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ARTICULO CIENTIFICO
IQUITOS- PERU
2010
Mor i T ., Ruiz E ., Garca M ., Bardales J2., Bendayan M2., Espinoza F2., Tresierra 2.,
Dvila C2., Arvalo L3., Reategui R3.,Angulo,J2., Quevedo C5.,Zapata E4.
RESUM EN
El presente trabajo de investigacin tuvo como objetivo
deter minar el efecto
antimicrobiano de Myrciaria dubia camu camu y Cyperus luzulae piripiri sobre
microorganismos patgenos. Las hojas y corteza de Myrciaria dubia se recolect del Lago
Supay, Distrito de Jenaro Herrera, la raz, tallo y flor de Cyperus Luzulae piripiri del
Fundo UNA P, de donde se obtuvo los extractos hidroalcoholicos y se prepararon las
concentraciones de los extractos vegetales: 500 mg/ml, 600 mg/ml, 700mg/ml, 800mg/ml,
para determinar el efecto antimicrobiano de M yrciaria dubia camu camu y Cyperus
luzulae piripiri. sobre cepas de Staphylococcus aureus, Pseudomona aeruginosa y
Escherichia coli, cultivados en agar tripticasa de soya.
Para la deter minacin de la C.M.I., los microorganismos se cultivaron en agar tripticasa soya. Se trabajo con 15 tubos con 1 ml. de caldo Muller - Hinton, se preparo una
solucin madre del extracto vegetal liofilizado a una cc. de 5.120 g/ml.Se aadi 0.2 ml.
de la solucin madre del extracto vegetal al tubo que contena 1.8 ml. A partir de este tubo
se prepar diluciones dobles seriadas .A cada tubo con el extracto vegetal se agreg 1
6
ml. del inoculo que contena aproximadamente 10 UFC/ml.,se incub a 37C por 18 horas
El extracto hidroalcoholico, de la hoja y corteza de Myrciaria dubia camu camu en las
concentraciones de: 800 mg/ml., 700 mg/ml., y 600 mg./ml., present actividad
antimicrobiana frente a Staphylococcus aureus y el extracto hidroalcoholico de la raz,
tallo y flor de Cyperus luzulae piripiri a diferentes concentraciones no mostro actividad
antibacteriana.
La Concentracin Mnima Inhib itoria del Extracto de la hoja de Myrciaria dubia camu
6
ABST RACT
The next research w ork w as to determine the antimicrobial effect of Myrciaria dubia "camu
camu" and C yperus luzulae "pir ipiri" on pathogens mic roorganisms. The leaves and bark
of Myrciaria dubia w as collected from Lake Supay, Jenaro Herrera District. The root, stem
and flow er of Cyperus Luzulae "piripiri" w as collected from the Fundo UNAP w here w as
obtained hydroalcoholic extracts and w as prepared concentrations of plant extracts of 500
mg/ml, 600 mg/ml, 700mg/ml, 800mg/ml, to deter mine the antimicrobial effect of Myrciaria
dubia "camu camu" and C yperus luzulae "piripiri on strains of Staphylococcus aureus,
Pseudomonas aeruginosa and Escherichia coli grow n in trypticase soy agar.
For the deter mination of the CMI, the organis ms w ere grow n in trypticase-soy agar. It w as
w orking w ith 15 tubes w ith 1 ml of Muller-Hinton broth; a stock solution w as prepared from
lyophilized plant extract to a cc. of 5,120 mg/ml. It w as added 0.2 ml. stock solution ofplant
extract to tube containing 1.8 ml. From this tube serial tw ofold, dilutions w ere prepared. To
each tube w ith the plant extract w as added 1 ml. of inoculum containing
approximately 106 UFC/ml., and it w as incubated at 37C for 18 hours .
The hydroalcoholic extract of the leaf and bark Myrciaria dubia "camu camu" in
concentrations of 800 mg/ml., 700 mg/ml., And 600 mg/ml., presented antimicrobial
l activity against Staphylococcus aureus. And, hydroalcoholic extract of the root, stem and
flow er of Cyperus luzulae "piripiri" at dif ferent concentrations w asnt show ed antibacterial
activity.
The minimum inhibitory concentration of leaf extract Myrciaria dubia "camu
camu" on a suspension of 106 ufc / ml of Staphylococcus aureus is equal to 6.38
g/ml.
Keywords: extract, antimicrobia l, lyophilized, inoculum, incubate
------------------------------------1 Biloga profesora principal-Dpto Microbiologa - UNA P
2 Bilogos: Dpto Microbiologa- UNAP
3
INTRODUCCION
La selva tropical de la regin amaznica es una de las reas de biodiversidad ms rica
del mundo y alberga varios miles de especies de plantas y muchas de ellas son utilizadas
por la poblacin amaznica como plantas medicinales.
Las enfermedades ocasionadas por diversos agentes patgenos e inadecuados estilos de
vida del hombre moderno, esta creando la necesidad de buscar nuevas alternativas de
tratamiento con una tendencia de volver a las costumbres ancestrales del uso de plantas,
para la cura de sus enfermedades, debido a las mltiples ventajas que aporta tanto en el
aspecto medicinal como econmico, sobre todo si se tiene en cuenta que la capacidad
adquisitiva de la poblacin es baja y el costo de los medicamentos es alto; es as que esta
alternativa de tratamiento constituye la forma mas barata y segura; y adems posee la
ventaja de presentar poco o ningn efecto secundario.
