BIOKATALISIS

Enzim Taq DNA Polimerase

Kelompok 5

Muhammad Fahmi Zaenal Abidin 1206212520

Laras Ragil K.P. 1206212363
Kasandika Ganiarsa 1206350304
Sabrina Zahra Fitriani 1206249391
Tiara Febriani 1206262140

Outline
Sumber Taq DNA Polimerase (bakteri
Thermus aquaticus)
Proses Produksi Taq DNA
Polimerase
Produk
Industri dan Harga dari Taq DNA
Polimerase di berbagai negara

Paper terkini tentang Taq DNA

Polimerase

SUMBER

Thermus aquaticus
Klasifikasi: Bacteria; Deinococcus-Thermus; Deinococci; Themales; Thermophilus; Aquaticus

yang

Bakteri gram negatif (mengandung peptidoglikan

sedikit dan mengandung lipoprotein.)
Ditemukan di Yellowstone National Park hot
spring, 55-100 derajat celcius, pH 5-9

lingkungan

Menghasilkan enzim Taq polimerase yang dapat

membiarkan bakteri membelah saat suhu
yang tinggi

aquaticus

Karena kestabilannya pada suhu tinggi Taq

polimerase yang dihasilkan dari Thermus
digunakan untuk PCR (Teknik Perbanyakan DNA)

Thermus aquaticus
Karakteristik DNA Polimerase dari Thermus aquaticus

Ukuran dan
Aktivitas

Fungsi

Dengan
memanfaatkan
aktifitas eksonuklease
5 ke 3, PCR dapat
dilaksanakan

Taq berukuran 94 kd,

dengan aktivitas DNA
polimerasi
terlokalisasi pada C
terminal dan aktivitas
eksonuklease
terlokalisasi 5 ke 3
pada N terminal

Temperatur

Dapat hidup di
temperatur diatas 45
derajat celcius dan
optimum saat 80
derajat celcius.

Kation
Monovalent
dan Divalent

Optimum saat
konsentrasi NaCL 40
mM dan KCl 60 mM,
jika lebih aktifitas
katalitik terganggu.

pH

pH optimum
dikisaran 7-8 pH unit
dengan suhu 80
derajat celcius,
bervariasi tergantung
buffer yang
digunakan.

PROSES
PRODUKSI

Proses Produksi
Bahan yang digunakan

STRAIN
MEDIA
KULTUR

HOST

T. aquaticus
strain YT-1
55-60oC; padat
mengandung
1.5% agar dan
nutrien
E. Coli DH1 de-ngan
medium LB 80
mikro gram/ml
ampicillin

Proses Produksi
Aktivitas protein

KONSENTRASI VISUALISASI

ditentukan dengan mengukur absorbansi :

280 dan 260 nm

elektroforesis (gel polyacrylamide) dan

staining Coomasie brilliant blue R

Proses Produksi
Purifikasi Taq DNA Polimerase

Persiapan
strain dan
media kultur

Menentukan
konsentrasi
protein

PCR

Memproduk
si clone T.
aquaticus
(amplifikasi
PCR)

Purifikasi

PRODUK

Aplikasi
Thermus aquaticus

Enzim Taq Polymerase

Biotechnology

Molecular
biology

Sumber: www.brenda-enzyme.com

Proses PCR

Produk Enzim Taq Polimerase

Deoxynucleoside
triphosphate
(dATP)

DNAn
Sumber: www.brenda-enzyme.com

Diphosphate
+
DNAn
+
1

Skema Reaksi Taq Polimerase

Sumber: www.brenda-enzyme.com

Patent
Patent Number : 5,108,892

Date of Patent

: Apr. 28, 1992

Method of Using a Taq DNA Polymerase

Without 5-3-Exonuclease Activity

Patent Number : US 7,972,830 B2

Date of Patent

: Jul. 5, 2011

Thermostable Taq Polymerase Fragment

INDUSTRI
DAN HARGA

Aplikasi dalam Industri

Taq DNA
Polymerase
sebagai standar
untuk PCR

Memiliki buffer
untuk berbagai
macam aplikasi
PCR

Tersedia dalam
berbagai jenis
format

Perusahaan

New England
Biolabs Inc.
Phusion High-Fidelity
DNA Polymerase
100U, 2000 U/mL : $105.00
500U, 2000 U/mL : $420.00

GenScript
USA Inc.
Taq DNA Polymerase
50x1000U : $2,700.00
1000U : $60.00

PENELITIAN
TERKINI

Sumber Jurnal

Daftar Pustaka

Detection of specific polymerase chain reaction product utilizing the 5 3 exonuclease activity
of Thermus aquaticus DNA polymerase. 1991. Holland, P. M., Abramson, R.D., Watsohn, R., Gelfand,
D.H. Proc. Natl. Acad. Sci. 88: 7276-7280
Deoxyribonucleic acid polymerase from the extreme thermophile Thermus aquaticus. 1976. Chien,
A., Edgar, D.B., Trela, J.M.Journal of Bacteriology. 127 (3): 1550-1557
Characterization of the 5 to 3 exonuclease associated with Thermus aquaticus DNA polymerase.
1990. Longley, M.J., Bennett, S.E., Mosbaugh, D.W. Nucleic Acid Research 18(24):7317-7322
Characterization of contaminating DNA in Taq polymerase which occurs during amplification with a
primer set for Legionella 5S ribosomal RNA. 1994. Maiwald, M., Ditton, H.J., SonnTaq, H.G., von
Knebel Doeberitz, M. Molecular and Cellular Probes 8(1):11-14
Optimizing Taq polymerase concentration for improved signal-to-noise in the broad range detection
of low abundance bacteria. 2009. Spangler, R., Goddard, N.L., Thaler, D.S. PLoS ONE 4(9):e7010
High fidelity DNA synthesis by the Thermus aquaticus DNA polymerase. 1990. Eckert, K.A. and
Kunkel, T.A. Nucleic Acids Research18:3739-3744
Comparison of different decontamination methods for reagents to detect low concentrations of
bacterial 16S DNA by real-time pcr. 2002. Klaschik, S., Lehmann, L.E., Raadts, A., Hoeft, A., Stuber,
F. Molecular Biology 22(3):231-242
Optimization of real-time PCR assay for rapid and sensitive detection of eubacterial 16S ribosomal
DNA in platelet concentrates. 2003. Mohammadi,T., Reesink, H.W., Vandenbroucke-Grauls, C.M.J.E.,
Savelkoul, P.H.M. Journal of Clinical Microbiology41(10):47964798
Engelke, David R., dkk. Purification of Thermus aquaticus DNA Polymerase Expressed in Escheria
coli (sumber:
http://degradome.uniovi.es/jmpf/Bibliograf/Analytical%20Biochemistry%201990%20Engelke%20Ta
q%20purification.pdf) Diakses pada 4 November 2014 Pukul 16.30