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FACULTAD DE BIOLOGA
TESIS:
QUE PRESENTA
AGRADECIMIENTOS
El hombre es una cuerda tendida entre el animal y el superhombre; una
cuerda
A mis padres Martha y Jos Luis, por haberme dado todo su cario, amor,
comprensin y apoyo, gracias a ellos soy lo que soy; solo me resta decirles que
los amo y que espero no defraudarlos.
A mis hermanos Ale, Pepe y Csar por estar con migo en todo momento, por
sus palabras de aliento y caminar junto a mi los quiero mucho.
A mis amigos inseparables Ady, Yari, Nancy y Marcos por haberme soportado
durante todo este tiempo y los que nos falta, gracias por su amistad los quiero.
A mis compaeros de la seccin 05 por haberme enseado tanto, por todos los
momentos juntos, estamos en el camino esforcmonos por cumplir nuestros
sueos.
INDICE
RESUMEN...1
I.-INTRODUCCION2
1.1 Sustratos utilizados para obtener etanol por fermentacin..6
1.2 La caa de azcar...7
1.3 Melaza de caa....8
1.4 La sacarosa....12
1.5 Combustibles y el alcohol etlico.13
1.6 Combustibles que contienen etanol14
1.7 Caractersticas del etanol.15
1.8 Efectos txicos del etanol.16
1.9 Procesos de fermentacin17
1.10 Produccin de etanol por medio de la fermentacin.18
1.11 Principio de destilacin...19
1.12 Microorganismos fermentadores..20
1.13 Levaduras.21
1.14 Componentes de una clula de levadura22
1.15 Composicin qumica de las levaduras...23
1.16 Requerimientos nutricionales de las levaduras..23
1.17 Conversin de azcar a etanol.24
1.18 Reproduccin...25
1.19 Distribucin...26
1.20 Utilizacin de levaduras para fermentacin27
1.21 Poder fermentativo de las levaduras27
1.22 Factores de estrs que afectan la actividad de las levaduras.28
1.23 Mecanismos de tolerancia en levaduras.30
II.- ANTECEDENTES..34
III.- OBJETIVOS...37
VI.
DISCUSION..68
VII.- CONCLUSIONES69
VIII.- ANEXOS..70
RESUMEN
I. INTRODUCCION
uso
por
tanto
potencialmente
agotable,
podra
disminuir
alcohol
es
muy
diverso,
aunque
genricamente
se
incluye
C6H12O6
Glucosa
2C2H5OH
Etanol
CO2
H2O
Dixido de carbono
Hoy en da, los logros que se han alcanzado estn enfocados en la obtencin
de nuevos biocatalizadores, que fermenten eficientemente jarabes que contengan
mezclas de azcares. Ya que en la naturaleza se cuenta con una gran variedad de
material vegetal que se puede utilizar como sustrato para la obtencin de etanol
por fermentacin.
Materia prima
Maz
2050
Trigo
790
Yuca
2160
Sorgo dulce
2970
Caa de azcar
4850
10
Melaza de remolacha
Materia seca
75%
74-78%
Azcares reductores
20-35%
0.5-4.0%
Azcares totales
48-56%
48-57%
9-12%
12-17%
Cenizas
10-15%
10-12%
Sacarosa
25 a 35%
46-52%
pH
5-5.5%
7.0%
Almidn
0.5%
Calcio
0.4-0.8%
0.1-0.5%
Sodio
0.1-0.4%
0.5-1.0%
Potasio
1.5-5.0%
2.0-7.0%
Magnesio
0.05-0.98%
0.1-0.15%
Fsforo
0.03-0.1%
0.02-0.07%
Azufre
0.3-0.8%
0.15-0.5%
Cobre
2.2-38 ppm
2.5 ppm
Manganeso
4-300 ppm
3.0 ppm
Zinc
4-48 ppm
0.15 ppm
Biotina
1.2-3.2
0.04-0.13
Acido flico
0.04
0.2
Inositol
6,000
5,800-8,000.
Pantotenato de Ca
54-64
50-100
Piridoxina
2.6-5
504
Riboflavina
2.5
0.4
Tiamina
1.8
1.3
Acido nicotnico
30-800
20-45
Colina
600-800
400-600
azcares)
Vitaminas (ppm)
1.4. La sacarosa
11
12
ambiente.