Al respecto la Organizacin Mundial de la Salud estima que ms de la mitad de los 4000
millones de habitantes de la tierra, confa en la medicina tradicional para resolv er sus
principales necesidades de salud y se puede decir que gran parte de las terapias
tradicionales entraan el uso de extractos de plantas o de sus metabolitos secundarios
que ayudar a deter minar la utilidad en la industria farmacutica en benefic io de la salud.
Adems la aparicin de cepas resistentes a los frmacos tradicionales han dado origen
a una corriente competitiva por la fabricacin de nuevos fitofrmacos que sean eficaces
en el tratamiento de numerosas enfermedades que aquejan a la poblacin mundial.
Debido a la necesidad de conocer las propiedades medicinales de las plantas y existiendo
poca informacin sobre los
Pseudomona
que son
causantes de
M ATERIAL Y M ETODOS
ATCC6538P,
Pseudomonas
aeruginosa
ATCC27853
2.3Diseo M uestral
En el presente estudio se utiliz un muestreo aleatorio simple, y sorteo aleatoriamente
de las concentraciones de extractos acuosos sobre los microorganismos sujetos de
estudio.
Ciencias Biolgicas.
1.- Las muestras de los vegetales: hojas y tallos y raz, fueron pesados por separado.
2.- Se cort en pequeos fragmentos.
3.- Luego ser seco al medio ambiente x 3 das
4.- Se volvi a pesar y luego se procedi a pulverizar, haciendo uso de un molinillo
manual de acero inoxidable.
5.- El pulv erizado se guardo en frascos oscuros para su utilizacin posterior.
1.- Se coloc las muestras en frascos especiales que soportan grandes presiones.
2.- Se congel las muestras a una temperatura de 42 C.
3.- Luego se coloc en el equipo de Liofilizacin por un tiempo de 72 horas.
4.- Se retir para su conservacin al medio ambiente.
1.- Se procedi hacer el clculo de las concentraciones para cada extracto a utilizar.
2.- Se pes 2.5 gr. de extracto liofilizado en 2.5 ml. de agua destilada estril para obtener
la solucin stock con una concentracin de 1000 mg/ml.
3.- A partir de esta solucin stock se procedi a preparar las siguientes concentraciones:
500 mg/ml , 600 mg/ml , 700 mg/ml. , 800 mg/ml ,
2.56. Preparacin de los discos de sensibilidad
24 horas.
1.- Se procedi a preparar el medio agar tripticasa de soya (TSA) en placas petri para
el cultivo de : Staphylococcus aureus Pseudomona aeruginosa y Escherichia coli.
2.- En una estufa se Incub a los microorganis mos a 37 C por 18 a 24 horas para
obtener cultivos jvenes.
3.- Luego se procedi a preparar la suspensin de grmenes en agua peptonada al 0.1
% con una concentracin aproximada de 3 x 10 gr menes/ml (comparado con el tubo N
1 del Nefelometro de Mc Farland).
4.- Se tom de esta suspensin alcuotas de 100 ml, las cuales se colocarn en placas
petri con agar Muller Hinton diseminndose por la superficie con una esptula de vidr io N
7
5.- Luego
los discos
de
1.- Se prepar cultivos de 18 horas de las bacterias a estudiar, en agar tripticasa -soya.
2.- Se Inocul en una porcin de una colonia aislada en 5 ml. de caldo de Tripticasa-soya
Y se incub a 37 C hasta que la turbidez sea visible ( 2-5 h.). Se Ajusto la turbidez con
solucin salina o caldo de cultivo estril hasta una turbidez equivalente al estndar 0.5 de
6
aproximadamente 10 ufc/ml.
7.- Se Incubo los tubos a 37 C durante 18 horas y luego se procedi a calcular la C.M.I.
agitando los tubos donde no ha habido desarrollo bacteriano
RESULTADOS
ANOVA
Dim etro
Suma de
cuadrados
gl
Media
cuadrtica
Sig.
Intergrupos
7020.867
3510.434
389.543
0.000
Intragrupos
2135.767
237
9.012
Total
9156.634
239
ANOV A
Dim etro
Suma de
cuadrados
gl
Media
cuadrtica
Sig.
Intergrupos
9.600
9.600
0.250
0.618
Intragrupos
9147.034
238
38.433
Total
9156.634
239
10
HSD de Tukey
I) Microorgansmo J) Microorgansmo
Staphylococcus
Pseudomonas
Error
tpico
Sig.
