UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLGICAS

ESCUELA DE BIOLOGIA

ALUMNA:

CURSO:

CICLO:

PROFESOR:

Pea Novoa Juana

Biotecnologa General

X-B

Eloy Lpez Medina

TRUJILLO PER

2014

ESTABLECIMIENTO DE CULTIVO IN VITRO DE HOJAS Saintpaulia ionantha Wendi violeta

africana EN CONDICIONES DE ASEPSIA
INTRODUCCIN
Diversas plantas de inters agroalimentario, ornamental o manipuladas genticamente, han
de propagarse o regenerarse vegetativamente. Asimismo, en algunos casos es preciso
emplear tcnicas de propagacin vegetativa para erradicar infecciones por virus y para
introducir variaciones genotpicas que aumenten la calidad de los productos. Estas tcnicas
se conocen genricamente como cultivo in vitro (Villamizar,2005).
La expresin cultivo in vitro de plantas se utiliza para denominar de forma genrica a un
conjunto muy diverso de tcnicas vienen siendo una eficaz herramienta en el estudio de
numerosos aspectos de la biologa de las plantas y en la resolucin de importantes
problemas prcticos, tanto agronmicos como forestales. Lo que tienen en comn estas
tcnicas es que, al menos en algn momento de su desarrollo, se recurre al cultivo de
material vegetal en condiciones aspticas, dentro de un recipiente ms o menos hermtico,
en un medio nutritivo sinttico y bajo condiciones ambientales (iluminacin y temperatura)
controladas (Prez , Bancos de cultivos in vitro)
Para el cultivo in vitro de clulas, tejidos u rganos hay una serie de factores que hay que
tener en cuenta. El medio de cultivo debe tener los nutrientes necesarios para que las
clulas vegetales puedan desarrollarse con normalidad: sales inorgnicas, una fuente de
carbono en el caso de no poder realizar fotosntesis, vitaminas en algunos casos y
fitohormonas. El medio inorgnico ms empleado es la mezcla de sales diseada por
Murashige y Skoog (MS). Este medio se puede completar con glucosa, vitaminas, auxinas
y/o citoquininas para el cultivo de distintos tipos de tejidos y clulas. (Villamizar,2005).
Para el establecimiento de cultivo in vitro de tejidos, se deben analizar aspectos
importantes tales como: el explante, la asepsia, los medios de cultivo y las condiciones
ambientales de incubacin (Stwar J, 2012).
La eleccin del explante apropiado constituye el primer paso; la eleccin est determinada
por el objetivo perseguido y la especie utilizada.El tamao del explante vara desde los 0.1
mm hasta piezas de tallo de 5 cm o ms. Los explantes pueden ser meristemos, puntas de
brotes, tallos, anteras, flores, hojas, embriones, semillas, races y yemas(Stwar J, 2012).

Saintpaulia ionantha Wendi violeta africana es una planta ornamental de gran inters
dentro del comercio y la jardinera, esta planta es originaria del este de frica pero se
encuentran ampliamente distribuidas por todo el mundo a travs de las asociaciones de
floricultores y aficionados. Las violetas son plantas muy apreciadas porque presentan gran
diversidad morfolgica y con una amplia gama de tonalidades de flores que van desde
violeta prpura a blancas. En la actualidad, se conocen ms de 20 especies y cientos de
variedades, las que se propagan por germinacin de semillas o en forma vegetativa por
esquejes, aunque actualmente se vienen desarrollando diversas tcnicas de cultivo in
vitro para obtener violetas africanas a gran escala, a partir de pequeas porciones de
peciolo y tejido foliar (Badillo J, 2009).
El objetivo de esta prctica fue obtener plntulas a partir del cultivo invitro de explantes
deSaintpaulia ionantha violeta africana, como tambin , evitar su contaminacin.

MATERIAL Y METODOS
Medio de cultivo
El medio de cultivo de Murashige y Skoog, fue proporcionado por el profesor, el cual
preparamos y dispensamos en cinco frasquitos de penicilina.
Colecta del material biologico
Para el desarrollo de la prctica, previamente se adquirieron las plantas de violeta
africana y se las conservo en el jardn botnico durante 2 semanas con la finalidad de
disminuir cualquier problema de contaminacin (hongos, bacterias, polvo, etc.). Se
procedi a recolectar hojas de la planta de violeta africana y se colocaron inmediatamente
en un depsito con agua de cao, para evitar la deshidratacin. Se determin el explanto y
se extrajeron 6 cuadraditos de las hojas obtenidas de aproximadamente 1 cm2. Los tejidos
a cultivar in vitro , seguidamente se transfirieron a un depsito para su esterilizacin.
Esterilizacin del lugar de trabajo
Se desinfect la mesa de trabajo ,con hipoclorito de sodio y se limpiaron con alcohol , todos
aquellos frascos y materiales que se iban a utilizar. En un frasco se coloc algodn y se
agreg alcohol de 96 ,el cual sirvi para colocar las pinzas y bisturi a utilizar.