13
14
15
Una gran cantidad del etanol que no se utiliza para bebidas, es actualmente
producido sintticamente, ya sea a partir de acetaldehdo obtenido del acetileno, o
de etileno obtenido del petrleo. Al etileno se le aade agua a unos 280C y 300
atm:
H3PO4
CH2 = CH2 (g) + H2O (g)
CH3CH2OH (g)
Catalizador
16
forma que el proceso cataltico no sea eficiente (Mathews y Van Holde, 1998;
Stryer, 1993).
17
18
19
20
son:
Saccharomyces
cerevisiae,
Saccharomyces
uvarun,
ms
importante
de
microorganismos
explotados
para
propsitos
21
22
18-44%
Protenas
36-60%
Acido nucleico
4-8%
Lpidos
4-7%
Inorgnicos totales
6-10%
Fsforo
1-3%
Potasio
1-3%
Sulfato
0.4%
Los
lpidos
como
constituyentes
de
las
membranas
citoplasmticas.
Fuente de nitrgeno. Los aminocidos y pptidos son necesarios para el
crecimiento y la sntesis de enzimas.
Factores nutrimentales. Como las vitaminas.
Iones inorgnicos. Son esenciales para el metabolismo de la levadura en
general.
23
Una vez que los azcares estn dentro de la clula, estos son convertidos
por la ruta glicoltica (tambin llamada Embden-Myerhof-Parnas) en piruvato. La
secuencia de la reaccin catalizada enzimticamente que oxidativamente
convierte la glucosa en cido pirvico en el citoplasma de la levadura es conocido
como gliclisis.
24
1.18. Reproduccin
La reproduccin de las levaduras se desarrolla de dos formas:
asexualmente
por
gemacin
sexualmente
mediante
ascoesporas
mitocondria no se
puede desarrollar de nuevo, ya que cada uno tiene su propio DNA, que codifica al
menos para algunas protenas estructurales mitocondriales y para las enzimas que
intervienen en la respiracin. Tambin tienen sus propios ribosomas para la
sntesis proteica, siendo estos del tipo 70s como los de las bacterias, y como
consecuencia, la sntesis proteica de las mitocondrias es afectada por el
cloranfenicol (Deacon, 1988).
Figura 5. Ciclo celular de levadura
25
1.19 Distribucin
Las levaduras han colonizado gran parte del planeta ya que se pueden
aislar de la tierra, del agua y del aire; esto depende de la presencia de la fuente de
carbono, principalmente azcares reductores. Ya que no poseen la capacidad de
desplazarse por s mismas dependen de vectores como el viento, insectos,
animales, incluso el hombre (Vaughan y Martn, 1995). Las levaduras cuentan con
la capacidad de desarrollarse bajo la presencia o no de oxgeno, lo que representa
una ventaja importante para la industria fermentativa ya que las condiciones
iniciales del cultivo tienen una amplia reprecisin sobre los rendimientos de
produccin de biomasa o de produccin de etanol.
En condiciones aerbicas con niveles bajos de azcar, las levaduras entran
en fase de crecimiento y no de fermentacin llevando a cabo el efecto Pasteur. En
condiciones con niveles altos de azcar rpidamente son metabolizados
reprimiendo la capacidad de la clula para realizar la respiracin, aunque no haya
deficiencia de oxgeno convirtiendo inmediatamente los azcares en etanol. Este
efecto es conocido como represin catablica (Barnett, 1981).
Estos procesos metablicos y regulatorios tienen aplicaciones importantes
en el diseo de procesos de fermentacin alcohlica o en la produccin de
biomasa. As se demuestra la importancia de elegir las condiciones adecuadas
para desarrollar las levaduras.
26
particularmente
Saccharomyces
cerevisiae
con
caractersticas
especficas para cada uno de sus procesos. Las levaduras secas que hoy se
comercializan y aquellas que se aslan para llevar a cabo fermentaciones deben
presentar una serie de caractersticas deseables que permitan obtener
propiedades especficas, tanto en el proceso como en el producto elaborado
(Pretorius, 2000).
27
As como la levadura produce altos niveles de etanol, algo que llega a ser
de principal importancia son los factores de estrs involucrados. Los factores de
estrs crtico tales como la temperatura, niveles de alcohol e infeccin son de
inters.
La temperatura es el principal factor de estrs, su incapacidad de precisar el
control de la temperatura en la fermentacin es posiblemente el mayor factor y el
ms comnmente problema que afecta al rendimiento. La temperatura ptima de
la fermentacin para la levadura (Saccharomyces cerevisiae) es de 35C y la
temperatura ptima de reproduccin para la levadura es de 28C.
