BIOQUMICA

PROF. VINICIUS MOREIRA

PRTICA 7
DESNATURAO DE PROTENAS

Nov/2014

SUMRIO

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1. Introduo ....................................................................................................... 4
2. Desnaturao Proteica ................................................................................... 5
3. Principais agentes responsveis pela desnaturao ...................................... 6
4. Prtica - Desnaturao de protenas ...............................................................8
4.1 Objetivo .............................................................................................. 8
4.2. Material utilizado................................................................................ 8
5. Procedimento experimental ............................................................................ 8
5.1. Precipitao por calor ........................................................................ 8
5.1.1. Resultado e discusso ......................................................... 8
5.2. Precipitao com reagentes alcaloides ............................................. 9
5.2.1. Resultados e discusses ..................................................... 9
6. Concluso ......................................................................................................11
7. Referencias ...................................................................................................12

1. INTRODUO
As protenas so estruturas compostas pela unio de diversas molculas
de aminocidos, atravs de ligaes peptdicas, sendo que possui quatro nveis
estruturais:

Estrutura primria: ligaes covalentes unem os resduos de

aminocidos em uma cadeia polipeptdica.

Estrutura secundria: so os arranjos particularmente estveis dos

resduos de aminocidos, dando origem a padres estruturais
recorrentes.

Estrutura terciria: descreve todos os aspectos do dobramento

tridimensional de um polipeptdeo.

Estrutura quaternria: quando uma protena possui uma ou mais

subunidades polipeptdicas.
Todas as protenas iniciam sua existncia no ribossomo como uma

sequncia linear de resduos de aminocidos. Esse polipeptdeo deve enovelarse durante e em seguida sntese, fim de atingir a sua conformao nativa.
Pequenas alteraes no meio em que se localiza a protena podem resultar em
alteraes estruturais, que poder levar uma deficincia no seu funcionamento.
A estrutura proteica adquire sua funo em meio celular especfico.
Condies diferentes daquelas presentes no interior da clula podem resultar em
variveis alteraes na estrutura das protenas. Uma perda da estrutura
tridimensional suficiente para causar perda de funo recebe o nome
de desnaturao. O estado desnaturado no necessariamente corresponde
um desenovelamento completo da estrutura proteica e a uma randomizao de
conformao. Sob a maioria das condies, as protenas desnaturadas se
encontram em um conjunto de estados parcialmente enovelados pouco
elucidados.
O ponto isoeltrico de uma protena o pH em que o nmero de cargas
positivas igual ao nmero de cargas negativas, no permitindo a migrao da
molcula em um campo eltrico. Neste ponto, a solubilidade de uma protena
mnima. Mas, se o nmero entre cargas positivas e negativas for diferente, a
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protena apresentar carga, positiva ou negativa. Com isso, uma nova fora
garante a solubilidade ao permitir a repulso entre molculas de mesma carga
efetiva o que, afastando as molculas entre si, favorece ainda mais a interao
com o solvente ou o meio onde a protena est inserida. No ponto isoeltrico, a
carga nula no permite foras de repulso e as molculas proteicas interagem
entre si, formando agregados que tendem a se precipitar.
A desnaturao provoca, em geral, grande perda de solubilidade das
protenas em solventes aquosos. A perda da solubilidade no ponto isoeltrico
tem sido um critrio clssico para detectar e acompanhar a desnaturao de
protenas em solues aquosas.

2. DESNATURAO PROTICA
Trata-se da perda da estrutura tridimensional da protena, ou seja, ela
perde a sua forma original.
Para que uma protena se precipite, uma das formas atingir o seu ponto
isoeltrico, onde ela mais insolvel. A solubilidade de uma protena
desnaturada diminui devido modificao em suas estruturas secundrias,
tercirias e quaternrias. Durante a desnaturao, as foras responsveis pela
conformao original se quebram e novas surgem, resultando em uma nova
conformao.
A maioria das protenas pode ser desnaturada pelo calor, que afeta as
interaes fracas em uma protena (especialmente entre as ligaes de
hidrognio) de forma complexa. Quando a temperatura se eleva lentamente,
uma conformao proteica geralmente permanece intacta at que haja uma
perda abrupta de estrutura em uma faixa estrita de temperaturas. Essa alterao
repentina indica que o desenovelamento um processo cooperativo: a perda da
estrutura em uma parte da protena desestabiliza outras partes.
H desnaturaes reversveis, e irreversveis. Temos como irreversvel o
exemplo da albumina do ovo, que uma vez que foi cozida, o resfriamento no
faz com que a protena se renature.