Lmite
superior
Lmite
inf erior
Lmite
inf erior
8.4000(*)
0.4746
0.000
7.281
9.519
Escherichia
13.0725(*)
0.4746
0.000
11.953
14.192
Staphylococcus
-8.4000(*)
0.4746
0.000
-9.519
-7.281
4.6725(*)
0.4746
0.000
3.553
5.792
-13.0725(*)
0.4746
0.000
-14.192
-11.953
-4.6725(*)
0.4746
0.000
-5.792
-3.553
Pseudomonas
Escherichia
Escherichia
Dif erencia de
medias (I-J)
Staphylococcus
Pseudomonas
Fuente: Datos de los investigadores
11
Grafica N 2
1.93
Microorgansmos
Escherichia coli
6.6
Pseudomona aeruginosa
15.0
Staphylococcus aureus
0.0
5.0
10.0
15.0
20.0
12
DISC USION
Las plantas medicinales amaznicas son usadas para combatir enfermedades infecciosas
que constituye el principal problema de salud de la poblacin.
En la actualidad se vienen realizando estudios de investigacin para deter minar las
propiedades de las plantas con actividad antimicrobiana, antimictica, antiviral y
antiparasitaria, utilizando diversas tcnicas in vitro, con un sinnmero de agentes
patgenos en los cuales no solo se analiza su actividad antimicrobiana, sino tambin, su
concentracin mnima inhibitoria.
En la presente investigacin, se registraron diferencias significativas al comparar el
promedio del dimetro de los halos de inhibicin, lo que indic a que existe un mayor de
halo de inhibicin en uno de los microorganismos (F=389.5)(T% con 2 gl=3.04) (Cuadro 1
- ANOVA)(Anexo Cuadro N 4,5,6,7,7).- As mis mo se evidencia diferencia significativa
(F= 0.250)(T5% con 1gl=6.76 ) (Cuadro2 y Grafica 1 - ANOVA) al comparar el dimetro de
las concentraciones de hojas y corteza frente a los microorganis mos, Staphylococcus
aureus ATCC6538P, mostro sensibilidad al extracto hidroalc oholico, de la hoja y corteza
de Myrciaria dubia camu camu en las concentraciones de : 800 mg/ml., 700 mg./ml., y
600 mg./ml., en cambio Pseudomona aeruginosa ATCC27853 y Escherichia coli
ATCC35218, mostraron resistencia a las diferentes concentraciones, lo que concuerda
con lo manifestado por MESONES Y DONAYRE (2006), quienes reportan que los
extractos acuosos de Bixa orellana achiote y Genipa americana huito presentaron
capacidad bactericida frente Escherichia coli y Staphylococcus aureus, as mis mo SILVA
et al (2004) , ensayaron la actividad antimicrobiana de diez extractos hidroalcoholicos de
Anadenanthera colubrina angico, frente a Staphylococcus aureus, determinando una
actividad inhibitoria tanto en
a cepas multiresistentes de
Staphylococcus aureus
As mismo NUNES et al (2004), reportan la actividad antimicrobiana del aceite esencial de
Sida cordifolio malva blanca, sobre Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis,
y Candida guilieermondii,
13
frente a
14
CONCLUSIONES
1.- El extracto hidroalcoholico, de la hoja y corteza de Myrciaria dubia camu camu en las
concentraciones de: 800 mg/ml., 700 mg/ml., y 600 mg./ml., presenta actividad
antimicrobiana frente a Staphylococcus aureus ATCC6538P.
2.- El extracto hidroalcoholico, de la hoja y corteza de Myrciaria dubia camu camu en las
concentraciones de: 800 mg/ml., 700 mg/ml., y 600 mg./ml., no presenta actividad
antimicrobiana frente a Pseudomonas aeruginosa ATCC27853 y Escherichia coli
ATCC35218
3.- Con el extracto hidroalcoholico de la raz, tallo y flor de Cyperus luzulae piripiri a las
diferentes concentraciones no mostro actividad antibacteriana frente a Staphylococcus
aureus ATCC6538P, Pseudomonas aeruginosa ATCC27853 y
Escherichia
coli
ATCC35218
4.- La Concentracin Mnima Inhibitoria del Extracto de la hoja de Myrciaria dubia camu
camu sobre una suspensin de 106 ufc/ ml de Staphylococcus aureus ,es igual a 6.38
g/ml.
REC OM ENDACIONES
1.- Se recomienda continuar con los ensayos realiz ados, utilizando otras plantas, para
incrementar el conocimiento sobre la actividad antimic robiana de las plantas medicinales.
15
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
1.
2.
CACERES,
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MENENDEZ,
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COHOBON,
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6.
FERNANDES,A.C.,PERFEITO,J.P.S.,FEREZ,S.J.,RAMALHO,L.S.,SA NTOS,M.L.,
OAULA,J.E,LOPEZ,K.S.E.,SCHWA RTZ,E.N.F.,SILVEIRA.D.
004.
Actividad
8.
MORI del A. T., REATEGUI, A.R. 2007. Impacto Ecolgico Social y Econmico del
Aprovechamiento de Rodales Naturales
NASCIMENTO,C.A.,LIAO.L.M.,OLIV EIRA,C.M.A.,KATO,L.PIMENTA.EC.
Actividad
2004.
NUNES,X.P.,TRAJANO,V.N.,LIMA,E.O.,BA RBOSA-FILHO,J.M.
2004
Actividad
2004
Actividad
Antibacteriana
555.pp.
17
18