Miriam Erika Salcedo Crdenas
28
29
30
Entre
los mecanismos de
tolerancia
solventes orgnicos en
los
microorganismos encontramos:
Cambios en la membrana plasmtica: la membrana plasmtica posee
una estructura lipdica, la cual es responsable de muchas funciones, entre
estas destacan el transporte y la produccin de energa. Adems la
membrana contiene protenas de transporte que permiten la capacitacin
de metabolitos y la liberacin de otras sustancias, as como bombas de
iones que permiten mantener un potencial de membrana (Murria, 2002).
Aunque la bicapa de lpidos de la membrana citoplasmtica es una barrera
eficiente para discriminar la entrada de molculas hidroflicas, permite que
pequeas molculas anfiflicas tales como el etanol pasen sin necesidad
de una permeasa especfica.
Han sido estudiados varios mecanismos de respuesta a nivel de membrana
para contrarrestar los efectos txicos debidos a la acumulacin de solventes
orgnicos. Estos cambios incluyen la modificacin del grado de saturacin de
lpidos de la membrana, cambios en la composicin de los lpidos, el recambio
y la isomerizacin cis-trans de los lpidos insaturados. Esta isomerizacin de
los lpidos de la membrana juega un papel muy importante en la tolerancia a
solventes orgnicos, permitindole a la clula sobrevivir al dao inicial; sin
embargo, se han observado que la isomerizacin cis-trans de cidos grasos no
es el nico mecanismo de tolerancia a los solventes (Yura y col., 2000). Los
cidos grasos no saturados de las levaduras son principalmente el cido
palmitolico y el cido olico a los cuales se les ha atribuido un efecto protector
de los efectos txicos del etanol. El cido olico es incorporado en la bicapa de
fosfolpidos produciendo una disminucin de la fluidez de la membrana, lo cual
impide que el etanol ingrese a la clula (Kyung y col., 2003). Esta relacin
entre la composicin de lpidos y la tolerancia al etanol tambin fue observada
cuando se encontr la presencia del ergosterol, fosfatidilcolina y cidos grasos
Miriam Erika Salcedo Crdenas
31
lipopolisacridos,
permitindole
al
microorganismo
los
lipopolisacridos
polisacridos
interactan
32
que
stas
no
sufran
la
prdida
de
su
funcin
33
II. ANTECEDENTES
Durante los ltimos aos se vienen utilizando las melazas como ingrediente
en la fabricacin de forraje para el ganado, habindose experimentado un
importante incremento en el consumo de melazas en alimentacin animal en el
mundo. Actualmente entre el 60% y el 70% del comercio mundial de melaza se
destina a alimentacin animal.
Por otro lado, las melazas son utilizadas ampliamente en la produccin de
etanol por ejemplo:
Acevedo y col., (2003) realizaron un estudio sobre el efecto del complejo
enzimtico Rhizozyme en la produccin de alcohol mediante la fermentacin de
melazas con S. cerevisiae. Se construy un dispositivo a escala piloto de 220 L,
que cercanamente representa las caractersticas dinmicas, trmicas, qumicas y
biolgicas de un fermentador industrial de 240000 L. Se prepar un diseo
experimental para estudiar el efecto de la adicin del complejo enzimtico en la
evolucin del grado alcohlico, los azcares reductores totales y la demanda
qumica de oxgeno resultantes de la fermentacin alcohlica. Se observaron
incrementos en el grado alcohlico hasta de un 8%, a una concentracin de
enzima de 35 ppm, sin aumento significativo de la demanda qumica de oxgeno
en la vinaza resultante. La utilizacin de este complejo enzimtico constituye una
manera sencilla de aumentar el rendimiento de la produccin de alcohol etlico en
fermentacin de melazas.
Chvez (2004) utiliz la caa de azcar como materia prima para la
produccin de alcohol carburante, ya que es rica en hidrato de carbono, los tallos
representan mayor valor econmico e inters para la fabricacin de azcar y la
elaboracin de alcohol. El alcohol se fabrica a partir de la fermentacin de los
carbohidratos. Obteniendo que el rendimiento en alcohol va de 2,800 8,400
l/ha/ao, con un rendimiento agrcola de 40 120 ton/ha/ao.