A desnaturao faz com que a protena perca a sua funo. por isso que
no podemos passar de 42 de febre, pois da em diante muitas enzimas (que
so protenas) iro se desnaturar e trazer muitos malefcios ao indivduo.

3. PRINCIPAIS AGENTES RESPONSVEIS PELA DESNATURAO

CALOR - A desnaturao pelo calor causa uma desorganizao das

cadeias peptdicas, mudando a conformao e alterando as propriedades
fsico-qumicas e biolgicas, sem afetar as ligaes peptdicas. A
temperatura para isso varia de uma protena para outra. A desnaturao
por calor envolve alteraes que tornam a protena insolvel nos
solventes em que ela era insolvel, ocorrendo ento, a sua precipitao.

REAGENTES PARA ALCALOIDES - Neste caso, a desnaturao ocorre

a formao de sais insolveis, quando a protena est com carga efetiva
positiva e funciona como ction. o que ocorre na desproteinizao do
sangue. Os agentes usados nesse tipo de precipitao so o cido
tricloroactico, tnico, fosfotngstico, pcrico e sulfossaliclico.

SAIS DE METAIS PESADOS - Chumbo, zinco, mercrio e cobre, se

combinam com as protenas, formando quelatos insolveis. A precipitao
ocorre por causa da insolubilidade desses sais em gua e devido aos
aminocidos hidrofbicos ficarem mais expostos ao meio aquoso
mediante a quebra das ligaes inicas.

PH - (potencial de hidrogenato) tambm pode desnaturar uma protena,

uma vez que esta tem seu pH, qualquer coisa em contraposio ir alterar
sua estrutura tridimensional.

AGENTES QUMICOS - como o veneno. Esses agentes podem agir sobre

a protena desfazendo ligaes, principalmente em pontes de hidrognio.

SOLVENTES ORGNICOS - A maioria dos solventes orgnicos tambm

possui ao desnaturante de protenas, levando as mesmas
precipitao. A explicao desse processo porque os solventes
orgnicos alteram a constante dieltrica do meio tornando-o inferior da
gua e, portanto, as foras eletrostticas que contribuem para a
estabilidade das protenas.

A precipitao por sais no ocorre desnaturao. Esse processo envolve

principalmente a influncia da adio de sais em diferentes concentraes sobre
a solubilidade da protena. No fenmeno salting out, os sais em altas
concentraes desidratam as protenas, atraindo as molculas de gua do meio,
de modo a ficar menos gua disponvel para as molculas proteicas.
A solubilidade de uma protena depende da quantidade de gua disponvel
ao redor de seus grupos inicos, logo se no existem molculas de gua para
interagirem com a protena porque a alta concentrao de sal interagiu com a
gua, as protenas iro de concentrar e precipitaro.
O efeito inverso, fenmeno chamado de salting in, em que a adio de
baixa concentrao de sal na soluo aumenta a solubilidade da protena. A
interao com os sais aumenta o nmero efetivo de cargas e a quantidade de
molculas de gua que se fixam ionosfera proteica, havendo maior interao
com o meio e, portanto maior solubilidade.
Cada um desses agentes desnaturantes representa um tratamento
relativamente brando no sentido de que nenhuma ligao covalente na cadeia
polipepitdica rompida. Os solventes orgnicos (uria e detergente) agem
principalmente de modo a promover o rompimento de interaes hidrofbicas
que estabilizam as protenas globulares; os extremos de pH alteram a carga

lquida da protena, provocando a repulso eletrosttica e rompimento de

algumas ligaes de hidrognio.
As reaes de desnaturao de protenas, com precipitao ou no,
possuem grande importncia para a bioqumica, indstria e na rea de alimentos.
Seus feitos envolvem desde a inativao trmica de microrganismos
patognicos e deterioradores de alimentos at as melhoras das propriedades
nutricionais dos mesmos. Vale ressaltar tambm a importncia da caracterizao
de protenas em solues e da desprotenizao dos compostos biolgicos para
anlise de componentes no proteicos.

