0.01
0.1
4.8
1.9
0.1
<0.01
<0.01
<0.01
0.4
0.1
1.0
0.1
<0.01
<0.01
0.1
0.1
0.1
3.8
0.1
0.1
0.1
0.1
<0.01
<0.01
<0.01
<0.01
79
S-HS
(9+10)
44
15
10
37
35
20
30
40
t (min)
44
37
HS-SPME
Istd
35
10
15.00
20.00
47
48
41
16
18
25.00
30.00
35.00
40.00
t (min)
(9+10)
15
S-HS
44
37
7
11
35
17
10
20
30
40
t (min)
10
44
6
HS-SPME
9
37
15
16
35
11
5
14.00
17
18.00
36
22.00
26.00
30.00
38
39
48
34.00
t (min)
Figura 15. Perfiles cromatogrficos tpicos, de los voltiles de la cscara del fruto de la
Swinglea glutinosa, obtenidos por diferentes mtodos headspace. Columna HP-5. Split
1:30. Detectores FID y MSD, respectivamente. La identificacin de los componentes
aparece en la Tabla 7.
81
(9+10)
12
17
15
11
S-HS
44
29
19
37
35
10
20
30
40
t (min)
10
44
6
9
15
17
16
19
HS-SPME
29
13
(30+31)
37
21
35
7
5
1 34
15.00
22
12
18 20
20.00
25
28
36
32
25.00
30.00
39
45
48
47
35.00
t (min)
Figura 16. Perfiles cromatogrficos tpicos, de los voltiles de la fase vapor del aceite
esencial de la cscara del fruto de la Swinglea glutinosa, obtenidos por mtodos
headspace. Columna HP-5. Split 1:30. Detectores FID y MSD, respectivamente. La
identificacin de los componentes aparece en la Tabla 7.
82
100
Monoterpenos
Cantidad relativa, %
90
Monoterpenos oxigenados
Sesquiterpenos
30
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0
5
15
45
60
120
MS de monoterpenos hidrocarbonados
relativas
de
algunos
picos,
debido
que
las
energas
-Pineno
85
93
100
Abundancia, %
80
60
40
77
121
20
105
53
39
0
30
40
50
136
67
60
70
80
90
100
110
120
130
140
.
.
-CH3
. .
-CH3 , -H
C 8H9+
-C2 H2
-Pineno
. .
C6 H7+
-CH3 , -H
m/z 77 (31%)
Ruptura allica
-C3 H7
+
m/z 93 (100%)
-2H
+
m/z 91 (40%)
86
C6H 7+
m/z 79 (28%)
m/z
MS de monoterpenoles
hidrocarbonados
correspondientes.
Tpicamente,
los
iones
-Terpineol
En el espectro de masas (MS) del -terpineol (Figura 19) no aparece la seal del
in molecular M+. en m/z 154; sin embargo, la aparicin de los iones (M-CH3)+ en
139 (15%), (M-H2O)+ en m/z 136 (88%) y el (M-H2O-CH3)+ en m/z 139 (121%),
indica su formacin inicial y permite elucidar el respectivo peso molecular. El pico
de base en el espectro del -terpineol corresponde al fragmento oxigenado
C3 H7O + en m/z 59 (100%), que se produce por una ruptura del enlace exocclico
.
87
59
93
100
121
136
Abundancia, %
80
60
81
40
67
43
20
107
53
0
30
40
50
60
70
80
90
100
110
120
130
140
150
m/z
+.
CH3
RDA
CH3
-H
CH
OH
2
CH
m/z 71 (11%)
-CH3
H3C
H
-H2O
m/z 67 (24%)
m/z 68 (17%)
(M-CH3-H2O)
OH
+
C5H7
-CH3
CH
3
+.
CHH333
+.
H2C
-H2O
OH
H3C
RDA
CH3
H3
H3C
CH3
3C
H2
+.
CH
2
3
-C3H7
CH2
-H2
-Terpineol
H3C
OH
Ruptura
3CH
-CH3
C
CH3
+
CH3C=O
H3
m/z 43 (23%)
m/z 59 (100%)
88
+
m/z 93 (97%)
+
m/z 91 (18%)
MS de sesquiterpenos
Biciclosesquifelandreno
89
161
100
Abundancia, %
80
60
105
40
91
119
81
20
204
133
41
55
40
67
60
147
80
100
120
140
160
180
m/z
200
CH3
CH3
H3 C
RDA
RDA
2C
CH 3
H
+.