Miriam Erika Salcedo Crdenas
34
35
36
37
Descripcin:
38
39
40
41
mayores cantidades de etanol para realizar las pruebas anteriores; pero ahora
solo en melaza de caa a concentraciones de 20, 30 y 40 Brix, con su respectiva
fuente de nitrgeno adicional y as poder evaluar los parmetros fermentativos de
las cepas y rendimientos de productividad. Con ste procedimiento se seleccion
una cepa de levadura que mostr las mejores caractersticas de productividad y
se utilizo para la realizacin de una prueba de fermentacin a nivel piloto.
42
determinando
el
rea
bajo
la
curva
de
los
compuestos
correspondientes (R =0.999).
4.8 Determinacin de la poblacin celular
Para determinar el nmero de clulas y su viabilidad, se realiz un conteo a
partir
de
las
muestras
obtenidas
de
las
fermentaciones
mencionadas
43
V. RESULTADOS
5.1. Aislamiento de levaduras en mostos de melaza
Se aislaron un total de 27 colonias de levaduras fermentadoras
espontneas en jugos de melaza de caa de azcar. Del proceso de fermentacin
de la melaza diluida con agua destilada a 30 y 40 Brix, durante 48 horas; se
realizaron 8 diluciones de cada una de las muestras, posteriormente se tomaron
100l de las diluciones para sembrar en
# de dilucin
Melaza
Melaza
Melaza
Melaza
30Brix-45 C
30Brix-30 C
40Brix-30 C
40Brix-45 C
Dilucin 1
No
No
No
No
Dilucin 2
No
No
No
No
Dilucin 3
2 (20-21)
1 (27)
1 (32)
2 (39-40)
Dilucin 4
2 (22-23)
2 (28-29)
2 (33-34)
2 (41-42)
Dilucin 5
3 (24-25-26)
2 (30-31)
2 (35-36)
2 (43-44)
Dilucin 6
No
No
1 (37)
1 (45)
Dilucin 7
No
No
1 (38)
1 (46)
Dilucin 8
No
No
No
No
44
Condiciones
Nmero de Cepa
Melaza 30Brix-
(7) 20 - 26
45C
Melaza 30Brix-
(5) 27 - 31
30C
Melaza 40Brix-
(7) 32 - 38
30C
Melaza 40Brix-
(8) 39 - 46
45C
45
46
47
30 Brix - 45C
D.O 600 nm
1.6
1.4
20
1.2
21
22
0.8
23
0.6
24
0.4
25
0.2
26
0
0%
8%
16%
24%
32%
40%
% GLUCOSA
48
D.O 600 nm
30 Brix - 30C
2.8
2.6
2.4
2.2
2
1.8
1.6
1.4
1.2
1
0.8
0.6
27
28
29
30
31
0%
8%
16%
24%
32%
40%
% GLUCOSA
Grafica 2. Prueba de crecimiento realizada en medio YPD a diferentes concentraciones de glucosa
de las cepas aisladas a (30 Brix 30C), con agitacin constante durante 24 horas, incubados a
30C.
49
D.O 600 nm
40 Brix - 30C
2.6
2.4
2.2
2
1.8
1.6
1.4
1.2
1
0.8
0.6
32
33
34
35
36
37
38
0%
8%
16%
24%
32%
40%
% GLUCOSA
50
40 Brix - 45C
D.O 600 nm
1.2
1
39
0.8
40
41
0.6
42
0.4
43
0.2
44
45
0%
8%
16%
24%
32%
40%
46
% GLUCOSA
Grafica 4. Prueba de crecimiento realizada en medio YPD a diferentes concentraciones de glucosa
de las cepas aisladas a (40 Brix y 45C), sin agitacin durante 24 horas a 45C.
51
30 Brix - 45C
0.1
0.08
20
D.O 600 nm
0.06
21
0.04
22
0.02
23
0
-0.02
16%
24%
32%
40%
24
25
-0.04
26
-0.06
-0.08
% SACAROSA
52
30 Brix - 30C
D.O 600 nm
2.6
27
2.4
28
29
30
2.2
31
2
16%
24%
32%
40%
% SACAROSA
53
40 Brix - 30C
2.6
D.O 600 nm
32
33
2.4
34
35
36
2.2
37
38
2
16%
24%
32%
40%
% SACAROSA
Grafica 7. Prueba de crecimiento realizada en medio YPD a diferentes concentraciones de
sacarosa de las cepas aisladas a (40 Brix 30C), con agitacin constante durante 24 horas.
esta
grafica
observamos
que
los
aislados
no
crecieron
54
40 Brix - 45C
0.7
39
0.6
40
D.O 600 nm
0.5
41
0.4
42
0.3
43
0.2
44
0.1
45
0
-0.1
46
16%
24%
32%
40%
% SACAROSA
Grafica 8. Prueba de crecimiento realizada en medio YPD a diferentes concentraciones de
sacarosa de las cepas aisladas a (40 Brix 45C), sin agitacin durante 24 horas crecidas a 45C.