4. DESNATURAO DE PROTENAS

4.1. OBJETIVO
Reforar os conceitos tericos relativos s protenas e o seu
impacto nos sistemas vivos para facilitar o entendimento sobre as
protenas e os seus possveis mtodos de desnaturao, assim como, o
impacto dessa desnaturao para os sistemas vivos.

4.2. MATERIAL UTILIZADO

Tubos de ensaio, bqueres e bastes de vidro

.Estantes para tubos de ensaio

.Soluo salina

.gua destilada

.Albumina bovina a 2% em NaCl

.TCA a 25% em gua destilada

5. PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL
5.1 PRECIPITACAO POR CALOR
Identificou-se as solues albumina bovina a 2% e TCA a 25% em gua
destilada. Em seguida, em um tubo de ensaio, colocou-se 2 mL de soluo
de albumina bovina a 2% e foi levado capala para aquecer diretamente
na chama.
5.1.1. RESULTADO E DISCUSSO
Aps a utilizao do agente desnaturante fsico como o calor, que pode
desnaturar a maioria das protenas, dado que a temperatura afeta as
interaes qumicas das protenas, foi observado a mudana de aspectos
na amostra da albumina bovina, como espcies de cogulos. A agitao
trmica afeta as interaes que estabilizam a estrutura tridimensional das
protenas.

5.2. PRECIPITACAO COM REAGENTES ALCALOIDES

Colocou-se em um tubo de ensaio, 1 mL de soluo de albumina bovina a
2% e 1 mL de TCA.

5.2.1. RESULTADOS E DISCUSSES

Os reagentes de alcaloides so cidos que alm de precipitarem alcaloides,
tambm podem se combinar com as protenas que possuam cargas
positivas e formarem complexos insolveis. Exemplos desses reagentes:
cido pcrico, cido tnico, cido fosfotngstico, cido tricloroactico (TCA),
dentre outros. No caso do TCA, a reao de protenas leva formao de
um tricloroacetato da protena em questo, o qual insolvel.
Foi utilizado na experincia o cido Tricloroactico a 10%, que um cido
tambm utilizado para precipitar componentes do sangue como
carboidratos. Houve precipitao das protenas na forma de uma nuvem
branca.

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6. CONCLUSO
Ao se solubilizar uma molcula, deve-se levar em considerao que cada
molcula ir depender da interao entre os grupos polares dos radicais R e
as molculas de gua atravs de pontes de hidrognio.
Ao ocorrer grandes variaes de pH, acontece a ionizao destes grupos e,
consequentemente, a interao da protena com o meio, resultando na mudana
radical na conformao da protena para um estado conformacional
biologicamente inativo.
No momento em que foi adicionado o cido soluo de albumina bovina,
houve formao de precipitados, pois a alterao do pH alterou a carga lquida
da protena. Uma protena desnaturada insolvel em gua e precipita em
soluo. Ou seja, houve a desnaturao da protena.
A desnaturao um fenmeno que no envolve ruptura das ligaes
peptdicas primrias, mas sim um rompimento das estruturas secundria,
terciria e quaternria.

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7. REFERNCIAS
Desnaturao das protenas
http://www.brasilescola.com/quimica/desnaturacao-das-proteinas.htm

Disponvel em 10/11/2014

Tcnicas de Desnaturao de Protenas

http://www.infoescola.com/bioquimica/tecnicas-de-desnaturacao-de-proteinas/
Disponvel em 10/11/2014

ATKINS, Peter; JONES, Loreta; Princpios de Qumica: questionando a vida

moderna e o meio ambiente, Porto Alegre: Bookman, 2001.

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