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Ricardo Elia Dazat

CURSO INTENSIVO DE HPLC


La cromatografa es un mtodo fsico de separacin en el cual los componentes de la
muestra a ser separados son distribuidos en dos fases, una de las cuales permanece
inmvil (fase estacionaria) mientras la otra (fase mvil) se mueve en una direccin
definida.
Un cromatografo de HPLC (cromatografa liquida de alta eficacia) esta constituido por
cinco partes esenciales: fase mvil, sistema de bomba, inyector, columna y detector
Fase mvil: las caractersticas del solvente son: alto poder disolvente sobre el analito, baja
reactividad, compatibilidad con el detector utilizado, adecuado punto de ebullicin, baja
viscosidad, alto grado de pureza. Los solventes mas usados en fase reversa son: aguametanol-acetonitrilo-tetrahidrofurano
En fase normal: hexano-ciclohexano-heptano-isooctano-MTBE
Sistema de bomba: dispositivo que toma la fase mvil del reservorio y lo impulsa a travs
del inyector, la columna y el detector. Puede ser bomba de jeringa, bomba de pistn
simple o dual. El gradiente de elucin puede ser isocrtico composicin constante
gradiente composicin variable.
Inyector: dispositivo que introduce la muestra en el sistema a alta presin, en forma
precisa y sin producir ensanchamiento de banda ni carryover
Columna: antes de la columna existe una precolumna lo que ayuda a una mayor vida de la
columna, elimina partculas o concomitantes que sacrifique la columna, acondiciona la
fase mvil. La columna sirve para separa los analitos de la muestra inyectada, clasificacin:
Adsorcin: fase estacionaria polar (silicagel, almina) fase mvil no polar (hidrocarburos,
ter, cloroformo, cloruro metileno)
Fase ligada: se caracteriza por separar los compuestos en base a su polaridad puede ser:
- fase normal: utiliza una fase estacionaria polar y una fase mvil apolar y se utiliza cuando
el compuesto de inters es bastante polar.
fase reversa: consiste en una fase estacionaria apolar y una fase mvil de polaridad
moderada, una de las fases estacionarias mas comn es la silica tratada con RMe2SiCl
Exclusin molecular: separa las partculas de la muestra en funcin de su tamao
Intercambio inico: se basa en la atraccin electrosttica entre los iones en solucin en
solucin y las cargas inmovilizadas a la fase estacionaria
Detector: caractersticas: respuesta lineal, amplio rango dinmico, no debe contribuir al
ensanchamiento de banda, sensibilidad apropiada, buena relacin seal/ruido, respuesta
rpida por ejemplo UV-Vis, PDA, fluorescencia, electroqumico, ELSD, MS
El curso fue muy instructivo, y reafirma los conocimientos que se adquieren en analtica II,
es recomendable para alumnos cuando se vuelva a dictar, ya sea que hallan o no cursado
analtica II, siendo una herramienta importante para un qumico

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