55
D.O 600 nm
30 Brix - 30C
2.5
2.3
2.1
1.9
1.7
1.5
1.3
1.1
0.9
0.7
0.5
0.3
0.1
-0.1
27
28
29
30
31
0%
5%
10%
15%
20%
% ETANOL
Grafica 9. Prueba de tolerancia a etanol realizada en medio YPD con 16% de sacarosa diferentes
concentraciones de etanol de las cepas aisladas a (30 Brix 30C), con agitacin constante
durante 24 horas, incubadas a 30C.
56
D.O 600 nm
40 Brix - 30C
2.5
2.3
2.1
1.9
1.7
1.5
1.3
1.1
0.9
0.7
0.5
0.3
0.1
-0.1
32
33
34
35
36
37
38
0%
5%
10%
15%
20%
% ETANOL
Grafica 10. Prueba de tolerancia a etanol realizada en medio YPD con 16% de sacarosa a
diferentes concentraciones de etanol de las cepas aisladas a (40 Brix y 30C), con agitacin
constante durante 24 horas, incubadas a 30C.
57
D.O 600 nm
40 Brix - 45C
1
0.9
0.8
0.7
0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
39
44
45
46
0%
5%
10%
15%
20%
% ETANOL
Grafica 11. Prueba de tolerancia a etanol realizada en medio YPD con 16% de sacarosa a
diferentes concentraciones de etanol de las cepas aisladas a
58
D.O 600 nm
30 Brix - 45C
0.18
0.16
0.14
0.12
0.1
0.08
0.06
0.04
0.02
0
24
25
26
0%
5%
10%
15%
% ETANOL
Grafica 12. Prueba de tolerancia a etanol realizada en medio YPD con 2% de sacarosa a
diferentes concentraciones de etanol de las cepas aisladas a (30 Brix y 45C), sin agitacin
durante 24 horas, incubadas a 45C.
59
D.O 600nm
30 Brix - 30C
2.2
2
1.8
1.6
1.4
1.2
1
0.8
0.6
0.4
0.2
0
27
28
29
30
31
0%
5%
10%
15%
% ETANOL
Grafica 13. Prueba de tolerancia a etanol realizada en medio YPD con 2% de sacarosa
diferentes concentraciones de etanol de las cepas aisladas a (30 Brix y 30C), con agitacin
constante durante 24 horas, incubadas a 30C.
60
D.O 600 nm
40 Brix - 30C
2.2
2
1.8
1.6
1.4
1.2
1
0.8
0.6
0.4
0.2
0
32
33
34
35
36
37
38
0%
5%
10%
15%
% ETANOL
Grafica 14. Prueba de tolerancia a etanol realizada en medio YPD con 2% de sacarosa
diferentes concentraciones de etanol de las cepas aisladas a (40 Brix
La grafica 15 nos muestra que no hay crecimiento de las cepas ya que los
valores andan entre el 0.1, observndose que nuevamente que el crecimiento es
inhibido por la temperatura usada (45C).
Miriam Erika Salcedo Crdenas
61
40 Brix - 45C
0.6
39
D.O 600 nm
0.5
40
0.4
41
0.3
42
0.2
43
44
0.1
45
0
0%
5%
10%
15%
% ETANOL
Grafica 15. Prueba de tolerancia a etanol realizada en medio YPD con 2% de sacarosa a
diferentes concentraciones de etanol de las cepas aisladas a (40 Brix y 45C), sin agitacin
durante 24 horas, incubadas a 45C.
Realizamos otra prueba de tolerancia a etanol para las cepas que fueron
aisladas y crecidas a 45C, crecindolas a 30C ya que no presentaban una buena
tolerancia y adems no tenan agitacin
presentaba.