CH3
H3C
+2
CH
H2C
+
m/z 133 (15%)
-C3H7
H2 C
H 2C
H3 C
+
m/z 161 (100%)
CH3
CH3
RDA
H 2C
CH2
H 2C
+
m/z 119 (27%)
RDA
H 2C
+
CH 2
CH2
m/z 79 (20%)
RDA
+
CH2
H2C
m/z 91 (34%)
90
H2
H2C
MS de sesquiterpenoles
Nerolidol
91
69
100
93
Abundancia, %
80
60
107
41
40
136
81
161
55
121
20
189
148
0
40
60
80
100
120
177
140
160
204
180
200
220
m/z
+.
CH3
(b)
+.
CH 3
CH 2
CH2
CH2
H2
CH
CH2
H2
-H2O
CH2
H
H 3C
CH3
H3C
CH3
-CH
CH3
CH 3
CH2
CH 2
+.
+
H3C
m/z 189 (8%)
Ruptura
H3C
(b) allica
OH
C
Ruptura
allica
RDA
(a)
H3 C
222
H 3C
Nerolidol
H3+
C
-C2H4
H3C
H3C
+ CH3
m/z 41 (40%)
CH3
m/z 69 (100%)
Ruptura
allica
(a)
+
OH
-C2H4
CH2
H3C
m/z 71 (44%)
H 3C
CH3
CH3C=O
m/z 43 (30%)
92
-C 3H 7
-2H
CH2
m/z 67 (27%)
m/z 55 (26%)
H3+
C
H3 C
CH2
H 2C
CH 3
M+. m/z
-CH3
CH2
+
m/z 161 (35%)
CH3
+.
CH3
CH3
CH 2
CH 3
-C5H8
-C3H7
H3C
CH 3
+
m/z 93 (89%)
+
m/z 91 (17%)
93
B
A
18.90
19.10
19.30
19.50
19.70
t (min)
Para verificar que hay varios componentes que estn co-eluyendo, se toma el
espectro de masas al inicio, en el centro y al final de la banda cromatogrfica, para
observar si los espectros de masas en cada uno de estos puntos, son idnticos o
no. Por ejemplo, se tomaron los espectros de masas en los puntos A, B y C, del
pico cromatogrfico, que se puede observar en la Figura 22. Los tres espectros de
masas eran diferentes (ver Figura 23), confirmando que s se present co-elucin
parcial de tres componentes.
94
Abundancia, %
93
68
100
80
60
79
121
107
40
20
39
40
136
53
60
80
100
120
m /z
140
93
100
Abundancia,%
B
80
60
40
77
20
43
69
55
40
60
Abundancia,%
108
80
100
120
140
43
139
93
71
40
m/z
154
81
60
55
125
20
0
121
108
100
80
136
40
60
80
100
120
140
160
m/z
Figura 23. Espectros de masas tomados en los puntos A, B, C del pico cromatogrfico
que eluye a tR =18.9-19.5 min en el cromatograma del AE de la cscara del fruto de la
Swinglea glutinosa, obtenido por HD-MW, que corresponden a los compuestos A.
Limoneno, B. -Felandreno y C. 1,8-Cineol. Columna HP-5 (60 m). Split 1:30. MSD.
95
96
m/z 68
Limoneno
18.90
19.00
19.10
19.20
19.30
19.40
19.50
19.60
19.70
19.80
-Felandreno
1,8 -Cineol
m/z 93
-Felandreno
Limoneno
18.90
19.00
19.10
19.20
19.30
19.40
19.50
19.60
19.70
19.80
m/z 154
1,8-Cineol
18.90
19.00
19.10
19.20
19.30
19.40
19.50
19.60
19.70
19.80
m/z 139
1,8 -Cineol
18.90
19.00
19.10
19.20
19.30
19.40
19.50
19.60
19.70
19.80
Figura 24. Fragmentogramas de masas correspondiente a los iones m/z 68, 93, 139 y
154, en los espectros de masas del limoneno, -felandreno y 1,8-cineol.
97
4. CONCLUSIONES
sido
identificados.
Para
su identificacin
se
usaron
dos
criterios,
98
Cantidad relativa, %
Compuestos
mayoritarios
Hoja
SFE
SDE
HD-MW
SDE
SFE
-Pineno
2.6
25.8
12.0
10.4
5.0
Sabineno
0.2
11.0
11.5
9.3
-Pineno
0.1
0.5
49.6
51.9
30.4
Limoneno
0.2
2.3
4.4
3.4
2.9
-Cariofileno
3.6
3.7
1.5
2.9
8.1
Biciclosesquifelandreno
26.1
17.9
8.1
8.4
32.8
Nerolidol
42.9
35.5
<0.01
<0.01
0.3
Germacreno B
4.6
2.8
0.4
0.5
2.7
Espatulenol
6.7
1.4
<0.01
<0.01
1.3
99
100
5.
RECOMENDACIONES
101
6. BIBLIOGRAFA
1.
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BANDONI,
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Los
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