En otro frasco se agreg alcohol al 70 % y en otro , hipoclorito de sodio al 1%, ambos para
la desinfeccin de los explantes. Tambin se colocaron dos mecheros separados 20 cm uno
del otro. Por ltimo, se usaron mascarilla y gorro para el cabello, durante la manipulacin
de los explantes, disminuyendo de esta manera, cualquier contaminacin.
Desinfestacin de los explantos
En una placa Petri estril se colocaron los explantes con alcohol etlico de 70 por 30
segundos,

se enjuagaron con agua destilada unas 5 veces y se desinfestaron con

hipoclorito de sodio al 1% por dos minutos, inmediatamente se enjuag con agua destilada
por 5 veces nuevamente.
Iniciacin del cultivo
Con la ayuda del bistur se transfirieron , cuidadosamente para no daar el material, cada
uno de los explantes a un frasquito de penicilina con medio de cultivo. Para evitar cualquier
contaminacin, se flame la boca del frasquito y su tapa antes de abrirlo y cerrarlo, como
tambin las pinzas con las que se trabajaron. Se rotularon y colocaron en un ambiente
adecuado para su desarrollo.

RESULTADOS
Luego de 2 semanas, se logaron obtener 1 frasquito de penicilina con explante sin ningn
tipo de contaminacin. Los otros 4 frasquitos con explante se contaminaron con algn tipo
de hongos. Los explantes a las tres semanas an no se han desarrollado a plntulas.

DISCUSION
La asocacion explante medio y las condiciones fisicas en que normalmente se incuban los
cultivos conforman un ambiente propicio para la

proliferacio de microorganismos

(bacterias, hongos), los cuales pueden destruir tales cultivos ,competir con l explante por el
medio de cultivo o modifcarlo(Villamizar,2005).
Para establecer cultivos asepticos es conveniente, trabajar en ambientes adecuados ,
esterilizar los medio de cultivo mas comunmente en un autoclavea una presion de 1 atm ,
durante

45 minutos, suficiente para matar virtualmente todas las formas de vida,

desinfectar los explantes , liberandolos de bacterias y hongos exgenos , y realizar los

cultivos con ciertas normas de asepsia. (Villamizar,2005).
Segn Villamizar,se siguio un protocolo de desinfestacin similar , logrando un 80 % de
explantes en medio de cultivo contaminados, mientras que segn Lpez D et al quin logr
obtener un 95% de plntulas sin ningn tipo de contaminacin. En ambos casos, se
utilizaron diferentes tiempos en los que se colocaron los explantes en alcohol al 70 % ,como
tambin las concentraciones en las que se encontraba el hipoclorito de sodio.
En esta prctica , la concentracin de hipoclorito de sodio al 1%, impidi que hongos y
otros contaminantes en las plantas de violeta africana sobrevivan,y al presentarse un alto
porcentaje de contaminacin, y conocer que se cumpli con el protocolo de desinfeccin,
por lo tanto se asume que no se realiz una adecuada manipulacin de los instrumentos y
explantes al momento de la prctica.

CONCLUSIONES
El medio de cultivo result ser el adecuado para el crecimiento de los explantes, teniendo
en cuenta los componentes tales como el agua destilada que representa el 95% del medio
nutriente; como la fuente de carbono la sacarosa, ya que los explantes no son
completamente auttrofos, y no pueden cubrir sus necesidades con la fotosntesis que
puede realizar in vitro. El buen desarrollo del explante tambin depende de muchos
factores tales como: las condiciones aspticas,
iluminacin, etc.

tamao del explanto, medio de cultivo,

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

Badillo J, Oliver M, Moreno K, Pacheco V, Corts H. (2009). Manual del laboratorio de

cultivo de tejidos. Instituto Politcnico Nacional. Unidad Profesional Interdisciplinaria de
Biotecnologa. Departamento de Bioprocesos. Academia de Biotecnologa.
Espinosa, ., Silva, J., Gonzlez, O., Fajardo, L. y Prez,J. (2007).Multiplicacin in vitro de
Violeta Africana (SAINTPAULIA IONNATA). Revista Electrnica Granma Ciencia.11(2).
Lpez D, Jimnez A, Orbe C, Vanegas P, Bonfill M, Del Villar A. Establecimiento de Cultivo in
vitro y de Clulas Desdiferenciadas de Aranto (Kalanchoe daigremontiana). Published
online. [fecha de acceso] 29-10-13. Disponible en:
http://www.smbb.com.mx/congresos%20smbb/acapulco09/TRABAJOS/AREA_II/OII-06.pdf
Prez C. Bancos de cultivos in vitro. Published online. [fecha de acceso] 29-10-13.
Disponible en: http://www3.unileon.es/personal/wwdiafga/web_mex12/Libro/seis.pdf
ROCA, W. y MROGINSKI, L. (1991).Cultivo de tejidos en la agricultura, fundamentos y
aplicaciones. Colombia.
Stwar J. (2012). Establecimiento del cultivo de tejidos vegetales in vitro. Published online.
[fecha de acceso] 29-10-13. Disponible en: http://agropecuarios.net/establecimiento-delcultivo-de-tejidos-vegetales-in-vitro.html
VILLAMIZAR, E. (2005)ESTANDARIZACIN DEL PROTOCOLO in vitro PARA EL
ESTABLECIMIENTO DE ENCENILLO (Weinmannia tomentosa H.B. & K.) Y DE RODAMONTE
(Escallonia myrtilloides L.F) EN EL LABORATORIO DE CULTIVOS DE TEJIDOS DEL JARDN
BOTNICO JOS CELESTINO MUTIS. SAN JOS DE CCUTA. PROGRAMA DE INGENIERA DE
PRODUCCIN BIOTECNOLGICA.