En la grafica 16 y 17 se observa que el comportamiento de las cepas es
similar en los experimentos con las mismas condiciones teniendo que el pico ms
alto se encuentra a 5% de etanol y el ms bajo a 10%, mantenindose hasta el
15% de etanol.
Estas graficas nos representan que la temperatura (45C) del experimento
si influyen sobre la tolerancia y el crecimiento de las cepas, ya que al realizarlos a
las mismas condiciones (30C) su comportamiento se presenta de manera similar.
62
D.O 600 nm
30 Brix - 30C
2.2
2
1.8
1.6
1.4
1.2
1
0.8
0.6
0.4
0.2
0
20
21
22
23
24
25
26
0%
5%
10%
15%
% ETANOL
Grafica 16. Prueba de tolerancia a etanol realizada en medio YPD con 2% de sacarosa a
diferentes concentraciones de etanol de las cepas aisladas a (30 Brix y 45C), pero ahora crecidas
a 30C con agitacin constante durante 24 horas.
D.O 600 nm
40 Brix - 30C
2.2
2
1.8
1.6
1.4
1.2
1
0.8
0.6
0.4
0.2
0
39
40
41
42
43
44
45
0%
5%
10%
15%
46
% ETANOL
Grafica 17. Prueba de tolerancia a etanol realizada en medio YPD con 2% de sacarosa a diferentes
concentraciones de etanol de las cepas aisladas a (40 Brix y 45C), pero ahora crecidas a 30C
con agitacin constante durante 24 horas.
63
Se realizaron varias pruebas para corroborar cuales cepas son las mejores
productoras de etanol y con ello seleccionar aquellas que tengan un mayor
crecimiento, una mayor tolerancia y por ende una mayor produccin de etanol.
Las primeras fermentaciones que realizamos fueron en 100 ml con un
mosto preparado con melaza a 20Brix, con una fuente de nitrgeno adicional
(NH4)2SO4 durante
grados Brix cada 24 horas, una vez transcurrido el tiempo seguimos con la
determinacin de etanol para ello se realizo lo siguiente:
1.- Centrifugar la muestra durante 10 minutos a 130rpm
2.- Tomar el sobrenadante
3.- Realizar una dilucin 1:5 (800l de agua destilada + 200l de muestra)
4.- Filtrar la muestra
5.- Inyectarla en el HPLC
Los datos que obtuvimos fueron los siguientes:
Tabla 5. Produccin de etanol en mostos de melaza de caa con sulfato de amonio como fuente
de nitrgeno.
Cepa Brix
Poblacin celular
Sacarosa
Glucosa
Fructuosa
Etanol
(1x106)
23
20
N. d.
N. d.
0.05
0.5305
274
25
20
N. d.
N. d.
0.05
0.5118
245
30
20
N. d.
N. d.
0.048
0.5037
263
34
20
N. d.
N. d.
0.048
0.5415
252
40
20
N. d.
N. d.
0.046
0..5197
244
42
20
N. d.
N. d.
0.034
0.3285
265
64
25
0.08
N. d.
0.035
8.84
34
25
0.012
N. d.
0.1
8.64
40
25
0.01
N. d.
0.78
8.46
30
N. d.
N. d.
0.33
10.5
34
30
N. d.
N. d.
N. d.
40
30
1.33
N. d.
0.16
8.73
35
3.6
0.42
0.26
9.25
34
35
3.4
0.1
0.23
9.14
65
40
35
4.07
0.43
0.2
9.27
VI. DISCUSION
El objetivo principal de este trabajo fue el aislar, seleccionar y caracterizar las
levaduras productoras de etanol a partir de melaza de caa de azcar. Lachance
Miriam Erika Salcedo Crdenas
66
67
VII. CONCLUSION
68
Al realizar las pruebas fermentativas se observ que las cepas con mejores
niveles de tolerancia de etanol son la 23, 34 y 40, llegando a tolerar entre un 5 y
10% reflejndose un incremento en la produccin de etanol durante la
fermentacin, obteniendo una concentracin del 10% de etanol cuando se uso
30Brix.
VIII. ANEXOS
8.1 Tablas de crecimiento con glucosa
69
600nm
Concentracin de glucosa
Procedencia
Cepas
0%
8%
16%
24%
32%
40%
30B-30C
27
1.132
2.381
2.512
2.399
2.225
2.113
28
1.063
2.336
2.401
2.499
2.406
2.167
29
0.808
2.282
2.441
2.199
1.975
1.772
30
1.093
2.198
2.454
2.501
2.382
2.213
31
1.036
2.172
2.285
2.393
2.218
2.145
27
1.250
2.358
2.297
2.444
2.219
2.245
28
1.281
2.383
2.364
2.469
2.353
2.288
29
1.207
2.196
2.380
2.449
2.155
2.387
30
1.279
2.436
2.272
2.332
2.181
2.375
31
1.728
2.325
2.390
2.293
2.126
2.190
27
1.179
2.248
2.416
2.444
2.116
2.295
28
1.244
2.254
2.258
2.394
2.273
2.251
29
1.214
2.240
2.367
2.463
2.323
2.324
30
1.255
2.307
2.455
2.462
2.336
2.275
31
2.145
2.257
2.382
2.403
2.305
2.349
24 horas
48 horas
72 horas
600nm
Concentracin de glucosa
Procedencia
Cepas
0%
8%
16%
24%
32%
40%
40B-30C
32
0.983
2.141
2.094
2.283
2.173
2.170
70
24 horas
48 horas
72 horas
33
0.962
2.043
2.391
2.438
2.302
2.082
34
0.844
2.069
2.133
2.251
2.311
2.274
35
0.793
2.123
1.938
2.287
2.150
2.107
36
0.827
2.325
2.482
2.410
2.331
2.227
37
0.817
1.941
2.428
2.354
2.206
2.198
38
0.933
2.211
1.969
2.401
2.215
2.138
32
1.509
2.180
2.205
2.349
2.190
2.374
33
1.277
2.324
2.291
2.524
2.222
2.263
34
1.173
2.265
2.431
2.384
2.281
2.368
35
1.187
2.329
2.196
2.510
2.346
2.291
36
1.093
2.312
2.335
2.320
2.337
2.238
37
1.587
2.285
2.325
2.328
2.251
2.179
38
1.248
2.208
2.219
2.446
2.344
2.254
32
2.119
2.313
2.418
2.444
2.037
2.202
33
1.805
2.276
2.427
2.467
2.286
2.293
34
1.199
2.292
2.426
2.418
2.367
2.291
35
1.969
2.333
2.339
2.505
2.373
2.288
36
1.075
2.286
2.451
2.495
2.350
2.297
37
1.813
2.308
2.468
2.555
2.243
2.321
38
1.232
2.240
2.443
2.447
2.366
2.250
600nm
Concentracin de glucosa
Procedencia
Cepas
0%
8%
16%
24%
32%
40%
30B-45C
20
0.009
0.011
0.010
0.007
0.006
0.008
71
24 horas
48 horas
72 horas
21
0.016
0.015
0.007
0.010
0.009
0.012
22
0.015
0.040
0.024
0.017
0.014
0.021
23
0.024
0.040
0.081
0.030
0.057
0.026
24
0.153
0.675
0.641
0.455
1.011
0.280
25
0.103
1.389
0.672
0.588
0.263
0.160
26
0.158
0.891
1.035
1.244
0.786
1.295
20
0.020
0.044
0.004
0.003
0.010
0.003
21
0.015
0.423
0.010
0.012
0.042
0.100
22
0.017
0.425
0.241
0.298
0.313
0.603
23
0.028
0.062
0.238
0.141
0.576
0.271
24
0.173
0.972
1.091
0.858
1.345
1.469
25
0.213
1.341
0.956
0.968
1.051
1.235
26
0.023
0.942
1.132
1.461
1.136
1.484
20
-0.173
0.221
-0.168
-0.159
0.082
-0.106
21
-0.170
0.572
-0.169
-0.076
0.156
0.216
22
-0.182
0.568
0.333
0.489
0.401
0.651
23
-0.144
-0.104
0.239
0.065
0.766
0.294
24
0.107
1.000
0.928
0.931
1.346
1.000
25
0.153
1.430
0.831
0.891
0.809
1.029
26
0.164
1.135
1.189
1.482
0.996
1.352
32%
40%
600nm
Procedencia
Concentracin de glucosa
Cepas
0%
8%
16%
24%
72
40B-45C
24 horas
48 horas
72 horas
39
0.043
0.058
0.042
0.0404
0.979
1.139
40
0.015
0.028
0.025
0.019
0.021
0.024
41
0.022
0.020
0.022
0.009
0.023
0.018
42
0.027
0.018
0.017
0.017
0.020
0.025
43
0.024
0.036
0.021
0.018
0.028
0.034
44
0.051
0.043
0.040
0.050
0.055
0.050
45
0.053
0.069
0.055
0.043
0.041
0.065
46
0.046
0.120
0.057
0.048
0.056
0.080
39
0.043
0.052
0.094
0.812
1.152
0.981
40
0.012
0.017
0.031
0.016
0.021
0.028
41
0.010
0.010
0.018
0.012
0.011
0.022
42
0.018
0.050
0.022
0.015
0.023
0.022
43
0.042
0.039
0.039
0.042
0.048
0.056
44
0.217
0.091
0.580
0.709
0.792
0.964
45
0.131
0.679
0.859
0.582
1.031
1.264
46
0.142
1.523
1.013
1.093
1.543
1.357
39
-0.129
-0.128
0.456
0.822
1.090
1.029
40
-0.005
-0.156
-0.182
-0.175
-0.178
-0.147
41
-0.173
-0.164
-0.152
-0.173
-0.179
-0.162
42
-0.173
-0.166
-0.165
-0.177
-0.088
-0.160
43
-0.140
-0.131
-0.129
-0.131
-0.039
-0.124
44
0.277
1.248
1.502
1.466
1.353
1.327
45
0.112
1.541
1.578
1.666
1.512
1.383
46
0.158
1.539
1.391
1.342
1.392
1.303
73
600nm
Concentracin de sacarosa
Procedencia
Cepas
16%
24%
32%
40%
30B-30C
27
2.428
2.515
2.458
2.371
28
2.390
2.319
2.425
2.330
29
2.267
2.121
2.195
2.313
30
2.036
2.465
2.435
2.347
31
2.146
2.419
2.397
2.328
27
2.375
2.408
2.432
2.372
28
2.316
2.452
2.391
2.330
29
2.324
2.384
2.370
2.365
31
2.246
2.314
2.348
2.421
31
2.407
2.338
2.359
2.300
27
2.490
2.588
2.512
2.469
28
2.553
2.590
2.524
2.455
29
2.477
2.579
2.538
2.387
30
2.545
2.510
2.517
2.461
31
2.548
2.554
2.503
2.462
24 horas
48horas
72 horas
600nm
Concentracin de sacarosa
74
Procedencia
cepas
16%
24%
32%
40%
40B-30C
32
2.157
2.381
2.377
2.338
33
2.053
2.151
2.432
2.335
34
2.118
2.480
2.317
2.350
35
2.078
2.245
2.357
2.315
36
2.143
2.253
2.428
2.312
37
Se quebr
2.230
2.380
2.319
38
2.340
2.278
2.355
2.357
32
2.359
2.530
2.286
2.363
33
2.271
2.416
2.363
2.260
34
2.291
2.338
2.470
2.277
35
2.349
2.333
2.214
2.253
36
2.482
2.373
2.324
2.282
37
Se quebr
2.355
2.592
2.215
38
2.443
2.380
2.266
2.264
32
2.543
2.490
2.530
2.468
33
2.481
2.580
2.490
2.485
34
2.519
2.578
2.549
2.461
35
2.555
2.504
2.531
2.461
36
2.474
2.543
2.451
2.408
37
2.500
2.489
2.433
-0.113
38
2.582
2.592
2.506
2.472
24 horas
48 horas
72 horas
600nm
Miriam Erika Salcedo Crdenas
Concentracin de sacarosa
75
Procedencia
Cepas
16%
24%
32%
40%
30B-45C
20
-0.008
-0.037
-0.029
-0.043
21
0.001
-0.047
-0.051
-0.036
22
-0.019
-0.034
-0.040
-0.059
23
0.064
0.066
0.025
-0.036
24
0.010
0.018
-0.013
0.001
25
0.014
-0.035
-0.041
-0.036
26
0.075
0.083
0.039
0.077
20
0.063
0.053
0.052
0.048
21
0.173
0.024
0.053
0.055
22
0.118
0.020
0.028
0.016
23
0.309
0.292
0.160
0.039
24
0.520
0.101
0.099
0.089
25
1.077
0.150
0.072
0.073
26
0.997
0.700
0.272
0.329
20
0.084
0.065
0.060
0.046
21
0.206
0.033
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0.385
24 horas
48 horas
72 horas
86
87
88
89
90
de la Caa de
Azcar (ICIDCA).
91